專利名稱：香草醛受體激動(dòng)劑用于制備抗阿爾茨海默病產(chǎn)品的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥、食品和飲料等技術(shù)領(lǐng)域，具體地說是涉及香草醛受體激動(dòng)劑的用途，更具體地說是一種涉及香草醛受體激動(dòng)劑用于制備抗阿爾茨海默病產(chǎn)品的用途。
背景技術(shù)：
(一)香草醛受體激動(dòng)劑的研究進(jìn)展瞬時(shí)受體勢(shì)(transient receptor potential，簡(jiǎn)稱TRP)通道在脊椎動(dòng)物和無脊椎動(dòng)物，在活化細(xì)胞和未活化細(xì)胞中都廣泛存在，是調(diào)節(jié)鈣流的主要通道。哺乳動(dòng)物瞬時(shí)受體勢(shì)大家族由6個(gè)蛋白家族組成經(jīng)典的瞬時(shí)受體勢(shì)家族(簡(jiǎn)稱TRPCS)、瞬時(shí)受體勢(shì)香草醛受體家族(簡(jiǎn)稱TRPVS)、瞬時(shí)受體勢(shì)melastatin家族或長(zhǎng)瞬時(shí)受體勢(shì)家族(簡(jiǎn)稱TRPMS)、瞬時(shí)受體勢(shì)mucolipin家族(簡(jiǎn)稱TRPMLS)、聚胱胺瞬時(shí)受體勢(shì)家族(簡(jiǎn)稱TRPPS)和錨蛋白跨膜蛋白1家族(ANKTM1，簡(jiǎn)稱TRPA1)。在真核生物中從酵母到哺乳動(dòng)物細(xì)胞中都可以發(fā)現(xiàn)瞬時(shí)受體勢(shì)家族，它在功能上通常與G-蛋白偶聯(lián)受體、生長(zhǎng)因子受體和磷脂酶相關(guān)。瞬時(shí)受體勢(shì)家族在腦中廣泛分布，幾乎所有的瞬時(shí)受體勢(shì)亞單位都存在。
瞬時(shí)受體勢(shì)香草醛受體(簡(jiǎn)稱TRPV)在感知和非感知功能轉(zhuǎn)換中起著越來越重要的作用，因此該受體家族越來越受到重視，這組中的不同的通道對(duì)一大類有害的和無害的環(huán)境刺激，包括熱、辣椒、滲透壓和機(jī)械刺激等，都表現(xiàn)出了獨(dú)特的敏感。從功能上講，6個(gè)哺乳類的TRPV大家族中成員可再被分成兩組從TRPV1、TRPV2、TRPV3到TRPV4是高溫度敏感型的、非選擇性的鈣離子通道。TRPV5和TRPV6是低溫度敏感型的、高選擇性的鈣離子通道。
瞬時(shí)受體勢(shì)香草醛受體中的TRPV1又稱香草醛受體(Vanilloid Receptor1，簡(jiǎn)稱VR1)或辣椒素受體，是在辣椒素和熱敏門控通道的克隆表達(dá)中被發(fā)現(xiàn)的，是一種外向調(diào)整型的陽離子選擇性離子通道，傾向于鈣(PCa/PNa≈10)或鎂(PMg/PNa5)，取決于蛋白核心基團(tuán)中的一個(gè)門冬氨酸分子。TRPV1也被溫?zé)?≥43℃)和中酸(PH≤5.9)所激活，作為化學(xué)和機(jī)械疼痛引起的刺激的集合。由熱引起的通路是直接的，中酸(PH≤5.9)降低了激活所需的溫度閥值，強(qiáng)化了對(duì)辣椒素的反應(yīng)。辣椒素和樹脂毒素是強(qiáng)有力的香草醛受體外源激動(dòng)劑。內(nèi)源的激動(dòng)劑包括大麻素受體激動(dòng)劑(如花生四烯醇乙醇胺等)和幾種脂肪氧化酶的二十烷酸化產(chǎn)物。
親水性分析顯示VR1有6個(gè)跨膜區(qū)，其中在第5和第6個(gè)跨膜區(qū)之間有一個(gè)短的孔狀疏水結(jié)構(gòu)，此結(jié)構(gòu)參與并調(diào)控了辣椒素激活VR1的過程，而與氫離子和溫度的關(guān)系不大。其氨基末端的親水區(qū)(432個(gè)氨基酸)包含了一個(gè)脯氨酸富集區(qū)(proline-rich region)，其連接了三個(gè)鉤狀重復(fù)區(qū)域，據(jù)推測(cè)可能參與了受體蛋白之間的相互作用；羧基末端(154個(gè)氨基酸)包含了一些不可識(shí)別的基序(motif)，其功能尚不清楚。VR1與其他瞬時(shí)受體勢(shì)家族的一些成員在氨基酸序列上有23％的同源性。
辣椒素受體是表達(dá)于感受痛覺的中樞感覺神經(jīng)元傷害性感受器上的陽離子通道，與人體對(duì)傷害性沖動(dòng)的感受和痛覺的產(chǎn)生密切相關(guān)。實(shí)驗(yàn)條件下，辣椒素受體激動(dòng)，機(jī)體會(huì)產(chǎn)生痛覺反應(yīng)。而敲除辣椒素受體的動(dòng)物則對(duì)某些傷害性刺激，如辣椒素、H+(pH＜5.9)、熱(≥43℃)極不敏感。人工克隆表達(dá)的VR1能被香草醛化合物、溫度(≥43℃)、酸(pH≤5.9)激活，因此有人認(rèn)為VR1是化學(xué)、物理性刺激致痛的分子綜合體。也有實(shí)驗(yàn)結(jié)果不支持這一假說。Nagy等用電生理和測(cè)量離子流的方法，比較了大鼠初級(jí)感覺細(xì)胞對(duì)辣椒素及傷害性熱刺激的細(xì)胞膜反應(yīng)，證實(shí)被辣椒素或熱刺激激活的離子通道的性質(zhì)有許多相同之處，但也有重要不同，即熱激活通道鈣離子的通透性性低于辣椒素激活通道。對(duì)熱刺激或辣椒素作出反應(yīng)的通道是單敏性，只有很少的離子通道對(duì)熱和辣椒素具有雙重敏感性。而在整細(xì)胞水平，則每個(gè)細(xì)胞可對(duì)熱或辣椒素作出反應(yīng)。由此推斷，辣椒素與熱刺激引起細(xì)胞反應(yīng)的分子實(shí)質(zhì)是不同的，可能與VR1有多種亞型有關(guān)。
辣椒素(capsaicin)，是辣椒中的主要辛辣成分。在19世紀(jì)中葉Thresh首次將其從辣椒粉中分離并命名為辣椒素。1919年，Nelson報(bào)道辣椒素的結(jié)構(gòu)為反8-甲基-N-香草基-6-壬烯基酰胺。辣椒素具有非常明顯的細(xì)胞特異性，可激活香草醛受體(即辣椒素受體)，從而產(chǎn)生生物學(xué)活性。目前關(guān)于辣椒素的研究主要集中在探索痛覺傳遞的機(jī)制和研究其疼痛治療中的潛在應(yīng)用價(jià)值。
香草醛是一組能夠通過其受體偶聯(lián)到非特異性的陽離子通道產(chǎn)生作用的化合物。辣椒素是典型的香草醛受體激動(dòng)劑，微摩爾辣椒素可抑制VR1。一組結(jié)構(gòu)上與辣椒素很類似的、包括4-羥基-3-甲氧芐基(即香草基)的化合物被研發(fā)出來，稱作辣椒素族化合物，包括二氫辣椒素(dihydrocapsaicin)、降辣椒素(norcapsaicin)、高辣椒素(homocapsaicin)、高二氫辣椒素(homodihydrocapsaicin)、homodihydrocapsaicin I、降二氫辣椒素(nordihydrocapsaicin)、順辣椒素(civamide，或稱cis-capsaicin)、nonivamide、olvanil(簡(jiǎn)稱NE-19550)、NE-21610、N-oleyl-homovanillamide(簡(jiǎn)稱NE-28345)、Dong-APharmaceutical(簡(jiǎn)稱DA-5018)、樹脂毒素等，其中最具潛力的辣椒素族化合物是樹脂毒素。
辣椒素產(chǎn)生鎮(zhèn)痛作用的構(gòu)效關(guān)系包括疏水烴鏈的適合長(zhǎng)度是8～18個(gè)碳；芳環(huán)上的3-甲氧基起重要但不是必須的作用；酚羥基是必不可少的，最好是對(duì)位；酰胺連接是必不可少的；氨基和環(huán)通過CH2連接最好。一些缺乏已知的香草基的香草醛受體激動(dòng)劑/抑制劑被陸續(xù)發(fā)現(xiàn)，如anandamide等。
(二)老年癡呆癥的研究進(jìn)展1、概述癡呆癥包括阿爾茨海默癥(Alzheimer’s Disease，或稱阿爾茲海默癥，簡(jiǎn)稱AD)、多重梗塞型癡呆(Multimfarct Dementia)、酒精性癡呆(Alcoholic Dementia)及正常腦壓水腦癥(Normal Pressure Hychocephalus)。
AD是一種慢性原發(fā)、進(jìn)行性腦變性疾病，是發(fā)生于老年期或老年前期的一種進(jìn)行性的神經(jīng)退行性疾病，是進(jìn)入暮年后的一種常見病態(tài)反應(yīng)，屬于非正常衰老狀態(tài)的早老性癡呆病癥。由于AD好發(fā)病于60歲以上老年人，所以習(xí)慣被稱為老年癡呆癥或早老性癡呆癥。
AD以記憶減退、認(rèn)知障礙，行為異常和語言能力喪失位特征，主要表現(xiàn)為大腦皮層獲得性高級(jí)功能的全面障礙和認(rèn)知功能明顯受損，腦功能退化衰亡，即記憶功能迅速衰減及識(shí)別能力障礙，并伴有行為或人格方面的改變。
該類疾病病程一般較長(zhǎng)，約為3～20年。對(duì)AD患者常年的護(hù)理費(fèi)用是巨大的，不僅對(duì)整個(gè)社會(huì)的醫(yī)療保障系統(tǒng)有極大影響，對(duì)中國未來社會(huì)的小家庭模式也是極大的挑戰(zhàn)。因此，其發(fā)生給社會(huì)、家庭均帶來了沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)和精神負(fù)擔(dān)，也給患者自身帶來極大的痛苦。目前，該疾病仍是全球較為棘手的病癥之一，積極研究開發(fā)新的治療方法是一件刻不容緩的事情。
2、病理表現(xiàn)及發(fā)病機(jī)制AD的主要病理表現(xiàn)是在前腦基底、海馬和大腦皮層細(xì)胞外神經(jīng)炎斑的形成，細(xì)胞內(nèi)神經(jīng)纖維纏結(jié)的出現(xiàn)以及神經(jīng)細(xì)胞和突觸數(shù)目的減少。斑點(diǎn)主要由淀粉樣前體蛋白(簡(jiǎn)稱APP)的蛋白水解產(chǎn)物β淀粉樣蛋白(簡(jiǎn)稱Aβ)聚集組成。在正常情況下，APP水解產(chǎn)物是可溶性的Aβ40，而在病理?xiàng)l件下，APP水解產(chǎn)物是長(zhǎng)的易形成纖維的Aβ1-42，它先以一種未成熟的、非纖維狀的分散的斑點(diǎn)形式存在，最終經(jīng)過構(gòu)象改變，聚合成一種有毒的纖維狀物質(zhì)，即形成斑點(diǎn)。神經(jīng)纖維纏結(jié)主要存在于錐狀神經(jīng)元的胞內(nèi)和異常的神經(jīng)軸突中，為一非水溶性結(jié)構(gòu)，其主要組成為直徑10nm的雙螺旋纖維結(jié)構(gòu)(簡(jiǎn)稱PHF)，主要成分是一種微管結(jié)合蛋白，即tau蛋白，正常的tau蛋白能穩(wěn)定微管蛋白的相互作用，而PHFs中的tau蛋白則以超磷酸化的形式存在。
AD的病因?qū)W復(fù)雜，目前主要有兩種假說tau蛋白假說和淀粉樣蛋白假說。tau蛋白假說的主要論點(diǎn)是由于tau蛋白的超磷酸化導(dǎo)致微管蛋白的不穩(wěn)定，引起高爾基體結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，從而影響APP的代謝，產(chǎn)生過量的Aβ。該假說還未在細(xì)胞或者動(dòng)物個(gè)體水平得到證實(shí)。淀粉樣蛋白假說的主要論點(diǎn)是在細(xì)胞外神經(jīng)病變發(fā)生的周圍淀粉樣蛋白的聚集，導(dǎo)致神經(jīng)炎斑的形成和隨后神經(jīng)纖維纏結(jié)的形成。因此，淀粉樣蛋白是AD病理鏈形成的起因。支持淀粉樣蛋白假說的證據(jù)很廣泛。
在AD病人中，對(duì)神經(jīng)元的功能缺失和死亡起關(guān)鍵警示作用的是APP的蛋白水解過程，由此導(dǎo)致了Aβ的產(chǎn)生增加，并在大腦中以神經(jīng)毒性形式聚集。Aβ是一種含有40～43個(gè)氨基酸的蛋白結(jié)構(gòu)，一部分嵌在細(xì)胞膜內(nèi)，另一部分則裸露在細(xì)胞外。Aβ蛋白的前身是淀粉樣前體蛋白(簡(jiǎn)稱APP)，共長(zhǎng)695～770個(gè)氨基酸，其絕大部分裸露在細(xì)胞外，一小部分嵌在細(xì)胞膜內(nèi)及細(xì)胞質(zhì)中。能夠切除APP的3種酶是α分泌酶、β分泌酶(beta-siteAPP-cleaving enzyme，簡(jiǎn)稱BACE)及γ分泌酶。Aβ的形成需要APP在β分泌酶作用下斷裂形成N端的Aβ和在γ分泌酶作用下斷裂形成C端的Aβ。α分泌酶能夠在Aβ內(nèi)部斷裂APP，從而阻礙了Aβ的形成。由α分泌酶及γ分泌酶切除之產(chǎn)物則比Aβ小一點(diǎn)，稱為P3蛋白。Aβ及P3皆會(huì)自細(xì)胞膜上游離出去，其中游離的Aβ又會(huì)自行凝聚成團(tuán)，形成所謂的斑點(diǎn)。
以神經(jīng)退行級(jí)聯(lián)的特殊位點(diǎn)為靶點(diǎn)的藥物正在研發(fā)中，由于在AD病理形成過程中，從APP轉(zhuǎn)化成神經(jīng)毒性的Aβ形式是一個(gè)決定性事件，研發(fā)能夠阻斷β分泌酶或γ分泌酶的藥物是一個(gè)熱點(diǎn)。能夠降低Aβ生成的特殊的γ分泌酶抑制劑被開發(fā)出來，但由于它有阻斷γ分泌酶斷裂Notch和其它蛋白底物的副作用，它在人體的應(yīng)用并不可行。BACE缺乏的小鼠能降低Aβ的生成而無明顯異常生理現(xiàn)象，證實(shí)BACE抑制劑能夠減少Aβ生成而無明顯副作用，但是有可能存在除APP外的其他的有重要生理學(xué)意義的BACE的底物，抑制它們的形成可能引起其他嚴(yán)重問題。盡管在抑制β分泌酶和γ分泌酶方面作了許多努力，直接作用于α分泌酶卻被忽視。目前極少有人考慮以α分泌酶作為藥物靶點(diǎn)，α分泌酶在Aβ序列內(nèi)部斷裂，產(chǎn)生一條大的、可溶性的細(xì)胞外片段(簡(jiǎn)稱sAPPa)和一條小的細(xì)胞內(nèi)片段(簡(jiǎn)稱C83)，這些片段并未表現(xiàn)出病理毒性，并且sAPPa還可能具有神經(jīng)保護(hù)性能。由于α分泌酶和β分泌酶競(jìng)爭(zhēng)APP，促進(jìn)α分泌酶能夠?qū)е聹p少的病理性片段。理論上，直接或間接的α分泌酶的促進(jìn)劑都有利于AD治療。
3、流行病學(xué)情況隨著發(fā)達(dá)國家和發(fā)展中國家人均壽命的提高，患癡呆癥的老年人數(shù)迅速增加。在所有的癡呆癥中，以AD所占的比例最高(約50％～60％)。
據(jù)資料報(bào)道，隨著年齡的增長(zhǎng)，在人體組織老化和基因的影響下，癡呆現(xiàn)象的發(fā)生率不斷升高；其中，AD隨年老急劇上升，從60歲起，每4年～5年上升一倍；AD的發(fā)病率在65歲左右的老年人中約占10％，在85歲以上的老年人中約占47％，已經(jīng)成為人類的第四號(hào)殺手。
過去學(xué)術(shù)界曾認(rèn)為中國是AD低危險(xiǎn)性國家，然而，早前于安徽屯溪召開的第二屆中國老年人癡呆癥和抑郁癥學(xué)術(shù)研討會(huì)暨國際老年癡呆學(xué)術(shù)研討會(huì)上，這一觀點(diǎn)受到挑戰(zhàn)。有5份研究報(bào)告表明，中國也是AD高危國家，這次會(huì)議報(bào)道的大量研究成果還表明，中國對(duì)AD的研究正在迅速接近國際先進(jìn)水平。
目前全球的AD病人估計(jì)在1200萬左右，中國現(xiàn)有老年癡呆患者大約為300萬～400萬，且呈迅速上升趨勢(shì)，確診后一般約7年～9年內(nèi)死亡。有資料表明，中國60歲以上人口早在1998年已達(dá)1.2億，并以年均3.2％的速度遞增，大大高于人口增長(zhǎng)速度。75歲以上的老人有2000萬，80歲以上老人有800萬，并以年均5.4％的速度增加，下世紀(jì)中葉可達(dá)4億左右，將成為世界上老齡人口最多的國家。
1988年中美上海調(diào)查研究表明，中國65歲以上老年人的癡呆發(fā)生率為4.6％，其中AD的比重為63％，多發(fā)梗塞性癡呆為28％，腦組織損傷后遺癥、化學(xué)藥物中毒以及神經(jīng)系統(tǒng)失調(diào)或營養(yǎng)缺乏導(dǎo)致的癡呆約占10％。
上海的流行病學(xué)調(diào)查顯示，中國55歲、65歲以上癡呆的患病率分別為2.57％和4.6％。北京老年病醫(yī)療研究中心對(duì)北京地區(qū)2788名60歲以上老人的調(diào)查發(fā)現(xiàn)，有208名老人患有癡呆癥，患病率達(dá)7.5％。其中女性病人139人，患病率達(dá)9.7％，顯著高于男性的5.8％。他們的研究還表明，高齡、低教育水平、居住在農(nóng)村是老年癡呆癥的高危因素。而解放軍總醫(yī)院對(duì)1728名離退休老干部的調(diào)查表明，有癡呆家庭史、“文革”中受迫害、電磁場(chǎng)暴露、腦外傷亦是老年癡呆癥的危險(xiǎn)因素。在廣州城區(qū)75歲以上老年人癡呆患病率的調(diào)查中，AD患病率為7.49％。
4、老年癡呆癥的治療藥物AD是老年人的常見病之一，是一種漸進(jìn)性的神經(jīng)功能退化性失調(diào)癥，目前本病的病因尚未得到充分闡明，一直是治療上的一個(gè)棘手問題。
抗癡呆藥物的研究和開發(fā)已引起世界各國醫(yī)藥界的高度重視。近年來，隨著對(duì)老年人神經(jīng)生理、生化、藥理等方面研究的不斷深入，導(dǎo)致相關(guān)藥物的開發(fā)研究不斷取得進(jìn)展。2001年有1270多種產(chǎn)品投放市場(chǎng)，這些產(chǎn)品中90％是80年代發(fā)現(xiàn)、90年代研究與開發(fā)成功的，此類藥物開發(fā)的新產(chǎn)品數(shù)目超過了任何其它治療類藥物開發(fā)的數(shù)目。
經(jīng)過近10年的臨床表明，乙酰膽堿酯酶(簡(jiǎn)稱AChE)抑制劑對(duì)AD具有一定的治療作用，其主要藥物他克林、利斯的明、多奈哌齊、加蘭他敏已是這一領(lǐng)域中的代表性品種，從而也推動(dòng)了癡呆治療藥品市場(chǎng)的發(fā)展進(jìn)程。
(1)腦代謝激動(dòng)劑研究發(fā)現(xiàn)，老年癡呆癥患者存在有糖代謝及核酸、蛋白質(zhì)、脂質(zhì)等代謝系統(tǒng)障礙，同時(shí)其腦血流量及耗氧量明顯低于同齡正常人。因此，腦代謝激動(dòng)劑和腦循環(huán)改善劑，特別是具有腦血管擴(kuò)張作用的腦代謝激動(dòng)劑就成為治療本病可供選用的藥物。此類藥物有吡拉西坦、腦復(fù)康、吡硫醇、腦復(fù)新、氫化麥角堿、喜得鎮(zhèn)、都可喜、長(zhǎng)春胺、長(zhǎng)效長(zhǎng)春胺、長(zhǎng)春乙酯、尼莫地平、尼莫通、桂利嗪、環(huán)扁桃酯、氯酯醒、己酮可可堿、巡能泰、麥角溴煙酯等。這些藥物對(duì)老年癡呆癥的某些癥狀如記憶力減退、適應(yīng)環(huán)境能力降低等，有程度不同的改善作用。
(2)擬膽堿藥現(xiàn)已知腦內(nèi)乙酰膽堿含量與記憶密切相關(guān)，老年或癡呆病人腦內(nèi)乙酰膽堿量減少，補(bǔ)充膽堿類藥物能改善其記憶和思維能力。但直接給予膽堿或卵磷脂并不能使乙酰膽堿增加。有人試以膽堿或卵磷脂與能通過血腦屏障的膽堿酯酶抑制劑毒扁豆堿合用于本病患者，可使其記憶力有提高，而單獨(dú)給予卵磷脂效果不明顯。另有人單用毒扁豆堿給本病患者靜注，記憶測(cè)定成績(jī)較安慰劑提高約20％，并發(fā)現(xiàn)對(duì)行為障礙也有效。研究認(rèn)為，膽堿酯酶抑制劑可延遲乙酰膽堿的代謝分解，從而延長(zhǎng)突觸后受體的興奮。另外，國內(nèi)研制的哈伯因(石杉?jí)A甲)，系中國學(xué)者從石杉屬植物千層塔中分離到的一種新生物堿，藥理實(shí)驗(yàn)證明，本品具有很強(qiáng)的擬膽堿活性，是一種高效、可逆的膽堿酯酶抑制劑。
(3)乙酰膽堿酯酶抑制劑(Acetylcholinesterase Inhibitors)乙酰膽堿酯酶抑制劑包括毒扁豆堿(商品名Synapton，F(xiàn)orest實(shí)驗(yàn)室生產(chǎn))、四氫氨基吖啶(他克林，商品名Cognex，Parke-Davis公司生產(chǎn))、donepezil(商品名Aricept，輝瑞/衛(wèi)材公司生產(chǎn))、metrifonate(拜耳公司生產(chǎn))和rivastigmine(商品名Exelon，諾華公司生產(chǎn))。這些化合物通過抑制乙酰膽堿酯酶在神經(jīng)腱內(nèi)濃縮乙酰膽堿，并能持續(xù)更長(zhǎng)的作用時(shí)間。
四氫氨基吖啶是第一個(gè)通過FDA并在臨床上治療阿爾茨海默病的膽堿酯酶抑制劑，但規(guī)定仍需作改進(jìn)。該品生物利用度要低于rivastigmine和donepezil，并有較大的副作用。多奈哌齊(Donopozil)是第二代也是第二個(gè)被美國FDA特許用于治療阿爾默海茨病(老年癡呆)的膽堿酯酶抑制劑，于1997年被FDA批準(zhǔn)用于臨床，可促進(jìn)輕、中度老年癡呆病人的認(rèn)知能力以及改善病人的精神狀態(tài)和保持腦功能活性等作用。與第一代膽堿酯酶抑制劑相比，該品有多項(xiàng)優(yōu)點(diǎn)(1)作用時(shí)間長(zhǎng)，每日只須口服一次；(2)藥效強(qiáng)、療效高；(3)安全性高、選擇性高，藥物不良反應(yīng)小。目前該品已進(jìn)入中國銷售，國內(nèi)也有廠家生產(chǎn)。
Sanochemia Pharmazeutika AG公司(維也納、奧地利)宣布第一個(gè)在歐洲上市的乙酰膽堿酯酶抑制劑-Reminyl(加蘭他敏)。該品被批準(zhǔn)在瑞典上市，并報(bào)送歐盟以期獲準(zhǔn)進(jìn)入歐洲其它市場(chǎng)。
麥的NeuroSearch公司最近利用NS2330進(jìn)行臨床研究開發(fā)。NS2330增加多巴胺和去甲腎上腺素的活性，同時(shí)也激活其抑制機(jī)制以刺激乙酰膽堿在大腦皮層(包括感知部位)的釋放。這樣所有三個(gè)神經(jīng)傳遞素的功能都將受到阿爾茨海默病的影響。該公司希望NS2330能夠具有較好的治療效果，目前該藥的I期臨床工作已經(jīng)完成，F(xiàn)DA也同意該公司繼續(xù)II期臨床工作。
其它用來研究的化合物還包括xanomeline(諾和諾德/禮來公司生產(chǎn))、besperidine(赫司特公司生產(chǎn))和talsaclidine(勃林格殷格翰/法瑪西亞普強(qiáng)公司)。
①他克林他克林的化學(xué)名為四氫氨基吖啶(簡(jiǎn)稱THA)，商品名Cognex，該藥是美國華納—蘭伯特公司開發(fā)并第一個(gè)上市的中樞系統(tǒng)的非競(jìng)爭(zhēng)、可逆性膽堿酯酶抑制劑，1993年獲得FDA批準(zhǔn)后首先在美國上市，是改善AD認(rèn)知癥新藥和老年益智藥物，同年在英國、法國、加拿大等國上市，其化合物專利于1996年到期，目前市場(chǎng)上主要是美國派德—戴維斯的產(chǎn)品。
他克林尤其對(duì)女性AD癥具有顯著的療效，與卵磷脂合用可獲得理想的效果，能明顯改善患者的記憶力，因此他克林已被認(rèn)為是治療、預(yù)防早老性癡呆僅有的幾種藥物之一。
他克林的不足之處是對(duì)肝功能及轉(zhuǎn)氨酶指數(shù)有較大影響，制約了市場(chǎng)的開發(fā)，其銷售額的增長(zhǎng)也遠(yuǎn)不如其它AD藥物。經(jīng)過進(jìn)一步的研究，在他克林母核的基礎(chǔ)上加成篩選，由德國赫斯特魯塞爾公司研制出維那克林。該藥是他克林1位羥基衍生物，其藥物作用機(jī)制得到相應(yīng)的改善，但仍有一些不良反應(yīng)，隨著醫(yī)學(xué)的發(fā)展，將被新一代乙酰膽堿酯酶抑制劑所替代。
②多奈哌齊多奈哌齊是具有高度選擇性、可逆性治療AD的藥物，為第二代中樞性乙酰膽堿酯酶抑制劑，是日本衛(wèi)材制藥公司開發(fā)的藥物，1996年11月25日獲得FDA的特許批準(zhǔn)用于臨床，商品名安理申。1997年初首先在美國上市，由衛(wèi)材/輝瑞共同開發(fā)全球市場(chǎng)，1999年10月安理申在中國上市，目前已形成了世界50多個(gè)國家地區(qū)的銷售網(wǎng)絡(luò)。
多奈哌齊是第二個(gè)獲準(zhǔn)治療老年癡呆癥的藥物，其最大優(yōu)勢(shì)是治療達(dá)標(biāo)劑量小、毒副作用低，耐受性好。專家普遍認(rèn)為，該藥在AD治療藥物中處于領(lǐng)先地位，在四個(gè)主要品種中占據(jù)了60％的市場(chǎng)份額，預(yù)計(jì)這一優(yōu)勢(shì)將延續(xù)到能夠?qū)膊≈委煯a(chǎn)生重要影響的新藥問世為止。
據(jù)Pharma Business雜志報(bào)道在2000年全球最暢銷500種藥品中，日本衛(wèi)材公司銷售額為4.31億美元，輝瑞公司的銷售額為1.19億美元，分別比上一年增長(zhǎng)了27.3％和30.8％。2001年多奈哌齊在全球排第101名，銷售額合計(jì)約6.83億美元，2002年在全球超過了1100億日元，已是AD市場(chǎng)中的佼佼者。
2001年中國醫(yī)藥研究開發(fā)中心、重慶桑田藥業(yè)開發(fā)了多奈哌齊原料藥及其片劑產(chǎn)品，國家藥品監(jiān)督管理局批準(zhǔn)其以四類新藥生產(chǎn)。
③利斯的明利斯的明是氨基酸甲酸類腦選擇性膽堿酯酶抑制劑，屬于該類藥的第二代產(chǎn)品，由瑞士諾華制藥英國公司開發(fā)，商品名艾斯能，1997年12月首先在瑞士上市，次年在英國上市。2000年4月21日獲得FDA批準(zhǔn)，同年6月底在美國上市，從而擴(kuò)展了阿爾茨海默癥治療藥物市場(chǎng)的格局。
研究結(jié)果顯示該藥雖然半衰期相對(duì)較短，但對(duì)膽堿酯酶抑制作用可達(dá)10小時(shí)，該藥不經(jīng)肝臟及P450代謝，對(duì)輕、中度早老性癡呆癥耐受性較好，同時(shí)具有抑制腦內(nèi)的丁酰膽堿酯酶作用，在歐洲、美國等45個(gè)國家進(jìn)行的一項(xiàng)前瞻性、隨機(jī)多中心雙盲研究中獲得較高的評(píng)價(jià)。
由于利斯的明在藥物市場(chǎng)中獲得越來越多的份額，2000年的銷售額比上一年增長(zhǎng)了83％，為1.195億美元，2001年利斯的明在全球銷售額增加101％，已達(dá)2.4億美元。
④加蘭他敏加蘭他敏屬于第二代乙酰膽堿酯酶抑制劑藥物，其藥物成份與歐洲山區(qū)水仙花鱗莖提取的生物堿相同，該植物藥在一些國家、地區(qū)已經(jīng)有過30多年的臨床應(yīng)用，用于治療逆轉(zhuǎn)神經(jīng)肌肉阻滯、重癥肌無力和幼兒腦型麻痹癥等。
加蘭他敏是希雷與強(qiáng)生公司合作開發(fā)的化學(xué)合成藥物，制劑有片劑、膠囊、口服液等，臨床用于改善AD患者總體功能。該藥具有雙重作用機(jī)制，能較好的刺激和抑制乙酰膽堿酯酶，并且能夠調(diào)節(jié)腦內(nèi)的煙堿受體位點(diǎn)，可顯著改善輕、中度早老性癡呆病人的認(rèn)知功能，延緩腦細(xì)胞功能減退的進(jìn)程。
加蘭他敏于2000年7月被歐盟批準(zhǔn)后在英國、愛爾蘭首次上市，2001年獲美國FDA許可用于治療阿爾茨海默癥，現(xiàn)已在25個(gè)國家上市。希雷公司負(fù)責(zé)在英國、愛爾蘭的銷售，強(qiáng)生公司負(fù)責(zé)美國和其它歐洲國家的銷售。國外報(bào)道2001年加蘭他敏銷售額為1.36億美元。
1998年上海申興制藥廠已生產(chǎn)加蘭他敏原料藥，1999年國家藥品監(jiān)督管理局批準(zhǔn)蘇州第六制藥廠生產(chǎn)四類新藥氫溴酸加蘭他敏膠囊，2001年上海申興產(chǎn)量同比增長(zhǎng)3倍，年產(chǎn)量達(dá)到30kg。該藥進(jìn)入市場(chǎng)后，臨床推廣長(zhǎng)足邁進(jìn)，2000年已在我國主要城市重點(diǎn)醫(yī)院抗癡呆藥品中嶄露頭角。
近幾年，乙酰膽堿脂酶抑制劑已成為AD的一線治療藥物，確認(rèn)了其有效緩解認(rèn)知功能障礙的地位，產(chǎn)品銷售量占據(jù)了抗癡呆藥物中的最大份額，研究表明石杉?jí)A甲、毒扁豆堿、美曲磷脂對(duì)阿爾茨海默癥也有一定的治療作用，中科院上海藥物所開發(fā)的石杉?jí)A甲化合物已申請(qǐng)了國際專利，其作用機(jī)制正在進(jìn)行深入的研究，北京四環(huán)制藥、寧波立華制藥、上海漢殷藥業(yè)和上海醫(yī)科大學(xué)紅旗藥廠獲得了新藥證書和生產(chǎn)文號(hào)。
(4)鉀通道阻滯劑研究表明，非選擇性的鉀通道阻滯劑通過延遲去極化和延長(zhǎng)突觸前神經(jīng)末梢的鈣流入引起神經(jīng)遞質(zhì)(包括Ach)釋放增加。若要想這類藥物用于治療老年癡呆，則所用藥物應(yīng)具備能增加乙酰膽堿的釋放而不減少膜磷脂酰膽堿組成的優(yōu)點(diǎn)，而減少膜磷脂酰膽堿的組成可能是AchE抑制劑存在的副作用。磷脂酰膽堿是膽堿的貯存庫，被神經(jīng)元用來合成Ach。膜磷脂酰膽堿的損失使乙酰膽堿的合成受到限制，導(dǎo)致膽堿輸出量減少。臨床研究已表明非選擇性鉀通道阻滯劑對(duì)改善患者的識(shí)別能力僅有中度作用，其作用不強(qiáng)可能是這些藥物的中樞神經(jīng)系統(tǒng)穿透力低，選擇性差或活性不夠等，有待于進(jìn)一步研究加以完善。
(5)谷氨酸受體調(diào)控劑在老年疾呆癥患者的大腦中，皮質(zhì)皮層和離皮層途徑的錐體細(xì)胞發(fā)生了神經(jīng)纖維混亂和退化。據(jù)報(bào)道，這些錐體細(xì)胞以谷氨酸為興奮遞質(zhì)。這些神經(jīng)元受損，功能喪失時(shí)會(huì)導(dǎo)致老年癡呆癥；但若功能過強(qiáng)，則會(huì)產(chǎn)生興奮性毒性，引起神經(jīng)元死亡，造成多種神經(jīng)退化性疾病。因此，調(diào)控退化的谷氨酸神經(jīng)元的突觸活性有望治療老年癡呆癥。研究表明，直接活化突觸后受體將有利于谷氨酸的傳遞，其部分激動(dòng)劑具有這樣的優(yōu)點(diǎn)，即當(dāng)內(nèi)源性谷氨酸低于正常水平時(shí)起激動(dòng)劑作用，而當(dāng)谷氨酸釋放過量時(shí)起拮抗劑作用，因此，部分激動(dòng)劑會(huì)對(duì)興奮毒性情況產(chǎn)生神經(jīng)保護(hù)作用。已有報(bào)道的藥物如美金剛胺(memantine)，當(dāng)谷氨酸以病理量釋放時(shí)，美金剛胺會(huì)減少谷氨酸的神經(jīng)毒性作用；當(dāng)谷氨酸釋放過少時(shí)，美金剛胺可以改善記憶過程所需谷氨酸的傳遞，臨床研究表明，美金剛胺用于老年癡呆癥患者具有較好的耐受性，在精神病理學(xué)和行為測(cè)定中產(chǎn)生溫和的有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的顯著改善。
(6)5-羥色胺3受體拮抗劑5-羥色胺3(簡(jiǎn)稱5-HT3)受體拮抗劑原用于止吐，現(xiàn)有研究根據(jù)5-HT3受體在大腦中的分布狀態(tài)，推測(cè)此類拮抗劑應(yīng)有其它中樞神經(jīng)系統(tǒng)的作用。如5-HT3拮抗劑昂丹司瓊樞復(fù)寧能改善膽堿能神經(jīng)功能正常和不足的動(dòng)物如鼠、狨等的識(shí)別能力；在50歲以上與老年有關(guān)的記憶力受損(AAMI)病人的臨床試驗(yàn)中，昂丹司瓊能使相當(dāng)于喪失6年的記憶力得到改善。因此，昂丹司瓊及其他5-HT3受體拮抗劑(托烷司瓊、格拉司瓊等有可能給老年癡呆患者帶來福音。
(7)天然藥物方面的研究現(xiàn)今很多醫(yī)藥公司還把目光移向天然藥物，試圖從中開發(fā)出有效的治療藥物。在這方面同樣也取得了一定的進(jìn)展。
①阿樸脂蛋白E4(ApoE4)我們知道，阿爾茨海默病的發(fā)病情況與遺傳基因有著較為緊密的聯(lián)系，阿樸脂蛋白E4ApoE4是特別值得讓我們?nèi)プ⒁獠⒊委熀皖A(yù)防阿爾茨海默病的方向進(jìn)行研究。在藥物開發(fā)中，ApoE4已經(jīng)進(jìn)行過人體藥物臨床試驗(yàn)，并極有可能成為療效比較確切的藥品。
②β-淀粉素(體)(Beta-amyloid)β-淀粉素是一種不能溶解的多肽。該種物質(zhì)能夠有效防止激烈氧化過程中導(dǎo)致的二乙基溴乙酰胺的破壞。在從事阿爾茨海默病研究理論中就是利用β-淀粉素限制自由基的產(chǎn)生以及清除自由基，以防止自由基所帶來的損害。這種類型的化合物包括idebenone(武田公司、Osaka日本)，該化合物既是一種自由基的清道夫也是某種神經(jīng)增長(zhǎng)因子的刺激物。早期研究表明，idebenone能有效治療中度癡呆癥。盡管葛蘭素威康公司(英國)和美國家用產(chǎn)品公司已經(jīng)在少數(shù)一些國家上市，但它已經(jīng)從日本退出市場(chǎng)，而且其III期臨床試驗(yàn)已經(jīng)被停止。
(8)其它類型藥物的研究進(jìn)展2000年上半年，一些研究表明，雌激素替代療法可以較明顯地延緩婦女阿爾茨海默病的發(fā)作，并能降低阿爾茨海默病的病情嚴(yán)重化。個(gè)別臨床研究也發(fā)現(xiàn)雌激素治療能夠提高感知度。雌激素對(duì)抗氧劑和抗炎藥的作用能力可以減少發(fā)病的機(jī)率，推動(dòng)乙酰膽堿的產(chǎn)生、促進(jìn)神經(jīng)細(xì)胞的生長(zhǎng)和存活。
2000年年中，日本的Toyama Chemical公司期望開始在英國進(jìn)行T-588的II期臨床研究，并能在美國進(jìn)行較早的試驗(yàn)。在紐約大學(xué)的合作下，公司發(fā)現(xiàn)T-588可以保護(hù)大腦神經(jīng)細(xì)胞。
日本藤澤制藥公司的FK-960在日本和美國進(jìn)行。該藥能夠提高感知度，具有新的作用機(jī)制。在最近有關(guān)研究報(bào)道是表明，咀嚼可以防止上年紀(jì)的人記憶力衰退，但其作用機(jī)制現(xiàn)在仍然沒有明確。研究人員通過研究小鼠的遺傳改變來研究人體老化的跡象。實(shí)驗(yàn)表明，拔除牙齒以防止咀嚼的小鼠的記憶力要遜于正常對(duì)照小組。此外，研究人員還研究了咀嚼時(shí)大腦的活動(dòng)情況，并發(fā)現(xiàn)下巴的活動(dòng)可以增強(qiáng)腦部海馬區(qū)的信號(hào)。
來自肯塔基州立大學(xué)的研究人員發(fā)現(xiàn)減少食用量可以保護(hù)大腦避免因年齡引起紊亂，這種紊亂類似于阿爾茨海默病。最近出版的研究論文表明，通過喂養(yǎng)減少食物量的小鼠，研究人員發(fā)現(xiàn)它們大腦的損傷能減少。對(duì)熱量攝入量和人體神經(jīng)變性疾病的研究還沒有開始，但有一些相關(guān)性研究顯示，相比于美國和加拿大，中國和日本由于攝入較少的熱量，因此相應(yīng)的阿爾茨海默病的發(fā)病率也減少。
加拿大的神經(jīng)生物技術(shù)公司在2000年上半年宣布了一個(gè)較為確切的產(chǎn)品memantine。該產(chǎn)品是一種非競(jìng)爭(zhēng)性N-甲基-D-天門冬氨酸(NMDA)阻斷劑，在美國進(jìn)行了III期臨床試驗(yàn)，主要用于治療阿爾茨海默病。
5、老年癡呆癥的市場(chǎng)發(fā)展前景
2000年世界七大藥品市場(chǎng)表明，AD藥品市場(chǎng)已從90年代中期的4億多美元增長(zhǎng)了近一倍，2001年全球AD市場(chǎng)價(jià)值已近12億美元；國外分析家預(yù)測(cè)在未來十年內(nèi)AD患者將會(huì)增加到20％左右，AD藥品市場(chǎng)的增長(zhǎng)速度將有較大幅度的上升。
由于患者的不斷增多，AD治療藥物的市場(chǎng)銷售額也一直在穩(wěn)步增長(zhǎng)。90年代該類藥物已成為暢銷藥物，1995年世界銷售額已達(dá)50億美元。21世紀(jì)初，該類藥物的銷售額超過了排列在前三位的治療心血管病藥物、治療胃腸道病藥物和抗感染藥物市場(chǎng)的份額，其發(fā)展勢(shì)頭看好。
目前，該類疾病已越來越受到中國國家和社會(huì)的高度重視，而且由于該類疾病類似于糖尿病等富貴病，一樣需要長(zhǎng)期服用治療藥物，因此其用藥市場(chǎng)隨著人口老齡化而逐漸擴(kuò)大，市場(chǎng)前景看好。基于此，為及時(shí)了解中國治療AD藥物的市場(chǎng)狀況，中國國家食品藥品監(jiān)督管理局南方醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)研究所信息中心選取中國六個(gè)主要用藥城市(北京、上海、廣州、南京、杭州、成都)的百家抽樣醫(yī)院、60名醫(yī)生專家和120名消費(fèi)者，對(duì)中國國內(nèi)老年癡呆癥用藥市場(chǎng)(1999年及2000年)及其主要競(jìng)爭(zhēng)品種進(jìn)行了全面的市場(chǎng)調(diào)研活動(dòng)。
(1)1999年～2000年中國治療老年癡呆藥物醫(yī)院用藥金額情況分析從1999年～2000年六城市(北京、上海、廣州、南京、杭州、成都)抽樣醫(yī)院治療老年癡呆癥用藥金額構(gòu)成情況來看，2000年六城市抽樣醫(yī)院銷售總金額較1999年同比增長(zhǎng)28.49％。而在治療老年癡呆藥主要品種中，使用金額百分比較大的品種排名依次為吡拉西坦、銀杏葉制劑、氫化麥角堿、阿米三嗪/蘿巴新、阿尼西坦、尼麥角林、胞磷膽堿、石杉?jí)A甲、多奈哌齊、吡硫醇、長(zhǎng)春西汀、加蘭他敏、氯酯醒、艾地苯醌。其中前四位品種市場(chǎng)份額(金額百分比)較大。
具體品種中，吡拉西坦的市場(chǎng)份額(金額百分比)2000年較1999年上升了8個(gè)百分點(diǎn)，仍居首位，金額增長(zhǎng)率達(dá)55.59％。銀杏葉制劑、氫化麥角堿保持較穩(wěn)定的市場(chǎng)份額，使用金額都保持一定的增長(zhǎng)。使用金額增長(zhǎng)較快的品種有石杉?jí)A甲、加蘭他敏，其中加蘭他敏增長(zhǎng)幅度最高。阿米三嗪/蘿巴新、阿尼西坦、尼麥角林、胞磷膽堿、長(zhǎng)春西汀和吡硫醇總體市場(chǎng)出現(xiàn)萎縮，而艾地苯醌基本退出市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)。多奈哌齊由于是較新的品種，在1999年未見銷售，但在2000年市場(chǎng)份額(使用金額百分比)占0.45％，顯示出一定的市場(chǎng)潛力。
(2)1999年～2000年中國治療老年癡呆藥物醫(yī)院用藥金額走勢(shì)分析從1999年～2000年六城市老年癡呆用藥金額走勢(shì)情況來看，2000年整體用藥水平要明顯高于1999年整體用藥水平，出現(xiàn)上升趨勢(shì)。其中1999年用藥金額高峰期和2000年用藥金額高峰期均出現(xiàn)在二季度(2000年用藥量高峰期是第三季度)，表明在2000年二季度高價(jià)品種的使用量相對(duì)要高。從六城市用藥情況中可以反映出中國城市的一個(gè)用藥趨勢(shì)。
(3)主要用藥城市醫(yī)院用藥情況分析從各品種在各城市的用藥金額排序情況來看，其銷售情況表現(xiàn)得較好的品種主要有銀杏葉制劑、吡拉西坦、氫化麥角堿和阿米三嗪/蘿巴新。其中銀杏葉制劑2000年在上海、廣州、杭州和成都地區(qū)排在第一位，在北京地區(qū)排名第二，南京地區(qū)排名第三，表現(xiàn)得相當(dāng)好，較1999年有所增長(zhǎng)，其幾個(gè)主打品牌達(dá)納康、銀杏天保、活血寧膠囊、百路達(dá)膠囊、天保寧、銀可絡(luò)的市場(chǎng)反應(yīng)有口皆碑；其次表現(xiàn)較好的則為吡拉西坦，該品2000年在北京和南京地區(qū)占據(jù)第一的位置，在其它幾個(gè)城市也是前三名之列，只有在杭州地區(qū)較弱(排名第5)；氫化麥角堿總體情況排在第三位，不過2000年排名較1999年排名有所提高。氫化麥角堿在各城市的排名基本保持不變，并在個(gè)別城市如上海和成都地區(qū)排名上升，而在南京地區(qū)排名下降一個(gè)位置。
(4)其它方面的市場(chǎng)評(píng)價(jià)隨著治療AD藥物臨床推廣的普及，AD已越來越受到社會(huì)和家庭的重視，從調(diào)查的醫(yī)生信息反饋來看，68％的醫(yī)生認(rèn)為社會(huì)大眾已經(jīng)開始關(guān)心和重視AD，與此同時(shí)，8.16％的醫(yī)生認(rèn)為市場(chǎng)供給嚴(yán)重不足，63.2％的醫(yī)生認(rèn)為市場(chǎng)供給不足?？梢?，AD用藥市場(chǎng)供給不足，市場(chǎng)仍有空間，有近八成醫(yī)生認(rèn)可市場(chǎng)前景較好。
同樣，隨著近年來OTC市場(chǎng)的蓬勃發(fā)展，有相當(dāng)部份品種(口服劑型)也在零售藥店中進(jìn)行銷售，由于長(zhǎng)期服藥的特點(diǎn)，越來越多的患者選擇直接從藥店進(jìn)行購藥治療。從中國國家藥品監(jiān)督管理局南方醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)研究所零售研究部對(duì)這類藥品的監(jiān)測(cè)結(jié)果顯示，銀杏葉制劑的市場(chǎng)份額(銷售金額百分比)約占市場(chǎng)的4成左右，中成藥較受零售市場(chǎng)的青睞，都可喜(阿米三嗪/蘿巴新)的市場(chǎng)份額約占3成左右，其余品種則占據(jù)余下的市場(chǎng)份額。從所調(diào)查的消費(fèi)者情況反映，有67.80％的消費(fèi)者是從醫(yī)院藥房獲得所需藥品的；而有27.97％的消費(fèi)者直接到藥店購買；4.24％的病患者從所在單位門診部獲得；還有0.85％的病患者到批發(fā)商處購買。這表明，目前來說，醫(yī)院雖然是老年人用藥的主要銷售渠道，但也可以看出，零售渠道也占有不可忽視的比例。
AD的治療占世界藥品市場(chǎng)的第七位，到2005年底價(jià)值61億美元。而目前抗AD藥物主要是緩解癥狀，并不遏制病情的發(fā)展。因此，研究出一種有效的治療方法來阻止?jié)撛诘陌l(fā)病過程是很必要的，所以本發(fā)明認(rèn)為研制用于預(yù)防、診斷、檢測(cè)、保護(hù)和治療AD等方面的產(chǎn)品特別是藥物能夠具有顯著的社會(huì)效益和經(jīng)濟(jì)效益。
但是，經(jīng)文獻(xiàn)檢索等，到目前為止，尚未發(fā)現(xiàn)將香草醛受體激動(dòng)劑作為抗阿爾茨海默病產(chǎn)品應(yīng)用方面的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所需要解決的技術(shù)問題是公開了一種香草醛受體激動(dòng)劑的新用途，以克服現(xiàn)有技術(shù)存在的上述缺陷。
也就是說，本發(fā)明意在明確香草醛受體激動(dòng)劑在阿爾茨海默病方面的具體應(yīng)用，進(jìn)而將香草醛受體激動(dòng)劑用于制備抗阿爾茨海默病產(chǎn)品；所述的抗阿爾茨海默病產(chǎn)品是指用于預(yù)防、診斷、檢測(cè)、保護(hù)、治療和研究阿爾茨海默病及其相關(guān)疾病的產(chǎn)品，是包括藥物、試劑、食品等中的一種或多種，優(yōu)選藥物。
(一)技術(shù)構(gòu)思自主開發(fā)創(chuàng)新藥物是中國目前的一項(xiàng)緊迫任務(wù)，中國醫(yī)藥行業(yè)具有悠久的發(fā)展歷史，在預(yù)防和治療疾病等方面也積累了豐富的經(jīng)驗(yàn)，尋找有效的活性成分是一條有效的途徑，也是中國創(chuàng)新藥物研制的優(yōu)勢(shì)之所在。
目前抗AD藥物的作用主要是緩解癥狀，并不遏制病情的發(fā)展。因此，研究出一種有效的預(yù)防、診斷、治療和研究方法來阻止?jié)撛诘陌l(fā)病過程是很必要的。
AD的二個(gè)特點(diǎn)是斑點(diǎn)和纏結(jié)，淀粉樣蛋白形成的斑點(diǎn)是AD病理級(jí)聯(lián)形成的起因。斑點(diǎn)是由淀粉樣前體蛋白(簡(jiǎn)稱APP)轉(zhuǎn)化所得的Aβ1-42聚合而形成的。在APP轉(zhuǎn)化形成Aβ過程中，有一些激酶如GSK3β、CDK5、和PKCε在起作用。激活的PKCε能增加α分泌酶，導(dǎo)致APP分泌增加，減少Aβ1-42的生成。
最近發(fā)現(xiàn)非選擇性陽離子通道，如瞬時(shí)受體勢(shì)香草酸受體(簡(jiǎn)稱TRPV1)，在鈣調(diào)節(jié)中起重要作用。而鈣離子是神經(jīng)元細(xì)胞中蛋白激酶C(簡(jiǎn)稱PKC)活化因子之一，PKC促進(jìn)α分泌酶活性，減少Aβ1-42生成。因此，本發(fā)明的目的是要通過自主開發(fā)的新型TRPV1激動(dòng)劑來調(diào)控鈣離子，從而調(diào)節(jié)PKC活性，再進(jìn)一步導(dǎo)致潛在的Aβ1-42生成減少，最終達(dá)到治療AD的效果。
與AD相關(guān)的記憶損傷或喪失，都涉及PKC激化調(diào)節(jié)這樣的分子事件。PKC也涉及APP轉(zhuǎn)化，先前的研究表明PKC激動(dòng)劑——佛波醇酯(phorbol esters)，苯內(nèi)酰胺(簡(jiǎn)稱BL)和苔蘚抑素(Bryostatin)極大地增加了AD病人纖維原細(xì)胞中α分泌酶產(chǎn)物sAPPa的分泌，減少了Aβ。這些數(shù)據(jù)顯示PKC和它的激活是是一種潛在的、重要的改善AD病理生理學(xué)和認(rèn)知損傷的方法，因此提供了更有希望的藥物研發(fā)的靶點(diǎn)。但是這些新的PKC激動(dòng)劑由于安全性問題，目前尚不能用于抗AD藥物的開發(fā)。
眾所周知，鈣離子(簡(jiǎn)稱Ca2+)是神經(jīng)元細(xì)胞中PKC活化因子之一。TRPV1通道在Ca2+調(diào)節(jié)中起重要作用。因此，本發(fā)明假設(shè)通過調(diào)控TRPV1通道，可以調(diào)節(jié)PKC活性，促進(jìn)α分泌酶活性，影響APP進(jìn)程，增加有神經(jīng)元保護(hù)作用的sAPPa的分泌，減少神經(jīng)元毒性的Aβ的產(chǎn)生。本發(fā)明的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)對(duì)此假設(shè)提供了強(qiáng)有力的證據(jù)。與PKC相比，TRPV1通道有選擇性地在神經(jīng)元中表達(dá)。因此，神經(jīng)元細(xì)胞中更特異地調(diào)控TRPV1活性可以特異調(diào)節(jié)PKC活性。
Ca2+在學(xué)習(xí)和記憶過程中起著基礎(chǔ)作用，還參與神經(jīng)細(xì)胞的生存和死亡。AD病理的一個(gè)方面是神經(jīng)細(xì)胞失去調(diào)節(jié)鈣平衡的能力，最終導(dǎo)致神經(jīng)細(xì)胞功能喪失和死亡。對(duì)AD病人及對(duì)APP和PS1變異的病理基因研究支持AD疾病中混亂的鈣調(diào)節(jié)作用。細(xì)胞內(nèi)鈣濃度的調(diào)節(jié)對(duì)控制多種鈣依賴性的細(xì)胞反應(yīng)，如基因表達(dá)、細(xì)胞分化等起著重要作用。細(xì)胞內(nèi)鈣濃度的調(diào)節(jié)非常復(fù)雜，有流入流出多種通道。通常鈣流入細(xì)胞質(zhì)是由于內(nèi)部貯存細(xì)胞器(主要是肌漿/內(nèi)質(zhì)網(wǎng)SER)通過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)鈣釋放通道(三磷酸肌糖受體或ryanodine受體)進(jìn)行鈣的釋放或是通過細(xì)胞膜上鈣通道流入鈣。最近發(fā)現(xiàn)一組新的鈣通道，瞬時(shí)受體勢(shì)(簡(jiǎn)稱TRP)通道大家族。這一發(fā)現(xiàn)揭示了在很多細(xì)胞中控制鈣流的分子實(shí)體和信號(hào)機(jī)制。
根據(jù)文獻(xiàn)檢索，發(fā)明人通過實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)香草醛受體激動(dòng)劑具有多種顯著的藥理活性。而經(jīng)過實(shí)驗(yàn)和研究結(jié)果，證明和證實(shí)了香草醛受體激動(dòng)劑在預(yù)防、診斷、檢測(cè)、保護(hù)和治療AD等方面具有顯著的活性。
(二)香草醛受體激動(dòng)劑所述的香草醛受體激動(dòng)劑是包括香草醛及其衍生物、辣椒素類似物及其衍生物等中的一種或多種。
其中，所述的香草醛及其衍生物是包括辣椒素、辣椒素族化合物及其衍生物等中的一種或多種。所述的香草醛是一組能夠通過其受體——香草醛受體偶聯(lián)到非特異性的陽離子通道產(chǎn)生作用的化合物。
所述的香草醛及其衍生物的化學(xué)結(jié)構(gòu)通式如下 其中，n為0、1或2等中的一種，優(yōu)選1；R1為羥基(OH)、烷基、烷氧基、酰氧基、胺烷氧基、氫(H)、氨基(NH2)或鹵素等中的一種，優(yōu)選羥基；R2為烷氧基、氫、羥基、氨基、烷基、脂肪胺或芳香胺、胺烷氧基，或者是酰氧基等中的一種，優(yōu)選烷氧基，進(jìn)一步優(yōu)選甲氧基；R3為具有5～23個(gè)碳原子的烷基或取代烷基、烯基或取代烯基、二萜烯基、苯基或取代苯基、金剛烷基或取代金剛烷基，或者是具有5～23個(gè)碳原子的哌嗪基或取代哌嗪基等中的一種；優(yōu)選具有7～18個(gè)碳原子的烷基或取代烷基，或者具有7～18個(gè)碳原子的烯基或取代烯基等中的一種；進(jìn)一步優(yōu)選具有7～18個(gè)碳原子的烷基或取代烷基等中的一種。
X為NHC(O)、C(O)NH、C(O)O、NHC(O)O、NHC(O)NH、NHC(S)NH、或者是NH(O)S(O)等中的一種；優(yōu)選NHC(O)；這里的烷基是包括具有5～23個(gè)碳原子的直鏈烷基、支鏈烷基或環(huán)狀烷基等中的一種，優(yōu)選包括異丁基、叔丁基、仲丁基、戊基、叔戊基、己基、環(huán)戊基或環(huán)己基等中的一種，特別優(yōu)選包括具有8～12個(gè)碳原子的直鏈烷基、支鏈烷基或環(huán)狀烷基等中的一種；這里的烷氧基中的烷基是包括具有1～6個(gè)碳原子的直鏈烷基、支鏈烷基或環(huán)狀烷基等中的一種，是包括甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、叔丁基、仲丁基、戊基、叔戊基、己基、環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基或環(huán)己基等中的一種，優(yōu)選包括具有1～3個(gè)碳原子的烷基等中的一種，特別優(yōu)選包括甲基或乙基等中的一種；這里的脂肪胺，即取代脂肪族伯胺、仲胺或叔胺，是包括甲胺、乙胺、丙胺、異丙胺、四種丁胺的異構(gòu)體、二甲胺、二乙胺、二乙醇胺、二丙胺、二異丙胺、二正丁胺、四氫吡咯、哌啶、嗎啉、3，5-二甲基嗎啉、哌嗪、N-甲基哌嗪、N-乙基哌嗪、N-異丙基哌嗪、2-甲基哌嗪、3-甲基哌嗪、2，6-二甲基哌嗪、三甲胺、三乙胺或三丙胺等中的一種，優(yōu)選氨、甲胺、乙胺、丙胺、二乙胺、二乙醇胺、三乙胺、嗎啉或N-甲基哌嗪等中的一種，特別優(yōu)選氨、甲胺、三乙胺或嗎啉等中的一種；這里的芳香胺，即取代芳香族伯胺、仲胺或叔胺，是包括苯胺、取代苯胺、N-甲基苯胺、N-乙基苯胺、吡啶、取代吡啶、喹啉、取代喹啉、異喹啉、取代異喹啉或奎寧等中的一種，優(yōu)選取代喹啉，取代喹啉中優(yōu)選(5-乙基-1-氮雜-二環(huán)[2.2.2]-辛-2-基)-喹啉-4-基-甲醇。
例如，R2為H、OH、OCH3、OCH2CH3、OCH2CH2CH3、OCH2CH2CH2CH3、OC6H5、CH2NH2、CH2CH2NH2、CH2CH2CH2NH2、OC(O)CH3、OC(O)CH2CH3、OC(O)CH2CH2CH3、OC(O)CH2CH2CH2CH3，或OC(O)C6H5等中的一種；優(yōu)選OCH3、OCH2CH3、OCH2CH2CH3或OCH2CH2CH2CH3等中的一種；進(jìn)一步優(yōu)選OCH3。
例如，X為NHC(O)，NHC(O)O，NHC(O)NH，NHC(S)NH，C(O)NH，C(O)O或者NH(O)S(O)等中的一種；優(yōu)選NHC(O)或C(O)O等中的一種；進(jìn)一步優(yōu)選NHC(O)。
其中，所述的辣椒素類似物及其衍生物是不含有香草?；?、但構(gòu)效關(guān)系與辣椒素相似的一組化合物。
部分辣椒素類似物及其衍生物的結(jié)構(gòu)式如下 N-(2-Hydroxyethyl)-5，8，11，14-eicosatetraenamide簡(jiǎn)稱AnandamidePhorbol 12-phenylacetate簡(jiǎn)稱PPAHV所述的構(gòu)效關(guān)系與辣椒素相似的含義是指包括符合以下構(gòu)效關(guān)系中的一種或多種①疏水烴鏈的適合長(zhǎng)度是8～18個(gè)碳；芳環(huán)3-甲氧基起重要但不是必須的作用；酚羥基是不可缺少的，最適合的位置是對(duì)位；酰氨鏈?zhǔn)遣豢苫蛉钡模话被铜h(huán)通過CH2連接是合適的(J Toxicol.Sci.1991 Feb；16 Suppl 13-20)；②化合物有三個(gè)假想結(jié)合部位A-香草基，B-酰胺基，C-脂肪鏈；其中，化合物的脂肪末端顯示出極大的靈活性和容納C部位的整體的疏水性。
在C區(qū)域能夠引進(jìn)剛性的環(huán)結(jié)構(gòu)，包括金剛烷胺-2-胺，金剛烷胺-2-醇，(5-乙基-1-氮雜-二環(huán)[2.2.2]-辛-2-基)-喹啉-4-基-甲醇，1-苯基-哌嗪，異吲哚-1，3-二酮，或者是2-甲基-2-丙醇等中的一種或多種。
化合物抗AD活性大小的確定，需要通過測(cè)試其穿透血腦屏障的能力。
分子穿透血腦屏障的關(guān)鍵規(guī)則是①小至中的體積；②脂溶性；③不帶電荷。
這些剛性的環(huán)結(jié)構(gòu)能夠使C區(qū)域更緊湊，體積更小，絕大多數(shù)是脂溶性(即疏水性)的，只有哌嗪取代基例外，且不帶電荷，含有一些能順利穿透BBB的藥物的結(jié)構(gòu)，這些特點(diǎn)都表示這類化合物是抗AD藥物的優(yōu)選的合適結(jié)構(gòu)。
(三)香草醛受體激動(dòng)劑的藥理活性AD的二個(gè)特點(diǎn)是斑點(diǎn)和纏結(jié)，淀粉樣蛋白形成的斑點(diǎn)是AD病理級(jí)聯(lián)形成的起因。斑點(diǎn)是由淀粉樣前體蛋白(簡(jiǎn)稱APP)轉(zhuǎn)化所得的Aβ1-42聚合而形成的。在APP轉(zhuǎn)化形成Aβ過程中，有一些激酶如GSK3β、CDK5、和PKCε在起作用。激活的PKCε能增加α分泌酶，導(dǎo)致APP分泌增加，減少Aβ1-42的生成。
最近發(fā)現(xiàn)非選擇性陽離子通道，如瞬時(shí)受體勢(shì)香草酸受體(簡(jiǎn)稱TRPVl)，在鈣調(diào)節(jié)中起重要作用。而鈣離子是神經(jīng)元細(xì)胞中蛋白激酶C(簡(jiǎn)稱PKC)活化因子之一，PKC促進(jìn)α分泌酶活性，減少Aβ1-42生成。因此，本發(fā)明的目的是要通過自主開發(fā)的新型TRPV1激動(dòng)劑來調(diào)控鈣離子，從而調(diào)節(jié)PKC活性，再進(jìn)一步導(dǎo)致潛在的Aβ1-42生成減少，最終達(dá)到治療AD的效果。
與AD相關(guān)的記憶損傷或喪失，都涉及PKC激化調(diào)節(jié)這樣的分子事件。PKC也涉及APP轉(zhuǎn)化，先前的研究表明PKC激動(dòng)劑——佛波醇酯(phorbol esters)，苯內(nèi)酰胺(簡(jiǎn)稱BL)和苔蘚抑素(Bryostatin)極大地增加了AD病人纖維原細(xì)胞中α分泌酶產(chǎn)物sAPPa的分泌，減少了Aβ。這些數(shù)據(jù)顯示PKC和它的激活是是一種潛在的、重要的改善AD病理生理學(xué)和認(rèn)知損傷的方法，因此提供了更有希望的藥物研發(fā)的靶點(diǎn)。但新的PKC激動(dòng)劑用于人類的安全問題還有待驗(yàn)證。
眾所周知，鈣離子(簡(jiǎn)稱Ca2+)是神經(jīng)元細(xì)胞中PKC活化因子之一。TRPV1通道在Ca2+調(diào)節(jié)中起重要作用。因此，本發(fā)明假設(shè)通過調(diào)控TRPV1通道，可以調(diào)節(jié)PKC活性，促進(jìn)α分泌酶活性，影響APP進(jìn)程，增加有神經(jīng)元保護(hù)作用的sAPPa的分泌，減少神經(jīng)元毒性的Aβ的產(chǎn)生。本發(fā)明實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)已證實(shí)這一點(diǎn)。與PKC相比，TRPV1通道有選擇性地在神經(jīng)元中表達(dá)。因此，神經(jīng)元細(xì)胞中更特異地調(diào)控TRPV1活性可以特異調(diào)節(jié)PKC活性。
Ca2+在學(xué)習(xí)和記憶過程中起著基礎(chǔ)作用，還參與神經(jīng)細(xì)胞的生存和死亡。AD病理的一個(gè)方面是神經(jīng)細(xì)胞失去調(diào)節(jié)鈣平衡的能力，最終導(dǎo)致神經(jīng)細(xì)胞功能喪失和死亡。對(duì)AD病人及對(duì)APP和PS1變異的病理基因研究支持AD疾病中混亂的鈣調(diào)節(jié)作用。細(xì)胞內(nèi)鈣濃度的調(diào)節(jié)對(duì)控制多種鈣依賴性的細(xì)胞反應(yīng)，如基因表達(dá)、細(xì)胞分化等起著重要作用。細(xì)胞內(nèi)鈣濃度的調(diào)節(jié)非常復(fù)雜，有流入流出多種通道。通常鈣流入細(xì)胞質(zhì)是由于內(nèi)部貯存細(xì)胞器(主要是肌漿/內(nèi)質(zhì)網(wǎng)SER)通過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)鈣釋放通道(三磷酸肌糖受體或ryanodine受體)進(jìn)行鈣的釋放或是通過細(xì)胞膜上鈣通道流入鈣。最近發(fā)現(xiàn)一組新的鈣通道，瞬時(shí)受體勢(shì)(簡(jiǎn)稱TRP)通道大家族。這一發(fā)現(xiàn)揭示了在很多細(xì)胞中控制鈣流的分子實(shí)體和信號(hào)機(jī)制。
本發(fā)明對(duì)香草醛受體激動(dòng)劑在阿爾茨海默病的預(yù)防、診斷、保護(hù)、治療和研究等方面的活性進(jìn)行了多方面的試驗(yàn)。
(四)香草醛受體激動(dòng)劑的用途1、概述本發(fā)明的目的是提供一種用于預(yù)防、診斷、檢測(cè)、保護(hù)、治療和研究阿爾茨海默病及其相關(guān)疾病的產(chǎn)品，包括藥物、試劑、食品、飲料等中的一種或多種，優(yōu)選藥物。
通過藥理活性篩選證明，香草醛受體激動(dòng)劑具有預(yù)防、診斷、檢測(cè)、保護(hù)、治療和研究阿爾茨海默病及其相關(guān)疾病的活性。已完成的急性毒性實(shí)驗(yàn)證明，小鼠灌胃給藥對(duì)該活性部位的最大耐受量超過2.0g/kg，相當(dāng)于臨床推薦用藥劑量的440倍，表明該香草醛受體激動(dòng)劑安全可靠。
綜上所述，發(fā)明人對(duì)香草醛受體激動(dòng)劑進(jìn)行了理論探索，經(jīng)過大量的實(shí)驗(yàn)研究特別是長(zhǎng)期的藥理學(xué)試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)所述及的香草醛受體激動(dòng)劑有顯著的預(yù)防、診斷、檢測(cè)、保護(hù)、治療和研究阿爾茨海默病及其相關(guān)疾病的活性。因此，香草醛受體激動(dòng)劑及其組合物可用于制備抗阿爾茨海默病產(chǎn)品，優(yōu)選以本發(fā)明香草醛受體激動(dòng)劑為原料制備而成的藥物。
2、香草醛受體激動(dòng)劑及其組合物的使用方法與要求本發(fā)明香草醛受體激動(dòng)劑可以單獨(dú)或與其它活性組分聯(lián)合使用，包括用于制備用于預(yù)防、診斷、檢測(cè)、保護(hù)、治療和研究阿爾茨海默病及其相關(guān)疾病的產(chǎn)品，包括藥物、試劑、食品、飲料等，尤其是藥物。
在具體使用方面，本發(fā)明所述的香草醛受體激動(dòng)劑能夠單獨(dú)使用，還能夠與其他許多化學(xué)物質(zhì)一起使用。無論這些化學(xué)物質(zhì)是否具有生物活性或具有治療疾病的功能，包括輔助功能如協(xié)同放大作用、拮抗或緩解香草醛受體激動(dòng)劑的副作用等，這些化學(xué)物質(zhì)是包括醫(yī)藥學(xué)上可接受的載體、食品、天然產(chǎn)物、化學(xué)合成藥物或人類用藥等中的一種或多種；優(yōu)選包括醫(yī)藥學(xué)上可接受的載體或者食品等中的一種或多種；進(jìn)一步優(yōu)選醫(yī)藥學(xué)上可接受的載體。
本文使用的“醫(yī)藥學(xué)上可接受的載體”包括任何和所有的生理適用的溶劑、分散介質(zhì)、胞衣、抗菌劑和抗真菌劑、等滲劑或吸收延遲劑等中的一種或多種。醫(yī)藥學(xué)上可接受載體的例子包括一種或多種的水、鹽水、磷酸緩沖鹽水、葡萄糖、甘油或乙醇等及其組合物中的一種或多種。在許多情況下，在該組合物中最好包括等滲劑，例如，糖、諸如甘露醇、山梨醇、山梨醇的多元醇或氯化鈉等中的一種或多種。醫(yī)藥學(xué)上可接受載體還可以包含少量的輔助物質(zhì)，例如潤濕劑或乳化劑、防腐劑或緩沖液等中的一種或多種，它們?cè)鰪?qiáng)了該香草醛受體激動(dòng)劑的有效期或效力。
從具體的分類上看，所說的醫(yī)藥學(xué)上可接受的載體是指醫(yī)藥學(xué)領(lǐng)域常規(guī)的藥物載體，包括賦形劑，如淀粉或水等中的一種或多種；潤滑劑，如甘油或硬脂酸鎂等中的一種或多種；崩解劑，如微晶纖維素等；填充劑，如淀粉或乳糖等中的一種或多種；粘接劑，如預(yù)膠化淀粉、糊精、纖維素衍生物、藻酸鹽、明膠或聚乙烯吡咯烷酮等中的一種或多種；滲透壓調(diào)節(jié)劑，如葡萄糖、蔗糖、山梨醇或甘露醇等中的一種或多種；稀釋劑，如水等；崩解劑，如瓊脂、碳酸鈣或碳酸氫鈉等中的一種或多種；吸收促進(jìn)劑，如季銨化合物等；表面活性劑，如十六烷醇等；吸附載體，如高嶺土或皂粘土等中的一種或多種；潤滑劑，如滑石粉、硬脂酸鈣、硬脂酸鎂或聚乙二醇等中的一種或多種；另外，還可以在組合物中加入其它輔劑，如香味劑或甜味劑等中的一種或多種。
例如，將活性組分香草醛受體激動(dòng)劑溶解、混懸或乳化于適宜的水性溶劑中(例如，蒸餾水、生理鹽水或格林溶液等中的一種或多種)或油性溶劑中(例如，植物油例如橄欖油、芝麻油、棉籽油、玉米油或丙二醇等中的一種或多種)中，即可制得注射制劑，其中溶劑中可含有分散劑(例如，聚山梨酯80、聚氧乙烯硬化蓖麻油60、聚乙二醇、苯甲醇、氯代丁醇或苯酚等中的一種或多種)、滲透壓調(diào)節(jié)劑(例如，氯化鈉、甘油、D9-甘露糖、D-山梨醇或葡萄糖等中的一種或多種)。在這種情況下，如有必要，可加入添加劑，例如增溶劑(例如，水楊酸鈉或醋酸鈉等中的一種或多種)、穩(wěn)定劑(例如，人血清白蛋白等)、止痛劑(例如，苯甲醇等)等。
本發(fā)明所述及的香草醛受體激動(dòng)劑還可以以組合物的形式聯(lián)合使用，特別是與用其它化學(xué)物質(zhì)如藥物對(duì)動(dòng)物尤其是哺乳動(dòng)物包括人或其他動(dòng)物進(jìn)行治療所用的組合物或者是類似的組合物。所述哺乳動(dòng)物，包括人、小鼠、大鼠、羊、猴、牛、豬、馬、兔、犬、黑猩猩、狒狒、狨、獼猴或恒河猴等中的一種或多種，優(yōu)選人、小鼠、大鼠、猴、豬、兔或犬等中的一種或多種，進(jìn)一步優(yōu)選人、大鼠或猴等中的一種或多種。例如，可以將本發(fā)明香草醛受體激動(dòng)劑加入適于給與受治療者的藥用組合物中。通常，該藥用組合物包含本發(fā)明香草醛受體激動(dòng)劑和藥學(xué)上可接受的載體。
香草醛受體激動(dòng)劑的組合物特別是藥物組合物可以有各種形式，包括例如液體、半固體和固體等劑量形式中的一種或多種；其中所說的藥物組合物包括治療有效量的香草醛受體激動(dòng)劑為活性成分，以及一種或多種醫(yī)藥學(xué)上可接受的載體。
香草醛受體激動(dòng)劑的藥物組合物可以采用本領(lǐng)域公知的常規(guī)生產(chǎn)方法制成各種劑型，例如使活性成分與一種或多種載體混合，然后將其制成所需的劑型。所述的劑型包括片劑、膠囊劑、顆粒劑、混懸劑、乳劑、溶液劑、糖漿劑或注射劑等中的一種或多種，采取口服或注射(包括靜脈注射、靜脈滴注、肌肉注射或皮下注射等中的一種或多種)、粘膜透析等中的一種或多種給藥途徑進(jìn)行抗AD及其相關(guān)病癥的治療或科學(xué)研究。
藥物組合物優(yōu)選含有重量比為0.5％～99％的活性成分香草醛受體激動(dòng)劑，進(jìn)一步優(yōu)選含有重量比為1％～95％的活性成分香草醛受體激動(dòng)劑，最優(yōu)選含有重量比為5％～90％的活性成分香草醛受體激動(dòng)劑。
香草醛受體激動(dòng)劑的藥物組合物一般必須無菌且在生產(chǎn)儲(chǔ)存條件下穩(wěn)定?？梢詫⒃摻M合物配制成溶液、微乳液、分散液、脂質(zhì)體或其它適合于高藥物濃度的有序結(jié)構(gòu)。通過將所需量的該香草醛受體激動(dòng)劑與所需上述成分的一種或組合一起加入適當(dāng)?shù)娜軇┲胁⒔又M(jìn)行除菌過濾制備無菌注射液。一般而言，通過將該香草醛受體激動(dòng)劑加入含有基本分散介質(zhì)和所需的上述其它成分的無菌溶媒中制備分散液。在用于制備無菌注射液的無菌粉劑的情況下，推薦的制備方法是真空干燥和冷凍干燥劑。例如，通過諸如卵磷脂的包衣、在分散液的情況下通過保持所需顆粒大小和通過使用表面活性劑，可以保持溶液的適當(dāng)流動(dòng)性。通過在該組合物中包括延遲吸收的藥劑(例如單硬脂酸鹽或明膠)可以達(dá)到注射組合物的延長(zhǎng)吸收。
用于患者時(shí)，本發(fā)明所述的香草醛受體激動(dòng)劑劑量為5～20mg/kg·d，該劑量或用量通常根據(jù)患者或使用者的年齡和體重以及身體狀況或患者癥狀的狀況來決定。也就是說，以下的劑量范圍均是安全可靠的，香草醛受體激動(dòng)劑劑量為1～3600mg/d(以70kg體重計(jì)算)；口服1～2000mg，優(yōu)選50～1000mg；注射2～400mg，優(yōu)選50～200mg；膏劑(lotion)0.5～5％，優(yōu)選1～2％。
本發(fā)明香草醛受體激動(dòng)劑及其藥用組合物可以包括“治療有效量”或“預(yù)防有效量”的本發(fā)明香草醛受體激動(dòng)劑?！爸委熡行Я俊笔侵冈诒匾膭┝亢蜁r(shí)間下有效達(dá)到所需治療效果的量。香草醛受體激動(dòng)劑的治療有效量可以根據(jù)諸如個(gè)體的病況、年齡、性別和體重以及該香草醛受體激動(dòng)劑在該個(gè)體引起所需反應(yīng)的能力等因素而變化。治療有效量亦指該香草醛受體激動(dòng)劑的有益治療效果超過其任何毒性或有害效果的量。“預(yù)防有效量”是指在必要?jiǎng)┝亢蜁r(shí)間下有效達(dá)到所需預(yù)防效果的量。因?yàn)轭A(yù)防劑量用于患病前或疾病早期的受治療者，預(yù)防有效量通常小于治療有效量。本發(fā)明香草醛受體激動(dòng)劑的治療或預(yù)防有效量的典型的非限制性范圍是5～20mg/kg，更優(yōu)選為5～10mg/kg。應(yīng)注意，劑量值將根據(jù)欲減輕的疾病類型和嚴(yán)重性變化，也就是說用于患者時(shí)，本發(fā)明所述的香草醛受體激動(dòng)劑劑量或用量，通常根據(jù)患者或使用者的年齡和體重以及身體狀況或患者癥狀的狀況來決定。另外，應(yīng)理解，對(duì)于任何特定受治療者，應(yīng)隨著時(shí)間根據(jù)個(gè)體需要和給與或監(jiān)督給與所述組合物的人的專業(yè)判斷調(diào)整特定劑量制度，并且本文設(shè)定的劑量范圍僅為例證性的，并不會(huì)限制要求保護(hù)的組合物的范圍或?qū)嵺`。
也就是說，需要根據(jù)治療的對(duì)象、給藥途徑、所治療疾病和狀況等，變化本發(fā)明香草醛受體激動(dòng)劑的每次和/或每日的劑量或用量。例如，經(jīng)靜脈給予哺乳動(dòng)物，尤其是成年人(如體重60kg)，所述香草醛受體激動(dòng)劑的單劑量約為5～10mg，優(yōu)選約10mg，優(yōu)選每日給藥1～3次。可以調(diào)整劑量單位，以提拱最佳所需反應(yīng)(例如，治療或預(yù)防應(yīng)答)。例如，可以單次大劑量給藥，可以在一段時(shí)間內(nèi)給予幾個(gè)均分量或根據(jù)治療情況的迫切性按比例降低或增加劑量。配制易于給藥和劑量統(tǒng)一的劑量單位形式的非腸道組合物尤其有利。本文使用的劑量單位形式，指適于欲治療的哺乳動(dòng)物受治療者的單元?jiǎng)┝康奈锢矸蛛x單位；每個(gè)單位含有預(yù)定量的計(jì)算用于與所需藥用載體一同產(chǎn)生所需治療效果的活性物香草醛受體激動(dòng)劑。本發(fā)明的劑量單位形式的規(guī)格，由以下確定并直接取決于以下(a)該香草醛受體激動(dòng)劑的獨(dú)特特征和欲達(dá)到的特定治療或預(yù)防效果，和(b)在混合這種用于治療個(gè)體敏感性香草醛受體激動(dòng)劑的技術(shù)中的內(nèi)在限制。
3、香草醛受體激動(dòng)劑及其組合物的藥物劑型和給藥途徑本發(fā)明所述的香草醛受體激動(dòng)劑及其組合物制備的用于預(yù)防、診斷、檢測(cè)、保護(hù)、治療和研究阿爾茨海默病及其相關(guān)疾病的產(chǎn)品，其中按照飲料、食品技術(shù)領(lǐng)域的要求制備的產(chǎn)品能夠用于預(yù)防、保護(hù)和治療阿爾茨海默病及其相關(guān)疾??；按照醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域的要求制備的產(chǎn)品能夠用于患者的治療或保健，既能夠單獨(dú)直接用于制備治療或保健的藥物，也能夠與許多化學(xué)物質(zhì)進(jìn)行混合或組合，直接或間接用于制備治療或保健的藥物。這里所述的化學(xué)物質(zhì)與本節(jié)上文中所述的相同。
在本發(fā)明中，所需物料包括本發(fā)明的原料、上述配套使用的化學(xué)物質(zhì)等，均應(yīng)根據(jù)實(shí)際情況和需要，采用食品級(jí)或藥用級(jí)的物料。
本發(fā)明所述的香草醛受體激動(dòng)劑及其組合物，可以用本領(lǐng)域已知的各種方法給藥，盡管在許多治療用途中推薦的給藥途徑/給藥方式是噴霧劑或口服給藥。但是，技術(shù)人員會(huì)理解給藥途徑/給藥方式隨所需的結(jié)果而變化。在某些具體實(shí)施中，該活性化合物可以與保護(hù)該化合物免于快速釋放的載體一同制備例如空釋制劑，包括移植物傳遞系統(tǒng)、透皮貼傳遞系統(tǒng)或微囊傳遞系統(tǒng)等中的一種或多種。此外，還可以使用生物可降解的、生物相容性聚合物，例如乙烯乙酸乙酯、聚酐、聚羥基乙酸、膠原蛋白、聚正酯或聚乳酸等中的一種或多種。制備這種制劑的許多方法均已申請(qǐng)專利或一般為本領(lǐng)域技術(shù)人員所知(參見例如Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems，J.R.Robinson編輯，Marcel Dekker，Inc.，紐約，1978)。
本發(fā)明所述的香草醛受體激動(dòng)劑及其組合物，通常通過口服、鼻吸入、直腸或腸胃外給藥等中的一種或多種方式，施用于需要這種治療的患者。
用于口服時(shí)，可將其制成常規(guī)的固體制劑如片劑、粉劑、粒劑或膠囊等中的一種或多種。在實(shí)施時(shí)，本發(fā)明香草醛受體激動(dòng)劑可以與例如惰性稀釋劑或可同化的食用載體一同口服。該香草醛受體激動(dòng)劑(和共它成分，如果需要)亦可以包于硬或軟殼明膠膠囊、壓制成片劑或直接加入受治療者的膳食中。關(guān)于口服治療給藥，可以將所述香草醛受體激動(dòng)劑與賦形劑一起加入并以可食片劑、頰含片劑、錠劑、膠囊、懸液、糖漿或糯米紙囊劑等等中的一種或多種形式使用。
為了以非腸道給藥之外給予本發(fā)明香草醛受體激動(dòng)劑，可能需要用防止其失活的材料對(duì)該香草醛受體激動(dòng)劑包衣或與該香草醛受體激動(dòng)劑一同給予。亦可以將補(bǔ)充的活性化合物加入該組合物中。在具體實(shí)施時(shí)，將本發(fā)明香草醛受體激動(dòng)劑與一種或多種可以用于治療疾病的其它治療藥物共配制和/或共給予。這種聯(lián)合使用，可以優(yōu)越地利用較低劑量的該給予的治療藥物，因此避免可能的毒性或與各種單一療法相關(guān)的并發(fā)癥。
制成液體制劑如水劑、油懸浮劑或其它液體制劑中的一種或多種，如糖漿或酏劑等中的一種或多種；用于腸胃外給藥時(shí)，可將其制成注射用的溶液劑、水劑或油性懸浮劑等中的一種或多種。
以上所述的使用形式中，優(yōu)選的形式是片劑、包衣片劑、膠囊、栓劑或注射劑等中的一種或多種，進(jìn)一步優(yōu)選片劑、膠囊或注射劑等中的一種或多種，特別優(yōu)選注射劑。
綜上所述，本發(fā)明香草醛受體激動(dòng)劑及其組合物可用于預(yù)防、診斷、檢測(cè)、保護(hù)、治療和研究阿爾茨海默病及其相關(guān)疾病的產(chǎn)品，優(yōu)選藥物和食品，進(jìn)一步優(yōu)選藥物。
(四)技術(shù)特長(zhǎng)本發(fā)明對(duì)香草醛受體激動(dòng)劑拓展了新的醫(yī)藥用途，也為預(yù)防、診斷、檢測(cè)、保護(hù)、治療和研究阿爾茨海默病及其相關(guān)疾病提供了一種新的藥物來源。本發(fā)明的香草醛受體激動(dòng)劑安全低毒，藥理作用較強(qiáng)，其原料來源廣泛、價(jià)廉，制備工藝簡(jiǎn)單，可用于制備預(yù)防、診斷、檢測(cè)、保護(hù)、治療和研究阿爾茨海默病及其相關(guān)疾病的產(chǎn)品。
本發(fā)明有針對(duì)性地研究香草醛受體激動(dòng)劑，香草醛受體激動(dòng)劑藥理作用較強(qiáng)，其原料來源豐富，制備工藝簡(jiǎn)單，得率高；且使用安全，一物多用，最大限度地發(fā)揮了作用，而且使用范圍特別廣，因此容易推廣應(yīng)用，能夠在較短的時(shí)間內(nèi)產(chǎn)生巨大的社會(huì)效益和經(jīng)濟(jì)效益。
香草醛受體激動(dòng)劑在胃腸道生物轉(zhuǎn)化中的活性形式，直接使用香草醛受體激動(dòng)劑，藥物的生物利用度高，可以準(zhǔn)確控制用藥劑量。香草醛受體激動(dòng)劑性質(zhì)穩(wěn)定，使用制備的制劑質(zhì)量穩(wěn)定。
此外，香草醛受體激動(dòng)劑化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，預(yù)防、診斷、檢測(cè)、保護(hù)、治療和研究阿爾茨海默病及其相關(guān)疾病的效果明顯，故其更適于預(yù)防、診斷、檢測(cè)、保護(hù)、治療和研究阿爾茨海默病及其相關(guān)疾病產(chǎn)品的工業(yè)化生產(chǎn)。
總之，本發(fā)明積極適應(yīng)了現(xiàn)代醫(yī)療和科研領(lǐng)域的工作需要和人性化服務(wù)的需要，是用于預(yù)防、診斷、檢測(cè)、保護(hù)、治療和研究阿爾茨海默病及其相關(guān)疾病等方面的安全原料。


圖1表示在SY5Y/VR1/SWAPP細(xì)胞中，用FLIPR分析方法測(cè)定辣椒素活性；圖中上部的英文標(biāo)題是SY5Y-hVR1和CHO/hVR1/r VR1細(xì)胞株的辣椒素劑量-反應(yīng)關(guān)系曲線；圖中的縱坐標(biāo)是相對(duì)熒光單位；圖中的橫坐標(biāo)是辣椒素對(duì)數(shù)濃度；圖2表示用ELISA檢測(cè)辣椒素對(duì)Aβ1-42生成的影響；圖中上部的英文標(biāo)題是VR1離子通道的激活導(dǎo)致Aβ1-42生成的降低；圖中的縱坐標(biāo)是Aβ1-42濃度；圖中的橫坐標(biāo)是辣椒素濃度；圖3表示定量西方墨點(diǎn)(Western Blot)法測(cè)定PKCε激酶活性。
圖中上部的英文標(biāo)題是VR1通道的激活導(dǎo)致PKC活性增強(qiáng)；圖中的縱坐標(biāo)是PKC活性；
圖中的橫坐標(biāo)是辣椒素濃度。
具體實(shí)施例方式
本發(fā)明研究了現(xiàn)有的香草醛受體激動(dòng)劑的新的藥理作用和新的用途，提供了一種能夠用于制備阿爾茨海默病預(yù)防、診斷、保護(hù)和治療等產(chǎn)品的原料，便于醫(yī)療行業(yè)和相關(guān)行業(yè)如食品、飲料等領(lǐng)域的安全使用。
(一)現(xiàn)有的香草醛及其衍生物的具體實(shí)例所述的辣椒素是典型的香草醛受體激動(dòng)劑，微摩爾的辣椒素即可抑制VR1，結(jié)構(gòu)式如下 所述的辣椒素族化合物及其衍生物是一組構(gòu)效關(guān)系與辣椒素相似的化合物，即含有香草酰基(即4-羥基-3-甲氧芐基-香草基)的辣椒素族化合物及其衍生物，包括二氫辣椒素(dihydrocapsaicin)、降氫辣椒素(norhydrocapsaicin)、高辣椒素(homocapsaicin)、高二氫辣椒素(homodihydrocapsaicin)、homodihydrocapsaicin I、norhydrocapsaicin、降二氫辣椒素(nordihydrocapsaicin)、順辣椒素(civamide，或稱cis-capsaicin)、nonivamide、olvanil(簡(jiǎn)稱NE-19550)、NE-21610、N-oleyl-homovanillamide(簡(jiǎn)稱NE-28345)、Dong-APharmaceutical(簡(jiǎn)稱DA-5018)、樹脂毒素等。其中最具潛力的辣椒素族化合物是樹脂毒素等化合物中的一種或多種。
含香草基的香草醛受體激動(dòng)劑的結(jié)構(gòu)式如下 Capsaicin
Dihydrocapsaicin Homocapsaicin Homodihydrocapsaicin Norcapsaicin Nordihydrocapsaicin
Nonivamide Resiniferatoxin (all Z)-N-(4-Hydroxyphenyl)-5，8，11，14-eicosatetraenamideAM 404
N-[(4-Hydroxy-3-methoxyphenyl)methyl]-5Z，8Z，11Z，14Z-eicosatetraeamideArvanil DA-5018 N-OleoyldopamineOLDA
NE-19550N-vanillyloleamide不含香草基的香草醛受體激動(dòng)劑的結(jié)構(gòu)式如下 N-(2-Hydroxyethyl)-5，8，11，14-eicosatetraenamideAnandamide
Phorbol 12-phenylacetatePPAHV(二)辣椒素衍生物的合成與設(shè)計(jì)1、部分化合物的合成方法香草醛受體激動(dòng)劑的合成方法A羧酸被溶解在2～10倍的草酰氯中，加兩滴DMF(N，N-二甲基甲酰胺)，攪拌3h或直到停止冒氣泡。多余的草酰氯可減壓蒸除，但通常不需進(jìn)一步純化。鹽酸香草胺被用DMF(或THF，四氫呋喃)溶解，加入2倍的5N NaOH，混合物被攪拌30分鐘后冷卻到0℃，滴加1-1.2倍的酰氯的醚或氯仿溶液，室溫?cái)嚢?～24h。反應(yīng)液被倒入大約是10倍DMF體積的水中(用THF作溶劑時(shí)，它被蒸發(fā)掉后加入醚)。分層后，用醚或氯仿萃取水層?；旌陷腿∥镆来斡?N HCl，飽和的NaHCO3，水和鹽水洗，然后用MgSO4干燥，蒸干。粗產(chǎn)品用硅膠柱色譜純化。
香草醛受體激動(dòng)劑的合成方法B4-乙酰氧-3-甲氧基苯乙酸和3～12倍的SOCl2被回流直到停止冒氣泡。多余的SOCl2被蒸干。加入苯并蒸干除去微量的SOCl2。產(chǎn)生的酰氯用大約20ml/10mmol的苯溶解，并冷卻到0℃，滴加2.0倍的胺的醚溶液或胺的氯仿溶液中(大約是所用苯體積的一半)。反應(yīng)在室溫下攪拌3h以上。沉淀物過濾，以醚洗滌。濾液用水和鹽水洗滌，用MgSO4干燥。真空抽干溶劑，就得到?；陌被衔?。用25ml/10mmol的MeOH溶解氨基化合物，并加入1.2～2.0倍的5N NaOH?；旌衔锸覝?cái)嚢?h，溶劑被蒸發(fā)。殘?jiān)?N NaOH溶解，用醚萃取，冷卻后用HCl酸化，并用醚萃取三次?；旌系妮腿∫河肏2O和鹽水洗后用MgSO4干燥。真空除去溶劑得到粗產(chǎn)品。
香草醛受體激動(dòng)劑的合成方法C1當(dāng)量胺和1～1.2當(dāng)量乙基香草醛被混合且加熱到170℃以使產(chǎn)生的EtOH揮發(fā)掉。3h之后，用弱真空蒸除剩余的EtOH。反應(yīng)液冷卻，用醚稀釋，依次用水、1NHCl、NaHCO3、鹽水洗滌，然后用MgSO4干燥。蒸去溶劑得到粗產(chǎn)品。
4-乙酰氧-3-甲氧基苯乙酸。高香草酸(30g，0.17mol)，醋酸酐(75ml，0.79mol)和2滴濃H2SO4混合在室溫下攪拌過夜，反應(yīng)液倒入1.8L H2O中，攪拌3h。沉淀過濾，濾液體積濃縮至大約400毫升，濾集所有的沉淀，熱水中重結(jié)晶，過濾，干燥得到29.4g(79％)產(chǎn)品，mp 138～139℃(lit.*mp 139～140℃)。
2、本發(fā)明合成的12個(gè)香草醛受體激動(dòng)劑
下面圖示了十二個(gè)化合物的合成方法。
化合物1和2的合成將3-甲氧基-4-羥基苯甲酸或3-甲氧基-4-羥基苯乙酸溶解在二甲基金剛烷基-2-胺中，加入HATU，加熱到180℃，反應(yīng)3小時(shí)，TLC檢測(cè)反應(yīng)完全。反應(yīng)剩余物依次用1N的鹽酸，飽和碳酸氫鈉溶液，和水洗滌。粗產(chǎn)品用柱層析純化。
化合物3，4的合成將3-甲氧基-4-羥基苯甲酸或3-甲氧基-4-羥基苯乙酸和金剛烷基-2-醇混合在一起，慢慢加入濃硫酸，加熱到120℃，反應(yīng)2小時(shí)，TLC檢測(cè)反應(yīng)完全。反應(yīng)剩余物依次用1N的鹽酸，飽和碳酸氫鈉溶液，和水洗滌。粗產(chǎn)品用柱層析純化。
化合物5，6的合成將3-甲氧基-4-羥基苯甲酸或3-甲氧基-4-羥基苯乙酸和(5-乙基-1-氮雜-二環(huán)[2.2.2]-辛-2-基)-喹啉-4-基-甲醇混合在一起，慢慢加入濃硫酸，加熱到120℃，反應(yīng)2小時(shí)，TLC檢測(cè)反應(yīng)完全。反應(yīng)剩余物依次用飽和碳酸氫鈉溶液和水洗滌。粗產(chǎn)品用柱層析純化化合物7的合成將3-甲氧基-4-羥基苯甲酸和Boc保護(hù)的2-溴乙胺，在三乙胺中室溫反應(yīng)3小時(shí)，之后旋蒸除去溶劑。再加入二甲基金剛烷基-2-胺和HATU，在120℃攪拌反應(yīng)過夜。加水沖稀，用乙酸乙酯萃取，干燥，旋干得到粗品。粗品溶于二氧六環(huán)中，加鹽酸攪拌反應(yīng)。反應(yīng)結(jié)束后，加水稀釋，再用乙醚萃取，有機(jī)相分別用碳酸氫鈉溶液，飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥。旋干得到的粗產(chǎn)品用95％乙醇重結(jié)晶。
化合物8的合成將3-甲氧基-4-羥基苯乙酸和Boc保護(hù)的2-溴乙胺，在三乙胺中室溫反應(yīng)3小時(shí)，之后旋蒸除去溶劑。再加入二甲基金剛烷基-2-胺和HATU，在120℃攪拌反應(yīng)過夜。加水沖稀，用乙酸乙酯萃取，干燥，旋干得到粗品。粗品溶于二氧六環(huán)中，加鹽酸攪拌反應(yīng)。反應(yīng)結(jié)束后，加水稀釋，再用乙醚萃取，有機(jī)相分別用碳酸氫鈉溶液，飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥。旋干得到的粗產(chǎn)品用95％乙醇重結(jié)晶。
化合物9的合成將3-甲氧基-4-羥基苯甲胺和金剛烷基-2-羧酸溶于乙腈中，加入DCC(二環(huán)己基碳二酰亞胺)，攪拌反應(yīng)1小時(shí)。加水沖稀，用乙酸乙酯萃取，萃取液分別用稀鹽酸，飽和碳酸氫鈉溶液和水洗滌，無水硫酸鈉干燥。柱層析純化，得到化合物9。
化合物10的合成將3-甲氧基-4-羥基苯甲胺與鄰笨二甲酸酐在乙酸下反應(yīng)，攪拌反應(yīng)1小時(shí)。加水沖稀，用乙酸乙酯萃取，萃取液分別用稀鹽酸，飽和碳酸氫鈉溶液和水洗滌，無水硫酸鈉干燥。柱層析純化，，可得到化合物10。
化合物11的合成將3-甲氧基-4-羥基苯甲胺和1-甲基-哌嗪酸溶于乙腈中，加入DCC(二環(huán)己基碳二酰亞胺)，攪拌反應(yīng)1小時(shí)。加水沖稀，用乙酸乙酯萃取，萃取液分別用稀鹽酸，飽和碳酸氫鈉溶液和水洗滌，無水硫酸鈉干燥。柱層析純化，得到化合物11。
化合物12的合成將3-甲氧基-4-羥基苯甲胺和1-苯基-哌嗪酸溶于乙腈中，加入DCC(二環(huán)己基碳二酰亞胺)，攪拌反應(yīng)1小時(shí)。加水沖稀，用乙酸乙酯萃取，萃取液分別用稀鹽酸，飽和碳酸氫鈉溶液和水洗滌，無水硫酸鈉干燥。柱層析純化，得到化合物12。
(三)應(yīng)用體外檢測(cè)評(píng)價(jià)TRPV1激動(dòng)劑對(duì)VR1離子通道的潛在激活引起Aβ1-42生成量的降低作用本發(fā)明已測(cè)評(píng)一組已有的TRPV1激動(dòng)劑，包括OLDA，Anadamide，NE-28345，DA-5018，NE-19550，Olvanil，Resinifratoxin，Arvanil，AM404，PPAHV，NADA；這些試劑均從供應(yīng)商處購得或從可靠團(tuán)體處得到。本發(fā)明測(cè)試了合成的新化合物。
本發(fā)明假設(shè)這些化合物可以通過激活TRPV1產(chǎn)生相似的降低Aβ1-42的作用。在初步研究中通過體外實(shí)驗(yàn)測(cè)評(píng)這些化合物以建立構(gòu)效關(guān)系，并為后續(xù)的研究打下基礎(chǔ)。體外實(shí)驗(yàn)應(yīng)用來源于人神經(jīng)母細(xì)胞的細(xì)胞系SH-SY5Y，使用人APP695swe和人TRPV1穩(wěn)定轉(zhuǎn)染該細(xì)胞系。該細(xì)胞系能產(chǎn)生大量的Aβ和Aβ1-42，有高水平的受TRPV1調(diào)節(jié)的Ca2+活動(dòng)窗口，表達(dá)高水平的PKCε。實(shí)驗(yàn)證明，香草醛受體激動(dòng)劑能減少Aβ的生產(chǎn)。
1、生物實(shí)驗(yàn)細(xì)胞系的建立它是從人神經(jīng)母細(xì)胞獲得的經(jīng)TRPV1和APP65swe穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的SH-SY5Y細(xì)胞(SY5Y/VR1/SWAPP)。
(1)FLIPR分析TRPV1(VR1)激動(dòng)劑對(duì)VR1的效能計(jì)劃使用熒光成像微板測(cè)定方法(FLIPR)測(cè)評(píng)已有的VR1激動(dòng)劑和設(shè)計(jì)的辣椒素衍生物的效能(EC50值)。
FLIPR分析在96孔的PLIRP平板(無鍍層清潔底板Corning#3603)上進(jìn)行。6萬個(gè)SY5Y/VR1/SWAPP細(xì)胞在FLIPR分析前24小時(shí)預(yù)先在FLIPR板的各個(gè)孔上點(diǎn)孔。FLIPR板孔加入染色上樣緩沖液(50μl SY5Y培養(yǎng)基/2.5μM丙磺舒，5μM Fluo-3，0.1％伯洛尼克)，37℃下放置1小時(shí)15分鐘。每個(gè)板孔用75μL的清洗緩沖液(HBSS，含有20mM HEPES，2.5mM丙磺舒)洗滌兩次。每個(gè)化合物稀釋成十一個(gè)不同濃度系列的分析緩沖液(清洗緩沖液+0.25％BSA)，濃度范圍由100μM到0.001μM。平板裝入FLIPR分析機(jī)并加入70μl不同濃度的化合物。FLIPR信號(hào)以統(tǒng)計(jì)格式捕獲和輸出。數(shù)據(jù)用Prism Graphpad分析方法計(jì)算EC50值。
(2)應(yīng)用ELISA分析TRPV1激動(dòng)劑對(duì)Aβ生成的影響使用夾心ELISA法檢測(cè)Aβ和Aβ1-42的總量。簡(jiǎn)述如下，用抽樣緩沖液(0.6％BSA，8mM Na2HPO4*7H2O，1.5mM NaH2PO4*H2O，145mM NaCl，0.05％乙基汞硫代水楊酸鈉，0.05％Triton X-405)稀釋細(xì)胞樣本和Aβ1-42標(biāo)準(zhǔn)品(0～1000pg/ml)(Bachem，Torrence，CA)，然后分別裝入immulon-4微板上(CMS，Chicago，IL)，總Aβ蛋白涂上15μg/ml 266捕獲抗體(用于結(jié)合人Aβ13～28殘基)，Aβ1-42涂上5μg/ml 21F12抗體(用于結(jié)合人Aβ33～42殘基)，并在4℃下培養(yǎng)過夜。稀釋后的樣品加載到1.2μM Durapore 96孔滴定板(Millipore)上，并用多功能真空多層過濾系統(tǒng)真空抽濾。上清液收集到96孔的聚丙烯微板上，轉(zhuǎn)移100μl樣品到96孔immulon-4微板上并涂布捕獲抗體。平板在4℃下培養(yǎng)過夜。翌日，用含0.05％吐溫-20、pH 7.4的PBS洗滌平板(含細(xì)胞或組織樣本)，隨后在室溫下同3D6生物素化的指示抗體(Harlan，Madison，WI)孵化一小時(shí)，該抗體特異性抗Aβ1-5(1∶2000稀釋在0.25％酪蛋白緩沖液中)。重復(fù)上述步驟清洗平板，然后加入馬辣根過氧化物酶(HRP)(1∶1000的0.25％酪蛋白緩沖液稀釋液，室溫下培育一小時(shí)。經(jīng)過最后一系列洗滌，室溫下加入TMB底物(Pierce，Rockford，IL)放置15分鐘。加入2N的硫酸終止酶促反應(yīng)。反應(yīng)產(chǎn)物用450nm和650nm下的吸光度差值定量。
(3)定量西方墨點(diǎn)法測(cè)定PKCε激酶活性為了測(cè)定PKCε激酶在用化合物處理過的細(xì)胞中的活性，SY5Y/VR1/SWAPP細(xì)胞用RDα(一種獨(dú)特的室內(nèi)培養(yǎng)的Pan-PKC底物表達(dá)菌)短暫地轉(zhuǎn)染。使用室內(nèi)培養(yǎng)的抗磷光體-RDα抗體通過定量西方墨點(diǎn)法測(cè)定PKCε激酶活力。得到的墨點(diǎn)用光密度法分析。光密度法所得數(shù)據(jù)用從平行載入墨點(diǎn)的β-肌動(dòng)蛋白光密度分析歸一化。
用RDα轉(zhuǎn)染的SY5Y/VR1/SWAPP細(xì)胞用不同濃度設(shè)計(jì)的化合物處理。研究使用細(xì)胞用刮刀收集細(xì)胞，用1×PBS漂洗一次。把細(xì)胞小球重新懸浮在溶細(xì)胞緩沖液(10mM K2HPO4，pH 7.2/1mM EDTA/5mM EGTA/10mM MgCl2/50mMβ-甘油磷酸/1mM Na3VO4/2mM DTT/1％Triton X-100/1μM Microcystin/COMPLETE蛋白酶抑制劑(Roche))中冰浴30分鐘以獲得溶菌液。所有的溶菌液用微量離心機(jī)14000rpm，4℃離心30分鐘，分出上清液。按照儀器使用說明，采用BCA蛋白質(zhì)分析儀(PIERCE)測(cè)定上清液的所有蛋白質(zhì)濃度。每個(gè)樣品的所有蛋白質(zhì)中取出30μg在10％NuPAGEBis-Tris凝膠中分離后使用Hoefer Transblotter(Semiphor，San Francisco，CA)轉(zhuǎn)移到0.2μm的硝酸纖維素膜上(Novex，San Diego，CA)。硝酸纖維素膜用TST(10mMTris-HCl，150mM NaCl，0.1％吐溫-20，pH 7.5)洗滌兩次，每次5分鐘，用5％BSA-TST在室溫下振蕩平板(Lab-Line)上阻斷1小時(shí)，然后分別與原始抗體在4℃下培養(yǎng)過夜。翌日，用TST洗滌膜3次，每次5分鐘。HRP結(jié)合的二級(jí)抗體用5％牛奶-TST稀釋成1∶2000后與膜在室溫下振蕩培養(yǎng)1小時(shí)。最后，采用上述方法洗滌膜后用PBS洗滌5分鐘。膜上的蛋白質(zhì)分別用化學(xué)發(fā)光實(shí)景方法(Amersham Life Science)檢測(cè)。
2、藥理實(shí)驗(yàn)使用7周大的雌性Balb/c小鼠。飼養(yǎng)小鼠的房間將保持溫度22±1℃，相對(duì)濕度60±10％，12小時(shí)光照，12小時(shí)無光照。采用氯胺酮和甲苯噻嗪將小鼠處以安樂死。
(1)小鼠體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)研究。0.1ml香草醛溶液(溶解于5％DMSO的PBS溶液)按照10mg/kg的劑量靜脈給藥于小鼠。快速靜脈注射時(shí)，小鼠可以耐受這些DMSO。每個(gè)時(shí)間點(diǎn)使用三只小鼠進(jìn)行藥代動(dòng)力學(xué)研究。靜脈注射0，2，5，10，15，30，45分鐘和1，2，4，6，8，24小時(shí)后，采用后眼眶靜脈穿刺術(shù)從眼靜脈叢抽取血樣(～0.5ml)。30分鐘，4和8小時(shí)后，每次頸錯(cuò)位處死3只小鼠，取出它們的大腦。血樣取出后加入肝素，7000rpm，5分鐘，冷凍離心后分離出血漿。大腦加入3倍體積的水后勻漿。從小鼠獲得的血漿和大腦勻漿樣品用液液萃取法提取后用HPLC或LC/MS/MS方法分析測(cè)定血漿香草醛濃度，用稀釋0.1ml含有不同濃度香草醛的血漿樣品制備含有0～2000ng/ml受試化合物的標(biāo)準(zhǔn)溶液。
(2)藥代動(dòng)力學(xué)分析。用WinNonlin Standard Version 2.0(Pharsight，Inc.，Mountain View，CA)的藥代動(dòng)力學(xué)軟件建立藥代動(dòng)力學(xué)模型和參數(shù)計(jì)算方法。在最低加權(quán)平方殘差，最低Schwartz標(biāo)準(zhǔn)(簡(jiǎn)稱SC)，最低Akaike’s信息標(biāo)準(zhǔn)(簡(jiǎn)稱AIC)值，適合參數(shù)的最低Ses和殘差的離散性基礎(chǔ)上選擇適合的模型。對(duì)血漿-濃度-時(shí)間曲線的最終相進(jìn)行線性回歸分析計(jì)算得t1/2(消除半衰期)。AUC除以劑量得到系統(tǒng)清除率(簡(jiǎn)稱CL)。還將計(jì)算大腦和血漿中藥物濃度的比例。
(3)代謝研究。肝微粒體中香草醛的代謝。小鼠，大鼠，狗，猴和人的肝微粒體將從Vitro Technologies或Gentese(Woburn，MA)購得。所有培養(yǎng)液含有最終濃度(200μl)的下述成分1×PBS，微粒體(1mg/ml)，葡萄糖6-磷酸(10mM)，葡萄糖6-磷酸脫氫酶(2單位/ml)，MgCl2(5mM)?；旌衔镌?7℃預(yù)培養(yǎng)5分鐘。加入不同濃度的VR1激動(dòng)劑啟動(dòng)代謝過程。培養(yǎng)10分鐘后，加入800μl丙酮終止反應(yīng)，用渦旋裝置徹底混和。按照下述方法用HPLC提取和分離混合物。在微粒體中加入SKF-525A測(cè)定細(xì)胞色素P450對(duì)香草醛代謝的貢獻(xiàn)。為了測(cè)定非酶促代謝微粒體將不在培養(yǎng)液中培養(yǎng)，消除酶的來源；培養(yǎng)液中清除NADPH生成系統(tǒng)，消除酶的輔助因子；90℃加入微粒體5分鐘，使之失活。上述培養(yǎng)方法也用于研究肝胞質(zhì)溶膠的影響。香草醛母體的減少可以用HPLC或LC/MS/MS檢測(cè)。代謝產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)用LC/MS/MS確定。
3、藥劑實(shí)驗(yàn)本發(fā)明制備粉針劑一般采用常規(guī)的冷凍干燥法，以水作為溶媒，其步驟為取香草醛受體激動(dòng)劑，加入賦形劑，加水溶解，加入活性炭，過濾除菌，灌裝，半軋塞，冷凍干燥，壓塞軋蓋即可。所用的賦形劑選自甘露醇、水解明膠、葡萄糖、乳糖、右旋糖苷等中的一種或幾種。每瓶含香草醛受體激動(dòng)劑10～100mg。
本發(fā)明制備粉針劑也可采用噴霧干燥法，以水作為溶媒，其步驟為取香草醛受體激動(dòng)劑，加或不加賦形劑(賦形劑同上)，加水溶解，加入活性炭，過濾除菌，噴霧干燥，無菌分裝，壓塞軋蓋即可。每瓶含香草醛受體激動(dòng)劑10～100mg。
本發(fā)明制備小針劑時(shí)，以注射用水作為溶媒配制即可，也可加適量輔料，輔料選自乙醇、丙二醇、甘油、聚乙二醇、苯甲酸芐酯、二甲基乙酰胺中的一種或幾種。每支含香草醛受體激動(dòng)劑10～100mg。
本發(fā)明制備葡萄糖輸液或氯化鈉輸液，以注射用水作為溶媒，加入適量葡萄糖或氯化鈉配制即可，也可加適量輔料，輔料選自乙醇、丙二醇、甘油、聚乙二醇、苯甲酸芐酯、二甲基乙酰胺中的一種或幾種。每瓶含香草醛受體激動(dòng)劑10～100mg。
本發(fā)明制備片劑、膠囊、顆粒劑、口服液等口服制劑，輔料可以是乳糖、淀粉、糊精、硬脂酸鹽等，按常規(guī)技術(shù)制備。
在本發(fā)明中，以上所述的具體實(shí)施方式
和以下所述的實(shí)例均是為了更好地闡述本發(fā)明，并不是用來限制發(fā)明的范圍。
下面通過實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作詳細(xì)描述。
實(shí)施例1、FLIPR分析方法測(cè)定辣椒素對(duì)VR1的效能首先在穩(wěn)定轉(zhuǎn)染TRPV1和APP695swe(SY5Y/VR1/SWAPP)的SHSY5Y細(xì)胞這一已建立的重要的來自于人成神經(jīng)細(xì)胞瘤細(xì)胞系中采用熒光成像微板測(cè)量分析方法(FLIPR)測(cè)評(píng)辣椒素對(duì)于VR1的效能(EC50值，圖1)。在SY5Y-hVR1和CHO/hVR1/rVR1細(xì)胞系中，辣椒素顯示出活性對(duì)劑量的依賴性。
如圖1(在SY5Y/VR1/SWAPP細(xì)胞中，用FLIPR分析方法)測(cè)定測(cè)定辣椒素活性)所示，藍(lán)色、綠色、紅色曲線分別表示SY5Y-hVR1，CHO/hVR1和CHO/rVR1細(xì)胞對(duì)不同濃度辣椒素的反應(yīng)。CHO/hVR1和CHO/rVR1細(xì)胞系在此作為對(duì)照。表格顯示從上述劑量依賴性實(shí)驗(yàn)測(cè)量的數(shù)據(jù)計(jì)算的辣椒素在三種細(xì)胞株中的EC50值。FLIPR分析在96孔PLIRP板(無鍍層清潔底板Coming#3603)上進(jìn)行。6萬個(gè)SY5Y/VR11/SWAPP細(xì)胞在FLIPR分析前24小時(shí)預(yù)先在FLIPR板的各個(gè)孔上點(diǎn)孔。FLIPR板孔加入染色上樣緩沖液(50μlSY5Y培養(yǎng)基/2.5μM丙磺舒，5μM Fluo-3，0.1％伯洛尼克)，37℃下放置1小時(shí)15分鐘。每個(gè)板孔用75μL的清洗緩沖液(HBSS，含有20mM HEPES，2.5mM丙磺舒)洗滌兩次。每個(gè)化合物稀釋成十一個(gè)不同濃度系列的分析緩沖液(清洗緩沖液+0.25％BSA)，濃度范圍由100μM到0.001μM。平板裝入FLIPR分析機(jī)并加入75μl不同濃度的化合物。FLIPR信號(hào)以統(tǒng)計(jì)格式捕獲和輸出。數(shù)據(jù)用Prism Graphpad分析方法計(jì)算EC50值。
實(shí)施例2、用ELISA檢測(cè)辣椒素對(duì)Aβ1-42生成的影響以下的夾心ELISA(酶連免疫標(biāo)記試驗(yàn))顯示辣椒素引起的VR1通道活化導(dǎo)致Aβ1-42生成減少(圖2用ELISA檢測(cè)辣椒素對(duì)Aβ1-42生成的影響)。用RD轉(zhuǎn)染SY5Y/VR1/SWAPP細(xì)胞48hr后，用PBS洗細(xì)胞兩次，加入新鮮培養(yǎng)基后，在培養(yǎng)基中加入不同濃度的辣椒素(如圖2所示)。兩小時(shí)后，收集培養(yǎng)基，用ELISA方法檢測(cè)Aβ；收集細(xì)胞，用于后面PKCε激酶活性的測(cè)定。如圖2所示，0.1μM或更高濃度的辣椒素能大大減少Aβ1-42的生成。
使用夾心ELISA法定量Aβ和Aβ1-42。簡(jiǎn)述如下，用抽樣緩沖液(0.6％BSA，8mMNa2HPO4*7H2O，1.5mM NaH2PO4*H2O，145mM NaCl，0.05％乙基汞硫代水楊酸鈉，0.05％Triton X-405)稀釋細(xì)胞樣本和Aβ1-42標(biāo)準(zhǔn)品(0～1000pg/ml)(Bachem，Torrence，CA)，然后分別裝入immulon-4微板(CMS，Chicago，IL)，總Aβ蛋白涂上15μg/ml 266捕獲抗體(用于結(jié)合人Aβ13～28殘基)，Aβ1-42涂上5μg/ml 21F12抗體(用于結(jié)合人Aβ33～42殘基)，并在4℃下培養(yǎng)過夜。稀釋后的樣品加載到1.2μM Durapore 96孔滴定板(Millipore)上，并用多功能真空多層過濾系統(tǒng)真空抽濾。上清液收集到96孔的聚丙烯微板上，轉(zhuǎn)移100μl樣品到96孔涂滿捕獲抗體immulon-4微板上。平板在4℃下培養(yǎng)過夜。翌日，用含0.05％吐溫-20、pH 7.4的PBS洗滌平板(含細(xì)胞或組織樣本)，隨后在室溫下同3D6生物素標(biāo)記的指示抗體(Harlan，Madison，WI)，該抗體特異性抗Aβ1-5(1∶2000稀釋在0.25％酪蛋白緩沖液中)。孵育一小時(shí)，重復(fù)上述步驟清洗平板，然后加入用0.25％酪蛋白緩沖液稀釋液稀釋1∶1000的馬辣根過氧化物酶(Amersham Life Sciences，ArlingtonHeights，IL)，室溫下培育一小時(shí)。經(jīng)過最后一系列洗滌，室溫下加入TMB底物(Pierce，Rockford，IL)室溫培養(yǎng)15分鐘。加入2N的硫酸終止酶促反應(yīng)。反應(yīng)產(chǎn)物用450nm和650nm下的吸光度差值定量。
實(shí)施例3、西方墨點(diǎn)定量測(cè)定PKCε激酶活性隨后的定量西方墨點(diǎn)法的測(cè)定結(jié)果顯示VR1通道的激活導(dǎo)致了PKCε激酶活性增加(見圖3定量定量西方墨點(diǎn)法測(cè)定PKCε激酶活性)。細(xì)胞裂解液中Aβ1-42的明顯減少符合磷光-RDα定量西方墨點(diǎn)法測(cè)得的PKCε激酶活性(PKCε是表達(dá)于SY5Y細(xì)胞系占主要的PKC異構(gòu)體)。如圖3所示，高于0.1M的辣椒素明顯地增加PKC激酶活性。
SY5Y/VR1/SWAPP細(xì)胞用RDα(一種獨(dú)特Pan-PKC底物表達(dá)菌)瞬時(shí)轉(zhuǎn)染。使用抗磷光體-RDα抗體通過定量西方墨點(diǎn)法測(cè)定PKCε激酶活力。得到的墨點(diǎn)用光密度法分析。光密度法所得數(shù)據(jù)用從平行載入印跡的β-肌動(dòng)蛋白光密度分析歸一化。
實(shí)施例4、香草醛受體激動(dòng)劑粉針劑的制備取香草醛受體激動(dòng)劑30g，加入右旋糖苷30g，加500ml注射用水，攪拌使其溶解；加注射用水至2000ml，加3.0g針用活性炭，充分?jǐn)嚢?0分鐘；脫炭過濾；用0.22μm微孔濾膜過濾；灌裝到無菌的西林瓶中，每瓶2ml，半軋塞；冷凍干燥，再壓塞軋蓋即可。
實(shí)施例5、香草醛受體激動(dòng)劑粉針劑的制備取香草醛受體激動(dòng)劑60g，加500ml注射用水，攪拌使其溶解；加注射用水1000ml，加1g針用活性炭，充分?jǐn)嚢?0分鐘；脫炭過濾；用0.22μm微孔濾膜過濾；冷凍干燥得無菌粉末，分裝成1000瓶。
實(shí)施例6、香草醛受體激動(dòng)劑粉針劑的制備取香草醛受體激動(dòng)劑40g，加入乳糖50g，加100ml注射用水，攪拌使其溶解；加注射用水至1000ml，加1.5g針用活性炭，充分?jǐn)嚢?0分鐘；脫炭過濾；用0.22μm微孔濾膜過濾；噴霧干燥得無菌粉末，分裝成1000瓶。
實(shí)施例7、香草醛受體激動(dòng)劑粉針劑的制備(1)處方注射用香草醛受體激動(dòng)劑半成品 150g甘露醇400g注射用水 加至10000ml共制成10000瓶(2)制備工藝按以上處方稱取處方量香草醛受體激動(dòng)劑，加入到適量注射用水中，攪拌使其溶解；加入處方量甘露醇，攪拌使完全溶解，加注射用水至全量；加入液體量的0.1％針用活性炭，充分?jǐn)嚢?0分鐘；脫炭過濾；用0.22μm微孔濾膜過濾；灌裝，半軋塞；冷凍干燥，壓塞軋蓋。共制得9735瓶，成品率為97.35％。
實(shí)施例8、香草醛受體激動(dòng)劑小針劑的制備取香草醛受體激動(dòng)劑5g，加100ml注射用水，攪拌使其溶解；加注射用水至1000ml，用0.22μm微孔濾膜過濾；分裝灌封，每瓶10ml，滅菌即可。
實(shí)施例9、香草醛受體激動(dòng)劑小針劑的制備取香草醛受體激動(dòng)劑10g，加入丙二醇30g，加200ml注射用水，攪拌使其溶解；加注射用水至1000ml，加1.5g針用活性炭，充分?jǐn)嚢?0分鐘；脫炭過濾；用0.22μm微孔濾膜過濾；分裝灌封，每瓶5ml，滅菌即可。
實(shí)施例10、香草醛受體激動(dòng)劑葡萄糖輸液的制備取香草醛受體激動(dòng)劑2g，加入聚乙二醇10g，加入葡萄糖500g，加2000ml注射用水，攪拌使其溶解；加注射用水至5000ml；用0.22μm微孔濾膜過濾；分裝灌封，每瓶100ml，滅菌即可。
實(shí)施例11、香草醛受體激動(dòng)劑葡萄糖輸液的制備取香草醛受體激動(dòng)劑2g，加入葡萄糖250g，加1000ml注射用水，攪拌使其溶解；加注射用水至5000ml；用0.22μm微孔濾膜過濾；分裝灌封，每瓶250ml，滅菌即可。
實(shí)施例12、香草醛受體激動(dòng)劑氯化鈉輸液的制備取香草醛受體激動(dòng)劑1g，加入氯化鈉90g，加1000ml注射用水，攪拌使其溶解；加注射用水至10000ml；用0.22μm微孔濾膜過濾；分裝灌封，每瓶250ml，滅菌即可。
實(shí)施例13、香草醛受體激動(dòng)劑片劑的制備(1)處方香草醛受體激動(dòng)劑 1000.0g微晶纖維素1170.0g預(yù)膠化淀粉690.0g乳糖 125.0g5％PVP無水乙醇適量硬脂酸鎂 15.0g共制成10000片(2)制備工藝按以上處方分別稱取處方量的主藥與輔料，按等量遞加法混合均勻后照處方工藝項(xiàng)下進(jìn)行制軟材、制顆粒，干燥，整粒等過程，計(jì)算好片重后用單沖壓片機(jī)和10.5mm淺凹沖模壓片，控制裸片硬度5～7kg，共制得片劑9698片，成品率為96.98％。采用滾轉(zhuǎn)噴霧法包衣，包衣工藝如下
包衣液的配制胃溶薄膜衣料85G61235，由上?？房蛋录夹g(shù)有限公司提供包衣工藝將待包衣裸片(硬度5kg～7kg)放入包衣鍋中，啟動(dòng)攪拌裝置和鼓風(fēng)加熱裝置，待裸片溫度升至40℃時(shí)，開始打開噴槍對(duì)準(zhǔn)片床的上1/3處噴入包衣液包衣，控制片床溫度38℃～42℃，氣磅壓力6kg，包衣液流速為50mL/min，包衣膜重占包衣片重的3％。
實(shí)施例14、香草醛受體激動(dòng)劑片劑的制備取香草醛受體激動(dòng)劑100g，微晶纖維素80g、乳糖15g、預(yù)膠化淀粉60g，過篩，混合均勻，用適量10％PVP 醇溶液制軟材，制粒，干燥，加入硬脂酸鎂3g，整粒，壓片，制成1000片。
實(shí)施例15、香草醛受體激動(dòng)劑膠囊劑的制備(1)處方香草醛受體激動(dòng)劑 1000.0g微晶纖維素1000g羧甲基淀粉鈉 140g無水乙醇 適量滑石粉80g共制成10000膠囊(2)制備工藝按以上處方分別取原料藥香草醛受體激動(dòng)劑及處方中其它輔料分別過100目篩，置60℃烘干，稱取處方量香草醛受體激動(dòng)劑與微晶纖維素、羧甲基淀粉鈉等量遞加法混合均勻，用適量無水乙醇制軟材，30目篩制粒，50～60℃干燥2小時(shí)，用30目篩整粒，加入處方量的滑石粉和羧甲基淀粉鈉混合均勻。
實(shí)施例16、香草醛受體激動(dòng)劑膠囊劑的制備取香草醛受體激動(dòng)劑100g、微晶纖維素100g、羧甲基淀粉鈉14g、滑石粉8g，分別過100目篩，置60℃烘干，取香草醛受體激動(dòng)劑與微晶纖維素、羧甲基淀粉鈉等量遞加法混合均勻，用適量無水乙醇制軟材，30目篩制粒，50～60℃干燥2小時(shí)，用30目篩整粒，加入處方量的滑石粉和羧甲基淀粉鈉混合均勻。
權(quán)利要求
1.香草醛受體激動(dòng)劑在制備抗阿爾茨海默病產(chǎn)品中的應(yīng)用。
2.香草醛受體激動(dòng)劑的組合物在制備抗阿爾茨海默病產(chǎn)品中的應(yīng)用。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的該香草醛受體激動(dòng)劑的應(yīng)用，其特征在于，所述的抗阿爾茨海默病產(chǎn)品是指用于預(yù)防、診斷、檢測(cè)、保護(hù)、治療和研究阿爾茨海默病及其相關(guān)疾病的產(chǎn)品。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的該香草醛受體激動(dòng)劑的應(yīng)用，其特征在于，所述的抗阿爾茨海默病產(chǎn)品是包括藥物、試劑、食品或飲料中的一種或多種。
5.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的該香草醛受體激動(dòng)劑的應(yīng)用，其特征在于，所述的香草醛受體激動(dòng)劑是包括香草醛及其衍生物、辣椒素類似物及其衍生物中的一種或多種。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的該香草醛受體激動(dòng)劑的應(yīng)用，其特征在于，所述的香草醛及其衍生物是包括辣椒素、辣椒素族化合物及其衍生物中的一種或多種。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的該香草醛受體激動(dòng)劑的應(yīng)用，其特征在于，所述的香草醛及其衍生物的化學(xué)結(jié)構(gòu)通式如下 其中，R1是包括羥基、烷基、烷氧基、酰氧基、胺烷氧基、氫、氨基或鹵素中的一種；R2是包括烷氧基、氫、羥基、氨基、烷基、脂肪胺或芳香胺、胺烷氧基，或者是酰氧基中的一種。R3是包括具有5～23個(gè)碳原子的烷基或取代烷基、烯基或取代烯基、二萜烯基、苯基或取代苯基、金剛烷基或取代金剛烷基，或者是具有5～23個(gè)碳原子的哌嗪基或取代哌嗪基中的一種；n是包括0、1或2中的一種；X是包括NHC(O)，C(O)NH，C(O)O，NHC(O)O，NHC(O)NH，NHC(S)NH，或者是NH(O)S(O)中的一種。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的該香草醛受體激動(dòng)劑的應(yīng)用，其特征在于，所述的烷基是包括具有5～23個(gè)碳原子的直鏈烷基、支鏈烷基或環(huán)狀烷基中的一種。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的該香草醛受體激動(dòng)劑的應(yīng)用，其特征在于，所述的烷基是包括是異丁基、叔丁基、仲丁基、戊基、叔戊基、己基、環(huán)戊基或環(huán)己基中的一種。
10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的該香草醛受體激動(dòng)劑的應(yīng)用，其特征在于，所述的烷基是包括具有8～12個(gè)碳原子的直鏈烷基、支鏈烷基或環(huán)狀烷基中的一種。
11.根據(jù)權(quán)利要求7所述的該香草醛受體激動(dòng)劑的應(yīng)用，其特征在于，所述的烷氧基中的烷基是包括具有1～6個(gè)碳原子的直鏈烷基、支鏈烷基或環(huán)狀烷基中的一種。
12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的該香草醛受體激動(dòng)劑的應(yīng)用，其特征在于，所述的烷氧基中的烷基是包括甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、叔丁基、仲丁基、戊基、叔戊基、己基、環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基或環(huán)己基中的一種。
13.根據(jù)權(quán)利要求11所述的該香草醛受體激動(dòng)劑的應(yīng)用，其特征在于，所述的烷氧基中的烷基是包括具有1～3個(gè)碳原子的烷基中的一種。
14.根據(jù)權(quán)利要求13所述的該香草醛受體激動(dòng)劑的應(yīng)用，其特征在于，所述的烷氧基中的烷基是包括甲基或乙基中的一種。
15.根據(jù)權(quán)利要求7所述的該香草醛受體激動(dòng)劑的應(yīng)用，其特征在于，所述的脂肪胺是包括取代脂肪族伯胺、仲胺或叔胺中的一種。
16.根據(jù)權(quán)利要求15所述的該香草醛受體激動(dòng)劑的應(yīng)用，其特征在于，所述的取代脂肪族伯胺、仲胺或叔胺是包括甲胺、乙胺、丙胺、異丙胺、四種丁胺的異構(gòu)體、二甲胺、二乙胺、二乙醇胺、二丙胺、二異丙胺、二正丁胺、四氫吡咯、哌啶、嗎啉、3，5-二甲基嗎啉、哌嗪、N-甲基哌嗪、N-乙基哌嗪、N-異丙基哌嗪、2-甲基哌嗪、3-甲基哌嗪、2，6-二甲基哌嗪、三甲胺、三乙胺或三丙胺中的一種。
17.根據(jù)權(quán)利要求16所述的該香草醛受體激動(dòng)劑的應(yīng)用，其特征在于，所述的取代脂肪族伯胺、仲胺或叔胺是包括氨、甲胺、乙胺、丙胺、二乙胺、二乙醇胺、三乙胺、嗎啉或N-甲基哌嗪中的一種。
18.根據(jù)權(quán)利要求17所述的該香草醛受體激動(dòng)劑的應(yīng)用，其特征在于，所述的取代脂肪族伯胺、仲胺或叔胺是包括氨、甲胺、三乙胺或嗎啉中的一種。
19.根據(jù)權(quán)利要求7所述的該香草醛受體激動(dòng)劑的應(yīng)用，其特征在于，所述的芳香胺是包括取代芳香族伯胺、仲胺或叔胺中的一種。
20.根據(jù)權(quán)利要求19所述的該香草醛受體激動(dòng)劑的應(yīng)用，其特征在于，所述的取代芳香族伯胺、仲胺或叔胺是包括苯胺、取代苯胺、N-甲基苯胺、N-乙基苯胺、吡啶、取代吡啶、喹啉、取代喹啉、異喹啉、取代異喹啉或奎寧中的一種。
21.根據(jù)權(quán)利要求20所述的該香草醛受體激動(dòng)劑的應(yīng)用，其特征在于，所述的取代芳香族伯胺、仲胺或叔胺是取代喹啉。
22.根據(jù)權(quán)利要求21所述的該香草醛受體激動(dòng)劑的應(yīng)用，其特征在于，所述的取代喹啉是(5-乙基-1-氮雜-二環(huán)[2.2.2]-辛-2-基)-喹啉-4-基-甲醇。
23.根據(jù)權(quán)利要求7所述的該香草醛受體激動(dòng)劑的應(yīng)用，其特征在于，所述的n是1。
24.根據(jù)權(quán)利要求7所述的該香草醛受體激動(dòng)劑的應(yīng)用，其特征在于，所述的R1是羥基。
25.根據(jù)權(quán)利要求7所述的該香草醛受體激動(dòng)劑的應(yīng)用，其特征在于，所述的R2是烷氧基。
26.根據(jù)權(quán)利要求25所述的該香草醛受體激動(dòng)劑的應(yīng)用，其特征在于，所述的R2是甲氧基。
27.根據(jù)權(quán)利要求7所述的該香草醛受體激動(dòng)劑的應(yīng)用，其特征在于，所述的R2是包括H、OH、OCH3、OCH2CH3、OCH2CH2CH3、OCH2CH2CH2CH3、OC6H5、CH2NH2、CH2CH2NH2、CH2CH2CH2NH2、OC(O)CH3、OC(O)CH2CH3、OC(O)CH2CH2CH3、OC(O)CH2CH2CH2CH3，或OC(O)C6H5中的一種。
28.根據(jù)權(quán)利要求27所述的該香草醛受體激動(dòng)劑的應(yīng)用，其特征在于，所述的R2是包括OCH3、OCH2CH3、OCH2CH2CH3或OCH2CH2CH2CH3中的一種。
29.根據(jù)權(quán)利要求7所述的該香草醛受體激動(dòng)劑的應(yīng)用，其特征在于，所述的R3是包括具有7～18個(gè)碳原子的烷基或取代烷基，或者具有7～18個(gè)碳原子的烯基或取代烯基中的一種。
30.根據(jù)權(quán)利要求7所述的該香草醛受體激動(dòng)劑的應(yīng)用，其特征在于，所述的X是包括NHC(O)、C(O)NH、C(O)O、NHC(O)O、NHC(O)NH、NHC(S)NH、或者是NH(O)S(O)中的一種。
31.根據(jù)權(quán)利要求7所述的該香草醛受體激動(dòng)劑的應(yīng)用，其特征在于，所述的X是NHC(O)。
32.根據(jù)權(quán)利要求5所述的該香草醛受體激動(dòng)劑的應(yīng)用，其特征在于，所述的辣椒素類似物及其衍生物是不含有香草酰基、但構(gòu)效關(guān)系與辣椒素相似的一組化合物，所述的構(gòu)效關(guān)系與辣椒素相似的含義是指包括符合以下構(gòu)效關(guān)系中的一種或多種①疏水烴鏈的適合長(zhǎng)度是8～18個(gè)碳；芳環(huán)3-甲氧基起重要但不是必須的作用；酚羥基是不可缺少的，最適合的位置是對(duì)位；酰氨鏈?zhǔn)遣豢苫蛉钡?；氨基和環(huán)通過CH2連接是合適的；②化合物有三個(gè)假想結(jié)合部位A-香草基，B-酰胺基，C-脂肪鏈；其中，化合物的脂肪末端顯示出極大的靈活性和容納C部位的整體的疏水性；在C區(qū)域能夠引進(jìn)剛性的環(huán)結(jié)構(gòu)，包括金剛烷胺-2-胺，金剛烷胺-2-醇，(5-乙基-1-氮雜-二環(huán)[2.2.2]-辛-2-基)-喹啉-4-基-甲醇，1-苯基-哌嗪，異吲哚-1，3-二酮，或者是2-甲基-2-丙醇中的一種或多種。
33.根據(jù)權(quán)利要求32所述的該香草醛受體激動(dòng)劑的應(yīng)用，其特征在于，所述的辣椒素類似物及其衍生物的化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下
34.根據(jù)權(quán)利要求6所述的該香草醛受體激動(dòng)劑的應(yīng)用，其特征在于，所述的辣椒素族化合物及其衍生物是含有香草酰基的辣椒素族化合物及其衍生物。
35.根據(jù)權(quán)利要求34所述的該香草醛受體激動(dòng)劑的應(yīng)用，其特征在于，所述的辣椒素族化合物及其衍生物是包括二氫辣椒素、降氫辣椒素、高辣椒素、高二氫辣椒素、homodihydrocapsaicin I、norhydrocapsaicin、降二氫辣椒素、順辣椒素、nonivamide、olvanil、NE-21610、N-oleyl-homovanillamide、Dong-A Pharmaceutical，或者是樹脂毒素中的一種或多種。
全文摘要
本發(fā)明涉及香草醛受體激動(dòng)劑用于制備抗阿爾茨海默病產(chǎn)品的用途，該香草醛受體激動(dòng)劑包括香草醛及其衍生物、辣椒素類似物及其衍生物，通過藥理活性篩選證明，香草醛受體激動(dòng)劑具有預(yù)防、診斷、檢測(cè)、保護(hù)、治療和研究阿爾茨海默病及其相關(guān)疾病的活性。該香草醛受體激動(dòng)劑安全低毒，藥理作用較強(qiáng)，其原料來源廣泛、價(jià)廉，且制備工藝簡(jiǎn)單、得率高、化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定、使用安全、一物多用。本發(fā)明對(duì)香草醛受體激動(dòng)劑拓展了新的醫(yī)藥用途，最大限度地發(fā)揮了作用，為預(yù)防、診斷、檢測(cè)、保護(hù)、治療和研究阿爾茨海默病及其相關(guān)疾病提供了一種新的藥物來源，且使用范圍特別廣，因此容易推廣應(yīng)用，能夠在較短的時(shí)間內(nèi)產(chǎn)生巨大的社會(huì)效益和經(jīng)濟(jì)效益。
文檔編號(hào)A61K31/403GK1736485SQ20051002729
公開日2006年2月22日 申請(qǐng)日期2005年6月29日 優(yōu)先權(quán)日2005年6月29日
發(fā)明者陳春麟, 毛晨, 張勁濤 申請(qǐng)人:上海美迪西生物醫(yī)藥有限公司