3-(6-溴-4-氧-4H-色酮)-1-苯基-5-對氯苯基-1,6a-二氫吡咯啉[3,4-c]吡唑-4,6(3aH ...的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種3?（6?溴?4?氧?4H?色酮）?1?苯基?5?對氯苯基?1,6a?二氫吡咯啉[3,4?c]吡唑?4,6（3aH,5H）?二酮及其制備方法與應用，該制備方法用1,3?偶極環(huán)加成方法在N?對氯苯基馬來酰亞胺引入五元吡唑環(huán)的基礎(chǔ)上導入了色酮的結(jié)構(gòu)，從而合成一個新型的3?（6?溴?4?氧?4H?色酮）?1?苯基?5?對氯苯基?1,6a?二氫吡咯啉[3,4?c]吡唑?4,6（3aH,5H）?二酮，上述化合物對于腫瘤細胞株具有良好的抑制作用，其中對于白血病細胞具有更好的抑制率和選擇性，在制備抗腫瘤藥物等方面，具有非常好的工業(yè)應用前景。
【專利說明】
3- (6-溴-4-氧-4H-色酮)-1 -苯基-5-對氯苯基-1 , 6a-二氫吡 咯啉[3,4-c]吡唑-4,6(3aH,5H)-二酮及其制備方法與應用
技術(shù)領(lǐng)域：
[0001 ]本發(fā)明涉及一種新的含有色酮結(jié)構(gòu)的吡唑類N-對氯苯基馬來酰亞胺衍生物，具體 是指3-(6-溴-4-氧-4H-色酮)-1-苯基-5-對氯苯基-1，6a-二氫吡咯啉[3，4-c]吡唑_4,6 (3aH，5H)_二酮及其制備方法與應用。
【背景技術(shù)】：
[0002] N-對氯苯基馬來酰亞胺，化學名：1_苯基吡咯烷-2，5_二酮，化學結(jié)構(gòu)式如下：
[0003]
1-對氯苯基吡咯焼-2, 5-二酮
[0004] 1，3_偶極環(huán)加成反應以其良好的區(qū)域和主體選擇性而成為合成五元雜環(huán)化合物 最主要的方法，也是雜環(huán)藥物化學研究中較為活躍的一類反應。近幾年來，由于色酮廣泛的 生物活性，諸如抗癌、抗菌、抑制血小板凝聚等而倍受關(guān)注。所以，無論是從藥理學還是從合 成角度考慮，這類雜環(huán)化合物都有很高的合成價值。
[0005] 吡唑衍生物作為一類有用的中間體以及它們本身所顯示出來的多種藥物活性而 受到人們的廣泛關(guān)注。本發(fā)明通過研究不同雜環(huán)在同一分子中聚集而對藥理活性所產(chǎn)生的 影響，從而提供一種全新的含有色酮結(jié)構(gòu)的吡唑類N-對氯苯基馬來酰亞胺衍生物。

【發(fā)明內(nèi)容】
：
[0006] 本發(fā)明的第一方面目的是提供一種新的含有色酮結(jié)構(gòu)的吡唑類N-對氯苯基馬來 酰亞胺衍生物。
[0007] 本發(fā)明采取的技術(shù)方案如下：
[0008] -種含有色酮結(jié)構(gòu)的吡唑類N-對氯苯基馬來酰亞胺衍生物，其化學名稱為:3-(6-溴-4-氧-4H-色酮)-1-苯基-5-對氯苯基-I，6a-二氫吡咯啉[3，4-c]吡唑-4，6 (3aH，5H)-二 酮，其結(jié)構(gòu)式如下：
[0012]
【申請人】通過研究發(fā)現(xiàn):使用色酮衍生物在吡唑的結(jié)構(gòu)上進行取代，對N-對氯苯基 馬來酰亞胺進行結(jié)構(gòu)改造，獲得了一種全新的含有色酮結(jié)構(gòu)的吡唑類N-對氯苯基馬來酰亞 胺衍生物，該化合物可以改變藥理活性。
[0013] 本發(fā)明的第二方面目的是提供一種上述含有色酮結(jié)構(gòu)的吡唑類N-對氯苯基馬來 酰亞胺衍生物的制備方法，其特征在于，包括以下步驟:將順丁烯二酸酐和對氯苯胺反應合 成N-對氯苯基馬來酰亞胺(3)，然后采用6-溴代色酮與苯肼脫水反應合成6-溴代色酮苯腙 (4)，最后將N-對氯苯基馬來酰亞胺(3)和6-溴代色酮苯腙(4)進行偶極環(huán)加成反應，合成3-(6-溴-4-氧-紐-色酮)-1-苯基-5-對氯苯基-1，6 &-二氫吡咯啉[3,4-0]吡唑-4,6(3&!1，5!〇-二酮(5)。
[0014] 本發(fā)明涉及的反應方程式如下：
[0015；
[0016] 進一步的，所述的一種3-(6-溴-4-氧-4H-色酮)-1_苯基-5-對氯苯基-I，6a-二氫 吡咯啉[3，4-c ]吡唑-4，6 (3aH，5H)-二酮的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
[0017] (1)、N-對氯苯基馬來酰亞胺的合成：
[0018] 將順丁烯二酸酐和對氯苯胺溶解于丙酮溶劑中，在攪拌下反應，并逐步產(chǎn)生淡黃 色沉淀，室溫反應1小時后，取少量沉淀，經(jīng)水洗、干燥，依次加入醋酸錳、三乙胺和醋酐，升 溫后，沉淀逐步溶解，在50~60°C下反應2小時，溶液由橙黃變成紅黑，逐漸出現(xiàn)新的沉淀， 冷卻至室溫，沉淀經(jīng)水洗、干燥，用丙酮重結(jié)晶得到產(chǎn)物N-對氯苯基馬來酰亞胺(3);
[0019] (2)、6_溴代色酮苯腙的合成：
[0020] 所述的6-溴代色酮苯腙(4)為已知化合物，CAS號為68287-82-1，本發(fā)明采用6-溴 代色酮與苯肼脫水反應生成席夫堿的方法進行合成:取2mmol的苯肼加入盛有IOmL四氫呋 喃的燒瓶中，沸水浴回流攪拌至溶解，然后緩慢滴加入20mL溶有2mmol 6-溴代色酮的無水 乙醇溶液，繼續(xù)沸水浴回流攪拌Ih，滴加10滴鹽酸，有淡黃色沉淀出現(xiàn);連續(xù)沸水浴回流攪 拌5h，停止水浴，加人20mL蒸餾水攪拌，淡黃色沉淀顏色變深，抽濾得6-溴代色酮苯腙，為黃 紅色針狀產(chǎn)物，用無水乙醚沖洗多次，真空干燥得產(chǎn)物6-溴代色酮苯腙(4);
[0021] (3)、3-(6-溴-4-氧-紐-色酮）-1-苯基-5-對氯苯基-1，6&-二氫吡咯啉[3,4-(：]吡 唑-4,6(3aH，5H)_二酮的合成：
[0022] 將lmmol N-對氯苯基馬來酰亞胺和I. Immol色酮苯腙于20mL乙醇中，再加入1.2mL 氯胺T，回流12小時。將沉淀過濾，清洗，用甲醇再結(jié)晶，真空干燥后得到產(chǎn)物3-(6-溴-4-氧- 4H-色酮）-1-苯基-N-對氯苯基-l，6a-二氫吡咯啉[3,4-c]吡唑-4,6(3aH，5H)_二酮(5)。 [0023]更進一步的設(shè)置在于：
[0024]所述的步驟(1)中，反應得到的淡黃色沉淀需進行減壓過濾。
[0025]本發(fā)明的第三方面目的是提供一種3-(6-溴-4-氧-4H-色酮）-1-苯基-5-對氯苯 基-l，6a-二氫吡咯啉[3,4-c]吡唑-4,6(3&!1，5!〇-二酮在制備抗腫瘤藥物方面的應用。通過 實驗驗證:上述化合物，對于不同瘤株如人肝癌細胞、口腔癌細胞、胃癌細胞、卵巢癌細胞、 白血病細胞、腸癌細胞等，均具有抑制作用，其中對于白血病細胞具有更佳的抑制率和選擇 性，可單獨制備抗腫瘤藥物、也可以作為活性成分與其他抗腫瘤藥物制備抗腫瘤組合物，具 有非常好的工業(yè)應用前景。
[0026] 本發(fā)明的有益效果如下：
[0027] 本
【申請人】經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，使用色酮衍生物在吡唑的結(jié)構(gòu)上進行取代，對N-對氯苯基 馬來酰亞胺進行結(jié)構(gòu)改造，獲得了一種全新的含有色酮結(jié)構(gòu)的吡唑類N-對氯苯基馬來酰亞 胺衍生物，該化合物可以改變藥理活性，經(jīng)進一步實驗及分析，研究不同雜環(huán)在同一分子中 聚集而對藥理活性所產(chǎn)生的影響，
【申請人】通過偶極環(huán)加成反應合成了含有色酮結(jié)構(gòu)的吡唑 類N-對氯苯基馬來酰亞胺衍生物，該方法制備的新型含有色酮結(jié)構(gòu)的吡唑類N-對氯苯基馬 來酰亞胺衍生物，在制備抗腫瘤藥物方面，具有非常好的工業(yè)應用前景。
【具體實施方式】：
[0028] 以下結(jié)合實施例對本發(fā)明做進一步描述，但實施例不應解釋為限定本發(fā)明的范 圍。
[0029]實施例1:N-對氯苯基馬來酰亞胺的合成：
[0030]將順丁烯二酸酐和對氯苯胺溶解于一定量的丙酮溶劑中，在攪拌下將對氯苯胺溶 液滴加至含有順丁烯二酸酐溶液的反應瓶，反應放熱并逐步產(chǎn)生淡黃色沉淀，室溫反應1小 時后，取少量沉淀，經(jīng)水洗、干燥，依次加入醋酸錳、三乙胺和醋酐，升溫后，沉淀逐步溶解， 在50~60 °C下反應2小時，溶液由橙黃變成紅黑，冷卻至室溫，水中沉淀經(jīng)大量水洗、干燥， 用丙酮重結(jié)晶得到產(chǎn)物N-對氯苯基馬來酰亞胺(3)。
[0031] 實施例2:6_溴代色酮苯腙的合成：
[0032] 采用6-溴代色酮與苯肼脫水反應生成席夫堿的方法，具體操作:取2mmol的苯肼加 入盛有IOmL四氫呋喃的燒瓶中，沸水浴回流攪拌至溶解，然后緩慢滴加入20mL溶有2mmo 16-溴代色酮的無水乙醇溶液，繼續(xù)沸水浴回流攪拌lh，滴加10滴鹽酸，有淡黃色沉淀出現(xiàn)。連 續(xù)沸水浴回流攪拌5h，停止水浴，加人20mL蒸餾水攪拌，淡黃色沉淀顏色變深，抽濾得苯腙， 黃紅色針狀產(chǎn)物。用無水乙醚沖洗多次，真空干燥得產(chǎn)物6-溴代色酮苯腙(4)。
[0033] 實施例3:3_ (6-溴-4-氧-4H-色酮）-1-苯基-5-對氯苯基-l，6a-二氫吡咯啉[3,4_ c]吡唑-4,6(3&!1，5!〇-二酮的合成：
[0034] 將lmmol N-對氯苯基馬來酰亞胺和I. Immol色酮苯腙于20mL乙醇中，再加入1.2mL 氯胺T，回流12小時。將沉淀過濾，清洗，用甲醇再結(jié)晶，真空干燥后得到產(chǎn)物3-(6-溴-4-氧-4H-色酮）-1-苯基-N-對氯苯基-l，6a-二氫吡咯啉[3,4-c]吡唑-4,6(3aH，5H)_二酮(5)。產(chǎn) 物為黃色結(jié)晶，產(chǎn)率 54.2%，m.p.l73.5-174.5°C。
[0035] 化合物（5)結(jié)構(gòu)確認:C26H15BrC I N3〇4
[0036] 1H 匪R(DMSO)S :7.288-7.492(m，12H，Ar-H)，6.47(s，lH，C = C-H)，5.84(d，J = 1010Hz,lH),5.33(d ,J = 1014Hz,lH),
[0037] IR 3457(N-C = 0) ,3085(ArH), 1730(C = 0), 1578(C = N), 1292(C-〇-C)cm_1
[0038] m/e: 548.99( 100.0% ), 546.99(77.2% ) 〇
[0039] Anal.calcd.for C26Hi5BrClN3〇4:C，56.92;H，2.78;N，7.66〇
[0040] 應用實施例4:采用MTT法檢測受試化合物(5)對不同瘤株的的抗腫瘤活性。
[0041 ]將上述實施例制備的化合物（5)，分別以不同瘤株[腫瘤細胞Bel-7402(人肝癌細 胞）、KB(口腔癌細胞）、SGC7901(胃癌細胞）、H08901 (卵巢癌細胞）、HL-60(白血病細胞）、 ECA109(腸癌細胞）]為實驗對象，測試化合物(5)對于不同瘤株的體外抑制作用：實驗采用 四甲基偶氮唑鹽微量酶反應比色法(MTT法），活性用半數(shù)抑制濃度表示（IC 50)。
[0042]具體實驗步驟如下：
[0043]將化合物5用DMSO溶解，稀釋，腫瘤細胞Bel-7402(人肝癌細胞）、KB(口腔癌細胞）、 SGC7901(胃癌細胞）、H08901 (卵巢癌細胞）、HL-60(白血病細胞）、ECA109(腸癌細胞)在96孔 板上種入4000個/200yL/孔，每孔加入化合物2yL，終濃度為12. ΟμΜ，6. ΟμΜ，3. ΟμΜ，1.5μΜ，共 同于37°C、5 %CO2細胞培養(yǎng)箱中孵育72小時，以DMS0(1 % )為空白對照。72小時后，加入終濃 度為0.25mg/mL的MTT，置于37 °C、5 % CO2細胞培養(yǎng)箱中4小時，之后吸干溶劑，每孔加入100μ I DMS0,用酶聯(lián)免疫儀于570nm處測定吸光度(0D值），所得數(shù)據(jù)用于計算IC5q值。挑選抑制活 性高的化合物，測定不同濃度下的化合物作用時間不同對人腫瘤細胞周期和凋亡的影響。
[0044]不同濃度的受試化合物用96孔板進行粗篩，根據(jù)所得的抑制率，計算IC5q值，結(jié)果 見下表。
[0045]表1、吡唑類N-對氯苯基馬來酰亞胺衍生物對六種腫瘤細胞株的1(：50值
[0047]通過上表數(shù)據(jù)可以看出：本發(fā)明制備的化合物，對于六種腫瘤細胞株均具有抑制 作用，其中對于HL-60(白血病細胞)具有更好的抑制率和選擇性，可以單獨制備抗腫瘤藥 物、也可以作為活性成分與其他抗腫瘤藥物制備抗腫瘤組合物，具有非常好的工業(yè)應用前 景。
【主權(quán)項】
1.3-(6-溴-4-氧-4H-色酮)-1-苯基-5-對氯苯基-l，6a-二氫吡咯啉[3,4-c]吡唑-4,6 (3aH，5H)_二酮，其結(jié)構(gòu)式如下：2. -種3-( 6-溴-4-氧-4H-色酮)-1-苯基-5-對氯苯基-1，6a-二氫吡咯啉[3，4-c ]吡唑-4,6(3aH，5H)_二酮的制備方法，其特征在于，包括以下步驟:將順丁烯二酸酐和對氯苯胺反 應合成N-對氯苯基馬來酰亞胺，然后采用6-溴代色酮與苯肼脫水反應合成6-溴代色酮苯 腙，最后將N-對氯苯基馬來酰亞胺和6-溴代色酮苯腙進行偶極環(huán)加成反應，合成3-(6-溴- 4-氧-4H-色酮)-1 -苯基-5-對氯苯基-1，6a-二氫吡咯啉[3，4-c ]吡唑-4，6 (3aH，5H)-二酮。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種3-(6-溴-4-氧-4H-色酮)-1_苯基-5-對氯苯基-1，6a-二 氫吡咯啉[3，4-c ]吡唑-4，6 (3aH，5H)-二酮的制備方法，其特征在于，包括以下步驟： (1) 、N-對氯苯基馬來酰亞胺的合成： 將順丁烯二酸酐和對氯苯胺溶解于丙酮溶劑中，在攪拌下反應，并逐步產(chǎn)生淡黃色沉 淀，室溫反應1小時后，取少量沉淀，經(jīng)水洗、干燥，依次加入醋酸錳、三乙胺和醋酐，升溫后， 沉淀逐步溶解，在50~60°C下反應2小時，溶液由橙黃變成紅黑，逐漸出現(xiàn)新的沉淀，冷卻至 室溫，沉淀經(jīng)水洗、干燥，用丙酮重結(jié)晶得到產(chǎn)物N-對氯苯基馬來酰亞胺； (2) 、6_溴代色酮苯腙的合成： 取2mmo 1的苯肼加入盛有1 OmL四氫呋喃的燒瓶中，沸水浴回流攪拌至溶解，然后緩慢滴 加入20mL溶有2mmo 1 6-溴代色酮的無水乙醇溶液，繼續(xù)沸水浴回流攪拌lh，滴加10滴鹽酸， 有淡黃色沉淀出現(xiàn);連續(xù)沸水浴回流攪拌5h，停止水浴，加人20mL蒸餾水攪拌，淡黃色沉淀 顏色變深，抽濾得6-溴代色酮苯腙，為黃紅色針狀產(chǎn)物，用無水乙醚沖洗多次，真空干燥得 產(chǎn)物； (3) 、3-(6-溴-4-氧-紐-色酮）-1-苯基-5-對氯苯基-1，6&-二氫吡咯啉[3,4-〇]吡唑-4， 6(3aH，5H)_二酮的合成： 將lmmol N-對氯苯基馬來酰亞胺和l.lmmol 6-溴代色酮苯腙于20mL乙醇中，再加入 1.2mL氯胺T，回流12小時。將沉淀過濾，清洗，用甲醇再結(jié)晶，真空干燥后得到產(chǎn)物3-(6-溴- 4-氧-4H-色酮）-1-苯基-N-對氯苯基-l，6a-二氫吡咯啉[3,4-c]吡唑-4,6(3aH，5H)_二酮。4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種3-(6-溴-4-氧-4H-色酮)-1_苯基-5-對氯苯基-1，6a_二 氫吡咯啉[3，4-c ]吡唑-4，6 (3aH，5H)-二酮的制備方法，其特征在于:所述的步驟（1)中，反 應得到的淡黃色沉淀需進行減壓過濾。5. -種權(quán)利要求1所述化合物在制備抗腫瘤藥物方面的應用。
【文檔編號】A61P35/00GK105859724SQ201610282184
【公開日】2016年8月17日
【申請日】2016年4月29日
【發(fā)明人】鄧莉平, 王瑋, 陳國慶, 胡純琦, 吳春雷, 莫憶偉, 李琰
【申請人】紹興文理學院