樣品中的測定對象成分的測定方法
【專利摘要】本發(fā)明提供膽紅素的影響得到抑制的樣品中的測定對象成分的測定方法。一種測定對象成分的測定方法，將樣品中的測定對象成分通過酶反應(yīng)轉(zhuǎn)變?yōu)檫^氧化氫，使所生成的過氧化氫在過氧化物酶的存在下與氧化發(fā)色型色原體反應(yīng)，測定顯色后的反應(yīng)液的吸光度，由此對測定對象成分進(jìn)行測定，所述測定方法的特征在于，共存有脂肪酸或其鹽。本發(fā)明的樣品中的測定對象成分的測定方法在臨床診斷中有用。
【專利說明】樣品中的測定對象成分的測定方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及樣品中的測定對象成分的測定方法以及樣品中的測定對象成分的測 定用試劑。

【背景技術(shù)】
[0002] 日常正在進(jìn)行如下臨床檢驗：使用氧化酶使血清等生物試樣中的測定對象成分生 成過氧化氫，測定所生成的過氧化氫，由此，對測定對象成分進(jìn)行測定。特別是在日常臨床 檢驗中使用如下比色分析：使所生成的過氧化氫在過氧化物酶存在下與氧化發(fā)色型色原體 反應(yīng)而生成色素，測定含有所生成的色素的顯色后的反應(yīng)液的吸光度，由此，對生物試樣中 的測定對象成分進(jìn)行測定。
[0003] 在基于該過氧化氫測定的比色分析中，生物試樣中含有的抗壞血酸、膽紅素等干 擾物質(zhì)的影響經(jīng)常成為問題。特別而言，膽紅素對在過氧化物酶存在下的過氧化氫與氧化 發(fā)色型色原體的反應(yīng)產(chǎn)生影響，存在由于其還原作用產(chǎn)生負(fù)面影響這樣的問題。
[0004] 作為解決該問題的方法，到目前為止已知：使用亞鐵氰化物離子的方法（參考專 利文獻(xiàn)1)、使用EDTA鐵絡(luò)合物的方法（參考專利文獻(xiàn)2)、使用亞鐵氰化物離子和白蛋白的 方法（參考專利文獻(xiàn)3)、使用陽離子型表面活性劑和/或兩性表面活性劑的方法（參考專 利文獻(xiàn)4)、使用兩性表面活性劑的方法（參考專利文獻(xiàn)5)、使用兩性表面活性劑和亞鐵氰 化物的方法（參考專利文獻(xiàn)6)、使用HLB13以上的聚氧乙烯烷基醚和亞鐵氰化物離子的方 法（參考專利文獻(xiàn)7)、使用鐵絡(luò)合物和類固醇化合物的方法（參考專利文獻(xiàn)8)、使用聚氧 乙烯烷基苯基醚縮合物的方法（參考專利文獻(xiàn)9)等。
[0005] 現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn) [0006] 專利文獻(xiàn)
[0007] 專利文獻(xiàn)1 :日本特開昭49-050991號公報
[0008] 專利文獻(xiàn)2 :日本特開昭57-071398號公報
[0009] 專利文獻(xiàn)3 :日本特開昭60-228963號公報
[0010] 專利文獻(xiàn)4 :日本特開平3-010696號公報
[0011] 專利文獻(xiàn)5 :日本特開平7-039394號公報
[0012] 專利文獻(xiàn)6 :日本特開平7-155196號公報
[0013] 專利文獻(xiàn)7 :日本特開平11-103888號公報
[0014] 專利文獻(xiàn)8 :日本特開平11-243993號公報
[0015] 專利文獻(xiàn)9 :日本特開2004-037431號公報


【發(fā)明內(nèi)容】

[0016] 發(fā)明所要解決的問題
[0017] 本發(fā)明的目的在于提供膽紅素的影響得到抑制的、樣品中的測定對象成分的測定 方法以及樣品中的測定對象成分的測定用試劑。
[0018] 用于解決問題的方法
[0019] 本發(fā)明人為了解決該問題而反復(fù)進(jìn)行了深入的研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)如下見解：將樣品 中的測定對象成分通過酶反應(yīng)轉(zhuǎn)變?yōu)檫^氧化氫，使所生成的過氧化氫在過氧化物酶的存在 下與氧化發(fā)色型色原體反應(yīng)，測定顯色后的反應(yīng)液的吸光度，由此對測定對象成分進(jìn)行測 定，在所述測定方法中，通過共存有脂肪酸或其鹽而使膽紅素的影響得到了抑制，從而完成 了本發(fā)明。SP，本發(fā)明涉及以下的[1]?[6]。
[0020] [1] 一種測定對象成分的測定方法，將樣品中的測定對象成分通過酶反應(yīng)轉(zhuǎn)變?yōu)?過氧化氫，使所生成的過氧化氫在過氧化物酶的存在下與氧化發(fā)色型色原體反應(yīng)，測定顯 色后的反應(yīng)液的吸光度，由此對測定對象成分進(jìn)行測定，所述測定方法的特征在于，共存有 脂肪酸或其鹽。
[0021] [2]如[1]所述的測定方法，其中，脂肪酸為碳原子數(shù)8?24的飽和或不飽和脂肪 酸。
[0022] [3]如[2]所述的測定方法，其中，碳原子數(shù)8?24的飽和或不飽和脂肪酸為選自 由辛酸、癸酸、月桂酸、肉豆蘧酸、棕櫚酸、硬脂酸、油酸、亞油酸、亞麻酸、二十碳三烯酸、花 生四烯酸、花生酸、二十碳四烯酸、二十碳五烯酸、二十二烷酸、二十二碳六烯酸、二十四烷 酸和二十四碳五烯酸組成的組中的脂肪酸。
[0023] [4] -種樣品中的測定對象成分的測定用試劑，其包含：將樣品中的測定對象成 分通過酶反應(yīng)轉(zhuǎn)變?yōu)檫^氧化氫的成分、過氧化物酶、氧化發(fā)色型色原體以及脂肪酸或其鹽。
[0024] [5]如[4]所述的測定用試劑，其中，脂肪酸為碳原子數(shù)8?24的飽和或不飽和脂 肪酸。
[0025] [6]如[5]所述的測定用試劑，其中，碳原子數(shù)8?24的飽和或不飽和脂肪酸為選 自由辛酸、癸酸、月桂酸、肉豆蘧酸、棕櫚酸、硬脂酸、油酸、亞油酸、亞麻酸、二十碳三烯酸、 花生四烯酸、花生酸、二十碳四烯酸、二十碳五烯酸、二十二烷酸、二十二碳六烯酸、二十四 烷酸和二十四碳五烯酸組成的組中的脂肪酸。
[0026] 發(fā)明效果
[0027] 根據(jù)本發(fā)明，能夠提供膽紅素的影響得到抑制的樣品中的測定對象成分的測定方 法以及測定用試劑。

【具體實施方式】
[0028] 本發(fā)明的樣品中的測定對象成分的測定方法中，將樣品中的測定對象成分通過酶 反應(yīng)轉(zhuǎn)變?yōu)檫^氧化氫，使所生成的過氧化氫在過氧化物酶的存在下與氧化發(fā)色型色原體反 應(yīng)，測定顯色后的反應(yīng)液的吸光度，由此對測定對象成分進(jìn)行測定，所述測定方法的特征在 于，共存有脂肪酸或其鹽。
[0029] 本發(fā)明中的脂肪酸只要是能夠進(jìn)行本發(fā)明的測定方法的脂肪酸，則沒有特別限 定，可以列舉例如碳原子數(shù)8?24的飽和或不飽和脂肪酸，優(yōu)選為碳原子數(shù)8?18的飽和 或不飽和脂肪酸。作為碳原子數(shù)8?24的飽和或不飽和脂肪酸，可以列舉例如：辛酸、癸酸、 月桂酸、肉豆蘧酸、棕櫚酸、硬脂酸、油酸、亞油酸、亞麻酸、二十碳三烯酸、花生四烯酸、花生 酸、二十碳四烯酸、二十碳五烯酸、二十二烷酸、二十二碳六烯酸、二十四烷酸、二十四碳五 烯酸等。另外，本發(fā)明中的脂肪酸也可以為鹽，作為鹽，可以列舉例如：鋰鹽、鈉鹽、鉀鹽、銨 鹽、鈣鹽、鎂鹽等。本發(fā)明中，也可以組合使用兩種以上的脂肪酸。本發(fā)明的測定方法中的 脂肪酸的濃度只要是能夠進(jìn)行本發(fā)明的測定方法的濃度，則沒有特別限定，通常為0. 1? 15mmol/L，優(yōu)選為 0· 2 ?10mmol/L。
[0030] 本發(fā)明中的樣品只要是能夠進(jìn)行本發(fā)明的測定方法的樣品，則沒有特別限定，可 以列舉例如全血、血漿、血清等，優(yōu)選為血漿和血清。
[0031] 本發(fā)明中的測定對象成分只要是通過測定由酶反應(yīng)轉(zhuǎn)變來的過氧化氫而進(jìn)行測 定的測定對象成分，則沒有特別限定，可以列舉例如：總膽固醇（TC)、高密度脂蛋白中的膽 固醇（HDL-C)、低密度脂蛋白中的膽固醇（LDL-C)、超低密度脂蛋白中的膽固醇（VLDL-C)、 殘粒樣脂蛋白中的膽固醇（RLP-C)、葡萄糖、尿酸、甘油三酯（TG)、磷脂質(zhì)、膽堿、肌酸、肌酸 酐、乳酸、丙酮酸等基質(zhì)，以及膽堿酯酶、鳥嘌呤酶等酶等。
[0032] 本發(fā)明中，測定對象成分通過酶反應(yīng)轉(zhuǎn)化成過氧化氫，作為測定對象成分與將測 定對象成分通過酶反應(yīng)轉(zhuǎn)化成過氧化氫的成分的組合，可以列舉例如以下的組合。
[0033] · TC、HDL-C、LDL-C、VLDL-C、RLP-C :膽固醇酯水解酶、以及膽固醇氧化酶
[0034] ?葡萄糖：葡萄糖氧化酶
[0035] ?尿酸：尿酸酶
[0036] · TG :脂蛋白脂肪酶、甘油激酶、以及甘油-3-磷酸氧化酶
[0037] ?磷脂質(zhì)：磷脂酶D、以及膽堿氧化酶
[0038] ?膽堿：膽堿氧化酶
[0039] ?肌酸：肌酸酶、以及肌氨酸氧化酶
[0040] ?肌酸酐：肌酸酐酶、肌酸酶、以及肌氨酸氧化酶
[0041] ?乳酸：乳酸氧化酶
[0042] ?丙酮酸：丙酮酸氧化酶
[0043] ?膽堿酯酶：2, 4-二甲氧基苯甲酰膽堿、以及膽堿氧化酶
[0044] ?鳥嘌呤酶：鳥嘌呤、黃嘌呤氧化酶、以及尿酸酶
[0045] 本發(fā)明中的過氧化物酶只要是能夠進(jìn)行本發(fā)明的測定方法的過氧化物酶，則沒有 特別限定，可以列舉例如：來自動物、植物、微生物的過氧化物酶、以及通過基因工程方法制 作的過氧化物酶等。作為本發(fā)明的測定方法中的過氧化物酶的濃度，通常為1?l〇〇kU/L。
[0046] 本發(fā)明中的氧化發(fā)色型色原體只要是能夠進(jìn)行本發(fā)明的測定方法的氧化發(fā)色型 色原體，則沒有特別限定，可以列舉例如無色型色原體、氧化偶合發(fā)色型色原體等。無色型 色原體是在過氧化氫以及過氧化物酶的存在下、單獨轉(zhuǎn)變?yōu)樯氐奈镔|(zhì)，可以列舉：四甲基 聯(lián)苯胺、鄰苯二胺、104-羧甲基氨基甲?；?3,7-雙（二甲基氨基）-10!1-吩噻嗪（〇^?)、 10-^甲基氨基甲?；?3,7-雙（二甲基氨基）-10!1-吩噻嗪（1?：0?)、^(羧甲基氨基羰 基）-4,4'_雙（二甲基氨基）二苯胺鈉鹽（DA-64)、10-N-(羧甲基氨基羰基）-3,7_雙（二 甲基氨基）-l〇H_吩噻嗪鈉鹽（DA-67)、4,4'_雙（二甲基氨基）二苯胺、雙[3-雙（4-氯苯 基）甲基-4-二甲基氨基苯基]胺（BCMA)等。
[0047] 氧化偶合發(fā)色型色原體是在過氧化氫及過氧化物酶的存在下、兩種化合物發(fā)生氧 化偶合而生成色素的物質(zhì)。作為兩種化合物的組合，可以列舉：偶合劑與苯胺類的組合、偶 合劑與酚類的組合等。
[0048] 作為偶合劑，可以列舉例如：4_氨基安替比林（4-AA)、3_甲基-2-苯并噻唑啉酮 腙等。
[0049] 作為苯胺類，可以列舉：N- (3-磺丙基）苯胺、N-乙基-N- (2-羥基-3-磺丙 基）-3-甲基苯胺（T00S)、N-乙基-N-(2-羥基-3-磺丙基）-3, 5-二甲基苯胺（MAOS)、N-乙 基-N-(2-羥基-3-磺丙基）-3,5-二甲氧基苯胺（DAOS)、N-乙基-N-(3-磺丙基）-3-甲 基苯胺（TOPS)、N- (2-羥基-3-磺丙基）-3, 5-二甲氧基苯胺（HDA0S)、N，N-二甲基-3-甲 基苯胺、N，N-二（3-磺丙基）-3,5-二甲氧基苯胺、N-乙基-N-(3-磺丙基）-3-甲氧基苯 胺、N-乙基-N-(3-磺丙基）苯胺、N-乙基-N-(3-磺丙基）-3, 5-二甲氧基苯胺、N-(3-磺 丙基）-3, 5-二甲氧基苯胺、N-乙基-N-(3-磺丙基）-3, 5-二甲基苯胺、N-乙基-N-(2-羥 基-3-磺丙基）-3-甲氧基苯胺、N-乙基-N-(2-羥基-3-磺丙基）苯胺、N-乙基-N-(3-甲 基苯基）-N' -琥珀酰乙二胺（EMSE)、N-乙基-N-(3-甲基苯基）-Ν' -乙酰基乙二胺、N-乙 基-Ν-(2-羥基-3-磺丙基）-4-氟-3, 5-二甲氧基苯胺（F-DA0S)等。
[0050] 作為酚類，可以列舉：苯酚、4-氯苯酚、3-甲基苯酚、3-羥基-2, 4, 6-三碘苯甲酸 (HTIB)等。
[0051] 本發(fā)明的測定方法中的氧化發(fā)色型色原體的濃度只要是適于過氧化氫的測定的 濃度，則沒有特別限定，通常為0. 01?l〇g/L。
[0052] 本發(fā)明中的測定對象成分的測定通常在pH4. 0?10. 0的水性介質(zhì)中進(jìn)行，優(yōu)選在 pH6. 0?8. 0的水性介質(zhì)中進(jìn)行。作為水性介質(zhì)，可以列舉例如：去離子水、蒸餾水、緩沖液 等，優(yōu)選緩沖液。作為緩沖液，可以列舉例如：磷酸緩沖液、檸檬酸緩沖液、硼酸緩沖液、碳酸 緩沖液、Good' s緩沖液等。作為Good' s緩沖液中使用的緩沖劑，可以列舉例如：2-嗎啉 代乙磺酸（MES)、三（羥甲基）氨基甲烷（Tris)、雙（2-羥乙基）亞氨基三（羥甲基）甲烷 (Bis-Tris)、N-(2-乙酰胺）亞氨基二乙酸（ADA)、哌嗪-N，Ν' -雙（2-乙磺酸）（PIPES)、 N-(2-乙酰胺）-2-氨基乙磺酸（ACES)、N，N-雙（2-羥乙基）-2-氨基乙磺酸（BES)、3-嗎啉 代丙磺酸（M0PS)、N-[三（羥甲基）甲基]-2-氨基乙磺酸（TES)、2-[4-(2-羥乙基）-1-哌 嗪基]乙磺酸（HEPES)、哌嗪-N，Ν' -雙（2-羥基丙磺酸）（P0PS0)、N-[三（羥甲基）甲基] 甘氨酸（Tricine)、N，N-雙（2-羥乙基）甘氨酸（Bicine)、N-三（羥甲基）甲基-3-氨基 丙磺酸（TAPS)、N-環(huán)己基-2-氨基乙磺酸（CHES)、N-環(huán)己基-3-氨基丙磺酸（CAPS)等。
[0053] 另外，本發(fā)明的測定方法中，可以共存有表面活性劑、防腐劑等。作為表面活性劑， 可以列舉例如：非離子性表面活性劑、陽離子型表面活性劑、陰離子型表面活性劑、兩性表 面活性劑等。作為防腐劑，可以列舉例如疊氮化物、螯合劑才=一> (BioAce)等。作 為疊氮化物，可以列舉例如疊氮化鈉等。作為螯合劑，可以列舉例如乙二胺四乙酸（EDTA) 或其鹽等。作為鹽，可以列舉例如鈉鹽、鉀鹽等。此外，還可以共存有作為膽紅素的影響抑 制劑已知的亞鐵氰化物、牛血清白蛋白（BSA)等蛋白質(zhì)。
[0054] 本發(fā)明的樣品中的測定對象成分的測定用試劑為用于本發(fā)明的測定方法的試劑， 包括：測定對象成分、將測定對象成分通過酶反應(yīng)轉(zhuǎn)化成過氧化氫的成分、過氧化物酶、氧 化發(fā)色型色原體以及脂肪酸或其鹽。作為測定對象成分、將測定對象成分通過酶反應(yīng)轉(zhuǎn)化 成過氧化氫的成分、過氧化物酶、氧化發(fā)色型色原體以及脂肪酸或其鹽，可以分別列舉例 如：上述測定對象成分、將測定對象成分通過酶反應(yīng)轉(zhuǎn)化成過氧化氫的成分、過氧化物酶、 氧化發(fā)色型色原體以及脂肪酸或其鹽等。
[0055] 本發(fā)明的測定用試劑可以為冷凍干燥狀態(tài)也可以為液態(tài)，在冷凍干燥狀態(tài)的試劑 的情況下，可以在水性介質(zhì)中溶解而用于測定。作為水性介質(zhì)，可以列舉例如上述水性介質(zhì) 等。另外，本發(fā)明的測定用試劑也可以采用試劑盒的形式，作為試劑盒，可以列舉例如雙試 劑型試劑盒、三試劑型試劑盒等。
[0056] 本發(fā)明的測定用試劑中，脂肪酸只要以能夠達(dá)到進(jìn)行本發(fā)明的測定方法的濃度的 含量含有則沒有特別限定，通常以在水性介質(zhì)中溶解的狀態(tài)下的濃度達(dá)到〇. 1?60mmol/L 的含量含有，優(yōu)選以達(dá)到〇. 2?40mmol/L的含量含有。
[0057] 本發(fā)明的測定用試劑中，過氧化物酶只要以能夠達(dá)到進(jìn)行本發(fā)明的測定方法的 濃度的含量含有則沒有特別限定，通常以在水性介質(zhì)中溶解的狀態(tài)下的濃度達(dá)到〇. 01? 40g/L的含量含有。
[0058] 本發(fā)明的測定用試劑中，氧化發(fā)色型色原體只要以能夠達(dá)到進(jìn)行本發(fā)明的測定 方法的濃度的含量含有則沒有特別限定，通常以在水性介質(zhì)中溶解的狀態(tài)下的濃度達(dá)到 0.01?40g/L的含量含有。
[0059] 在本發(fā)明的測定用試劑中，可以含有上述表面活性劑、防腐劑等。此外，也可以含 有作為膽紅素的影響抑制劑已知的亞鐵氰化物、牛血清白蛋白（BSA)等蛋白質(zhì)。
[0060] 以下，通過實施例對本發(fā)明更加詳細(xì)地進(jìn)行說明，但這些實施例不對本發(fā)明的范 圍進(jìn)行任何限定。另外，在本實施例、比較例及試驗例中，使用下述生產(chǎn)商的試劑及酶。
[0061] MOPS (同仁化學(xué)研究所公司制）、乙酸鈉三水合物（關(guān)東化學(xué)公司制）、EMSE (夕Μ 卜一^ s 77公司制）、4-ΑΑ( 77々公司制）、硼酸（和光純藥工業(yè)公司制）、疊氮 化鈉（和光純藥工業(yè)公司制）、7 =才^ HS-210(日油公司制）、EDTA · 2Na(同仁化學(xué)研究 所公司制）、葡聚糖硫酸鈉（分子量50萬）（PK化學(xué)公司制）、硫酸鈉（關(guān)東化學(xué)公司制）、 BSA (密理博公司制）、工欠' > L-40 (花王公司制）、口二v夕L121 (ADEKA公司制）、 亞鐵氰化鉀（FCK;關(guān)東化學(xué)公司制）、十四烷基三甲基氯化銨（和光純藥工業(yè)公司制）、辛 酸鈉（東京化成公司制）、癸酸鈉（東京化成公司制）、月桂酸鈉（東京化成公司制）、油酸 鈉（東京化成公司制）、亞油酸鈉（東京化成公司制）、亞麻酸（東京化成公司制）、十二烷 基硫酸鈉 （SDS ;和光純藥工業(yè)公司制）、過氧化物酶（P0D ;東洋紡織公司制）、抗壞血酸氧 化酶（A0D ;旭化成公司制）、尿酸酶（東洋紡織公司制）、LPL311 (脂蛋白脂肪酶；東洋紡織 公司制）、CH0-CE(膽固醇氧化酶；龜甲萬公司制）。
[0062] 實施例1
[0063] 制備以下的包含第一試劑和第二試劑的尿酸測定用試劑盒（試劑盒A1?A6)。
[0064] 第一試劑
[0065] MOPS(pH7.0) 20mmot/L 乙酸鈉三水合物 15g/L EMSE 0.2g/L 硼酸 0.1 g/L 疊氮化鈉 0.2g/L 7 二t>HS-210 Ig/L POD 5kU/L AOD 3kU/L
[0066] 脂肪酸（參考表1)
[0067] 第二試劑
[0068] MOPS(pH7.0) 20mmol/L 乙酸鈉三水合物 12.5g/L
[0069] 4-AA 0.3 5 g/L EDTA-2Na 0.5 g/L 7 二才 >HS-210 0.5g/L 疊氮化鈉 0.2g/L POD 1 OkU/L 尿酸酶 0.75kU/L
[0070] [比較例1]
[0071] 制備包含以下的第一試劑和第二試劑的尿酸測定用試劑盒（試劑盒al)。
[0072] 第一試劑
[0073] MOPS(pH7.0) 20mmol/L 乙酸鈉三水合物 15g/L EMSE 0.2g/L 硼酸 0.1g/L 疊氮化鈉 0.2g/L 7 二才^HS-210 lg/L POD 5kU/L AOD 3kU/L
[0074] 第二試劑
[0075] MOPS(pH7.0) 20mmol/L 乙酸鈉三水合物 12.5g/L 4-AA 0.35g/L EDTA-2Na 0.5g/L 7 二才>HS-210 0.5g/L 疊氮化鈉 0.2g/L POD lOkU/L 尿酸酶 0.75kU/L
[0076] [比較例2]
[0077] 制備包含以下的第一試劑和第二試劑的尿酸測定用試劑盒（試劑盒a2)。
[0078] 第一試劑
[0079] MOPS(pH7.0) 20inmol/L 乙酸鈉三水合物 15g/L EMSE 0_2g/L 硼酸 0.1g/L 疊氮化鈉 0.2g/L 7 二才 VHS-2i() 1 g/L POD 5klJ/L AOD 3kU/L SDS 1 minol/L
[0080] 第二試劑
[0081] MOPS(pH7.0) 20minol/L 乙酸鈉三水合物 12.5g/L 4-AA 0.3 5 g/L EDTA-2Na ().5ii/L 〇 /二才 >HS-210 ().5g/L 疊氮化鈉 （).2g/L POD lOkU/L 尿酸酶 （).75kU/L
[0082] 實施例2
[0083] 使用實施例1的試劑盒A1，按照以下的步驟測定樣品中的尿酸。
[0084] (1)標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作
[0085] 作為標(biāo)準(zhǔn)液，使用生理鹽水（尿酸濃度：0mg/dL)以及液態(tài)對照血清II ^ = 一（尿 酸濃度：9. 4mg/dL ;和光純藥工業(yè)公司制），作為試劑盒，使用實施例1的試劑盒A1，利用日 立7170S型自動分析裝置進(jìn)行以下的反應(yīng)，基于通過該反應(yīng)得到的兩個吸光度（E1和E2)， 制作表示尿酸濃度與"吸光度"（從E2中減去E1而得到的值）之間的關(guān)系的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
[0086] 向反應(yīng)池中添加標(biāo)準(zhǔn)液（3. 1 μ L)和第一試劑（0. 15mL)，在37°C下加熱5分鐘，在 主波長600nm、副波長700nm下測定反應(yīng)液的吸光度（E1)，接著，向該反應(yīng)液中添加第二試 劑（0. 05mL)，進(jìn)一步在37°C下加熱5分鐘，在主波長600nm、副波長700nm下測定反應(yīng)液的 吸光度（E2)。
[0087] (2)測定用樣品的制備
[0088] 向生物化學(xué)對照血清"QAP卜口一 > 2X"（希森美康公司制）220 μ L中混合膽紅素 濃度為500mg/dL的干渉膽紅素 C (希森美康公司制）30 μ L，制備膽 紅素濃度為60mg/dL的添加有膽紅素的樣品。同樣地，使用干渉^ 1 7々· A 7 -膽 紅素 C(空白）（希森美康公司制）代替膽紅素濃度為500mg/dL的干渉7々·Α 7 -膽紅素 C，制備膽紅素濃度為Omg/dL的對照樣品。
[0089] (3)利用樣品與實施例1的各試劑盒的反應(yīng)的該樣品中的"吸光度"的測定
[0090] 除了使用上述（2)中制備的測定用樣品、即添加有膽紅素的樣品以及對照樣品的 各樣品代替上述（1)的標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作中使用的標(biāo)準(zhǔn)液以外，通過與（1)的"吸光度"的計 算方法同樣的方法，測定對該樣品的"吸光度"。
[0091] (4)測定用樣品中的尿酸濃度的確定
[0092] 由上述（3)中測定的"吸光度"和上述（1)中制作的標(biāo)準(zhǔn)曲線確定各樣品中的尿 酸濃度。將對照樣品中的尿酸濃度設(shè)為100時的添加有膽紅素的樣品中的尿酸濃度的相對 值不于表1。
[0093] 除了使用試劑盒A2?A6的各試劑盒代替試劑盒A1作為試劑盒以外，通過與上述 (1)?（4)同樣的方法，確定添加有膽紅素的樣品中的尿酸濃度的相對值。將結(jié)果示于表 1〇
[0094] [比較例3]
[0095] 除了使用比較例1的試劑盒al代替實施例2的試劑盒A1以外，通過與實施例2 同樣的方法，確定添加有膽紅素的樣品中的尿酸濃度的相對值。將結(jié)果示于表1。
[0096] [比較例4]
[0097] 除了使用比較例2的試劑盒a2代替實施例2的試劑盒A1以外，通過與實施例2 同樣的方法，確定添加有膽紅素的樣品中的尿酸濃度的相對值。將結(jié)果示于表1。
[0098] 表 1
[0099]

【權(quán)利要求】
1. 一種測定對象成分的測定方法，將樣品中的測定對象成分通過酶反應(yīng)轉(zhuǎn)變?yōu)檫^氧化 氫，使所生成的過氧化氫在過氧化物酶的存在下與氧化發(fā)色型色原體反應(yīng)，測定顯色后的 反應(yīng)液的吸光度，由此對測定對象成分進(jìn)行測定，所述測定方法的特征在于，共存有脂肪酸 或其鹽。
2. 如權(quán)利要求1所述的測定方法，其中，脂肪酸為碳原子數(shù)8?24的飽和或不飽和脂 肪酸。
3. 如權(quán)利要求2所述的測定方法，其中，碳原子數(shù)8?24的飽和或不飽和脂肪酸為選 自由辛酸、癸酸、月桂酸、肉豆蘧酸、棕櫚酸、硬脂酸、油酸、亞油酸、亞麻酸、二十碳三烯酸、 花生四烯酸、花生酸、二十碳四烯酸、二十碳五烯酸、二十二烷酸、二十二碳六烯酸、二十四 烷酸和二十四碳五烯酸組成的組中的脂肪酸。
4. 一種樣品中的測定對象成分的測定用試劑，其包含：將樣品中的測定對象成分通過 酶反應(yīng)轉(zhuǎn)變?yōu)檫^氧化氫的成分、過氧化物酶、氧化發(fā)色型色原體以及脂肪酸或其鹽。
5. 如權(quán)利要求4所述的測定用試劑，其中，脂肪酸為碳原子數(shù)8?24的飽和或不飽和 脂肪酸。
6. 如權(quán)利要求5所述的測定用試劑，其中，碳原子數(shù)8?24的飽和或不飽和脂肪酸 為選自由辛酸、癸酸、月桂酸、肉豆蘧酸、棕櫚酸、硬脂酸、油酸、亞油酸、亞麻酸、二十碳三 烯酸、花生四烯酸、花生酸、二十碳四烯酸、二十碳五烯酸、二十二烷酸、二十二碳六烯酸、 二十四烷酸和二十四碳五烯酸組成的組中的脂肪酸。
【文檔編號】C12Q1/00GK104245953SQ201380021223
【公開日】2014年12月24日 申請日期:2013年4月18日 優(yōu)先權(quán)日:2012年4月27日
【發(fā)明者】桑田英之, 荒武知子, 金城健太 申請人:協(xié)和梅迪克斯株式會社