連蕊茶花提取物及其提取方法和用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于食品化工技術(shù)領(lǐng)域，涉及"連蕊茶"花的有效成分提取物及其提取方法 和用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 連蕊茶(Camellia rosthorniana Hand.-Mazz)花為山茶屬植物川萼連蕊茶的花。 該植物在我國(guó)南方地區(qū)自然分布，也有人工栽培。其花中含有豐富的黃酮類、多酚類和皂苷 類成分。實(shí)驗(yàn)表明，其花的提取物具有良好的抑菌效果，能夠顯著延長(zhǎng)常溫下鮮牛奶的保質(zhì) 期。關(guān)于該種植物花的提取物的開發(fā)利用，還未見報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 鑒于現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的第一個(gè)目的在于提供"連蕊茶"花有效成分的提取 物及其提取方法。
[0004] 為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的，發(fā)明人通過大量試驗(yàn)研究并不懈探索，最終獲得了如下 技術(shù)方案：
[0005] -種"連蕊茶"花的提取物，其中："連蕊茶"為山茶屬植物川萼連蕊茶Camellia rosthorniana Hand. -Mazz，所述的提取物是"連蕊茶"花的乙醇水溶液提取物依次經(jīng)石油 醚、乙酸乙酯萃取后的乙酸乙酯部位。
[0006] 優(yōu)選地，如上所述的"連蕊茶"花的提取物，其中提取所采用的乙醇水溶液的體積 濃度為65 %-95 %。
[0007] -種上述"連蕊茶"花提取物的提取方法，該提取方法包括如下步驟:取干燥"連蕊 茶"花，去除灰塵等雜質(zhì)，粉碎，加入10-30倍量濃度為65%-95%的乙醇水溶液，回流提取1-5次，每次不少于2小時(shí)，提取液回收乙醇至無醇味，依次以1-2倍體積的石油醚、乙酸乙酯萃 取，棄去石油醚萃取相和水相，將乙酸乙酯萃取相回收溶劑，得到"連蕊茶"花提取物。
[0008] 進(jìn)一步優(yōu)選地，如上所述"連蕊茶"花提取物的提取方法，其采取的乙醇水溶液的 體積濃度為70 %-82 %。
[0009] 進(jìn)一步優(yōu)選地，如上所述"連蕊茶"花提取物的提取方法，其得到的"連蕊茶"花提 取物冷凍干燥后，經(jīng)測(cè)定其中的總黃酮含量為22%-25%，總多酚含量為4%-5%，總皂苷含 量為 19%-22%。
[0010] 另外，本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)"連蕊茶"花提取物具有一定程度的抑菌活性，并通過如下方 法獲得了多種提取物：
[0011] 方法1:取干燥"連蕊茶"花，去除灰塵等雜質(zhì)，粉碎。加入10-30倍量65 %-95 %乙 醇，回流提取1次或以上，每次不少于2小時(shí)。提取液濃縮至四分之一以下，加2-5倍量水調(diào)節(jié) 醇水比例，靜置24小時(shí)后過濾，濾液回收乙醇至無醇味，再用真空冷凍干燥機(jī)除去水分，獲 得"連蕊茶"花提取物。
[0012] 方法2:取干燥"連蕊茶"花，去除灰塵等雜質(zhì)，粉碎。加入10-30倍量水，煎煮1次或 以上，每次不少于2小時(shí)。提取液濃縮至四分之一以下，加等倍量乙醇調(diào)節(jié)醇水比例，靜置24 小時(shí)后過濾，濾液回收乙醇至無醇味，再用真空冷凍干燥機(jī)除去水分，獲得"連蕊茶"花提取 物。
[0013] 方法3:取干燥"連蕊茶"花，去除灰塵等雜質(zhì)，粉碎。加入10-30倍量65 %-95 %乙 醇，回流提取1次或以上，每次不少于2小時(shí)。提取液回收乙醇至無醇味，采用石油醚、正丁 醇、氯仿、乙酸乙酯萃取，獲得"連蕊茶"花提取物。
[0014] 雖然"連蕊茶"花的常規(guī)提取物具有一定程度的抑菌活性，但抑菌活性均不顯著。 發(fā)明人在研究上述方法3的過程中意外發(fā)現(xiàn)，"連蕊茶"花的乙醇水溶液提取物依次經(jīng)石油 醚、乙酸乙酯萃取后的乙酸乙酯部位，其抑菌活性大幅度提高。試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，方法1、2獲得的提 取物的抑菌活性不高，只能延長(zhǎng)牛奶保鮮期1天。方法3中采用正丁醇、氯仿與乙酸乙酯配合 萃取的提取物并未發(fā)現(xiàn)明顯的抑菌活性，而依次經(jīng)石油醚、乙酸乙酯萃取后的乙酸乙酯部 位，其抑菌活性大幅度提高，可以有效延長(zhǎng)牛奶保鮮期5-7天。因此，利用該提取物有效部位 的抑菌活性和安全性，其可以被作為食品保鮮劑，尤其特別適合制備成延長(zhǎng)牛奶保質(zhì)期的 食品保鮮劑。因此，本發(fā)明的第二個(gè)目的在于提供一種工業(yè)新用途，即：上述的"連蕊茶"花 提取物在制備食品保鮮劑中的用途。
[0015] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明提供的"連蕊茶"花提取物具有抑菌活性顯著，安全性高， 可用于延長(zhǎng)牛奶的保鮮期5-7天。另外，本發(fā)明制備方法簡(jiǎn)單，無需復(fù)雜的工藝和設(shè)備，適合 工業(yè)化生產(chǎn)。
【附圖說明】
[0016] 圖1為"連蕊茶"花提取物對(duì)含有枯草芽孢桿菌的牛奶的抑菌曲線圖，其中：系列1 為空白對(duì)照，系列2、3為1號(hào)和2號(hào)"連蕊茶"花提取物，系列4為3號(hào)"連蕊茶"花提取物。
[0017] 圖2為"連蕊茶"花提取物對(duì)含有金黃色葡萄球菌的牛奶的抑菌曲線圖，其中：系列 1為空白對(duì)照，系列2、3為1號(hào)和2號(hào)"連蕊茶"花提取物，系列4為3號(hào)"連蕊茶"花提取物。
[0018] 圖3為"連蕊茶"花提取物對(duì)含有大腸桿菌的牛奶的抑菌曲線圖，其中：系列1為空 白對(duì)照，系列2、3為1號(hào)和2號(hào)"連蕊茶"花提取物，系列4為3號(hào)"連蕊茶"花提取物。
【具體實(shí)施方式】
[0019] 以下實(shí)施例進(jìn)一步描述本發(fā)明方法的實(shí)施過程和有益效果，實(shí)施例僅用于例證的 目的，不限制本發(fā)明的范圍，同時(shí)本領(lǐng)域普通技術(shù)人員根據(jù)本發(fā)明所做的顯而易見的改變 也包含在本發(fā)明范圍之內(nèi)。
[0020] 實(shí)施例1
[0021] (1)取干燥"連蕊茶"花，去除灰塵等雜質(zhì)，用中草藥粉碎機(jī)將干燥"連蕊茶"花粉 碎。
[0022] (2)將"連蕊茶"花干粉Ikg和76 %乙醇20L加入中藥提取罐，回流提取2次，每次3小 時(shí)。
[0023] (3)過濾合并2次提取液，濃縮至5L，冷卻后加入25L去離子水。6°C下靜置24小時(shí)后 過濾，濾液回收乙醇至無醇味，再用真空冷凍干燥機(jī)除去水分，獲得"連蕊茶"花提取物。 [0024] 實(shí)施例2
[0025] (I)取干燥"連蕊茶"花，去除灰塵等雜質(zhì)，用中草藥粉碎機(jī)將干燥"連蕊茶"花粉 碎。
[0026] (2)將"連蕊茶"花干粉Ikg和去離子水15L加入中藥提取罐，加熱煮沸提取2次，每 次2小時(shí)。
[0027] (3)過濾合并2次提取液，濃縮至2L，冷卻后加入2L乙醇。6°C下靜置24小時(shí)后過濾， 濾液回收乙醇至無醇味，再用真空冷凍干燥機(jī)除去水分，獲得"連蕊茶"花提取物。
[0028] 實(shí)施例3
[0029] (1)取干燥"連蕊茶"花，去除灰塵等雜質(zhì)，用中草藥粉碎機(jī)將干燥"連蕊茶"花粉 碎。
[0030] (2)將"連蕊茶"花干粉Ikg和76 %乙醇25L加入中藥提取罐，加熱回流提取2次，每 次3小時(shí)。
[0031] (3)過濾合并2次提取液，回收乙醇至無醇味。依次以等體積石油醚、乙酸乙酯萃 取，棄去石油醚和水萃取物，將乙酸乙酯萃取物回收溶劑獲得"連蕊茶"花的有效提取物。
[0032] 實(shí)施例4
[0033] 將實(shí)施例1、2、3獲得的連蕊茶的花提取物，分布標(biāo)記為1號(hào)、2號(hào)和3號(hào)樣，測(cè)試其抑 菌作用。
[0034]試驗(yàn)方法:將連蕊茶的花提取物稱定后分別用5%DMS0溶解配制成8mg/ml溶液備 用，并且在每次取用前均用超聲充分分散均勻。取IOOyL上述溶液采用2倍稀釋法用無菌水 稀釋成一系列濃度梯度。取Imll X 108CFU/ml各細(xì)菌菌懸液加入到9ml的LB液體培養(yǎng)基中混 勻得相應(yīng)的培養(yǎng)基菌懸液，在每管中分別加入IOOyL培養(yǎng)基菌懸液，各管中提取物質(zhì)量濃度 依次為2、1、0.5、0.25、0.125、0.0625、0.0312511^/1111。以無菌水為空白對(duì)照，置于37°(：恒溫 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h后觀察，以目視無菌生長(zhǎng)的孔對(duì)應(yīng)最低濃度為最小抑菌濃度。
[0035]實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表1，"連蕊茶"花的1號(hào)和2號(hào)提取物對(duì)細(xì)菌枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄 球菌和大腸桿菌的最小抑菌濃度(MIC)為0.5mg/ml;對(duì)真菌黑曲霉的最小抑菌濃度(MIC)為 lmg/mld號(hào)提取物細(xì)菌枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌和大腸桿菌的最小抑菌濃度(MIC) 為0.2mg/ml;對(duì)真菌黑曲霉的最小抑菌濃度(MIC)為0.5mg/ml。
[0036]表Γ連蕊茶"花提取物對(duì)細(xì)菌、真菌的MIC(mg/ml)

[0038] 實(shí)施例5
[0039] 將實(shí)施例1、2、3獲得的連蕊茶的花提取物，分布標(biāo)記為1號(hào)、2號(hào)和3號(hào)樣，測(cè)試其對(duì) 牛奶的保鮮作用
[0040] 實(shí)驗(yàn)方法:取5g"連蕊茶"花提取物的凍干粉末，溶解于IOml去離子水中，用0.45μπι 濾膜過濾。將濾液加入鮮牛奶中，調(diào)整提取物濃度到l〇〇mg/ml。加入枯草芽孢桿菌、金黃色 葡萄球菌或大腸桿菌，調(diào)整初始菌落計(jì)數(shù)在3-41ogCFU/ml，在25 °C下培養(yǎng)7天，每24h計(jì)算菌 落數(shù)，結(jié)果見附圖1-3。
[0041]實(shí)驗(yàn)結(jié)果:在常溫(25°C)下"連蕊茶"花的1號(hào)、2號(hào)和3號(hào)提取物均可以在一定程度 上延長(zhǎng)牛奶的保鮮時(shí)間。接種枯草芽孢桿菌或金黃色葡萄球菌的鮮牛奶，加入1號(hào)和2號(hào)提 取物后保鮮期延長(zhǎng)1天，加入3號(hào)提取物后保鮮期延長(zhǎng)5天;接種大腸桿菌的鮮牛奶，加入1號(hào) 和2號(hào)提取物后保鮮期延長(zhǎng)1天，加入3號(hào)提取物后保鮮期延長(zhǎng)7天。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種"連蕊茶"花的提取物，其特征在于，所述的"連蕊茶"為山茶屬植物川萼連蕊茶 Came 11 ia rosthorniana Hand. -Mazz，所述的提取物是"連蕊茶"花的乙醇水溶液提取物依 次經(jīng)石油醚、乙酸乙酯萃取后的乙酸乙酯部位。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的"連蕊茶"花的提取物，其特征在于，所述的乙醇水溶液的體積 濃度為65 %-95 %。3. -種"連蕊茶"花提取物的提取方法，其特征在于，該提取方法包括如下步驟:取干燥 "連蕊茶"花，去除灰塵等雜質(zhì)，粉碎，加入10-30倍量濃度為65%-95%的乙醇水溶液，回流 提取1-5次，每次不少于2小時(shí)，提取液回收乙醇至無醇味，依次以1-2倍體積的石油醚、乙酸 乙酯萃取，棄去石油醚萃取相和水相，將乙酸乙酯萃取相回收溶劑，得到"連蕊茶"花提取 物。4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述"連蕊茶"花提取物的提取方法，其特征在于，所述的乙醇水溶液 的體積濃度為70 %-82 %。5. 根據(jù)權(quán)利要求3所述"連蕊茶"花提取物的提取方法，其特征在于，所述的"連蕊茶"花 提取物中總黃酮含量22%-25%，總多酚含量4%-5%，總皂苷含量19%-22%。6. 權(quán)利要求1或2所述的"連蕊茶"花提取物在制備食品保鮮劑中的用途。
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種“連蕊茶”花提取物及其提取方法和用途，該提取物以山茶屬植物川萼連蕊茶Camellia rosthorniana Hand.?Mazz的花作為原料，先采用乙醇水溶液提取，提取液回收乙醇至無醇味，依次以1?2倍體積的石油醚、乙酸乙酯萃取，棄去石油醚萃取相和水相，將乙酸乙酯萃取相回收溶劑，即得。本發(fā)明提供的“連蕊茶”花提取物具有抑菌活性顯著，安全性高，可用于延長(zhǎng)牛奶的保鮮期5?7天。另外，本發(fā)明制備方法簡(jiǎn)單，無需復(fù)雜的工藝和設(shè)備，適合工業(yè)化生產(chǎn)。
【IPC分類】A23C3/08
【公開號(hào)】CN105707230
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201610073454
【發(fā)明人】王湛昌, 許林, 李清源, 魏鳴, 謝焰鋒
【申請(qǐng)人】武漢市農(nóng)業(yè)科學(xué)技術(shù)研究院林業(yè)果樹科學(xué)研究所