專利名稱：疏水性多胺類似物及其使用方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于化學(xué)和生物化學(xué)領(lǐng)域，涉及新的多胺轉(zhuǎn)運(yùn)抑制劑類化合物的合成和用途。這些化合物具有藥理學(xué)或農(nóng)業(yè)用途以及用于有關(guān)多胺轉(zhuǎn)運(yùn)的分析和制備試驗(yàn)。作為藥物，這些化合物可單獨(dú)或結(jié)合諸如多胺合成抑制劑等其他藥劑用于治療與細(xì)胞，尤其是真核細(xì)胞惡性增殖的疾病。
背景技術(shù)：
多年來對(duì)于多胺、腐胺、亞精胺和精胺在細(xì)胞活動(dòng)中之生物活性的研究證明它們?cè)谏顒?dòng)中起著復(fù)雜而重要的作用(Cohen，S.S.，“有關(guān)多胺”1998，牛津大學(xué)出版社，紐約)。它們?cè)谏韕H下為多陽離子，可與所有陰離子細(xì)胞組分緊密結(jié)合并調(diào)節(jié)其活性。
正常和瘤形成性生長(zhǎng)過程中的許多刺激因素會(huì)激活多胺生物合成路徑。大量跨學(xué)科研究顯示在多胺生物合成、代謝和轉(zhuǎn)運(yùn)過程的許多步驟中，其細(xì)胞內(nèi)濃度受到高度調(diào)控。細(xì)胞內(nèi)包含著嚴(yán)密調(diào)控此類分子水平的復(fù)雜機(jī)制這一事實(shí)表明此類分子的濃度只允許極其窄幅的波動(dòng)。
多胺向哺乳動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)部的轉(zhuǎn)運(yùn)依賴于能量和溫度，是可飽和的，由載體介導(dǎo)的，并按著相當(dāng)?shù)臐舛忍荻冗\(yùn)行(Seiler，N.等，哺乳動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)的多胺轉(zhuǎn)運(yùn)。世界生物化學(xué)雜志，1990，22，211-18；Khan，N.A.；Quemener，V.等，多胺轉(zhuǎn)運(yùn)路徑的描述，多胺的神經(jīng)藥物學(xué)(Carter，C主編)，1994，Academic，SanDiego，pp.37-60)。大量實(shí)驗(yàn)證明多胺濃度的動(dòng)態(tài)平衡由該轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)介導(dǎo)。生長(zhǎng)刺激引起的多胺需求改變將反映為轉(zhuǎn)運(yùn)活性的升高。用血清或表皮生長(zhǎng)因子刺激人成纖維細(xì)胞增殖令腐胺的攝入提高了18-100倍(DiPasquale，A.等，表皮生長(zhǎng)因子刺激人成纖維細(xì)胞培養(yǎng)物內(nèi)腐胺的轉(zhuǎn)運(yùn)和鳥氨酸脫羧酶活性。實(shí)驗(yàn)細(xì)胞研究，1978，116，317-323；Pohjanpelto，P.，開始增殖的人成纖維細(xì)胞內(nèi)的腐胺轉(zhuǎn)運(yùn)活性顯著升高。細(xì)胞生物學(xué)雜志，1976，68，512-20)。已證明，腫瘤的腐胺攝入速度加快(Volkow，N.等，以標(biāo)記的腐胺作為探針用于腦腫瘤內(nèi)?？茖W(xué)，1983，221，673-75；Moulinoux，J-P.等，循環(huán)多胺在腫瘤學(xué)中的生物學(xué)意義。細(xì)胞分子生物學(xué)雜志，1991，37，773-83)。
用α-二氟甲基鳥氨酸(DFMO)-一種作用機(jī)制清楚的ODC抑制劑-抑制細(xì)胞培養(yǎng)物中多胺的生物合成引起細(xì)胞內(nèi)腐胺和亞精胺的顯著減少，并最終導(dǎo)致細(xì)胞生長(zhǎng)抑制。向培養(yǎng)基中補(bǔ)加外源多胺后，上述減少令多胺轉(zhuǎn)運(yùn)活性提高了數(shù)倍(Bogle，R.G.等，內(nèi)皮多胺吸收L-精氨酸缺乏或多胺缺乏的選擇性刺激。美國(guó)生理學(xué)雜志，1994，266，C776-C783；Alhonen-Hongisto，L.等，胞內(nèi)腐胺缺乏誘導(dǎo)自發(fā)的多胺和甲基乙二醛雙(脒基腙)的吸收。生物化學(xué)雜志，1980，192，941-945)。然后，細(xì)胞生長(zhǎng)速度恢復(fù)正常。
多胺轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白或復(fù)合物的基因已經(jīng)從大腸桿菌和酵母中克隆出來(Kashiwagi，K等人，J.Biol.Chem，1990，265，20893-20897；Tomitori，H等人，酵母中多胺轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的基因的識(shí)別，J.Biol.Chem，1999，274，3265-3267)。哺乳動(dòng)物轉(zhuǎn)運(yùn)子(transporter)的基因有待識(shí)別。來自大腸桿菌的轉(zhuǎn)運(yùn)子的亞基已經(jīng)被結(jié)晶出來，且已經(jīng)測(cè)定了其X射線結(jié)構(gòu)(Sugiyama，S等人，大腸桿菌中多胺轉(zhuǎn)運(yùn)體系的初級(jí)受體，PotD的晶體結(jié)構(gòu)，J.Biol.Chem，1996，271，9519-9525)。這種結(jié)構(gòu)表示少數(shù)但已解析的為數(shù)不斷增加的亞精胺結(jié)合蛋白中的一種。因?yàn)檫@種結(jié)構(gòu)是對(duì)原核生物物種測(cè)定的，所以其在哺乳動(dòng)物轉(zhuǎn)運(yùn)抑制劑中的應(yīng)用受到一定的限制。
一些研究人員已經(jīng)研究了多胺類似物在抑制3H亞精胺被細(xì)胞攝入中的能力。Bergeron及其合作者研究了在亞精胺或精胺類似物的末端氮原子上加入不同烷基取代基的效果(Bergeron等人，多胺類似物的反增殖性結(jié)構(gòu)活性的研究，J.Med.Chem，1994，37，3464-3476)。他們說明越大的烷基就會(huì)降低阻止放射性同位素示蹤的亞精胺攝入的能力。他們后來推斷出，在氮原子之間的亞甲基數(shù)目的增加會(huì)降低競(jìng)爭(zhēng)3H亞精胺攝入的能力(Bergeron.R等人，亞精胺和精胺抗腫瘤藥之間的結(jié)構(gòu)活性關(guān)系的比較，J.Med.Chem，1997，40，1475-1494)。他們還推斷出多胺轉(zhuǎn)運(yùn)裝置只需要三個(gè)陽離子中心用于多胺識(shí)別和轉(zhuǎn)運(yùn)(Porter，C.W.等人，J.Cancer Res，1984，44，126-128)。兩個(gè)小組使用CoMFA和QSAR方法分析了文獻(xiàn)例子中多胺類似物在抑制3H亞精胺被攝入L1210細(xì)胞中的能力(Li，Y等人，在L1210細(xì)胞中多胺轉(zhuǎn)運(yùn)抑制劑的結(jié)構(gòu)-功能關(guān)系的基于比較分子領(lǐng)域的預(yù)測(cè)模型，Cancer Res，1997，57，234-239；Xia，C.Q等人，在L1210細(xì)胞中的多胺轉(zhuǎn)運(yùn)抑制劑的QSAR分析，J.Drug Target，1998，6，65-77)。
目前已使用一種放射性化學(xué)試驗(yàn)來進(jìn)行轉(zhuǎn)運(yùn)的生物化學(xué)分析，并用于研究酵母和多種哺乳動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)的多胺轉(zhuǎn)運(yùn)(Kakinuma，Y.等，生物化學(xué)和生物物理學(xué)研究通訊，216985-992，1995；Seiler，N.等，世界生物化學(xué)細(xì)胞生物學(xué)雜志，28843-861，1996)。見，例如，Huber，M.等的癌癥研究，55934-43，1995。
WO 99/03823及其對(duì)應(yīng)的1999年7月6日提交的美國(guó)專利申請(qǐng)09/341400(其全部?jī)?nèi)容參考結(jié)合于此)以及最近的公開出版物，如Burns，M.R.；Carlson，C.L.；Vanderwerf，S.M.；Ziemer，J.R.；Weeks，R.S.；Cai，F(xiàn)；Webb，H.K.；Graminski，G.F.的氨基酸/精胺共軛物多胺酰胺作為有效亞精胺吸收抑制劑，J.Med.Chem，2001，44，3632-44和Graminski，G.F.；Carlson，C.L.；Ziemer，J.P.；Cai，F(xiàn).；Vermeulen，N.M.；Vanderwerf，S.M.；Burns，M.R.，作為有效多胺轉(zhuǎn)運(yùn)抑制劑的雙精胺二聚物的合成，Bioorg.Med.Chem.Lett，2002，12，35-40，已經(jīng)描述了一些非常有效的多胺轉(zhuǎn)運(yùn)抑制劑。
引用以上文獻(xiàn)并非指認(rèn)以上都是相關(guān)的現(xiàn)有技術(shù)。以上給出的文獻(xiàn)日期或其中內(nèi)容都是基于申請(qǐng)人現(xiàn)有的信息，并不確保其準(zhǔn)確性。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明涉及新型多胺類似物及其衍生物，以及它們作為藥物、農(nóng)用制劑或環(huán)保制劑的用途。這些新型多胺類似物及其衍生物包括共價(jià)連接到多胺部分的疏水性部分。這些新型PA類似物可被認(rèn)為具有疏水親水兩重特性(疏水性以及帶電部分(charged portions)。本發(fā)明的多胺類似物及其衍生物包括用疏水性酰基進(jìn)行?；亩喟罚渲絮；峭ㄟ^形成酰胺或磺酰胺鍵完成的。雖然疏水性?；投喟凡糠种g的鍵合可存在于多胺中的任何一個(gè)胺基上，優(yōu)選是鍵合到伯胺官能度上。
本發(fā)明的類似物及其衍生物是細(xì)胞多胺轉(zhuǎn)運(yùn)的有效抑制劑。在不受理論約束的情況下，它們被推斷為以非常高的親合力連接到細(xì)胞的多胺轉(zhuǎn)運(yùn)子裝置上。它們可單獨(dú)使用，或者結(jié)合細(xì)胞多胺合成物抑制劑來抑制細(xì)胞生長(zhǎng)和繁殖，甚至在存在外來亞精胺的情況下。
本發(fā)明的類似物和衍生物包括下式I表示的化合物
R-X-多胺其中R選自H或直鏈或支鏈C1-50飽和或不飽和脂肪基(aliphatic)、羧烷基、烷氧羰基烷基或烷氧基；C1-8脂環(huán)基(alicyclic)；單或多環(huán)芳基取代的脂肪基；脂肪族取代的單或多環(huán)芳香基(aromatic)；單或多環(huán)雜環(huán)基；單或多環(huán)雜環(huán)脂肪基；C1-10烷基；芳基磺?；?；或氰基；“X”是-CO-、-SO2-或-CH2-，以及“多胺”可以是任何天然產(chǎn)物，如腐胺、精胺或亞精胺，或合成的多胺。
優(yōu)選的，R是至少約C5、至少約C10、至少約C11、至少約C12、至少約C13、至少約C14、至少約C15、至少約C16、至少約C17、至少約C18、至少約C19、至少約C20、或至少約C22。
X和多胺之間的鍵合可以是直接的，其中在X與多胺的胺基的氮原子之間沒有原子，或者是間接的，其中在X與多胺的胺基的氮原子之間有一個(gè)或多個(gè)原子。在X與多胺之間的鍵合可通過多胺中的任何氨基存在，盡管在本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)例中使用了伯氨基。
在本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)例中，X與多胺之間的鍵合是間接的，其中摻入的一個(gè)或多個(gè)原子優(yōu)選是氨基酸或其衍生物的原子。在本發(fā)明的特別優(yōu)選的實(shí)例中，摻入的一個(gè)或多個(gè)原子是賴氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、鳥氨酸或2，4-二氨基丁酸中的原子。本發(fā)明的優(yōu)選化合物可如下表示R-X-L-多胺其中R是直鏈或支鏈C10-50飽和或不飽和脂肪基、羧烷基、烷氧羰基烷基、或烷氧基；C1-8脂環(huán)基；單或多環(huán)芳基取代或未取代的脂肪基；脂肪族取代或未取代的單或多環(huán)芳香基；單或多環(huán)雜環(huán)基；單或多環(huán)雜環(huán)脂肪基；芳基磺?；?；X是-CO-、-SO2-、或-CH2-；以及L是共價(jià)鍵或天然存在的氨基酸、鳥氨酸、2，4-二氨基丁酸、或其衍生物。
本發(fā)明類似物及其衍生物可任選進(jìn)一步在多胺的一個(gè)或多個(gè)其它位置被取代。這包括，但不限于內(nèi)部氮原子和/或內(nèi)部碳原子。在本發(fā)明的一個(gè)方面，優(yōu)選的取代基是這樣的結(jié)構(gòu)，它能提高多胺轉(zhuǎn)運(yùn)抑制、結(jié)合親合力或者提高化合物與多胺連接分子(如多胺轉(zhuǎn)運(yùn)子、酶或DNA)的連接的不可逆性。這種附加的取代基包括氮丙啶基和各種其它的脂肪族、芳香族、混合脂肪族-芳香族、或雜環(huán)多環(huán)結(jié)構(gòu)。能夠共價(jià)連接到多胺轉(zhuǎn)運(yùn)子或其它多胺連接分子上的反應(yīng)部分(如氮丙啶)也包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。能夠與親核試劑反應(yīng)形成共價(jià)鍵的反應(yīng)基團(tuán)的例子包括氯-、溴-和碘乙酰胺、磺酰基氟化物、酯、氮芥等。這種反應(yīng)部分可用于診斷或研究工作中的親合性標(biāo)記，并可在抑制多胺轉(zhuǎn)運(yùn)或多胺合成中提供藥物活性。反應(yīng)基團(tuán)可以是反應(yīng)性光親合基團(tuán)如疊氮基或二苯甲酮基團(tuán)。用于光親合性標(biāo)記的化學(xué)試劑在本領(lǐng)域是已知的(Flemming，S.A.，四面體，1995，51，12479-12520)。
本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選的方面涉及多胺類似物或其衍生物，它是具有藥物用途的高度專一性的多胺轉(zhuǎn)運(yùn)抑制劑，可用作抗癌化學(xué)治療的藥物。連接到一個(gè)分子的多胺連接點(diǎn)上和/或抑制多胺轉(zhuǎn)運(yùn)的本發(fā)明的一類多胺類似物或衍生物可用下式II表示 其中a、b和c的范圍分別是1-10；d和e的范圍分別是0-30；每個(gè)X分別是碳(C)或硫(S)原子，R1和R2如下述，或者每個(gè)R1X{O}n和R2X{O}n分別用H代替；*表示手性碳原子的位置。其中，如果X是C，那么n是1；如果X是S，那么n是2；如果X是C，那么XO基團(tuán)可以是CH2，n是0。
在上述分子式中，R1和R2分別選自H或直鏈或支鏈C1-50飽和或不飽和脂肪基、羧烷基、烷氧羰基烷基、或烷氧基；C1-8脂環(huán)基；單或多環(huán)芳基取代的脂肪基；脂肪族取代的單或多環(huán)芳香基；單或多環(huán)芳香的或飽和的雜環(huán)基；單或多環(huán)雜環(huán)芳香基；C1-10烷基；芳基磺?；换蚯杌?。
在這里使用的雜環(huán)的例子包括，但不限于吡咯、呋喃、 噻吩、咪唑、噁唑、噻唑、吡唑、3-吡咯啉、吡咯烷、吡啶、嘧啶、嘌呤、喹啉、異喹啉和咔唑。
所有的上述脂肪基、羧烷基、烷氧羰基烷基、烷氧基、脂環(huán)基、芳基和雜環(huán)基部分也可任選被分別選自鹵素(halo)-(氟、氯、溴或碘)、低級(jí)烷基(1-6C)和低級(jí)烷氧基(1-6C)的1-3個(gè)取代基取代。
在這里使用的羧烷基指取代基-R′-COOH，其中R′是亞烷基；烷氧羰基烷基指-R′-COOR，其中R′和R分別是亞烷基和烷基。在優(yōu)選的實(shí)例中，烷基指1-6個(gè)碳原子的飽和直鏈或支鏈烴基，如甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、叔丁基、正戊基、2-甲基戊基、正己基等。亞烷基與烷基相同，不同的是這些基團(tuán)是二價(jià)的。芳基或烷基磺?；糠值姆肿邮绞荢O2R，烷氧基部分的分子式是-O-R，其中R是上述烷基，或芳基，其中芳基是苯基，任選被分別選自鹵素(halo)-(氟、氯、溴或碘)、低級(jí)烷基(1-6C)和低級(jí)烷氧基(1-6C)的1-3個(gè)取代基取代。
上述化合物的優(yōu)選一組是d為4，且e為0。
連接到分子的多胺連接點(diǎn)和/或抑制多胺轉(zhuǎn)運(yùn)的本發(fā)明的多胺類似物或衍生物的其它類型如下式III所示 其中a、b和c的范圍分別是1-10，d和e的范圍分別是0-30。R1和R2的定義如分子式II，R3和R4分別選自包括-CH3和上述在分子式II中定義的R1和R2的有機(jī)取代基。類似物的這一組是由游離氨基前體與酮的還原胺化作用產(chǎn)生的。這類類似物的一些成員如系列V所示(參見圖2)。
在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)例中，R1和R2是相同的并如分子式II中所述相同。位置R3和R4也可以是相同的，所有的R1-R4也可以是相同的。另外，分子式III中的每個(gè)位置的R1、R2、R3和R4也可以分別是H。
在本發(fā)明的其它方面中，相對(duì)多胺(如精胺)最接近的和/或末端氨基也可進(jìn)行二烷基化形成叔胺。這些物質(zhì)可通過大量過量的羰基組分的還原胺化作用進(jìn)行合成。另外，這些物質(zhì)可通過胺前體共軛加成到α，β-不飽和羰基或α，β-不飽和腈來制備。每個(gè)R1、R2、R3和R4可以各自不同，且與上述分子式III中定義的相同。每個(gè)R1、R2、R3和R4也可以分別是H。a、b、c、d和e的值如分子式III所述。本發(fā)明的這個(gè)方面如下述分子式IV所示
在本發(fā)明的另一個(gè)方面中，也可提供在分子的?；糠秩鄙僮罱咏蚰┒税被幕衔铩＿@些可用分子式V表示 其中Z1是NR1R3，Z2選自-R1、-CHR1R2或-CR1R2R3(其中R1、R2和R3如分子式III所示)，或者Z2是NR2R4，Z1選自-R1、-CHR1R2或-CR1R2R3(其中R1、R2、R3如分子式III所示)。a、b和c的值的范圍分別是1-10；d和e范圍分別是0-30。分子式V包括的化合物可這樣進(jìn)行制備，即優(yōu)選把氨基酸衍生物(改性成包含含有非胺的Z基團(tuán))偶合到多胺上，然后適當(dāng)進(jìn)行含胺的Z基團(tuán)的衍生作用。進(jìn)行這些反應(yīng)的化學(xué)物質(zhì)在本領(lǐng)域是已知的，并在此公開。
在本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)例中，所有上述分子式中的位置R1、R2、R3和R4分別如下選擇，其中每個(gè)g、h、i、j和k分別選自0-15 其中E指“反式(entgeten)”，Z指“順式(zusammen)”。
本發(fā)明包括上述分子式的多胺類似物和衍生物的游離堿或酸形式，以及它們的鹽。本發(fā)明也包括上述類似物和衍生物的光學(xué)異構(gòu)體，尤其是得自上述用*標(biāo)示的手性中心的光學(xué)異構(gòu)體。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)例中，包括得自單步制備步驟、組合的作用或互相轉(zhuǎn)換的對(duì)映異構(gòu)體和/或非對(duì)映異構(gòu)體的混合物。
本發(fā)明也提供上述類似物和衍生物的前體藥物形式，其中前體藥物在體內(nèi)新陳代謝形成上述類似物或衍生物。事實(shí)上，上述類似物或衍生物的一些可以是另一種類似物或衍生物的前體藥物。
在本發(fā)明的另一個(gè)方面中，提供了包含上述類似物和衍生物的組合物。優(yōu)選地，通過包含適當(dāng)?shù)妮d體或賦形劑把該組合物制成適合藥物或農(nóng)業(yè)用途。
在本發(fā)明的另一個(gè)方面中，提供了使用的上述類似物和衍生物以及組合物的方法。這些方法包括使用本方面的多胺化合物來抑制多胺轉(zhuǎn)運(yùn)，以及治療人類和農(nóng)業(yè)疾病和癥狀。人類疾病和癥狀的例子包括，但不限于癌癥、骨質(zhì)疏松癥、哮喘、自身免疫性疾病、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、I型胰島素依賴型糖尿病、組織移植、非洲昏睡病、牛皮癬、再狹窄、作為化妝抑制用的抑制不需要的毛發(fā)生長(zhǎng)、甲狀旁腺功能亢進(jìn)、炎癥、治療胃潰瘍、青光眼、阿耳茨海默氏病、抑制心動(dòng)過速、刺激或抑制腸運(yùn)動(dòng)性、克羅恩氏病和其它炎癥性腸病、高血壓(血管舒張)、中風(fēng)、羊癇風(fēng)、焦慮、神經(jīng)退化病、痛覺過敏的狀態(tài)、防止聽力損失(特別是癌化學(xué)療法引起的聽力損失)、以及可卡因強(qiáng)化的藥理學(xué)控制和治療可卡因上癮和用藥過量和其它真菌、細(xì)菌、病毒和寄生疾病。這些化合物也發(fā)現(xiàn)可用作核酸的細(xì)胞間輸送用的媒介，所述核酸用于許多疾病狀態(tài)的反義(anti-sense)DNA療法中。在農(nóng)業(yè)應(yīng)用中，本發(fā)明多胺化合物也可用作，但不限于土壤添加劑或調(diào)節(jié)劑。
附圖簡(jiǎn)述
圖1顯示了方案1，選擇性?；馁嚢彼?精胺衍生物的合成路徑。通過使用類似保護(hù)的“H-X-COO”原料(其中X是CH-(CH2)d-NH-COO-CH2-Ph，其中d如上述，“Ph”是苯基)和/或使用其它伯多胺(包括精胺)，該路徑可容易地修改成用于其它多胺衍生物。
圖2描述了包括在本發(fā)明中的示例性多胺結(jié)構(gòu)。它們已經(jīng)根據(jù)連接在精胺骨架上形成本發(fā)明示例性類似物和衍生物的化學(xué)部分的特征分成系列I-VI。其它多胺也可用作骨架。在每個(gè)表第一、最左邊列中所示的結(jié)構(gòu)表示用于合成單個(gè)多胺結(jié)構(gòu)的特殊化學(xué)原料。所用的合成步驟得到了終端產(chǎn)品，它們是得自?；群桶?系列I)之間的反應(yīng)的羧酰胺，得自磺酰氯和胺(系列II)之間的反應(yīng)的磺酰胺，得自DCC、HBTU或PyBOP活化的羧酸與胺(系列III)之間的反應(yīng)的羧酰胺，得自氨與醛(系列IV)的還原胺化作用的烷基化仲胺，得自游離氨基前體與酮(系列V)的還原胺化作用的具有α-烷基取代基的烷基化仲胺，以及得自大量過量的含羰基(如醛或酮)組分的還原胺化作用的二烷基化叔胺(系列(VI)。另外，系列VI化合物也可通過把胺前體共軛加成到α，β-不飽和羰基或α，β-不飽和腈上形成的。列E和F指堿性化學(xué)結(jié)構(gòu)的雙衍生形式。
圖3顯示了本發(fā)明的多胺類似物的代表性結(jié)構(gòu)。
圖4顯示了在L-賴氨酸類似物ε位上的烴取代基長(zhǎng)度與得到的作為多胺轉(zhuǎn)運(yùn)抑制劑的活性之間的關(guān)系，所述活性由EC50所定義(參見實(shí)施例IV)。
圖5代表性的顯示了用于計(jì)算logP值的化合物部分。
圖6顯示了計(jì)算的logP值與HPLC停留時(shí)間之間的關(guān)系，所述HPLC停留時(shí)間對(duì)應(yīng)于表2(系列I)所示的化合物的丹?；?dansylate)衍生物。
圖7顯示了計(jì)算的logP值與平均EC50值之間的關(guān)系，所述化合物的平均EC50值得自4個(gè)細(xì)胞系(數(shù)據(jù)相對(duì)于表1中的系列I化合物)。
圖8顯示了HPLC停留時(shí)間與平均EC50之間的關(guān)系，所述HPLC停留時(shí)間對(duì)應(yīng)于表2(系列IV和V)所示的化合物的丹酰化(dansylate)衍生物，所述化合物的平均EC50值得自4個(gè)細(xì)胞系(表1中的數(shù)據(jù))。
圖9顯示了計(jì)算的logP值與HPLC停留時(shí)間之間的關(guān)系，所述HPLC停留時(shí)間對(duì)應(yīng)于表2(系列IV和V)所示的化合物的丹?；?dansylate)衍生物。
圖10顯示了計(jì)算logP值與平均EC50值之間的關(guān)系，所述化合物的EC50值得自4個(gè)細(xì)胞系(數(shù)據(jù)對(duì)應(yīng)于表1的系列IV和V化合物)。
圖11顯示了HPLC停留時(shí)間與平均EC50之間的關(guān)系，所述HPLC停留時(shí)間對(duì)應(yīng)于表2(系列IV和V)所示的化合物的丹?；?dansylate)衍生物，所述平均EC50值通過使用表1中的數(shù)據(jù)得自4個(gè)細(xì)胞系。
圖12顯示了本發(fā)明示例性多胺類似物和衍生物的結(jié)構(gòu)。
具體實(shí)施例方式
本發(fā)明的發(fā)明人已經(jīng)設(shè)計(jì)出了新的多胺類似物和衍生物，用于抑制多胺轉(zhuǎn)運(yùn)和其它用途?？赏茢噙@些類似物和衍生物以高的親合力結(jié)合到多胺轉(zhuǎn)運(yùn)子上，并競(jìng)爭(zhēng)性或非競(jìng)爭(zhēng)性地抑制多胺轉(zhuǎn)運(yùn)。因此，這些化合物通過降低或阻止多胺攝入來改變多胺在細(xì)胞中的新陳代謝。
在本發(fā)明特別優(yōu)選的實(shí)例中，一種或多種多胺類似物和衍生物與多胺合成抑制劑結(jié)合使用，來抑制細(xì)胞增長(zhǎng)和繁殖。這樣，它們可用于治療許多疾病的藥物，特別是癌癥和其它涉及細(xì)胞繁殖的癥狀，包括但不限于炎性疾病或癥狀，其中免疫系統(tǒng)的組成經(jīng)受了不需要的增生。非限制性的例子包括哮喘、自身免疫性疾病、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼、I型胰島素依賴型糖尿病、牛皮癬、再狹窄、抑制毛發(fā)在皮膚上不需要的增生、組織移植、非洲昏睡病、骨質(zhì)疏松癥、甲狀旁腺功能亢進(jìn)、治療胃潰瘍、阿耳茨海默氏病、抑制心動(dòng)過速、刺激或抑制腸運(yùn)動(dòng)性、克羅恩氏病和其它其它炎癥性腸病、高血壓(血管舒張)、中風(fēng)、羊癇風(fēng)、焦慮、神經(jīng)退化病、痛覺過敏的狀態(tài)、保護(hù)毛細(xì)胞不受化學(xué)療法引起的聽力損失、以及可卡因強(qiáng)化的藥理學(xué)控制和治療可卡因上癮和用藥過量和其它真菌、細(xì)菌、病毒和寄生疾病。
在這里所用的術(shù)語“多胺”包括腐胺、精胺或亞精胺，以及更長(zhǎng)鏈的直鏈多胺、支鏈多胺等，它們具有2到約10個(gè)氮原子。也包括在這個(gè)定義中的是多胺衍生物或類似物，包括具有許多官能團(tuán)的基本多胺鏈，所述官能團(tuán)連接到C原子或末端或內(nèi)部N原子上。對(duì)于在伯胺基團(tuán)上的修飾，當(dāng)然多胺必需包含這樣的基團(tuán)。
多胺“類似物”和/或“衍生物”通常指任何這里公開或描述的修飾的多胺分子。這些分子通常是現(xiàn)有多胺的修飾物，現(xiàn)有多胺包括天然或合成的多胺，它們也可被稱為本發(fā)明“多胺試劑”、“PA”或“試劑”。優(yōu)選的PA結(jié)合和/或抑制細(xì)胞的多胺轉(zhuǎn)運(yùn)，因此也可稱為“轉(zhuǎn)運(yùn)結(jié)合分子”或“多胺轉(zhuǎn)運(yùn)抑制劑”。本定義的范圍包括任何的修飾，如從現(xiàn)有多胺中形成PA，或者從天然物質(zhì)中分離出結(jié)構(gòu)相同的PA。優(yōu)選地，修飾是把一個(gè)或多個(gè)化學(xué)部分加成到多胺上。
作為“抑制劑”多胺類似物或衍生物的PA(a)比天然多胺更好地結(jié)合到多胺轉(zhuǎn)運(yùn)子上，和/或(b)通過一些方法阻斷多胺攝入細(xì)胞或亞細(xì)胞多胺轉(zhuǎn)運(yùn)制子。本發(fā)明包括當(dāng)結(jié)合使用多胺合成抑制劑時(shí)能有效抑制不同的真核細(xì)胞類型中的多胺轉(zhuǎn)運(yùn)子并抑制細(xì)胞增長(zhǎng)和繁殖的PA。
本發(fā)明的PA通常具有酰基化的伯胺官能度，并可由以非常高的親合力結(jié)合到細(xì)胞的多胺轉(zhuǎn)運(yùn)裝置上。Ki的測(cè)量是通過使用一種試驗(yàn)來進(jìn)行的，所述試驗(yàn)顯示了對(duì)多胺攝入的抑制作用，如對(duì)于3H-亞精胺的攝入。
PA也可用次級(jí)試驗(yàn)來分析，在合用多胺生物合成的有效抑制劑的條件下，根據(jù)細(xì)胞增長(zhǎng)抑制測(cè)試，顯示出細(xì)胞的多胺吸收的抑制。本試驗(yàn)在多胺如亞精胺的存在下測(cè)定PA阻止多胺攝入的能力，從而克服使用DFMO(二氟甲基鳥氨酸)多胺生物合成的抑制作用。由于多胺單酰胺在這兩個(gè)試驗(yàn)中都具有高效力，所以在不限制本發(fā)明條件下，可推斷在轉(zhuǎn)運(yùn)子蛋白上有一個(gè)位點(diǎn)可緊密結(jié)合抑制劑的酰胺官能度。
這些PA的優(yōu)選實(shí)例是帶有兩個(gè)或多個(gè)伯胺基團(tuán)的多胺分子酰基化的結(jié)果。在?；筒坊鶊F(tuán)之間的鍵合優(yōu)選是酰胺鍵(用“CO”和“NH”之間的鍵表示)，并形成具有下述通式的分子?；钠溆嗖糠?rest)-CO-NH-多胺的其余部分如上述，也可使用其它鍵合，不管是直接或間接。在上述分子式中“多胺”可以是具有至少一個(gè)用于連接?；牟坊鶊F(tuán)的多胺，但是優(yōu)選是具有兩個(gè)或多個(gè)伯胺基團(tuán)。
包括在上述分子式中的一類優(yōu)選的?；糜谶M(jìn)一步?；膬蓚€(gè)伯胺。得到PA類可用下述分子式(分子式II)描述。
如上述，在這些化合物中的烷基部分的非限制性例子包括至少約8個(gè)碳原子的直鏈或支鏈，以提高疏水性(或親油性)，如至少約10、至少約12、至少約14、至少約16、至少約18、至少約20、至少約22、至少約24、至少約26、至少約28、至少約30個(gè)碳原子。在優(yōu)選實(shí)例的另一個(gè)系列中，鏈具有至少約19、21、23、25或27個(gè)碳原子，優(yōu)選是具有至少約20到至少約24或26個(gè)碳原子。
上式中PA的特別優(yōu)選的一組是d為4且e為0，盡管通常從這一組中排除出去的是這樣的PA，其中R2X{O}n-是H，R1X{O}n-是R1SO2-，其中R1是通過噻吩的2位連接到S原子上，并在其5位上取代的噻吩部分。優(yōu)選地排除出去的是這樣的PA，其中在5位的取代基包括酰胺鍵。也優(yōu)選地排除出去的是這樣的PA，其中酰胺鍵連接到氯化的芳基上，如在199年9月15日提交的美國(guó)專利申請(qǐng)09/396523中鑒定為ORI1340的化合物。
本發(fā)明的其它PA類如上述分子式I、III、IV和V所述。在本發(fā)明的所有分子式中，術(shù)語“單或多環(huán)脂環(huán)基”包括金剛烷基(adamantyl)型結(jié)構(gòu)。而且，與本發(fā)明分子式的化學(xué)部分的描述一起使用的術(shù)語“取代的”包括通過“取代”的方式把一個(gè)部分連接分子式的其余部分。該術(shù)語也說明，所述化學(xué)部分的“非取代”形式也包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
通過分析多胺類似物的結(jié)構(gòu)與其用作多胺轉(zhuǎn)運(yùn)抑制劑的能力之間的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)多胺上疏水性取代基的親油性的提高可增加轉(zhuǎn)運(yùn)抑制作用。當(dāng)親油性多胺類似物與多胺轉(zhuǎn)運(yùn)裝置之間的作用的性質(zhì)在這時(shí)仍然是不清楚時(shí)，本發(fā)明包括但不限于這樣的情況，其中疏水性(親油性)部分可用來錨定(anchor)轉(zhuǎn)運(yùn)子上或其附近區(qū)域中的一些疏水性部分。從而形成類似物的多胺部分與多胺轉(zhuǎn)運(yùn)子之間的相互作用。
有許多方法可用來分析本發(fā)明化合物的疏水性。下述兩種方法可測(cè)量親油性的相對(duì)程度。
logP系數(shù)是化合物在1-辛醇和H2O混合物中分配比的對(duì)數(shù)。logP值大于1的化合物被認(rèn)為是親油性的(相對(duì)H2O，其在1-辛醇中的溶解度更大)。化合物中可電離基團(tuán)的存在對(duì)于這個(gè)參數(shù)有非常大的作用。電離會(huì)極大地提高化合物的H2O溶解度。因此，當(dāng)將親油性與活性相關(guān)聯(lián)時(shí)，化合物的電離潛能必需考慮?？墒褂迷S多計(jì)算機(jī)化的算法來計(jì)算logP值的估算值。這種計(jì)算機(jī)程序中的一種是CambridgeSoftCorporation生產(chǎn)的ChemDraw Pro Version5.0。該程序用來計(jì)算logP系數(shù)的方法中的一種是通過Crippen′s裂片法(Crippen等人，J.Chem.Inf.Comput.Sci，1987，27，21)。本發(fā)明使用這種方法計(jì)算上述分子碎片的logP值。這些碎片以圖5所示的形式產(chǎn)生。這些計(jì)算的結(jié)果列在表1中(對(duì)于ε-?；〈馁嚢彼?精胺共軛物(圖2，系列I)的D-立體異構(gòu)體)以及表2中(對(duì)于ε-烷基取代賴氨酸-精胺共軛物(圖2，系列IV-V)的D-立體異構(gòu)體)。
表1對(duì)應(yīng)于ε-?；?取代的精胺基類似物(圖2，系列I)的D-立體異構(gòu)體的化學(xué)結(jié)構(gòu)(對(duì)應(yīng)于圖2的ID)，logP計(jì)算值，HPLC數(shù)據(jù)和平均EC50值。包括化合物1426和一種系列V化合物作為比較。
ID結(jié)構(gòu) LogP 停留時(shí)間 平均EC50值
IB38 1.739.6313IB37 1.036.3341IB2 6.5921.1 0.083IB4 5.6815.820.084IB8 1.576.07 3.5IB262.016.34 1.1IB361.214.91 27IB340.754.6 8.5IB6 2.4810.482.2
IB7 2.03 6.83 13IB9 1.12 5.16 12IB33 -0.05 3.56 8.4IB10 0.23.46 12IB32 0.97 5.29 3.6IB30 1.68 7.4 2IB29 1.99 6.08 2.1IB25 -0.44 No Data 10IB240.58 4.23 30VA21 1.04 10.110.651426 Not calc′d6.68 3.7IA4 5.68 15.790.13對(duì)于系列I型化合物，本發(fā)明優(yōu)選的PA是具有低EC50值的PA，如具有小于約5、約6、約7、約8、約9、約10、約15、約20或約25分鐘HPLC停留時(shí)間的PA。
表2對(duì)應(yīng)于ε-烷基化的精胺基類似物(圖2，系列IV和V)的D-立體異構(gòu)體的化學(xué)結(jié)構(gòu)(對(duì)應(yīng)于圖2的ID)，logP計(jì)算，HPLC數(shù)據(jù)和平均EC50值。包括化合物1426和一種系列V化合物作為比較。
ID 結(jié)構(gòu)LogP 停留時(shí)間 平均EC50值VB28 2.0113.891.45IVB28 2.219.4 12.8VA22 1.84102.42VA27 2.3112.71 26.8VA26 1.7410.84 4.14IVB23 0.669.05 1.79IVB3 0.919.16 2.19
IVB211.12 9.62 1.32IVB241.46 9.35 1.32IVB221.92 9.85 0.68IVB6 2.28 10.870.89IVB5 1.83 10.270.71IVB332.45 10.011.38IVB271.68 10.310.61IVB250.57 9.89 0.89VA21 1.04 10.11 0.651426 Not calc′d6.68 3.68IA4 5.68 15.79 0.13對(duì)于系列IV和V型化合物，本發(fā)明優(yōu)選的PA是具有低EC50值的PA，如具有小于約5、約6、約7、約8、約9、約10、約15、約20或約25分鐘HPLC停留時(shí)間的PA。
測(cè)量相對(duì)疏水性的另一種方法是色譜分析技術(shù)，如在C18反相柱上的HPLC停留時(shí)間的比較，較長(zhǎng)的停留時(shí)間表示較大的相對(duì)疏水性。本發(fā)明使用了丹?；?dansylation)方法來形成所述類似物的丹酰基衍生物，并通過對(duì)C18反相HPLC進(jìn)行熒光檢測(cè)來分析這些衍生物。對(duì)于一些代表性的類似物，類似物和內(nèi)標(biāo)物(1，7-二氨基庚烷)的洗提峰之間的差別顯示在上述表1和2中。
對(duì)于系列I和IV型化合物，計(jì)算的logP值與丹?；苌锏腍PLC停留時(shí)間之間的關(guān)系分別列在圖6和9中。對(duì)于系列I和IV型化合物，計(jì)算的logP值與平均EC50之間的關(guān)系分別列在圖7和10中。對(duì)于系列I和IV型化合物，HPLC停留時(shí)間和平均EC50值之間的關(guān)系分別列在圖8和11中。
也已經(jīng)設(shè)計(jì)了其它的化合物疏水性度量(特別是對(duì)于氨基酸)，并由R.Wolfenden進(jìn)行了測(cè)量(Wolfenden，R.；Andersson，L.；Cullis，P.M.；Southgate，C.C.B.，氨基酸側(cè)鏈對(duì)于溶劑水的親合力，Biochemistry，1981，20，849-855)。他們測(cè)量了稀水溶液和蒸汽相之間的氨基酸側(cè)鏈的分配平衡。他們描述了一種的“水合潛能”的尺度，從而緩沖的水蒸氣相分布測(cè)試是根據(jù)氨基酸的側(cè)鏈部分進(jìn)行的(例如相對(duì)丙氨酸的甲烷，相對(duì)絲氨酸鋨甲醇，相對(duì)賴氨酸的正丁胺或者相對(duì)精氨酸的正丙基胍)。如果側(cè)鏈具有電離潛能，那么應(yīng)作修正以只考慮位未電離分?jǐn)?shù)。這是使用pKa的文獻(xiàn)值來計(jì)算未電離分?jǐn)?shù)。對(duì)于20種天然氨基酸，其側(cè)鏈橫跨這樣的自由能范圍，從對(duì)于氫(甘氨酸)的2.39千卡/摩爾或?qū)τ诩淄?丙氨酸)的1.94千卡/摩爾到對(duì)于正丁胺(賴氨酸)的-7.00千卡/摩爾或?qū)τ谡?精氨酸)的-14.6千卡/摩爾，所述自由能指從蒸汽相進(jìn)入水中需要的能量。
這些值形成了“水合潛能”的尺度，它與這樣的可能(potential)相關(guān)，即相對(duì)蛋白的更加疏水性的內(nèi)部，給定的氨基酸存在于外部，或者蛋白的疏水性部分。作者指出“從水中移出親水性側(cè)鏈的能量消耗遠(yuǎn)大于把疏水性側(cè)鏈拉入水中的能量消耗，事實(shí)上，可以觀察到疏水性殘基通常存在于蛋白的表面?！北景l(fā)明使用了這個(gè)度量來描述連接到多胺上的取代基的親油性。在分析前除去多胺部分。例如，需要在分析前除去任何包含α-氨基酸的類似物的α-氨基和α-羧酸酯基團(tuán)。通過使用這個(gè)尺度，相對(duì)賴氨酸-精胺共軛物(ORI 1202)，自由能小于測(cè)定的對(duì)于正丁胺(對(duì)應(yīng)于賴氨酸)的-7.00千卡/摩爾的取代基可以是優(yōu)選的多胺轉(zhuǎn)運(yùn)抑制劑，所述自由能指從蒸汽相進(jìn)入水中需要的能量。這意味著任何水合潛能大于(更正(positive)的)-7.00千卡/摩爾(如本尺度所定義的)的取代基會(huì)使多胺轉(zhuǎn)運(yùn)抑制劑具有明顯的活性(轉(zhuǎn)運(yùn)自由能的值越負(fù)的，意味著給定化合物在水中比在蒸氣相中具有越高的溶解性)。
PA的優(yōu)選組其中所述d為4且e為0，包括對(duì)應(yīng)于在上述分子式中用*標(biāo)示的手性碳的L和D-立體異構(gòu)體。示例性PA(如ORI 1202(L-賴氨酸-精胺)、1426(D-賴氨酸-精胺))以及包含IA4的那些(圖2)證明了在下述轉(zhuǎn)運(yùn)子抑制和細(xì)胞增長(zhǎng)抑制試驗(yàn)中的效力。PA ORI 1202也顯示了在一些抗癌鼠異種移植模型中的效果。參見Weeks，R.S.，Vanderwerf，S.M.，Carlson，C.I.，Burns，M.R.，O′Day，C.L.，Cai，C.F.，Devens，B.H.，暗淡Webb，H.K.，Exp.Cell Res.2000，261，293-302，以及Devens，B.H.，Weeks，R.S.，Burns，M.R.，Carlson，C.L.，和Brawer，M.K.前列腺癌和前列腺疾病2000，3，275-279。
在上述分子式的?；校瑑蓚€(gè)伯胺基團(tuán)的其它修飾容易通過使用伯胺基團(tuán)來完成，所述伯胺基團(tuán)可用于與市售正交雙保護(hù)(orthogonally diprotected)的H2N(CH2)nCH(NH2)COOH型分子(其中n的范圍是1-50)一起的選擇性功能化，所述分子如賴氨酸和鳥氨酸。
在不受理論限制的條件下，提高在上述R1和R2位的取代基的親油性會(huì)急劇提高對(duì)于多胺轉(zhuǎn)運(yùn)子的親合力。提高本發(fā)明的PA的親油性可增加多胺轉(zhuǎn)運(yùn)的抑制作用，這是由于同時(shí)存在親水性和親油性的區(qū)域。當(dāng)他們嘗試將親水性較大的物質(zhì)(如多陽離子多胺)移過它們疏水性較大的外膜屏障時(shí)，生物體系有一個(gè)重要的化學(xué)問題。如果轉(zhuǎn)運(yùn)子將多陽離子形式的多胺移過這個(gè)屏障的話，轉(zhuǎn)運(yùn)子是通過一些屏蔽或最小化其親水性的機(jī)理來這樣做的，這種方法的機(jī)理可能包括在多胺和位于蛋白上的帶負(fù)電殘基之間形成特殊的鹽橋，或者在膜間孔隙中形成帶電內(nèi)部。因?yàn)槎喟忿D(zhuǎn)運(yùn)已知是一個(gè)依賴能量的過程，所以轉(zhuǎn)運(yùn)子可能具有這樣的任務(wù)，即在膜疏水性較大的環(huán)境的存在下提供一個(gè)非常特殊的多胺形親水性孔。因此，轉(zhuǎn)運(yùn)子可能具有能與膜相互作用的疏水性殘基，接近能與多胺相互作用的親水性殘基。
通過設(shè)計(jì)包含親水性和疏水性區(qū)域的PA，本發(fā)明利用了多胺轉(zhuǎn)運(yùn)子的可能特性來提高轉(zhuǎn)運(yùn)的抑制作用。因此，本發(fā)明提供了多個(gè)系列包含多胺模擬部分和疏水性膜模擬部分的PA。可以推斷這些PA對(duì)于轉(zhuǎn)運(yùn)子具有較強(qiáng)的親合力，相比缺乏明顯疏水性區(qū)域的PA，它們顯示出顯著提高的生長(zhǎng)抑制作用(與多胺合成抑制劑合用)。可能由于同樣的原因，本發(fā)明的PA也希望能顯示出提高的口服生物利用率。希望親油性的提高能增強(qiáng)口服的吸收性。
也希望在同一個(gè)分子中導(dǎo)入親水性和疏水性區(qū)域(如本發(fā)明所述)來使核酸通過生物膜的轉(zhuǎn)運(yùn)變得方便。這個(gè)性能使類似物可用作用于反義DNA的轉(zhuǎn)運(yùn)子，用于科學(xué)、分析、診斷和治療的用途。
通過分析直鏈脂肪族飽和烴在位置R(參見圖2，系列I)上的延伸的結(jié)果可支持上述說法，所述延伸在多胺合成抑制劑的存在下可提高細(xì)胞生長(zhǎng)抑制作用。在該酰胺位置上的更長(zhǎng)的烴鏈能提高效力這樣清楚的趨勢(shì)可通過比較精胺基化合物IA4、IA8和IA11以及IB4、IB7和IB8來說明(參見表3)。圖4顯示了在多胺合成抑制劑的存在下，在R位置上的烴取代基的長(zhǎng)度與得到的EC50值的關(guān)系。
表3顯示了分析各種示例性PA的結(jié)果，所述分析結(jié)果相對(duì)于結(jié)合DFMO的抑制細(xì)胞增長(zhǎng)能力，對(duì)應(yīng)于未處理的對(duì)照細(xì)胞。EC50指在DFMO和PA都存在的條件下產(chǎn)生50％的最大細(xì)胞增長(zhǎng)抑制作用的PA濃度。Ki指多胺轉(zhuǎn)運(yùn)的抑制常數(shù)，所述抑制常數(shù)基于對(duì)于四個(gè)放射性底物濃度(0.3-3μM)和5個(gè)抑制劑濃度(0.01-1.0μM)和一個(gè)對(duì)照的倒數(shù)Lineweaver-Burke曲線圖分析和一個(gè)控制。使用化合物ORI 1202和1426作為比較。參見下述實(shí)施例。
表3在DFMO(1-5mM)存在下測(cè)得的代表性多胺類似物(參見圖2)的EC50值(μM)。也表示出了得自各種示例性PA的分析的IC50。IC50指在PA單獨(dú)存在下產(chǎn)生50％最大細(xì)胞生長(zhǎng)抑制作用的PA濃度。
*如圖12所示一系列PA(其中分子式I的R1和R2位置被脂肪族鏈取代，所述脂肪族鏈在其烴鏈中的不飽和度是不同的)表示在圖2的系列III中。這些化合物包括具有內(nèi)部幾何順式(Zusammen或Z-形式)的化合物，反式(entgengen或E-形式)異構(gòu)體也包括有這個(gè)系列中。
除了親油性的作用，本發(fā)明采用了基于PA帶電性的考慮。從本發(fā)明PA的上述分子式II中容易看出，引入R1X{O}n-和R2X{O}n-部分可減少類似物或衍生物上的正電荷數(shù)。在生理學(xué)pH值7.2，大部分胺基都是帶正電荷銨鹽的形式。通過對(duì)帶有乙酰胺(IA11)的PA相比類似的PA(其中R1X{O}n-和R2X{O}n-被氫原子取代(參見IA11對(duì)表3中的ORI 1202和ORI 1426))顯示出更高的EC50的觀察，提出了正電荷對(duì)于抑制多胺轉(zhuǎn)運(yùn)的重要性。
系列IV(參見圖2)通過結(jié)合長(zhǎng)烴鏈和保留帶正電荷銨鹽功能結(jié)合了上述對(duì)于親油性和正電荷的考慮。還原胺化作用可用來制備這些結(jié)構(gòu)，從而形成烷基化(代替?；?的胺?？赏茢噙@些化合物對(duì)于多胺轉(zhuǎn)運(yùn)子具有較強(qiáng)的親合力。具有二聚精胺結(jié)構(gòu)(同如IA19這樣的結(jié)構(gòu)表示)的PA對(duì)于初始的賴氨酸-精胺共軛物沒有改進(jìn)。
PA的另一類(基于包含羧酰胺(carboamide)的長(zhǎng)鏈烴(圖2系列I))可通過結(jié)合親油性的和生物穩(wěn)定的磺酰胺基團(tuán)來制備。這些PA如圖2系列II所示。在不受理論約束的情況下，在磺酰胺系列中加入另一個(gè)羰基類氧原子可提高多胺轉(zhuǎn)運(yùn)子的酰胺結(jié)合區(qū)域的相互作用。可能起作用的另一個(gè)因素是在相對(duì)羧酰胺的磺酰胺中的提高的親油性。另外，磺酰胺已知相比羧酰胺具有更高的生物穩(wěn)定性。
本發(fā)明也提供了其它方法來提高PA分子上的取代基的親油性。分子?；糠稚咸砑油榛倪x擇可提高這個(gè)基團(tuán)的親油性，因此使類似物具有更高的活性。提高該親油性的一種另外方法是通過把另外的烷基鏈連接到氨基的α位上(取代基連接到與氮原子連接的碳原子上)。這些類似物可通過游離氨基前體與一種系列V中所示的酮試劑進(jìn)行還原胺化作用進(jìn)行制備。在氨基的α位上連接甲基或其它取代基的另一個(gè)優(yōu)點(diǎn)是降低了生物學(xué)代謝的速度。
提高類似物的親油性的其它方法是通過在分子的最接近或末端、或者上述兩種氮原子上制備叔胺。這些分子(它們列在系列VI中)是通過利用游離單或二胺前體與過量在系列VI中所示的包含羧基的試劑的還原胺化反應(yīng)制備的。制備這些二取代叔胺的替代方法是把選擇性保護(hù)的胺基前體共軛加成到α，β-不飽和羰基化合物或α，β-不飽和腈化合物上。
本發(fā)明還提供合成本發(fā)明PA的方法。通常，含正交保護(hù)的二胺的化合物，如但不限于特定氨基酸，可偶聯(lián)到多胺的伯胺基團(tuán)上，然后去保護(hù)一個(gè)或兩個(gè)保護(hù)的胺基，然后任選再對(duì)胺進(jìn)行衍生作用。在不限制本發(fā)明范圍的條件下，制備精胺基PA的示例性方法如圖1所示，所述PA的分子式中d為4、e為0、X為C，要么R1X{O}n-要么R2X{O}n-為氫，其中4-硝基苯基活化的酯Boc-L-Lys-(Cbz)-ONP用來連接精胺。這種方法只用于說明目的，其它包含二氨基的氨基酸包括，但不限于D-賴氨酸、L-鳥氨酸、D-鳥氨酸、L-2，4-二氨基丁酸、D-2，4-二氨基丁酸、L-2，3-二氨基丙酸和D-2，3-二氨基丙酸，它們同樣可以是正交二保護(hù)的，并偶聯(lián)到精胺上。其它適當(dāng)?shù)谋Ｗo(hù)基團(tuán)可用于本發(fā)明實(shí)踐中，Boc-(丁氧基羰基)和Cbz-(芐氧羰基)保護(hù)基團(tuán)的說明只用于說明性目的。其它保護(hù)基團(tuán)方法在本領(lǐng)域是已知的(參見“有機(jī)合成中的保護(hù)基團(tuán)-第三版，1999，eds.T.W.Greeneand P.G.M.Wuts.John Wiley and Sons，Inc.New York)。
在本發(fā)明的另一方面中，多胺類似物可通過偶聯(lián)包含末端羧酸的氨基酸與多胺的伯胺基團(tuán)來制備，在所述末端羧酸上具有合適的保護(hù)基團(tuán)(如甲基或苯甲酯)，如N-tBoc-Asp(OCH3)-OH或N-tBoc-Glu(OCH3)-OH，然后完全保護(hù)剩余的氨基。在使用硅膠色譜進(jìn)行純化后，對(duì)末端羧酸進(jìn)行去保護(hù)，并與包含長(zhǎng)鏈烴的胺或醇反應(yīng)，分別得到酰胺或酯。這些多胺類似物可用下面的結(jié)構(gòu)表示 n＝1天冬氨酸n＝2谷氨酸X＝N或O其中n也可大于2，優(yōu)選上限到約10(包括3、4、5、6、7、8和9)，R的定義如上述分子式II中R1和R2所示。包含末端羧酸的氨基酸的α氨基也可如上述分子式II進(jìn)行衍生化。這些化合物可稱為圖2所示化合物的“倒轉(zhuǎn)的”酰胺或酯衍生物。
類似的疏水性PA可通過使用半胱氨酸、絲氨酸、或高絲氨酸間接連接到疏水性和多胺部分來制備。疏水性PA也可通過酯鍵(可能通過絲氨酸)、硫酯鍵(可能通過半胱氨酸)、脲鍵(-N-CO-N-)、氨基甲酸酯鍵(-O-CO-N-或-N-CO-O-)或延伸的磺酰胺鍵(-NH-SO2-)進(jìn)行連接。
如圖1所示，可在過量多胺中加入活性酯，形成取代的和非取代的?；喟返幕旌衔?。接著多胺的剩余游離氨基可進(jìn)行保護(hù)，通過它們的tBoc或Cbz氨基甲酸酯，所需的正交保護(hù)產(chǎn)物就被分離出來。氨基的完全保護(hù)制成了更親油性的產(chǎn)物，它使純化所需化合物變得方便。圖1中的示例性反應(yīng)方法產(chǎn)生了兩種合成中間體，一個(gè)具有4Boc和1Cbz氨基甲酸酯，另一個(gè)具有4Cbz和1Boc氨基甲酸酯。這些中間體使末端或最接近(相對(duì)初始精胺多胺)的氨基暴露出來以便被選擇性的去保護(hù)，所述去保護(hù)通過催化氫化(參見流程圖的左邊)或酸處理(參見流程圖的右邊)進(jìn)行。當(dāng)觀察相對(duì)賴氨酸的部分時(shí)，ε-或α-氨基位置可分別視為末端和最接近的氨基。
然后，去保護(hù)的氨基還可通過常規(guī)酰胺化學(xué)進(jìn)行修飾。例如，在不限制本方面的情況下，去保護(hù)的氨基可用酰氯或磺酰氯進(jìn)行?；蛲榛?，分別形成圖2系列I和II所示的PA。這些位置也可是用標(biāo)準(zhǔn)肽偶聯(lián)劑(如DCC、PyPOP或HBTU(用來形成系列III的PA)活化的羧酸，或者是使用還原胺化處理(形成系列IV的PA)的醛。其它類似物可通過游離氨基前體與系列V所示的一種酮試劑的還原胺化作用來制備。系列VI類似物可通過使用游離單或二胺前體與過量的含羰基的試劑的還原胺化作用來制備，如圖2的系列VI部分所示。制備這些包含二取代叔胺的分子的其它方法是把選擇性保護(hù)的胺前體共軛加成到α，β-不飽和羰基化合物或α，β-不飽和腈化合物上。
上述合成方法可以平行的方式進(jìn)行，允許同時(shí)生產(chǎn)多種PA。例如，圖1所示的反應(yīng)方法可開始于L-和D-形式的Boc-Lys-(Cbz)-ONP以及精胺的混合物。這樣就可能產(chǎn)生4種不同的氨基(兩種基于各L-和D-形式，兩種基于每個(gè)末端和最接近氨基)去保護(hù)，以及隨后的修飾。也存在其它兩種可能的修飾，其中兩個(gè)氨基都同時(shí)去保護(hù)用于隨后的修飾。這樣就會(huì)產(chǎn)生六種可能的修飾路徑。
使用兩種?；鹊钠叫絮；?如通過溶液相方法)會(huì)產(chǎn)生12種不同的PA。然后對(duì)每個(gè)單獨(dú)的PA進(jìn)行純化，在進(jìn)一步表征和使用之前除去多胺部分上的保護(hù)基團(tuán)。
本發(fā)明也提供組合物，所述組合物包含一種或多種PA及其可接受的鹽，結(jié)合了賦形劑、稀釋劑或媒介來使其方便使用或容易給藥。優(yōu)選地，組合物可用于醫(yī)藥、治療或農(nóng)業(yè)用途。在堿性胺的存在下，適當(dāng)使用強(qiáng)或中等強(qiáng)度的無毒有機(jī)或無機(jī)酸形來形成本發(fā)明藥學(xué)可接受的鹽(它包含堿性基團(tuán))，所使用的方法是本領(lǐng)域已知的。示例性的鹽包括但不限于馬來酸鹽、富馬酸鹽、乳酸鹽、草酸鹽、甲烷磺酸鹽、乙烷磺酸鹽、苯磺酸鹽、酒石酸鹽、檸檬酸鹽、鹽酸鹽、氫溴酸鹽、硫酸鹽、磷酸鹽和硝酸鹽。
如上述，本發(fā)明的PA具有抑制多胺轉(zhuǎn)運(yùn)的能力和這樣的特性，即開發(fā)用于治療許多疾病和癥狀，如最主要的是癌癥。本發(fā)明的組合物可能本身是活性的，或者可用作“前體藥物”，所述前體藥物可在體內(nèi)轉(zhuǎn)變成活性形式。
本發(fā)明的PA及其藥物上可接受的鹽可配制為常規(guī)劑型，如膠囊、浸漬的藥片、藥片或可注射的制劑。也可使用固體或液體的藥物可接受的載體。也可制成設(shè)計(jì)成實(shí)時(shí)或延時(shí)釋放的藥物組合物。
任選地，組合物包含抗氧劑、表面活性劑和/或甘油酯?？寡鮿┑睦影ǖ幌抻贐HT、維生素E和/或C。甘油酯的例子包括但不限于一種或多種選自乙酰化或非取代的單甘油酯、中等鏈三甘油酯(如在油中的那些)、辛?；刘；垡叶?8甘油酯的化合物。
優(yōu)選地，對(duì)本發(fā)明的化合物進(jìn)行全身給藥，如通過注射或口服給藥。使用時(shí)，注射可通過任何已知的方法，優(yōu)選是靜脈內(nèi)、皮下、肌肉內(nèi)、頭顱內(nèi)或腹腔內(nèi)注射?？勺⑸涞奈镔|(zhì)可制備成常規(guī)的形式，如溶液或懸浮液、固體形式(在注射前溶解或懸浮在液體中)，或者作為乳液。
固體載體包括淀粉、乳糖、硫酸鈣二水合物、石膏粉、蔗糖、滑石、明膠、瓊脂、果膠、阿拉伯樹膠、硬脂酸鎂和硬脂酸。液體載體包括糖漿、花生油、橄欖油、鹽水、水、葡萄糖、甘油等。同樣地，載體或稀釋劑可包括任何延長(zhǎng)釋放的材料，如甘油單硬脂酸酯或甘油二硬脂酸酯，單獨(dú)或與蠟一起使用。當(dāng)使用液體載體時(shí)，制劑的形式可以是糖漿、酏劑、乳液、軟明膠膠囊、含液體的膠囊、無菌可注射液體(如溶液)，例如一次用量的針劑或水性或非水性液體懸浮劑。概括這些藥用組合物可在例如Remington′sPharmaceutical Sciences，Mack Publishing Company，Easton Pennsylvania(Gennaro 18版，1990)上發(fā)現(xiàn)。
藥物制劑是通過下述常規(guī)藥物技術(shù)技術(shù)來完成的，包括這些步驟如混合、制粒和壓片，對(duì)于片狀形式，如果需要的或者是混合、填充和適當(dāng)溶解組分，以得到所需的口服或胃腸外給藥的產(chǎn)品。也可以制備其它用于局部的、透皮的、葉鞘內(nèi)的、鼻內(nèi)的、支氣管內(nèi)的、顱骨內(nèi)的、眼內(nèi)的、耳內(nèi)的和直腸內(nèi)給藥的制劑。藥物組合物也可包含小量無毒輔助物質(zhì)，如潤(rùn)濕或乳化劑、pH緩沖劑等。
盡管給藥的較佳路徑是系統(tǒng)性的，但是藥物組合物也這樣施用，即局部或透皮(如作為軟膏、面霜或凝膠)；口服；直腸；如作為栓劑注射用或連續(xù)灌注；葉鞘內(nèi)；鼻內(nèi)；支氣管內(nèi)；顱骨內(nèi)；耳內(nèi)；或眼內(nèi)給藥。
耳內(nèi)制劑對(duì)于治療或緩和由于化學(xué)療法引起的聽力損失是特別有效的。
對(duì)于局部應(yīng)用，化合物可混入局部施用的媒介中，如藥膏或軟膏?；钚越M分的載體可以是可噴射或不可噴射的形式。不可噴射形式可以是半固體或固體形式，包括本身用于局部應(yīng)用的載體，其動(dòng)態(tài)粘度優(yōu)選大于水的動(dòng)態(tài)粘度。合適的制劑包括但不限于溶液、懸浮液、乳液、面霜、軟膏、粉末、涂抹油、藥膏等。如果需要的話，這些可進(jìn)行殺菌或混合輔助試劑，如防腐劑、穩(wěn)定劑、潤(rùn)濕劑、緩沖劑、或用于影響滲透壓的鹽等。
對(duì)于非可噴射局部制劑的優(yōu)選媒介包括軟膏基質(zhì)(如聚乙二醇-1000(PEG-1000)；常規(guī)面霜；凝膠；以及石油膏等)。局部制劑對(duì)于施加本發(fā)明來控制皮膚上不需要的毛發(fā)生長(zhǎng)來說是尤其優(yōu)選的。
也合適的局部應(yīng)用是可噴射的氣溶膠制劑，其中化合物(優(yōu)選結(jié)合了固體或液體惰性載體材料)包裝在擠壓的瓶子中，或與壓縮的揮發(fā)性、通常是氣體推進(jìn)劑混合。除了本發(fā)明的化合物，氣溶膠制劑可包含溶劑、緩沖劑、表面活性劑、芳香劑、和/或抗氧劑。
對(duì)于較佳的局部應(yīng)用，尤其是對(duì)于人類，優(yōu)選施加有效量的化合物在目標(biāo)區(qū)域上，如皮膚表面、粘膜、眼睛等。該有效量的范圍通常是每次施加約0.001毫克到約1克，這要取決于待治療的區(qū)域、癥狀的嚴(yán)重程度和使用的局部媒介的特性。
本發(fā)明的化合物可單獨(dú)施用或結(jié)合一種或多種其它化合物施用，所述其它化合物可用來治療疾病或癥狀。為了治療癌癥，PA通常結(jié)合了抗瘤劑如分裂抑制劑(如長(zhǎng)春花堿)；烷基化試劑如環(huán)環(huán)磷酰胺；葉酸抑制劑如氨甲喋呤、pritrexim或三甲曲沙(trimetrexate)；抗代謝劑如5-氟尿嘧啶和胞嘧啶阿拉伯糖苷；嵌入型(intercalating)抗生素如阿霉素和爭(zhēng)光霉素；酶或酶抑制劑如天冬酰胺酶；多異構(gòu)酶(topoisomerase)抑制劑如吡喃葡糖苷；或生物響應(yīng)改性劑如干擾素和白細(xì)胞間介素-2。事實(shí)上，藥物組合物包括任何已知的癌癥治療物質(zhì)以及本發(fā)明的PA，它也包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)?？赏ㄟ^把組分混合到給藥用的單個(gè)組合物中來使用這些組合物，或者單個(gè)組分作為整個(gè)治療方法的一步單獨(dú)給藥。
更優(yōu)選地，本發(fā)明的化合物結(jié)合了一種或多種多胺合成抑制劑進(jìn)行給藥，所述抑制劑包括但不限于鳥氨酸脫羧酶的抑制劑，如DFMO、aceylenic腐胺、1-氨氧基-3-氨基丙烷、抗酶、2-丁基腐胺、尸胺、L-副刀豆氨酸、5’-脫氧-5’-〔N-甲基-N-〔3-(氨氧基)乙基〕氨基〕腺苷、5’-脫氧-5’-〔N-甲基-N〔3-(肼基丙基)氨基〕腺苷、二氨基丙烷、1，3-二氨基-2-丙醇、2-二氟甲基腐胺、二氟苯基乙基(4-氨基丙基脒基腙)、2，3-二甲基腐胺、N-二甲基腐胺、2-乙基腐胺、(+或-)-α-氟甲基鳥氨酸、2-氟甲基腐胺、2-己基腐胺、2-肼基鳥氨酸、異丁苯丙酸、D-甲基乙炔基腐胺、甲基乙二醛雙(3-氨丙基脒基腙)、2-甲基鳥氨酸、2-甲基腐胺、2-單氟甲基-反式-脫氫鳥氨酸、2-單氟甲基脫氫腐胺、單氟甲基鳥氨酸、2-單氟甲基腐胺、新霉素、D-鳥氨酸、2-戊基腐胺、對(duì)亞苯基二胺、磷肽MG25000、磷蘇氨酸(phosphothreonine)、磷酪氨酸(phosphotyrosine)、2-丙基腐胺、別-S-腺苷基(adenosyl)-L-蛋氨酸、S-乙基硫代腺苷、甲基硫代腺苷、和5’-甲基-硫代腺苷(這些都描述在Zollner H.(1993)酶抑制劑手冊(cè)，第二版，WeinheimBasel(Switzerland)中)；S-腺苷基蛋氨酸脫羧酶的抑制劑，如SAM486A(4-氨基二氫茚酮-1-(2’脒基)腙二氫氯化物一水合物)、S-腺苷基-1，8-二氨基-3-硫代辛烷、S-(5’-腺苷基)甲基硫代-2-氨氧基乙烷、S-腺苷基-3-甲基硫代-1-丙胺、5’-{〔(Z)-4-氨基2-丁烯基〕甲基氨基}-5’-脫氧腺苷、5’-氨基-5’-脫氧腺苷、5’-〔(氨基亞氨基甲基)氨基〕-5’〕脫氧腺苷二氫硫酸鹽、1-氨氧基-3-氨基丙烷、〔2-(氨氧基)乙基〕(5’-脫氧腺苷、5’-基)(甲基)锍、5’-〔(3-氨基丙基〕-氨基)-5’-脫氧腺苷、5’-〔(3-氨基丙基〕-甲基氨基)-5‘-脫氧腺苷、9-(6(RS)-氨基-5，6，7-三脫氧-β-D-核糖(ribo)-辛呋喃糖基(octofuranosyl)〕-9H-嘌呤-6-胺、氫硼化物、正丁基乙二醛雙(脒基腙)、9-〔6(RS)-c-碳酰氨基-5，6，7-三脫氧-β-D-核糖-辛呋喃糖基〕-9H-嘌呤-6-胺、氰化物、氰基硼氫化物、S-(5’脫氧-5‘-腺苷基)甲硫氨酰乙基羥基胺、S-(5’-脫氧-5‘-腺苷基)甲硫氨酰硫代羥基胺、5’-脫氧-5‘-〔N-甲基-N-〔2-(氨氧基)乙基〕氨基〕腺苷、9-〔6(S)-二氨基-5，6，7，8，9-五脫氧-β-D-核糖-壬呋喃糖基(nanofuranosyl)〕-9H-嘌呤-6-胺、二乙基乙二醛雙(脒基腙)、二氟苯基乙基(4-氨基丙基脒基腙)、二甲基(5’-腺苷)锍、二甲基乙二醛雙(脒基腙)、乙基乙二醛雙(脒基腙)、羥胺、4-羥基penenal、MDL 73811、5‘〔〔3-甲基氨基)丙基〕氨基〕-5’-脫氧腺苷(1，1‘-(甲基乙烷二基diylidine)二硝基)雙(3氨基胍(guanididne))、甲基乙二醛雙(3-氨基丙基脒基腙)、甲基乙二醛雙(環(huán)己基脒基腙)、甲基乙二醛雙(胍基腙)、戊二醛雙胍基腙)、苯基肼、丙二醛雙(胍基腙)、半卡巴肼、硼氫化鈉、氰基硼氫化鈉、和精胺，這些都描述在Zollner H.(1993)酶抑制劑手冊(cè)，第二版中。
本發(fā)明的PA也結(jié)合使用單克隆抗體和腫瘤疫苗，以及結(jié)合用于進(jìn)行治療人類疾病如癌癥的細(xì)胞療法。PA也可用來化學(xué)預(yù)防癌癥擴(kuò)散的風(fēng)險(xiǎn)，其中一種或多種PA可單獨(dú)使用，或者結(jié)合多胺合成抑制劑來防止癌癥的開始或復(fù)發(fā)。本發(fā)明的藥物組合物也可包括一種或多種其它藥物，如抗傳染劑，包括抗菌劑、抗真菌劑、抗寄生劑、抗病毒劑、和抗球蟲劑。
本發(fā)明化合物的單劑量通常為每千克人體重量使用約1納克到約1克。藥量?jī)?yōu)選為每千克人體重要使用約0.01毫克到約1克，更優(yōu)選是每千克人體重要使用約0.1毫克到約100毫克。對(duì)于局部給藥，劑量的范圍是化合物濃度的約0.01-20％，優(yōu)選是1-5％。對(duì)于口服，每日總用量的范圍優(yōu)選是約1-500毫克。但是，前述范圍只是示意性的，對(duì)于單個(gè)治療狀態(tài)的變化數(shù)量是非常大的，對(duì)于這些推薦值的較大偏離是允許的，通常本領(lǐng)域的技術(shù)人員可作出這樣的變化。
治療疾病或癥狀的化合物的有效量或劑量可使用對(duì)于特定疾病或癥狀的體外系統(tǒng)或體內(nèi)動(dòng)物模型的認(rèn)識(shí)來確定。對(duì)于癌癥，有許多本領(lǐng)域已知的模型，并可代表廣譜人類腫瘤。在培養(yǎng)皿中，使用標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)可測(cè)試化合物對(duì)于腫瘤細(xì)胞增長(zhǎng)的抑制作用，在該試驗(yàn)中許多人類細(xì)胞排列在人類或非人類動(dòng)物體中。許多這些方法(包括動(dòng)物模型)詳細(xì)描述在Geran，R.I.等“化學(xué)試劑和天然產(chǎn)物抵抗動(dòng)物腫瘤和其它生物系統(tǒng)的拍攝方法(第三版)”，Canc.Chemother.Reports，第三部分，31-112。
本發(fā)明也提供了使用PA(無論是否制成組合物)來抑制細(xì)胞增長(zhǎng)和繁殖的方法，所述PA可單獨(dú)使用或結(jié)合多胺合成抑制劑。這些方法可通過全身或局部施用PA來容易地進(jìn)行。PA的局部輸送提供了高的局部濃度，從而降低了對(duì)于多胺代謝作用的全身效應(yīng)的可能性，所述多胺代謝得自全身施加PA。
通過同時(shí)施用一種或多種多胺合成抑制劑，可有效的進(jìn)行抑制細(xì)胞增長(zhǎng)和繁殖。這種抑制作用可施加到多種類型的細(xì)胞上，包括但不限于細(xì)菌細(xì)胞、真菌細(xì)胞和高級(jí)多細(xì)胞生物體的真核細(xì)胞。本發(fā)明的一種用途中，一種或多種PA可用來抑制細(xì)菌或真菌細(xì)胞增長(zhǎng)。本實(shí)例可有效地用于臨床和農(nóng)業(yè)來控制細(xì)菌或真菌。
在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)例中，一種或多種PA可結(jié)合使用多胺合成抑制來抑制癌細(xì)胞(包括固體腫瘤的細(xì)胞)的增長(zhǎng)和/或繁殖。當(dāng)后者的用途可在多細(xì)胞生物體中進(jìn)行時(shí)，本發(fā)明的最優(yōu)選用途是用于人類目的。
另外，本發(fā)明提供了一種或多種PA在分析和/或預(yù)防方法中的應(yīng)用，所述方法相對(duì)于多胺轉(zhuǎn)運(yùn)。例如，在不限制本發(fā)明條件下，通過PA和轉(zhuǎn)運(yùn)子之間的物理連接的效力和連接到PA上的標(biāo)記物的存在，PA可用來鑒定和/或定位多胺轉(zhuǎn)運(yùn)。合適的標(biāo)記物在本領(lǐng)域是已知的，它們?cè)试SPA的鑒定或定位，這要么是由于標(biāo)記物本身發(fā)出可檢測(cè)的信號(hào)，或者通過標(biāo)記物特殊部分(它是可檢測(cè)的或者連接或與標(biāo)記物反應(yīng))的親合力效力。標(biāo)記物的例子包括但不限于放射性同位素、熒光標(biāo)記和蛋白質(zhì)標(biāo)記。本發(fā)明的鑒定和/或定位方法可整體使用或作為診斷或研究方法的一部分。
本發(fā)明也提供PA的制備性應(yīng)用。例如，一種或多種PA可用來連接和分離蛋白質(zhì)或其它能與多胺作用的細(xì)胞因子(cellular factor)。這種方法的一個(gè)例子使用PA來連接多胺轉(zhuǎn)運(yùn)子，并使其分離或純化。這些方法可在溶液中進(jìn)行，其中PA和PA連接蛋白或因素的作用產(chǎn)生了一種復(fù)合物，所述復(fù)合物隨后從溶液中分離或純化出來，或者其是固相，其中PA是固定不動(dòng)的，并且PA和PA連接蛋白或因素之間的作用形成了蛋白或因素與固定PA的復(fù)合物。
如本發(fā)明通常所述，參照下述實(shí)施例可更容易地理解本發(fā)明，所述實(shí)施例只用于說明，并沒有限制本發(fā)明的范圍，除非有特別的說明。
實(shí)施例I化學(xué)合成多胺試劑(PA)可以平行的形式，從含正交保護(hù)的二氨基的氨基酸原料開始合成多胺類似物。使用圖1中的4-硝基苯基活化酯L-Boc-Lys-(Cbz)-ONP可提供合成方法的一個(gè)示例性說明。在1.5等當(dāng)量的多胺甲醇溶液中逐滴加入活性酯，得到未取代的、單取代的和二取代的酰基多胺的統(tǒng)計(jì)學(xué)混合物。然后蒸發(fā)溶劑，在多胺部分中剩余的游離氨基保護(hù)為它們的或者tBoc或者Cbz氨基甲酸酯。標(biāo)準(zhǔn)的后處理形成了完全保護(hù)的粗產(chǎn)物混合物。所需要的正交保護(hù)的產(chǎn)物通過使用了標(biāo)準(zhǔn)有機(jī)溶劑二氧化硅凝膠色譜以純產(chǎn)品的形式分離出來。這種純化方法基于帶有完全保護(hù)的剩余氨基的分離的多胺分子，它提供了更親油性的產(chǎn)物混合物，從而簡(jiǎn)便了純化方法。因此，除了酰基官能度，示例性中間體包含或者4Boc基團(tuán)或者4Cbz基團(tuán)，從而保留了足夠的親油性來使用標(biāo)準(zhǔn)溶劑來進(jìn)行純化，所述溶劑包括乙酸乙酯和己烷的一對(duì)一混合物，它包括各種比例的甲醇(0-10％)。
如圖1所示，該方法提供了兩種合成中間體，一個(gè)具有4Boc和1Cbz氨基甲酸酯，另一個(gè)具有4Cbz和1Boc氨基甲酸酯。這些中間體以選擇性的方式使只有一個(gè)氨基(或者最接近(α-)或者末端(ε-))暴露出來。也可能的是改進(jìn)這種方法，從而使二個(gè)氨基都暴露用于進(jìn)一步修飾。如圖1所示，或者最接近(α-)或者末端(ε-)氨基分別通過催化氫化或酸處理選擇性去保護(hù)。然后，暴露的氨基使用酰基氯或磺酰氯進(jìn)行?；蛲榛苑謩e形成系列I和II(參見圖2)型的PA。暴露的氨基也可使用標(biāo)準(zhǔn)肽偶聯(lián)劑(如DCC、PyPOP或HBTU(以形成系列III型PA)或在還原胺化條件的醛(以形成系列IV型PA)進(jìn)行羧酸活化。通過游離氨基前體與一種系列V中的酮試劑的還原胺化作用制備其它類似物。系列VI類似物可通過使用了游離單一或二胺前體和過量羰基試劑(如系列VI表所示)的還原胺化反應(yīng)來制備。制備這些包含二取代叔胺的分子的其它方法是把選擇性保護(hù)的胺前體共軛加成到α，β-不取代羰基化合物或α，β-不取代腈化合物。
使用標(biāo)準(zhǔn)條件分離的PA的去保護(hù)得到了所需的純產(chǎn)品。PA使用薄層色譜(TLC)分析(使用iPrOH/HO/Ac/pyr/H2O，4∶1∶1∶2)；高效液相色譜(HPLC)分析(丹?；笫褂肏PLC熒光檢測(cè)器)；使用了電噴射電離的液相色譜-質(zhì)譜(LC-MS)；和1H和13CNMR分析來鑒定。測(cè)定后所有的PA都評(píng)定為90-98％純度。
實(shí)施例II細(xì)胞培養(yǎng)和試劑所有的細(xì)胞系(cell line)都得自ATCC(Manassas，VA)，并在推薦的介質(zhì)、血清(serum)和CO2濃度下培養(yǎng)。介質(zhì)得自Mediatech，Inc.(Herndon，VA)，血清得自Gibco BRL(Gaithersburg，MD)。在所有的培養(yǎng)液中包括50U/毫升盤尼西林、50微克/毫升鏈霉素和2mM L-谷氨酰胺(都購自BioWhittaker，Walkersville，MD)。DFMO得自Marion Merrell Dow(Cinncinati，OH)。當(dāng)細(xì)胞與多胺或ORI化合物一起培養(yǎng)時(shí)，加入1mM氨基胍(AG；Sigma)來抑制血清胺氧化酶活性。IC50指在PA單獨(dú)存在下形成50％最大細(xì)胞生長(zhǎng)抑制的PA的濃度。
實(shí)施例III多胺轉(zhuǎn)運(yùn)和Ki試驗(yàn)把〔2，9-3H〕亞精胺(SPD) (購自DuPont NEN，Boston，MA)單獨(dú)或與PA同時(shí)加入到在雙數(shù)生長(zhǎng)中的含在24-孔(well)板中的MDA-MB-231細(xì)胞。細(xì)胞在37℃孵化15分鐘，以測(cè)定初始多胺攝入率。然后用冷PBS清洗細(xì)胞3次，使用0.1％SDS進(jìn)行細(xì)胞溶解，使用細(xì)胞溶解產(chǎn)物的閃爍計(jì)數(shù)測(cè)定摻入細(xì)胞中的多胺量。為了測(cè)定Ki，測(cè)試四種放射性底物濃度(0.3-3μM)和5種抑制劑濃度(0.01-1.0μM)和一種對(duì)照。使用倒數(shù)Lineweaver-Burke曲線分析測(cè)定Ki值。Ki值可用得自對(duì)Lineweaver-Burke曲線對(duì)抑制劑濃度的斜率作圖的線性方程進(jìn)行測(cè)定，其中Ki＝y(tǒng)-截距/斜率。這些分析的結(jié)果列在上表3中。
實(shí)施例IV生長(zhǎng)抑制試驗(yàn)將細(xì)胞接種在96-孔(well)板上，從而使它們?cè)谠囼?yàn)時(shí)處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)中。接種后的那天，把PA加入細(xì)胞中，如果細(xì)胞生長(zhǎng)，允許在1mM AG和0.5μM SPD的存在下繼續(xù)生長(zhǎng)6天，以保證任何的增長(zhǎng)抑制都不是介質(zhì)中外部多胺耗盡的結(jié)果。6天結(jié)束時(shí)，使用MTS/PMS染色試驗(yàn)測(cè)量細(xì)胞生長(zhǎng)(Cell Titer96 Aqueous Non-Radioactive Cell Proliferation Assay；Promega，Madison，WI)。EC50表示在DFMO(在所有細(xì)胞系中都是5mM，除了MDA)和PA(濃度部分地隨所用細(xì)胞系的不同而變化)存在下可達(dá)到的50％最大生長(zhǎng)抑制時(shí)的PA濃度。IC50表示當(dāng)單獨(dú)使用時(shí)50％最大生長(zhǎng)抑制時(shí)的PA濃度。結(jié)果列在上表3中。
實(shí)施例V丹酰化衍生物的HPLC分析多胺分析用的樣品處理(參見Kabra，Pokar M.，Hsian K.Lee，Warren PLubich and Laurence J.Marton使用反相液相色譜的非共軛的和乙?；亩喟返牡；苌锏墓滔噍腿『蜏y(cè)定用于腦脊液、尿和組織中多胺的改進(jìn)的分離系統(tǒng)，Journal of Chromatography 380(1986)19-32)。
血漿樣品(來自血液)-把125-150微升樣品(最佳的)移入微量離心機(jī)管中，并與0.4M高氯酸以1∶1混合。在5℃的離心機(jī)中，以13000rpm渦流和旋轉(zhuǎn)樣品10分鐘。移走200微升上清液以進(jìn)行在丹?；椒ㄖ兴龅牡；?。可分析小到25微升的血漿樣品(對(duì)于這里和下述討論，沒有得到200微升進(jìn)行丹?；纳锨逡旱娜魏螛悠房捎酶呗人岚哑潴w積提高到200微升，用于進(jìn)行丹?；?。
細(xì)胞培養(yǎng)樣品介質(zhì)-把1.5毫升移入1.7毫升的微量離心機(jī)管中，并在5℃的離心機(jī)中，以3000rpm旋轉(zhuǎn)5分鐘。移走300微升上清液，并用冷0.4M高氯酸以1∶1混合。在5℃的離心機(jī)中，以13000rpm渦流和旋轉(zhuǎn)樣品10分鐘。移走200微升上清液以進(jìn)行在丹酰化方法中所述的丹?；?br>
細(xì)胞-如通常使胰蛋白酶化，并在4°和1500rpm的條件下，在15毫升的管中旋轉(zhuǎn)6分鐘。倒掉在上清液，并在1.5毫升1×PBS中重新懸浮細(xì)胞團(tuán)(pellet)。轉(zhuǎn)移到大的微量離心機(jī)管中。在4°和3000rpm的條件下旋轉(zhuǎn)5分鐘。移走上清液。在1.0毫升1×PBS中重新懸浮細(xì)胞團(tuán)。移走20微升以進(jìn)行計(jì)數(shù)，并在3000rpm和4°的條件下旋轉(zhuǎn)5分鐘。移走上清液。對(duì)干的細(xì)胞團(tuán)，在每106個(gè)細(xì)胞中加入200微升0.4M高氯酸。用吸管上下吸取以混合。在5℃的離心機(jī)中，以13000rpm渦流和旋轉(zhuǎn)樣品10分鐘。移走200微升上清液以進(jìn)行在丹?；椒ㄖ兴龅牡；ＪＳ嗟纳锨逡涸?70℃下保存。
組織-制備時(shí)在冰上保存樣品。從組織樣品上切割約100毫克的一片，并放入15毫升錐形管中。以20∶1體積/重量比(即2毫升/100毫克)加入1.2M高氯酸。使用組織磨具使組織勻漿化。渦流樣品，并把1毫升樣品移入微量離心機(jī)管中。在5℃的離心機(jī)中，以13000rpm旋轉(zhuǎn)10分鐘。移走200微升上清液以進(jìn)行在丹酰化方法中所述的丹?；?。
多胺分析用的丹?；椒ǜ呗人嶂械?00微升樣品10微升內(nèi)標(biāo)(IS)(1，7-二氨基庚烷，100μM原液(stock))；使用20微升進(jìn)行25分鐘和1483HPLC120微升飽和碳酸鈉溶液(360微升用于組織樣品)400微升丹酰氯溶液(新鮮，在丙酮中為10毫克/毫升)將所有組分加入4毫升螺帽玻璃瓶中，并渦流30秒。將瓶子浮在70℃中水浴10分鐘。移走并在黑暗中冷卻到室溫，因?yàn)闃悠肥菍?duì)光敏感的。當(dāng)樣品冷卻時(shí)可進(jìn)行樣品制備方法。
樣品制備方法使用Alltech C-18最大制備筒，一個(gè)樣品的丹?；靡粋€(gè)筒，以從樣品中清除出任何干擾作用。這種方法也把樣品放在甲醇中，以用于HPLC系統(tǒng)中。
每個(gè)筒放在真空接頭(manifold)上，并用3毫升MeOH隨后用3毫升H2O清洗一次。然后用1毫升注射器從玻璃瓶中移走樣品，并施加到Alletch筒中。然后每個(gè)筒都用10毫升H2O清洗，并用30毫升注射器空氣干燥二次。
至此，所有的步驟都可以棄去。把筒放在管架上，所述管架放在貼了標(biāo)簽的1.7毫升微量離心機(jī)管以進(jìn)行洗脫。樣品用1毫升MeOH洗脫入微量離心機(jī)管?，F(xiàn)在，樣品已可注射入HPLC或在-70℃下保存幾個(gè)月(如果需要的話)。
用于上述目的的溶劑如下溶劑AHPLC級(jí)乙腈溶劑B10mM乙酸鈉pH4.5/10％乙腈(8.9升H2O，1升乙腈，100毫升1M乙酸鈉，pH4.5，良好混合，過濾并在室溫下儲(chǔ)存)。
樣品注射通過在20微升旁管(loop)中注射100微升使之達(dá)到循環(huán)溢出。樣品在4℃下保存直到注射，用水冷卻儲(chǔ)存架，所述儲(chǔ)存架位于231XL自動(dòng)注射器上。
40分鐘PA分析
流速為3毫升/分鐘溶液和原料如下內(nèi)標(biāo)1，7-二氨基己烷(Sigma D-3266)在水中配成20mM，并在-70℃下保存。稀釋到在水中的100μM工作原液，并在-70℃存在。
高氯酸70％ACS試劑(Aldrich 244252)對(duì)于0.4M，在總量為100毫升的H2O中混合3.4毫升。在室溫下儲(chǔ)存。
對(duì)于1.2M，在總量為100毫升的H2O中混合10.2毫升。在室溫下儲(chǔ)存。
碳酸鈉無水(Acros 42428-5000)制成飽和水溶液。
乙酸鈉無水(Sigma S-2889)在水中形成1M，然后使用冰醋酸調(diào)節(jié)pH到4.5。過濾并在室溫下儲(chǔ)存。
丹酰氯95％(Sigma D-2625)乙腈HPLC級(jí)(Fisher A998-4)甲醇HPLC級(jí)(Fisher A452-4)丙酮HPLC級(jí)(Fisher A949-1)冰醋酸ACS試劑(Fisher A38212)在此引用的所有文獻(xiàn)，包括專利、專利申請(qǐng)和公開文獻(xiàn)，其全部?jī)?nèi)容參考結(jié)合于此，而不管前面是否結(jié)合。如在這里使用的術(shù)語“一個(gè)”“任何”都包括單個(gè)和多個(gè)形式。
根據(jù)以上對(duì)本發(fā)明的充分論述，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以發(fā)現(xiàn)，根據(jù)本發(fā)明的構(gòu)思，在本發(fā)明的范圍內(nèi)，無需過多的試驗(yàn)，即可用多種等效參數(shù)、濃度和條件來實(shí)施本發(fā)明。雖然以上結(jié)合具體實(shí)施方式
對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了描述，但不難看出還存在進(jìn)一步修改的可能。本申請(qǐng)應(yīng)涵蓋基于本發(fā)明原理的所有改變、用途或修改，這包括雖不同于以上具體所述，但屬于本發(fā)明所屬領(lǐng)域已知或常規(guī)操作范圍之內(nèi)的改換，該原則同樣適用于后文權(quán)利要求范圍內(nèi)的必要技術(shù)特征。
權(quán)利要求
1.一種多胺類似物或衍生物，它可用下式表示R-X-L-多胺其中R是直鏈或支鏈C10-50飽和或不飽和脂肪基、羧烷基、烷氧羰基烷基、或烷氧基；C1-8脂環(huán)基；單環(huán)或多環(huán)芳基取代的或非取代的脂肪基；脂肪族取代的或不取代的單環(huán)或多環(huán)芳香基；單環(huán)或多環(huán)雜環(huán)基；單環(huán)或多環(huán)雜環(huán)脂肪基；芳基磺?；籜是-CO-、-SO2-、或-CH2-；以及L是共價(jià)鍵或天然存在的氨基酸、鳥氨酸、2，4-二氨基丁酸、或其衍生物。
2.一種多胺類似物或衍生物，它可用分子式II表示 其中a、b和c的范圍分別是1-10；d和e的范圍分別是0-30；每個(gè)X分別是碳(C)或硫(S)原子，R1和R2分別選自H或直鏈或支鏈C1-50飽和或不飽和脂肪基、羧烷基、烷氧羰基烷基、或烷氧基；C1-8脂環(huán)基；單環(huán)或多環(huán)芳基取代的或非取代的脂肪基；脂肪基取代的或非取代的單環(huán)或多環(huán)芳香基；單環(huán)或多環(huán)雜環(huán)基；單或多環(huán)雜環(huán)脂肪基；C1-10烷基；芳基磺酰基；或氰基，或者每個(gè)R1X{O}n和R2X{O}n分別用H代替；其中*表示手性碳原子的位置，如果X是C，那么n是1；如果X是S，那么n是2；如果X是C，那么XO基團(tuán)可以是CH2，n是0。
3.一種多胺類似物或衍生物，它可用分子式III表示 其中a、b和c的范圍分別是1-10，d和e的范圍分別是0-30；和R1、R2、R3和R4可以是相同或不同的，它們分別選自H或直鏈或支鏈C1 -50飽和或不飽和脂肪基、羧烷基、烷氧羰基烷基、或烷氧基；C1-8脂環(huán)基；單環(huán)或多環(huán)芳基取代的或非取代的脂肪基；脂肪基取代的或非取代的單環(huán)或多環(huán)芳香基；單環(huán)或多環(huán)雜環(huán)基；單環(huán)或多環(huán)雜環(huán)脂肪基；C1-10烷基；芳基磺酰基；或氰基。
4.一種多胺類似物或衍生物，它可用分子式IV表示 其中a、b和c的范圍分別是1-10，d和e的范圍分別是0-30；和R1、R2、R3和R4可以是相同或不同的，它們分別選自H或直鏈或支鏈C1 -50飽和或不飽和脂肪基、羧烷基、烷氧羰基烷基、或烷氧基；C1-8脂環(huán)基；單環(huán)或多環(huán)芳基取代的或非取代的脂肪基；脂肪基取代的或非取代的單環(huán)或多環(huán)芳香基；單環(huán)或多環(huán)雜環(huán)基；單環(huán)或多環(huán)雜環(huán)脂肪基；C1-10烷基；芳基磺酰基；或氰基。
5.一種多胺類似物或衍生物，它可用分子式V表示 其中a、b和c的范圍分別是1-10，d和e的范圍分別是0-30；和Z1是NR1R3，Z2選自-R1、-CHR1R2或-CR1R2R3，或者Z2是NR2R4，Z1選自-R1、-CHR1R2或-CR1R2R3，R1、R2和R3可以是相同或不同的，它們分別選自H或直鏈或支鏈C1-50飽和或不飽和脂肪基、羧烷基、烷氧羰基烷基、或烷氧基；C1-8脂環(huán)基；單環(huán)或多環(huán)芳基取代的或非取代的脂肪基；脂肪基取代的或非取代的單環(huán)或多環(huán)芳香基；單環(huán)或多環(huán)雜環(huán)基；單環(huán)或多環(huán)雜環(huán)脂肪基；C1-10烷基；芳基磺?；?；或氰基。
6.如權(quán)利要求1-5中任何一項(xiàng)所述的類似物或衍生物，其特征在于所述a、b和c使得所述類似物或衍生物是基于腐胺、精胺或亞精胺基的。
7.如權(quán)利要求1-5中任何一項(xiàng)所述的類似物或衍生物，其特征在于所述每個(gè)R1、R2、R3和R4分別選自H或直鏈或支鏈C10-50飽和或不飽和脂肪基、羧烷基、烷氧羰基烷基或烷氧基。
8.如權(quán)利要求1所述的類似物或衍生物，其特征在于所述L是氨基酸，所述氨基酸選自賴氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、鳥氨酸或2，4-二氨基丁酸。
9.一種多胺類似物或衍生物，它選自如圖2所示的精胺基的化合物IA4、IB4、IA7、IVB22或IVA22。
10.一種多胺類似物或衍生物，它選自圖12所示的化合物。
11.如權(quán)利要求1-5中任何一項(xiàng)所述的類似物或衍生物，其特征在于所述d是4且e是0。
12.如權(quán)利要求1-5中任何一項(xiàng)所述的類似物或衍生物，其特征在于所述每個(gè)R1、R2、R3和R4分別選自H或選自 其中每個(gè)g、h、i、j和k分別選自0到15，所述E指“反式”，Z指“順式”。
13.一種組合物，它包括如權(quán)利要求1-12中任何一項(xiàng)所述的多胺類似物或衍生物以及賦形劑、稀釋劑或媒介。
14.如權(quán)利要求13所述的組合物，其特征在于所述賦形劑、稀釋劑或媒介是藥學(xué)上或美容上可接受的。
15.如權(quán)利要求13所述的組合物，其特征在于所述賦形劑、稀釋劑或媒介是局部或耳內(nèi)給藥的。
16.如權(quán)利要求13所述的組合物，它還包括多胺生物合成抑制劑。
17.如權(quán)利要求16所述的組合物，其特征在于所述抑制劑是DFMO。
18.如權(quán)利要求13所述的組合物，它可以制成靜脈內(nèi)的、皮下的、肌肉內(nèi)的、頭顱內(nèi)的、腹膜內(nèi)的、局部的、透皮的、葉鞘內(nèi)的、鼻內(nèi)的、支氣管內(nèi)的、顱骨內(nèi)的、眼內(nèi)的、耳內(nèi)的、直腸的或腸胃外給藥。
19.一種治療一種或多種疾病的方法，所述疾病選自癌癥、骨質(zhì)疏松癥、哮喘、自身免疫性疾病、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、I型胰島素依賴型糖尿病、組織移植、非洲昏睡病、牛皮癬、再狹窄、作為化妝抑制用的抑制不需要的毛發(fā)生長(zhǎng)、甲狀旁腺功能亢進(jìn)、炎癥、治療胃潰瘍、青光眼、阿耳茨海默氏病、抑制心動(dòng)過速、刺激或抑制腸運(yùn)動(dòng)性、克羅恩氏病和其它炎癥性腸病、高血壓(血管舒張)、中風(fēng)、羊癇風(fēng)、焦慮、神經(jīng)退化病、痛覺過敏的狀態(tài)、保護(hù)毛細(xì)胞不受化學(xué)療法引起的聽力損失、以及可卡因強(qiáng)化的藥理學(xué)控制和治療可卡因上癮和用藥過量，所述方法包括把如權(quán)利要求1-12中任何一項(xiàng)所述的類似物或衍生物或者如權(quán)利要求13-18中任何一項(xiàng)所述的組合物施加到遭受所述一種或多種疾病折磨的目標(biāo)體上。
20.如權(quán)利要求19所述的方法，其特征在于所述給藥是全身的。
21.如權(quán)利要求19或20所述的方法，其特征在于所述給藥是口服的。
22.如權(quán)利要求19或20所述的方法，其特征在于所述給藥是通過隨時(shí)間釋放媒介完成的。
23.一種治療真菌、細(xì)菌、病毒或寄生疾病的方法，它包括把如權(quán)利要求1-12中任何一項(xiàng)所述的類似物或衍生物或者如權(quán)利要求13-18中任何一項(xiàng)所述的組合物施加到遭受所述疾病折磨的目標(biāo)體上。
24.一種提高核酸的細(xì)胞攝入的方法，它包括使用如權(quán)利要求1-12中任何一項(xiàng)所述的類似物或衍生物接觸細(xì)胞。
25.一種抑制毛發(fā)生長(zhǎng)的方法，它包括把如權(quán)利要求1-12中任何一項(xiàng)所述的類似物或衍生物或者如權(quán)利要求13-18中任何一項(xiàng)所述的組合物局部施加到需要抑制毛發(fā)生長(zhǎng)的目標(biāo)體上。
26.如權(quán)利要求25所述方法，其特征在于所述類似物或衍生物被制成了化妝品。
27.一種抑制聽力損失的方法，它包括把如權(quán)利要求1-12中任何一項(xiàng)所述的類似物或衍生物施加到需要所述抑制的目標(biāo)體上。
28.如權(quán)利要求27所述的方法，其特征在于所述目標(biāo)體是受到了由于癌癥化學(xué)療法造成的聽力損失的影響。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種新的多胺類似物和衍生物，它包括疏水性區(qū)域和多胺區(qū)域，及其組合物，以及它們的使用方法。
文檔編號(hào)A61P31/04GK1511137SQ02803508
公開日2004年7月7日 申請(qǐng)日期2002年1月8日 優(yōu)先權(quán)日2001年1月8日
發(fā)明者M·R·伯恩斯, G·F·格拉姆斯基, N·班杜, M R 伯恩斯, 格拉姆斯基 申請(qǐng)人:麥迪凱斯特治療學(xué)股份有限公司