一株屎腸球菌hew-a588及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及微生物學(xué)領(lǐng)域，具體地說，涉及一株屎腸球菌HEW-A588及其應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 屎腸球菌（Enterococcus faecium)，是人和動(dòng)物腸道中的正常菌群，其生長繁殖 速度快，為革蘭氏陽性鏈球或球菌，多成對(duì)或短鏈狀排列，通常不運(yùn)動(dòng)，無芽孢；其菌落呈圓 形、乳白色，表面凸起，邊緣整齊，濕潤光澤。屎腸球菌可以產(chǎn)乳酸和抑菌物質(zhì)，能夠抑制腸 道中致病菌及腐敗菌的繁殖，降低腹瀉率和死亡率，同時(shí)還可促進(jìn)動(dòng)物的消化吸收，改善腸 道內(nèi)微生態(tài)平衡，提高采食量及飼料轉(zhuǎn)化率，提高免疫力并保障動(dòng)物健康。屎腸球菌能夠附 著于腸道粘膜上并形成生物薄膜，抵御外界病原菌的入侵。
[0003] 屎腸球菌是一種兼性厭氧乳酸菌，它還可用于改善食品、飼料的品質(zhì)。相對(duì)于嚴(yán)格 厭氧、培養(yǎng)保存條件苛刻的雙歧桿菌、乳桿菌來說，屎腸球菌更便于生產(chǎn)和使用。大量研宄 表明，直接飼喂含有屎腸球菌的微生態(tài)制劑可提高畜禽的體增重，提高飼料利用率，降低腹 瀉率及死亡率。因此，屎腸球菌在畜牧生產(chǎn)中有廣泛的應(yīng)用前景。但大多益生菌對(duì)飼料加 工中的制粒工藝的高溫、運(yùn)輸及胃腸液和膽汁的耐受性較差，進(jìn)入腸道的活乳酸菌的種類 和數(shù)量不多，因此篩選獲得耐高溫、耐胃腸液和膽汁的乳酸菌可以解決這一系列的問題。
[0004] 乳酸菌的來源很多，可購買工業(yè)菌株和標(biāo)準(zhǔn)菌株，也可以從自然環(huán)境、土壤、酸奶、 泡菜等分離乳酸菌。然而益生菌最終是要飼喂動(dòng)物，因此相對(duì)其他來源的菌株，動(dòng)物無疑是 最好的來源。來源于動(dòng)物腸道的乳酸菌能夠適應(yīng)動(dòng)物腸道環(huán)境，耐受胃酸和膽鹽的消化。因 此，從動(dòng)物腸道分離和篩選的乳酸菌將是動(dòng)物用益生菌篩選的重要研宄方向。
[0005] 現(xiàn)有的屎腸球菌耐熱性、耐酸堿性、抑菌性能及發(fā)酵性能等都不理想，不能適應(yīng)日 益發(fā)展的工業(yè)化需求，尤其離目前飼料工業(yè)及畜牧養(yǎng)殖業(yè)目標(biāo)還有一定差距，因此，分離、 純化更加適合畜牧業(yè)發(fā)展需求的益生屎腸球菌菌株成為亟待解決的技術(shù)問題。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的是提供一株抗逆性和益生性強(qiáng)的屎腸球菌HEW-A588及其應(yīng)用。
[0007] 本發(fā)明的另一目的是提供由屎腸球菌HEW-A588制備的微生態(tài)制劑及動(dòng)物飼料。
[0008] 為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明目的，本發(fā)明提供的屎腸球菌（Enterococcus faeciums) HEW-A588是從健康仔豬直腸內(nèi)容物中分離獲得乳酸菌，經(jīng)過菌落形態(tài)觀察、產(chǎn)酸及抑菌性 能測試等獲得目標(biāo)菌株，該菌株耐性強(qiáng)、抗逆性和益生性更顯著?，F(xiàn)已保藏于中國微生物菌 種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心（簡稱CGMCC)，地址北京市朝陽區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)， 中國科學(xué)院微生物研宄所，郵編100101，保藏編號(hào)CGMCC No. 10547,保藏日期2015年2月 9曰。
[0009] 菌株HEW-A588具有以下微生物學(xué)特征：革蘭氏陽性菌，在MRS培養(yǎng)基上生長迅 速，37°C培養(yǎng)24h形成乳白色、圓形、表面光滑濕潤、凸起、邊緣整齊、直徑約Imm左右，菌落 形態(tài)見圖1，油鏡下觀察其菌體呈球形、成對(duì)成鏈或聚團(tuán)排列、無芽孢，兼性厭氧生長；菌株 HEW-A588生長溫度范圍：4°C -65°C，最適生長溫度：20°C -45°C ;生長適宜pH I. 5-11，最適 pH值為6-8。部分生理生化特性見表1。
[0010] 表1屎腸球菌HEW-A588部分生理生化特性
[0011]
【主權(quán)項(xiàng)】
1?屎腸球菌（Enterococcus faecium)HEW-A588,其保藏編號(hào)為 CGMCC No. 10547。
2. 由權(quán)利要求1所述屎腸球菌HEW-A588制備的微生態(tài)制劑。
3. 權(quán)利要求2所述微生態(tài)制劑的制備方法，其特征在于，包括以下步驟： 1) 發(fā)酵培養(yǎng)：將屎腸球菌HEW-A588的種子液接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中發(fā)酵培養(yǎng)得到發(fā)酵 液； 2) 發(fā)酵液經(jīng)離心獲得菌泥，然后經(jīng)混合、制粒，包被，即得屎腸球菌HEW-A588微生態(tài)制 劑。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于，步驟1)中用于制備種子液的 搖瓶培養(yǎng)基成分為：蔗糖1-5%，葡萄糖0.5-1. 5%，蛋白胨1-3%，酵母膏0.5-2. 0%， MgSO4 ? 7H200. 1-0. 5%，MnSO4 ? 4H200. 01-0. 05%，NaClO. 5-2. 0%，檸檬酸二銨 0? 1-0. 5%， CaCO30.0 5-1. 0 %，余量為水，pH7. 0±0. 4 ;搖瓶培養(yǎng)條件為：pH6. 3-7. 8,28-45°C，轉(zhuǎn)速 100-300r/m 培養(yǎng) 5-24h。
5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于，步驟1)中用于制備種子液的搖瓶培 養(yǎng)基成分為：蔗糖1.5%，葡萄糖0.5%，蛋白胨1.6%，酵母膏0.8%，MgSO 4 ? 7H200. 3%， MnSO4.4400. 02%，NaClO. 5%，檸檬酸二銨 0? 1%，CaCO30.0 5%，余量為水，pH6. 8±0. 2 ;搖 瓶培養(yǎng)條件為：pH6. 8, 37°C，轉(zhuǎn)速150r/m培養(yǎng)6. 5h。
6. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于，步驟1)中發(fā)酵培養(yǎng)基成分為：綿 白糖0. 5-1. 0 %，檸檬酸鈉0. 5-1. 5%，酵母膏1. 0-2. 0%，氯化鎂0. 04-0. 08%，氯化鈉 0? 05-0. 3%，硫酸錳 0? 01-0. 05%，磷酸氫二鉀 0? 05-0. 2%，檸檬酸鐵銨 0-0? 008%，吐 溫-800.05-0.15%，余量為水，？117.0±0.2;發(fā)酵條件為：裝液量為20-401培養(yǎng)基，接種 量為 100-300mL 種子液，pH6. 3-7. 8, 28-45°C，轉(zhuǎn)速 100-300r/min 發(fā)酵 4-24h，得二級(jí)種子 液；將二級(jí)種子液轉(zhuǎn)接到2 X IO4L發(fā)酵罐中，裝液量70%，然后pH6. 3-7. 8, 28-45°C，轉(zhuǎn)速 100-200r/min，發(fā)酵 10-14h。
7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的制備方法，其特征在于，發(fā)酵條件為：裝液量為20L培養(yǎng)基， 接種量為l〇〇mL，pH6. 8, 37°C，轉(zhuǎn)速120r/min發(fā)酵10h，得二級(jí)種子液；將二級(jí)種子液轉(zhuǎn)接到 2 X IO4L發(fā)酵罐中，裝液量70%，然后pH6. 8, 37°C，轉(zhuǎn)速120r/min發(fā)酵10h。
8. 權(quán)利要求1所述屎腸球菌HEW-A588、權(quán)利要求2所述微生態(tài)制劑在制備動(dòng)物飼料中 的應(yīng)用。
9. 含有權(quán)利要求1所述屎腸球菌HEW-A588、權(quán)利要求2所述微生態(tài)制劑的動(dòng)物飼料。
【專利摘要】本發(fā)明提供一株新分離的屎腸球菌(Enterococcus faecium)HEW-A588，該菌具有顯著的益生性以及抗逆性，由其制備的微生態(tài)制劑進(jìn)入動(dòng)物腸道，迅速活化、增殖，并能夠形成有益優(yōu)勢菌群，維持腸道平衡，不但可以提高動(dòng)物的飼料利用效率，節(jié)約成本，而且改善了動(dòng)物體內(nèi)消化道內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)態(tài)，促進(jìn)營養(yǎng)的吸收利用，促進(jìn)動(dòng)物生長，提高經(jīng)濟(jì)效益等功效，有著良好的應(yīng)用前景。CGMCC No.1054720150209
【IPC分類】C12R1-46, C12N1-20, A23K1-16
【公開號(hào)】CN104862254
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510275127
【發(fā)明人】李雪平
【申請(qǐng)人】北京好實(shí)沃生物技術(shù)有限公司
【公開日】2015年8月26日
【申請(qǐng)日】2015年5月26日