本發(fā)明涉及一種bt可濕性粉劑及其制備方法，具體涉及一種含納米二氧化硅bt可濕性粉劑及其制備方法，屬于生物農(nóng)藥技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)：

蘇云金芽胞桿菌（bacillusthuringiensis，簡(jiǎn)稱bt）是一種內(nèi)生芽孢的革蘭氏陽(yáng)性土壤細(xì)菌，對(duì)鱗翅目、膜翅目、同翅目、螨類和原蟲等有一定的作用。bt的來(lái)源十分豐富，許多材料如土壤、植物葉片、糞便、動(dòng)物活體中都能分離到bt菌。bt能產(chǎn)生多種毒性，如伴孢晶體、營(yíng)養(yǎng)期殺蟲蛋白、雙效菌素和幾丁質(zhì)酶等，其中伴孢晶體是bt殺蟲的主要成分。與傳統(tǒng)的化學(xué)農(nóng)藥相比，bt制劑安全性較強(qiáng)，但其產(chǎn)品的穩(wěn)定性差，殘效期短，殺蟲速度較慢，而且受施用環(huán)境影響大，不能抗紫外線等。

納米材料是指其結(jié)構(gòu)單元的尺寸介于1納米～100納米范圍之間。它具有表面效應(yīng)、小尺寸效應(yīng)和宏觀量子隧道效應(yīng)等特性，使得納米材料具有特殊的光學(xué)、導(dǎo)熱導(dǎo)電等特性。當(dāng)前納米材料已在不同的領(lǐng)域被廣泛的應(yīng)用，利用納米材料作為藥物的載體，可以控制藥物的釋放速度、增加藥物的生物膜透過(guò)性并且提高藥物的生物利用度。因而將納米材料應(yīng)用于農(nóng)藥領(lǐng)域，具有用藥量少、藥效穩(wěn)定、持效期長(zhǎng)等優(yōu)點(diǎn)。

納米二氧化硅是一種無(wú)機(jī)化工材料，具有比表面積大、吸附能力強(qiáng)、分散性好等特點(diǎn)，在催化、石油化工、脫色劑、填充劑、醫(yī)藥和環(huán)保等領(lǐng)域都有廣泛的應(yīng)用。具有對(duì)抗紫外性的光學(xué)性能，對(duì)環(huán)境毒性低。當(dāng)前納米二氧化硅的合成方法主要分為物理法和化學(xué)法，合成方法較為簡(jiǎn)單，價(jià)格相對(duì)低廉。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是提供一種含納米二氧化硅bt可濕性粉劑及其制備方法，用于解決當(dāng)前蘇云金芽孢桿菌粉劑抗紫外照射能力差，殺蟲活性較低的問(wèn)題。

本發(fā)明一種含納米二氧化硅bt可濕性粉劑的制備方法，其特征在于制備步驟如下：

（1）制備種子液：取標(biāo)準(zhǔn)菌株bthd73接種于lb固體培養(yǎng)基中，在30℃的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時(shí)，然后用接種環(huán)挑取單斑，接種于5ml的lb液體培養(yǎng)基中，于30℃，200rpm培養(yǎng)箱中振蕩培養(yǎng)12小時(shí)，得到種子液；

（2）制備bt發(fā)酵液：取步驟（1）的種子液，按2%的體積比接種至lb液體培養(yǎng)基中，于30℃,200rpm培養(yǎng)箱中振蕩培養(yǎng)，直到芽孢脫落量以及伴孢晶體的含量均為50%，得到bt發(fā)酵液；

（3）制備胞晶混合物：取步驟（2）的bt發(fā)酵液，調(diào)節(jié)ph值至4.5，然后8000rpm，離心30分鐘，收集沉淀物，得到胞晶混合物；

（4）制備含納米二氧化硅bt可濕性粉劑：按質(zhì)量份組配，取步驟（3）的胞晶混合物3~15份和納米二氧化硅2~8份，攪拌混勻；加入潤(rùn)濕劑0.1~0.4份、乳化劑0.1~0.4份、分散劑1~2.5份、展著劑0.5~2份、助溶劑1~4份，攪拌混勻；在60℃條件下烘至含水率為5%，取出，研磨粉碎，過(guò)75微米的篩，得到含納米二氧化硅bt可濕性粉劑。

其中，步驟（4）中所述的按質(zhì)量份組配：取步驟（3）的胞晶混合物9份和納米二氧化硅6份，攪拌混勻；加入潤(rùn)濕劑0.3份、乳化劑0.2份、分散劑2.5份、展著劑1.5份、助溶劑1份，攪拌混勻。

步驟（4）中所述的按質(zhì)量份組配：取步驟（3）的胞晶混合物9份和納米二氧化硅6份，攪拌混勻；加入潤(rùn)濕劑0.2份、乳化劑0.2份、分散劑1.0份、展著劑2份、助溶劑3份，攪拌混勻。

步驟（4）中所述的按質(zhì)量份組配：取步驟（3）的胞晶混合物9份和納米二氧化硅6份，攪拌混勻；加入潤(rùn)濕劑0.1份、乳化劑0.2份、分散劑1.5份、展著劑1份、助溶劑2份，攪拌混勻。

步驟（4）中所述的潤(rùn)濕劑為吐溫80、乳化劑為tritonx-100、分散劑為普魯蘭多糖、展著劑為聚乙烯醇、助溶劑為丙二醇。

所述納米二氧化硅為固體，由市場(chǎng)購(gòu)得。

本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)及有益之處：

1、本發(fā)明以納米二氧化硅作為載體，加入吐溫80作為潤(rùn)濕劑，tritonx-100作為乳化劑，普魯蘭多糖作為分散劑，聚乙烯醇作為展著劑，丙二醇作為助溶劑。且添加了新的載體、新的助劑，彌補(bǔ)了當(dāng)前bt粉劑的缺陷。

2、本發(fā)明的bt可濕性粉劑中，以納米二氧化硅作為bt胞晶混合物的載體，具有較高的吸附容量，并且能夠有效的保護(hù)bt有效成分，在強(qiáng)紫外照射6h后仍能維持很高的生物活性，比不含納米二氧化硅的bt可濕性粉劑的致死率高3.7倍。

3、本發(fā)明的bt可濕性粉劑具有很好的殺蟲活性，與僅含胞晶混合物的粉劑相比，其生物活性提高了12倍；并且本發(fā)明的胞晶混合物的用量少，經(jīng)折算僅含3%~15%，而現(xiàn)有的bt可濕性粉劑胞晶混合物含量一般為50%，cn102027999a專利的胞晶混合物含量達(dá)50%~70%，相比之下，本發(fā)明的bt可濕性粉劑，大大降低了胞晶混合物的用量具有防治效率高且社會(huì)經(jīng)濟(jì)效益高的特點(diǎn)。

具體實(shí)施方式為了進(jìn)一步闡明本發(fā)明而不是限制本發(fā)明，以下結(jié)合實(shí)施例加以說(shuō)明。下述實(shí)施例中所述實(shí)驗(yàn)方法，如無(wú)特殊說(shuō)明，均為常規(guī)方法。

實(shí)施例一、一種含納米二氧化硅bt可濕性粉劑的制備方法，包括以下步驟：

（1）制備種子液：取標(biāo)準(zhǔn)菌株bthd73接種于lb固體培養(yǎng)基中，在30℃的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時(shí)，然后用接種環(huán)挑取單斑，接種于5ml的lb液體培養(yǎng)基中，于30℃，200rpm培養(yǎng)箱中振蕩培養(yǎng)12小時(shí)，得到種子液。所述的lb固體培養(yǎng)基包括：胰蛋白胨10g/l，酵母粉5g/l，氯化鈉10g/l，瓊脂粉5g/l；lb液體培養(yǎng)基為：胰蛋白胨10g/l，酵母粉5g/l，氯化鈉10g/l，ph值7.0。

（2）制備bt發(fā)酵液：取步驟（1）的種子液，按2%的體積比接種至100ml的lb液體培養(yǎng)基中，于30℃,200rpm培養(yǎng)箱中振蕩培養(yǎng)，直到芽孢脫落量以及伴孢晶體的含量均為50%，得到bt發(fā)酵液；

（3）制備胞晶混合物：取步驟（2）的bt發(fā)酵液，調(diào)節(jié)ph值至4.5，然后8000rpm，離心30分鐘，收集沉淀物，得到胞晶混合物；

（4）制備含納米二氧化硅bt可濕性粉劑：按質(zhì)量份組配，取步驟（3）的胞晶混合物9份和納米二氧化硅6份，攪拌混勻；加入潤(rùn)濕劑0.3份、乳化劑0.2份、分散劑2.5份、展著劑1.5份、助溶劑1份，攪拌混勻；在60℃條件下烘至含水率為5%，取出，研磨粉碎，過(guò)75微米的篩，得到含納米二氧化硅bt可濕性粉劑。

實(shí)施例二、一種含納米二氧化硅bt可濕性粉劑的生物活性測(cè)定

1、確定bt胞晶混合物的質(zhì)量，利用棉鈴蟲2齡幼蟲進(jìn)行生物活性測(cè)定。具體測(cè)定方法為：配置新鮮的飼料至96孔板中，往孔板中均勻的加入不同重量百分比的胞晶混合物。每孔加入3只幼蟲，每個(gè)處理重復(fù)12次。具體結(jié)果如表1所示。同時(shí)以加入無(wú)菌水作為空白對(duì)照。處理后置于溫度為25±2℃，光照時(shí)間為14h的生化培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，24h后觀察幼蟲的生長(zhǎng)狀況，記錄死亡數(shù)，計(jì)算校正死亡率。

表1不同質(zhì)量胞晶混合物的生物活性

注：發(fā)酵菌株為bthd73標(biāo)準(zhǔn)菌株。供試?yán)ハx為棉鈴蟲，按標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行飼養(yǎng)并生測(cè)。從表1可以看出，hd73胞晶混合物對(duì)棉鈴蟲的殺蟲效果良好。計(jì)算得到其lc50值為97.6ug/l。

2、確定納米二氧化硅的含量，固定胞晶混合物的重量百分比為9%，具體配比以及實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表2所示。

表2不同配比的胞晶混合物和納米二氧化硅的生物活性

從表2可以看出，胞晶混合物和納米二氧化硅的質(zhì)量分別為9%和6%時(shí)對(duì)供試?yán)ハx的殺蟲效率好。

3、考察不同比例的助劑成分對(duì)其殺蟲效果的影響。固定胞晶混合物和納米二氧化硅的質(zhì)量百分比分別為9%和6%，根據(jù)不同助劑單組份對(duì)bt殺蟲活性的影響，本發(fā)明通過(guò)正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)了l16=5因素4水平實(shí)驗(yàn)，并測(cè)定了其中3組試驗(yàn)產(chǎn)品對(duì)供試?yán)ハx的生物活性。各原料配比試驗(yàn)結(jié)果如表3所示。

表3不同配比助劑（重量百分比）的bt可濕性粉劑的生物活性

注：除去各組分的含量，余量為水。如表3所示，2號(hào)組產(chǎn)品的生物活性最高。即hd73胞晶混合物、納米二氧化硅、吐溫80、tritonx-100、普魯蘭多糖、聚乙烯醇和丙二醇的質(zhì)量百分?jǐn)?shù)分別為：9%、6%、0.3%、0.2%、2.5%、1.5%和1%。

4、對(duì)于表3中組別3的樣品，測(cè)定了其lc50。結(jié)果表明，最優(yōu)配方的lc50值為8.05ug/l，與單獨(dú)的胞晶混合物粉劑相比，生物活性提高了12倍。

5、使用表3中的組別3的配方，考察強(qiáng)紫外照射下含納米二氧化硅bt可濕性粉劑的殺蟲活性。取10g樣品溶解在100ml的蒸餾水中，置于254nm紫外燈30cm處照射不同的時(shí)間，然后測(cè)定其對(duì)棉鈴蟲的生物活性。同時(shí)以不含納米二氧化硅的bt可濕性粉劑為對(duì)照（ck），對(duì)比經(jīng)紫外照射后兩種可濕性粉劑的校正死亡率。結(jié)果如表4所示。

表4含納米二氧化硅bt可濕性粉劑的抗紫外性能

從表4可以看出，相同紫外照射條件下（6h）含納米二氧化硅的bt可濕性粉劑對(duì)棉鈴蟲的校正死亡率為68.6%，比未納米二氧化硅的bt可濕性粉劑的致死率高3.7倍以上。

以上所述僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例，凡依本發(fā)明申請(qǐng)專利范圍所做的均等變化與修飾，皆應(yīng)屬本發(fā)明的涵蓋范圍。