專利名稱：人催產(chǎn)素酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本實(shí)用新型屬于涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，具體而言，涉及人催產(chǎn)素Oxytocin(OT)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA)試劑盒。
背景技術(shù)：
催產(chǎn)素，Oxytocin(OT)，又稱縮宮素，是一種哺乳動(dòng)物激素。由9個(gè)氨基酸構(gòu)成的特殊結(jié)構(gòu)的環(huán)狀肽類激素，分子量為1007.19，在大腦下視丘“室旁核”與“視上核(supraoptic nucleus) ”神經(jīng)元所自然分泌,經(jīng)下視丘腦下垂體路徑神經(jīng)纖維送到后葉分泌。催產(chǎn)素在雌性哺乳動(dòng)物生產(chǎn)時(shí)大量釋放，擴(kuò)張子宮頸和收縮子宮，促進(jìn)分娩。分娩后催產(chǎn)素也會(huì)刺激乳頭，促進(jìn)乳汁產(chǎn)生。最近的研究已經(jīng)開始探討催產(chǎn)素對(duì)于各種行為的影響，包括性高潮、社會(huì)認(rèn)同、夫妻或情侶間的成對(duì)結(jié)合、焦慮，和產(chǎn)婦的行為等。出于這個(gè)原因，它有時(shí)被稱為“愛情激素”。催產(chǎn)素有助于減輕壓力及緩解疼痛。無(wú)法分泌催產(chǎn)素和無(wú)法感到同情和反社會(huì)，精神病，自戀和一般的操控個(gè)性有關(guān)。目前國(guó)際已報(bào)道的催產(chǎn)素定量測(cè)定方法主要有高效液相色譜法、放射免疫測(cè)定法和酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法。高效液相色譜法(HPLC)具有靈敏度高、準(zhǔn)確性和重復(fù)性好等優(yōu)勢(shì)，但需要昂貴的儀器設(shè)備，而且檢測(cè)過(guò)程繁瑣、樣本前處理的技術(shù)要求很高，難于操作。檢測(cè)人員需要具備專業(yè)的檢測(cè)技能和豐富的實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)。放射免疫分析法(RIA)是一種應(yīng)用放射性同位素的敏感性和抗原抗體反應(yīng)的特異性結(jié)合而成的體外微量分析方法。雖然該技術(shù)特異性較高，靈敏度也較高，但其局限性也很顯著，主要有以下幾點(diǎn):I)原料來(lái)源:必須使用放射性核素，需要防護(hù)和防止污染；2)穩(wěn)定性差:放射性同位素易衰減，標(biāo)記抗原有效使用時(shí)間短；3)難以實(shí)現(xiàn)操作和測(cè)量的自動(dòng)化。酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA)檢測(cè)技術(shù)是在RIA基本理論的基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的一種非放射性標(biāo)記免疫分析技術(shù)。利用抗原-抗體之間特異性的免疫反應(yīng)識(shí)別生物液體中的靶分子，并利用酶-底物的顯色反應(yīng)定量的反應(yīng)待測(cè)樣本中靶分子的含量。由于其特異性強(qiáng)、靈敏度、操作簡(jiǎn)便及不需大型儀器等優(yōu)點(diǎn)，現(xiàn)廣泛用于生物樣本的定量檢測(cè)實(shí)驗(yàn)中。酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒中的關(guān)鍵因素是獲得高特異性、高親和力的抗體，但由于人催產(chǎn)素是小分子多肽物質(zhì)，免疫原性較弱，通過(guò)傳統(tǒng)的免疫方法不易產(chǎn)生特異性的抗體，而本專利利用偶聯(lián)載體來(lái)增加其免疫原性，獲得高質(zhì)量的抗體。本專利從酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒制備的源頭入手，將人催產(chǎn)素與BSA偶聯(lián)，通過(guò)利用新技術(shù)提高偶聯(lián)效率，制備穩(wěn)定的0T-GA-BSA(催產(chǎn)素-戊二醛-牛血清白蛋白)，再使用免疫技術(shù)制備特異性高親和力強(qiáng)的抗體，為試劑盒的制備提供高品質(zhì)原材料。同法制得抗原OT-GA-OVA (催產(chǎn)素-戊二醛-雞卵白蛋白)。[0011]因此，有必要選用一種快速、簡(jiǎn)便能夠定量且靈敏度、準(zhǔn)確度和特異性高的方法來(lái)進(jìn)行人催產(chǎn)素的檢測(cè)。

實(shí)用新型內(nèi)容本實(shí)用新型目的是人催產(chǎn)素酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒，其操作簡(jiǎn)便，成本低，穩(wěn)定性好，可以滿足普通實(shí)驗(yàn)室的要求。為了實(shí)現(xiàn)本實(shí)用新型的目的，擬采用如下技術(shù)方案:本實(shí)用新型一方面涉及一種人催產(chǎn)素酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒，包括酶標(biāo)板，所述酶標(biāo)板包括固相載體和包被層，其特征在于:所述固相載體上設(shè)置有多個(gè)微孔，所述包被層附著在所述固相載體的微孔表面，所述包被層是由人催產(chǎn)素抗體和牛血清白蛋白依次涂布在所述固相載體的微孔表面上形成的復(fù)合層。在本實(shí)用新型的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方式中，所述的多個(gè)微孔是指96個(gè)微孔。在本實(shí)用新型的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方式中，所述的固相載體是聚苯乙烯試劑板。本專利通過(guò)高效的偶聯(lián)方法的得到穩(wěn)定性好的0T-GA-BSA，并通過(guò)免疫動(dòng)物得到特異性高及親和力強(qiáng)的抗體，用來(lái)制備人催產(chǎn)素免疫免疫吸附測(cè)定試劑盒。通過(guò)于與HPLC法的比較，其精密度、回收率、準(zhǔn)確性和批量檢測(cè)樣本等方面均優(yōu)于HPLC法。ELISA法比HPLC法樣品前處理簡(jiǎn)單得多，特異性好，無(wú)需純化濃縮。另外，ELISA法比HPLC法操作時(shí)間短，一次可處理大量樣品，節(jié)約了大量的人力、物力，提高了工作效率。而且，ELISA法比HPLC法投資小，儀器的使用不需要專業(yè)培訓(xùn)技術(shù)人員，更適合基層單位使用。

圖1為本實(shí)用新型一具體實(shí)施例酶標(biāo)板結(jié)構(gòu)示意圖。I固相載體，2微孔,3包被層。
具體實(shí)施方式
以下結(jié)合附圖和具體實(shí)施例對(duì)本實(shí)用新型作進(jìn)一步說(shuō)明，以使本領(lǐng)域的技術(shù)人員可以更好的理解本實(shí)用新型并能予以實(shí)施，但所舉實(shí)施例不作為對(duì)本實(shí)用新型的限定。如圖1所示，本實(shí)用新型試劑盒的酶標(biāo)板，其包括固相載體I和包被層3，固相載體I采用96孔聚苯乙烯試劑板(PS)。固相載體I上有多個(gè)微孔2，包被層3附著在固相載體上的微孔2上。包被層3是包括抗人催產(chǎn)素抗體和牛血清白蛋白的復(fù)合層。本專利采用效率高的新型偶聯(lián)技術(shù)，獲得穩(wěn)定性好的0T-GA-BSA，并利用免疫技術(shù)制備高特異性及高親和力的抗體，將其應(yīng)用于酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒的制備和生產(chǎn)中。為了制備高品質(zhì)的酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒，首先必須制備出效價(jià)高特異性強(qiáng)的抗體。人催產(chǎn)素是小分子多肽物質(zhì)，本身不具有誘導(dǎo)產(chǎn)生抗體的能力。為此，必須設(shè)法先將人催產(chǎn)素與載體蛋白BSA偶聯(lián)制備成全抗原，這是制備高品質(zhì)人催產(chǎn)素酶聯(lián)免疫試劑盒的最為關(guān)鍵的因素之一。1、人催產(chǎn)素酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒的研制:本試劑盒應(yīng)用競(jìng)爭(zhēng)抑制酶聯(lián)免疫分析法測(cè)定血清或血漿樣本中人催產(chǎn)素的水平。制備過(guò)程如下:使用96孔聚苯乙烯試劑板(PS)作為固相載體，先將其置于紫外光下輻照2小時(shí)，使PS板活化。在試劑板微孔條上預(yù)先包被一定濃度的抗體，4°C過(guò)夜，經(jīng)洗板及牛血清白蛋白封閉處理后制成包被好的酶標(biāo)板。檢測(cè)時(shí)，依次加入待測(cè)標(biāo)本及生物素化的人催產(chǎn)素，形成待測(cè)標(biāo)本中的人催產(chǎn)素和生物素化的人催產(chǎn)素競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合酶標(biāo)板上包被的抗體的局面，再通過(guò)親和素化辣根過(guò)氧化物酶(HRP)放大信號(hào)，以3，3'，5，5'-四甲基聯(lián)苯胺(TMB)及硫酸分別作為底物及終止液，完成人催產(chǎn)素的酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒的制備。經(jīng)過(guò)對(duì)試劑盒一系列的質(zhì)量指標(biāo)檢測(cè)，包括靈敏度、重復(fù)性、特異性、回收率及線性測(cè)定，表明該檢測(cè)體系成熟，本試劑盒各項(xiàng)指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果:a.標(biāo)準(zhǔn)曲線
權(quán)利要求1.人催產(chǎn)素酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒，包括酶標(biāo)板，所述酶標(biāo)板包括固相載體和包被層，其特征在于:所述固相載體上設(shè)置有多個(gè)微孔，所述包被層附著在所述固相載體的微孔表面，所述包被層是由抗人催產(chǎn)素抗體和牛血清白蛋白依次涂布在所述固相載體的微孔表面上形成的復(fù)合層。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的人催產(chǎn)素酶聯(lián)免疫吸附免疫測(cè)定試劑盒，所述的多個(gè)微孔是指96個(gè)微孔。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的人催產(chǎn)素酶聯(lián)免疫吸附免疫測(cè)定試劑盒，所述的固相載體是聚苯乙烯試劑板。
專利摘要本實(shí)用新型公開了人催產(chǎn)素酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒，包括酶標(biāo)板，所述酶標(biāo)板包括固相載體和包被層，其特征在于所述固相載體上設(shè)置有多個(gè)微孔，所述包被層附著在所述固相載體的微孔表面，所述包被層是由抗人催產(chǎn)素抗體和牛血清白蛋白依次涂布在所述固相載體的微孔表面上形成的復(fù)合層。本實(shí)用新型的試劑盒操作簡(jiǎn)便，成本低，穩(wěn)定性好，可以滿足普通實(shí)驗(yàn)室的要求。
文檔編號(hào)G01N33/544GK202994796SQ20122061628
公開日2013年6月12日 申請(qǐng)日期2012年11月9日 優(yōu)先權(quán)日2012年11月9日
發(fā)明者萬(wàn)定一, 何峰容, 朱馨蕾, 楊娟, 汪景, 謝正紅, 李慶, 叢旭霞, 劉曉樂(lè) 申請(qǐng)人:武漢優(yōu)爾生科技股份有限公司