本發(fā)明涉及飼料添加劑，具體是涉及一種預(yù)防加洲鱸脂肪肝發(fā)生的飼料添加劑。

背景技術(shù)：

1、由于市場上飼料產(chǎn)品營養(yǎng)指標(biāo)設(shè)計(jì)過高，新鮮度差，或餌料霉變等問題的存在、抗生素和殺蟲劑的濫用等因素所造成的魚類肝膽綜合癥頻繁發(fā)生，魚類肝膽綜合癥的預(yù)防是目前水產(chǎn)上急需攻克的一個(gè)難題。鯉魚、草魚、鯽魚等攝食性魚類，在每年7-9月份經(jīng)常爆發(fā)肝膽綜合征的疾病，此病由于致病因素較多，多數(shù)的養(yǎng)殖者只是針對(duì)單純脂肪肝來進(jìn)行治療，造成治療效果差、成本高的現(xiàn)象。

2、引發(fā)該病的原因很復(fù)雜，主要是由養(yǎng)殖水質(zhì)條件、藥物攝入、飼料的營養(yǎng)失衡等方面造成的。而造成飼料營養(yǎng)失衡的原因主要是以下幾個(gè)方面：(1)魚類對(duì)脂肪的代謝。因?yàn)轸~類往往不能充分分解不飽和度較高的脂肪酸，因而使得這些不飽和度較高的脂肪酸貯留于體內(nèi)組織中，在體內(nèi)發(fā)生過氧化。同時(shí)，負(fù)責(zé)分解高度不飽和脂肪酸的細(xì)胞器，如過氧化物酶體，在被激活分解這些不飽和程度較高的脂肪酸時(shí)，本身也會(huì)產(chǎn)生較多的自由基，從而使得內(nèi)環(huán)境的過氧化壓力增加。(2)飼料中植物性原料過多造成的，準(zhǔn)確地說是植物性飼料中纖維素(或非淀粉多糖)造成的。其機(jī)制，一個(gè)是一般認(rèn)為肉食性魚類對(duì)糖的利用能力低下,被視為具有先天性的“糖尿病體質(zhì)”，尤其是在像加州鱸魚表現(xiàn)得更加明顯。魚類攝入飼料糖后有一部分以糖原的形式儲(chǔ)存起來。儲(chǔ)存糖原的主要部位是肝臟和肌肉。由于糖原的大量蓄積,魚類肝胰臟會(huì)增大。有些魚類肝胰臟增大的同時(shí)肝功能有所損壞。另一個(gè)是在魚類腸道內(nèi)，纖維素、非淀粉多糖通過物理裹攜等作用阻礙膽汁酸的重吸收，膽汁酸重吸收水平的下降不僅誘導(dǎo)肝臟中膽固醇合成量增加，還使血液和肌肉中膽固醇水平下降，肝臟中積聚的膽固醇被用于合成膽汁酸。由于膽汁酸的過量分泌，膽囊中存儲(chǔ)不下而溢出，出現(xiàn)綠肝。肝臟長時(shí)間的超負(fù)荷分泌導(dǎo)致功能衰竭，繼而不能分泌足夠的膽汁酸，使膽汁顏色異常，同時(shí)發(fā)生脂肪吸收障礙。

3、由于飼料資源及成本等方面的原因，我國水產(chǎn)飼料中植物性原料用量較高。但對(duì)于植物性飼料營養(yǎng)特點(diǎn)的研究主要在氨基酸和脂肪酸的平衡性，而對(duì)其中含量高達(dá)30％左右的纖維素和非淀粉多糖關(guān)注不多。我國雜粕等植物性飼料資源豐富，在水產(chǎn)飼料中大量使用植物性原料是不可避免的。因此，目前急需一種安全有效預(yù)防加州鱸脂肪肝發(fā)生的方法。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、為了解決上述問題，本發(fā)明提供了一種預(yù)防加洲鱸脂肪肝發(fā)生的飼料添加劑，按質(zhì)量百分比計(jì)，包括35～45％的酵母水解物，15～25％的姜黃素，15～25％的益母草堿以及余量的載體；

2、所述載體為脫脂米糠和/或稻殼粉。

3、進(jìn)一步地，將所述飼料添加劑水分控制在10～12％以下，然后粉碎并過80目篩；

4、說明：水分的控制能夠抑制霉菌毒素生成，保護(hù)肝細(xì)胞功能，減少毒素誘導(dǎo)的脂代謝紊亂；粉碎過篩能夠提高營養(yǎng)均勻性和消化率，降低肝臟脂質(zhì)合成與解毒負(fù)擔(dān)。

5、進(jìn)一步地，所述姜黃素包埋在微膠囊內(nèi)，包埋姜黃素的微膠囊的制備方法為：

6、s1、將預(yù)處理后的姜黃素、益生菌與孔徑1～5μm的多孔淀粉按照質(zhì)量比為1：0.1～0.2：0.3～0.5進(jìn)行培養(yǎng)，加入有機(jī)溶劑配制成2～4wt％的復(fù)合懸液，即為芯材溶液；

7、s2、將改性海藻酸鈉、脫氧膽酸按照質(zhì)量比為5～10：1混合得到壁材，然后按照1g：50～100ml加入到去離子水中，在300～500w的超聲頻率下超聲分散8～12min至均勻，滅菌后得到壁材溶液；

8、s3、按照體積比為1:3～5將芯材溶液與壁材溶液混合均勻，通過擠壓法加入到2～3％的cacl2溶液溶液中，靜置形成凝膠，按照凝膠與磷酸鹽緩沖液的體積比為1:5～8將凝膠轉(zhuǎn)移至ph為7.2～7.6、含0.3ml乳鐵蛋白和0.5ml透明質(zhì)酸的磷酸鹽緩沖液中，低速攪拌25～30min，形成表面修飾層；用去離子水洗滌3～5次后，按照凝膠與殼聚糖溶液的體積比為1：3～5將凝膠浸入含0.1～0.5％低聚果糖的殼聚糖溶液中二次包覆，靜置15～20min；最后在30～40℃下低溫干燥至含水量≤5％，獲得直徑10～50μm的功能化微膠囊，即為包埋姜黃素的微膠囊；

9、說明：采用微囊包埋技術(shù)，解決姜黃素水溶性差、吸收率低的問題，使其在腸道緩釋，持續(xù)發(fā)揮抗氧化作用；芯材中具備抗炎、抗氧化功效的姜黃素與具備調(diào)節(jié)腸道菌群功效的益生菌通過多孔淀粉負(fù)載，形成穩(wěn)定復(fù)合物，提升姜黃素在消化道中的保留率，使得緩釋時(shí)間延長，同時(shí)保護(hù)益生菌免受胃酸破壞；

10、脫氧膽酸作為壁材成分，可促進(jìn)腸道內(nèi)膽汁酸循環(huán)，激活法尼醇x受體(fxr)，抑制肝臟甘油三酯合成酶(如dgat2)表達(dá)，進(jìn)一步降低脂肪肝發(fā)生率；通過脂質(zhì)體載體定向遞送姜黃素至肝細(xì)胞，激活pparα通路，抑制脂肪酸合成酶(fas)表達(dá)，減少甘油三酯在肝臟的異常積累；在包埋過程中添加低聚果糖，能夠通過促進(jìn)腸道益生菌增殖(如雙歧桿菌)，減少內(nèi)毒素(lps)向肝臟轉(zhuǎn)移，間接緩解脂肪肝進(jìn)展；低聚果糖與益生菌聯(lián)用可使肝臟甘油三酯(tg)含量下降25％～30％；將凝膠浸漬于含乳鐵蛋白和透明質(zhì)酸的緩沖液中，通過靜電吸附形成靶向修飾層，增強(qiáng)微膠囊在肝臟組織的蓄積能力；乳鐵蛋白可結(jié)合肝細(xì)胞表面受體，透明質(zhì)酸則通過cd44受體介導(dǎo)靶向，協(xié)同提高活性成分對(duì)肝臟脂肪代謝的調(diào)控效率。

11、更進(jìn)一步地，步驟s1中所述益生菌為羅伊氏乳桿菌、嗜酸乳桿菌、乳酸桿菌、乳雙歧桿菌中的任意一種或幾種等重量比例混合；所述益生菌活菌數(shù)為1.0×106～1.0×108cfu/ml；所述有機(jī)溶劑為濃度為0.01～0.1％的pluronic?f-68、體積濃度為18～22％的乙醇及0.1～0.5mg/ml硫酸葡聚糖鈉鹽等體積比例組成；

12、說明：硫酸葡聚糖鈉鹽通過增加負(fù)電荷密度，增強(qiáng)靜電排斥作用，防止多孔淀粉與益生菌的物理性黏連，丙酮作為姜黃素的良好溶劑，可促進(jìn)其均勻分散于多孔淀粉孔道內(nèi)，減少游離態(tài)姜黃素的聚集；pluronic?f-68：通過降低溶液表面張力，減少顆粒間范德華力和疏水相互作用，抑制姜黃素與益生菌的聚集，并且對(duì)益生菌活性抑制較??；低聚果糖通過協(xié)同促進(jìn)羅伊氏乳桿菌、嗜酸乳桿菌、乳酸桿菌、乳雙歧桿菌等益生菌的增殖，從減少內(nèi)毒素轉(zhuǎn)移、增強(qiáng)脂質(zhì)代謝、抑制炎癥等多途徑間接緩解脂肪肝進(jìn)展。

13、進(jìn)一步地，所述姜黃素的預(yù)處理方法為：將姜黃根莖粉末以液固比25～30ml：1g與0.3～0.5mol/l的溴化1-辛基-3-甲基咪唑水溶液混合，在200～250w下超聲處理1～1.5h，得到姜黃素提取物；將姜黃素提取物溶于中鏈甘油三酯中，配制濃度為3～5mg/ml的姜黃素油溶液，在60～80mpa下均質(zhì)處理2～4次，細(xì)化粒徑至100～200nm，即得預(yù)處理后得姜黃素；

14、說明：上述方式能夠使得提取的姜黃素類化合物提取率達(dá)90％以上，預(yù)處理后姜黃素的dpph自由基清除率提升至75～80％以上，肝臟甘油三酯(tg)含量降低35％，mda水平下降40％；dpph清除率提升至75～80％以上，表明姜黃素能高效中和肝臟內(nèi)活性氧(ros)，減少脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，保護(hù)肝細(xì)胞膜完整性；mda(丙二醛)作為脂質(zhì)過氧化終產(chǎn)物，其降低40％直接反映氧化應(yīng)激損傷減輕，避免肝細(xì)胞線粒體功能紊亂；肝臟甘油三酯(tg)含量降低35％，通過抑制脂肪酸合成酶(fas)活性、激活過氧化物酶體增殖物激活受體(pparα)促進(jìn)脂肪酸β-氧化，減少脂質(zhì)在肝細(xì)胞內(nèi)的異常堆積；從而提升飼料添加劑的預(yù)防肝病發(fā)生能力。

15、進(jìn)一步地，改性海藻酸鈉的制備方法：

16、將去離子水和海藻酸鈉按照質(zhì)量比為22～25：1混合并攪拌均勻，使用0.1～0.2mol/l的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)ph至7～8，然后加入占海藻酸鈉1～1.2％的納米蒙脫石，復(fù)測ph并再次調(diào)節(jié)至7～8，升溫40～50℃并在180～200w的超聲頻率下處理8～15min，得到產(chǎn)物a；依次加入占上述產(chǎn)物a質(zhì)量0.8～1％的粒徑＜1μm的粉碎燕麥殼、占上述產(chǎn)物a質(zhì)量0.5～0.7％的維生素e，均質(zhì)混合后得到產(chǎn)物b，再在40～50℃下干燥至含水量≤5％，得到改性海藻酸鈉。

17、說明：壁材中添加納米蒙脫石，利用其層狀結(jié)構(gòu)吸附游離ca2+并阻隔氧氣，使姜黃素氧化降解率進(jìn)一步降低；在產(chǎn)物a中添加維生素e，通過協(xié)同作用抑制脂質(zhì)過氧化，降低肝細(xì)胞氧化損傷；粒徑＜1μm的粉碎燕麥殼能夠進(jìn)一步增強(qiáng)其與海藻酸鈉的氫鍵結(jié)合，減少泄漏風(fēng)險(xiǎn)。

18、更進(jìn)一步地，所述均質(zhì)混合的方法為，將產(chǎn)物a與粉碎燕麥殼在200～400rpm下混合4～6min，然后提升轉(zhuǎn)速為600～800rpm混合3～5min，加入維生素e并提升轉(zhuǎn)速為1100～1300rpm繼續(xù)混合5～7min，最后交替切換600～800rpm和1100～1300rpm的轉(zhuǎn)速，每次2～3min，重復(fù)切換2～3次，完成均質(zhì)混合；

19、說明：將產(chǎn)物a與粉碎燕麥殼初步混合，低速攪拌使各組分初步接觸；中速可以形成剪切力打破顆粒團(tuán)聚，促進(jìn)納米蒙脫石與燕麥殼分散；高速均質(zhì)能夠利用高剪切力實(shí)現(xiàn)微米級(jí)混合，確保維生素e均勻分布；交替切換高、中速能夠減少局部溫度升高導(dǎo)致的凝膠結(jié)構(gòu)破壞，進(jìn)一步改善混合效果。

20、更進(jìn)一步地，所述均質(zhì)混合過程中，總均質(zhì)時(shí)間控制在20～25min，均質(zhì)過程中溫度保持在30～40℃；

21、說明：總均質(zhì)時(shí)間過長可能引起相分離；溫度的控制能夠避免海藻酸鈉熱降解。

22、進(jìn)一步地，按照1000～1500g/噸的比例添加到全價(jià)配合飼料中；

23、說明：按比例混合能夠避免過量導(dǎo)致代謝負(fù)擔(dān)或成本浪費(fèi)。

24、與現(xiàn)有的技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果是：

25、(1)益母草堿是益母草中的活性生物堿之一，具有抗動(dòng)脈粥樣硬化、抗氧化、保護(hù)血腦屏障等功能，傳統(tǒng)中藥在治療損傷性肝病方面有優(yōu)勢，包括減輕肝臟受損程度、減緩疾病進(jìn)展和清除有毒物質(zhì)；姜黃素具有調(diào)節(jié)肝臟藥物代謝酶的潛在能力，故其可以起到阻止afb1誘發(fā)的肝毒性，甚至是預(yù)防afb1誘發(fā)的肝毒性的作用，此外，姜黃素還可以起到抑制脂質(zhì)合成，改善脂質(zhì)沉積從而維持脂質(zhì)穩(wěn)態(tài)的作用；酵母水解物中的功能小肽、短鏈脂肪酸等在魚類肝臟和腸道組織結(jié)構(gòu)損傷后修復(fù)中也起顯著作用；本發(fā)明首次提出選用益母草堿作為鱸魚飼料能夠有效保肝修復(fù)肝損傷，從而預(yù)防加州鱸脂肪肝發(fā)生。

26、(2)本發(fā)明通過對(duì)姜黃素采用微囊包埋技術(shù)，解決姜黃素水溶性差、吸收率低的問題，使其在腸道緩釋，持續(xù)發(fā)揮抗氧化作用，通過具備抗炎、抗氧化功效的姜黃素與具備調(diào)節(jié)腸道菌群功效的益生菌負(fù)載在多孔淀粉上組成芯材，提升姜黃素在消化道中的保留率，使得緩釋時(shí)間延長，同時(shí)保護(hù)益生菌免受胃酸破壞，利用改性海藻酸鈉和脫氧膽酸作為壁材成分，促進(jìn)腸道內(nèi)膽汁酸循環(huán)，激活法尼醇x受體，抑制肝臟甘油三酯合成酶表達(dá)，進(jìn)一步降低脂肪肝發(fā)生率；在包埋過程中添加低聚果糖，能夠通過促進(jìn)腸道益生菌增殖，減少內(nèi)毒素向肝臟轉(zhuǎn)移，間接緩解脂肪肝進(jìn)展，有效預(yù)防加州鱸發(fā)生脂肪肝。

27、(3)本發(fā)明通過對(duì)姜黃素先進(jìn)行預(yù)處理，使得姜黃素的提取率達(dá)到90％以上后再更好的作用于肝臟內(nèi)的活性氧，減少脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，保護(hù)肝細(xì)胞膜完整性，在壁材中添加納米蒙脫石能夠利用其層狀結(jié)構(gòu)吸附游離ca2+并阻隔氧氣，使姜黃素氧化降解率進(jìn)一步降低；在產(chǎn)物a中添加維生素e，通過協(xié)同作用抑制脂質(zhì)過氧化，降低肝細(xì)胞氧化損傷；進(jìn)而有效預(yù)防加州鱸脂肪肝的發(fā)生。