自發(fā)酵液中提取恩拉霉素的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種一種自發(fā)酵液中提取恩拉霉素的方法，包括恩拉霉素發(fā)酵液滅活、板框過濾濕菌體、濕菌體經(jīng)搖擺顆粒機制粒，制取棕紅色提取液、制取淡黃色脫色液、制取濃縮液、結(jié)晶、得到白色粉末狀產(chǎn)品等步驟。本發(fā)明提取收率高，產(chǎn)品純度高，工藝簡潔，流程短，投資少，易投產(chǎn)。
【專利說明】自發(fā)酵液中提取恩拉霉素的方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001〕 本發(fā)明涉及一種提取恩拉霉素的方法。

【背景技術(shù)】
[0002]恩拉霉素對革蘭氏陽性菌有很強的抑制作用，其敏感細菌主要有金黃色葡萄球菌等各種革蘭氏陽性球菌、枯草桿菌、炭蛆桿菌破傷風(fēng)梭菌、肉毒梭菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌等。長期使用后不易產(chǎn)生抗藥性，不易被動物吸收，畜禽體內(nèi)殘留很少。恩拉霉素能改變腸道內(nèi)的細菌群落分布，有利于飼料營養(yǎng)成份的消化吸收，促進動物增重和提高飼料利用率，因此被世界上許多國家推薦作為抗生素促生長劑。恩拉霉素是放線菌發(fā)酵產(chǎn)生的一種由不飽和脂肪酸和十幾種氨基酸組成的多肽類抗生素，主要存在于發(fā)酵菌體細胞內(nèi)。目前恩拉霉素商品主要為預(yù)混劑，市場上的產(chǎn)品有4%和8%兩種含量的恩拉霉素預(yù)混劑，無直接自發(fā)酵液中提取恩拉霉素精品的報道。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明的目的在于提供一種提取收率高，產(chǎn)品純度高的自發(fā)酵液中提取恩拉霉素的方法。
[0004]本發(fā)明的技術(shù)解決方案是:
一種自發(fā)酵液中提取恩拉霉素的方法，其特征是:包括下列步驟:
(1)恩拉霉素發(fā)酵液1000匕發(fā)酵單位825611加1，含恩拉霉素8.256 ^ ；發(fā)酵液加熱至75-801，保溫300111，滅活，然后降溫至45-501:待用；
(2)滅活發(fā)酵液經(jīng)板框過濾，并用1501純化水套洗，然后用空氣吹至無水滴出，得到濕菌體 200.4 1? ；
(3)濕菌體經(jīng)搖擺顆粒機制粒，加入75%乙醇1200匕轉(zhuǎn)速30-50轉(zhuǎn)/分鐘攪拌下，加入亞硫酸鈉1208，用15%此1溶液調(diào)節(jié)？孤0，轉(zhuǎn)速30-50轉(zhuǎn)/分鐘攪拌2匕抽濾，濾餅再用460175%乙醇淋洗，抽干，得到棕紅色提取液1605匕恩拉霉素含量為4941.；
(4)萃取液用10%版10?溶液調(diào)9118.0，加入藥用活性炭16 ^，轉(zhuǎn)速30-50轉(zhuǎn)/分鐘攪拌脫色化，抽濾，用1001純化水洗滌活性炭，抽干；濾液再用0.45110的精密過濾器復(fù)濾，得到淡黃色脫色液17001 ；
(5)用15%此1溶液調(diào)節(jié)脫色液？肌0，溫度45?551:、真空度-0.0851？^濃縮，得到濃縮液205升，恩拉霉素含量為3775011加1 ；
(6)攪拌轉(zhuǎn)速10-30轉(zhuǎn)丨分鐘，緩慢降溫至5?81:，結(jié)晶10卜；離心，用95%乙醇洗滌晶體，濕晶體經(jīng)45。〇、-0丨0851？^干燥8卜，得到白色粉末狀產(chǎn)品7.56 1?，產(chǎn)品含量97011/呢。
[0005]本發(fā)明特點:
1、生產(chǎn)過程中添加抗氧化劑亞硫酸鈉，防止恩拉霉素在提取過程中被氧化，減少色素的廣生，從而提尚提取收率，廣品純度尚。
[0006]2、采用乙醇自發(fā)酵液中萃取恩拉霉素，無有害氣體產(chǎn)生，同時乙醇可以回收循環(huán)利用，降低生產(chǎn)成本。
[0007]3、與樹脂法提取工藝比較，僅使用少量酸堿，廢水排放少，有利于環(huán)境保護。
[0008]4、該項技術(shù)生產(chǎn)工藝簡潔，流程短，投資少，易投產(chǎn)。
[0009]下面結(jié)合實施例對本發(fā)明作進一步說明。

【具體實施方式】
[0010]一種自發(fā)酵液中提取恩拉霉素的方法，包括下列步驟:
1、恩拉霉素發(fā)酵液1000匕發(fā)酵單位825611加1，含恩拉霉素8.256蛣。
[0011]發(fā)酵液加熱至75-801，保溫30-11,滅活，然后降溫至45-501:待用。
[0012]2、滅活發(fā)酵液經(jīng)板框過濾，并用1501純化水套洗，然后用空氣吹至無水滴出，得到濕菌體200.4 1?，恩拉霉素含量為40.29^/呢，過濾收率為97.81%。
[0013]3、濕菌體經(jīng)搖擺顆粒機制粒，加入75%乙醇1200匕轉(zhuǎn)速30-50轉(zhuǎn)/分鐘攪拌下，加入亞硫酸鈉1208，用15%此1溶液調(diào)節(jié)？孤0，轉(zhuǎn)速30-50轉(zhuǎn)/分鐘攪拌2匕抽濾，濾餅再用460175%乙醇淋洗，抽干，得到棕紅色提取液1605匕恩拉霉素含量為4941.211加1，萃取收率為 98.21%0
[0014]4、萃取液用10%版10?溶液調(diào)9118.0，加入藥用活性炭16 ^，轉(zhuǎn)速30-50轉(zhuǎn)/分鐘攪拌脫色化，抽濾，用1001純化水洗滌活性炭，抽干。濾液再用0.4511111的精密過濾器復(fù)濾，得到淡黃色脫色液1700匕恩拉霉素含量為4597.9 11加1，脫色收率為98.56%。
[0015]5、用15%此1溶液調(diào)節(jié)脫色液？肌0，溫度45?551:、真空度-0.0851？^濃縮，得到濃縮液205升，恩拉霉素含量為3775011加1，濃縮收率為99.01%。
[0016]6、攪拌轉(zhuǎn)速10-30轉(zhuǎn)/分鐘，緩慢降溫至5?81:，結(jié)晶10卜。離心，用95%乙醇洗滌晶體，濕晶體經(jīng)45。〇、-0.0851？^干燥8卜，得到白色粉末狀產(chǎn)品7.56 1?，產(chǎn)品含量97011/呢。純度達到93%，提取總收率88.9%。
【權(quán)利要求】
1.一種自發(fā)酵液中提取恩拉霉素的方法，其特征是:包括下列步驟: (1)恩拉霉素發(fā)酵液1000L，發(fā)酵單位8256u/ml，含恩拉霉素8.256 kg ;發(fā)酵液加熱至75-80 °C，保溫30min，滅活，然后降溫至45-50 °C待用； (2)滅活發(fā)酵液經(jīng)板框過濾，并用150L純化水套洗，然后用空氣吹至無水滴出，得到濕菌體 200.4 kg ； (3)濕菌體經(jīng)搖擺顆粒機制粒，加入75%乙醇1200L，轉(zhuǎn)速30-50轉(zhuǎn)/分鐘攪拌下，加入亞硫酸鈉120g，用15%HC1溶液調(diào)節(jié)PH3.0，轉(zhuǎn)速30-50轉(zhuǎn)/分鐘攪拌2h，抽濾，濾餅再用460L75%乙醇淋洗，抽干，得到棕紅色提取液1605L，恩拉霉素含量為4941.2u/ml ； (4)萃取液用10%Na0H溶液調(diào)PH8.0，加入藥用活性炭16 kg，轉(zhuǎn)速30-50轉(zhuǎn)/分鐘攪拌脫色lh，抽濾，用100L純化水洗滌活性炭，抽干；濾液再用0.45um的精密過濾器復(fù)濾，得到淡黃色脫色液1700L ； (5)脫色液用10%氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)脫色液PH6.5，溫度45?55°C、真空度-0.085MPa濃縮，得到濃縮液205升，恩拉霉素含量為37750u/ml ； (6)攪拌轉(zhuǎn)速10-30轉(zhuǎn)/分鐘，緩慢降溫至5?8°C，結(jié)晶10h;離心，用95%乙醇洗滌晶體，濕晶體經(jīng)45°C、-0.085MPa干燥8h，得到白色粉末狀產(chǎn)品7.56 kg，產(chǎn)品含量970u/mg。
【文檔編號】C07K1/34GK104447958SQ201410752313
【公開日】2015年3月25日 申請日期:2014年12月11日 優(yōu)先權(quán)日:2014年12月11日
【發(fā)明者】陳劍慧, 孫玫, 林永彬, 劉懷宏, 羅小芹, 韓勤更 申請人:新疆天富陽光生物科技有限公司, 江蘇賽奧生化有限公司