專利名稱：一種用于治療糖尿病的藥物組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種用于治療糖尿病的藥物組合物，特別是一種以中草藥提取物為原料的藥物組合物。
背景技術(shù)：
糖尿病是一種常見(jiàn)的慢性內(nèi)分泌代謝紊亂性疾病，其發(fā)病率(主要是II型糖尿病)正在逐年上升，死亡率已居腫瘤和心血管疾病之后的第三位。II型糖尿病的治療多采用口服降糖藥物療法，目前臨床上用于治療II型糖尿病的口服降糖藥物有磺脲類降糖藥物，雙胍類降糖藥物，以及α-糖苷酶抑制劑類藥物，但由于磺脲類和雙胍類藥物的較強(qiáng)副作用(如磺脲類損害胰臟β細(xì)胞、低血糖等；雙胍類易發(fā)生乳酸中毒等)，其使用受到了一定限制。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的就在于提供一種具有顯著生理效應(yīng)的治療糖尿病的藥用組合物。
目前，治療糖尿病的方法在于采用α-糖苷酶抑制劑，α-糖苷酶抑制劑的作用是通過(guò)調(diào)控存在于人體小腸黏膜微絨毛膜表面的麥芽糖酶和蔗糖酶等水解酶活性，阻滯了糖類化合物分解成葡萄糖等單糖的過(guò)程，延緩了碳水化合物的消化吸收，從而可避免飯后血糖迅速上升，抑制飯后高血糖和胰島素過(guò)度分泌，減小患者血糖波動(dòng)幅度，達(dá)到對(duì)血糖的良好控制。傳統(tǒng)藥物和植物如虎杖、桑葉、仙鶴草的提取物均具有強(qiáng)烈的α-葡萄糖苷酶抑制活性，部分提取物還具有顯著的醛糖還原酶抑制活性。經(jīng)臨床試驗(yàn)證實(shí)，醛糖還原酶活性增高是導(dǎo)致糖尿病慢性并發(fā)癥的主要原因之一，抑制醛糖還原酶的活性，能有效地改善糖尿病患者的多元醇代謝紊亂，從而預(yù)防和延遲糖尿病并發(fā)癥的發(fā)生。經(jīng)對(duì)這些提取物的體內(nèi)降血糖活性進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)這些提取物均能不同程度地降低四氧嘧啶糖尿病小鼠模型的血糖，且不同的提取物有著明顯不同的作用方式。
虎杖(Polygonum cuspidatum Sieb，et Zucc)系蓼科蓼屬植物，又名斑根紫金龍、活血龍、陰陽(yáng)蓮等。藥用部分為根莖，有活血定痛、清熱利濕、解毒、抑菌等作用。在臨床上主要用于治療多種感染性疾病、燒傷、微循環(huán)功能障礙、腫瘤等，沒(méi)有發(fā)現(xiàn)毒副作用。主要化學(xué)成分有大黃素、大黃酚、白藜蘆醇(resveratrol)、白藜蘆醇甙(polydatin，或稱虎杖晶Ⅳ)、槲皮素(quercetin)、原兒茶酸(protocatechuicacid)、糖苷類、氨基酸等，并富含縮合鞣質(zhì)和多聚糖。虎杖鞣酸可通過(guò)調(diào)控人體小腸黏膜微絨毛膜表面的糖苷酶活性達(dá)到對(duì)餐后血糖的良好控制；大黃素可防治STZ(鏈脲菌素)誘導(dǎo)的糖尿病大鼠的早期腎臟損害，其機(jī)制可能抑制ET-1(內(nèi)皮素)等的合成與釋放；虎杖白藜蘆醇通過(guò)清除體內(nèi)自由基、抑制脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)，達(dá)到降血脂、抗氧化、降血糖及改善糖尿病并發(fā)癥的作用。
桑葉異名鐵扇子，為?？粕費(fèi)orus alba L.(藥材Folium Mori)的樹(shù)葉。主要化學(xué)成分有黃酮類、甾類、多糖和氨基酸等。桑葉的藥用首載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，桑葉性味苦甘、寒，是中醫(yī)清熱解毒之要藥。主治熱感冒、肺熱燥咳、頭暈頭疼、目赤暈等癥，臨床應(yīng)用十分廣泛，常用桑葉入藥，組成復(fù)方中藥，療效良好。桑屬植物具有降血糖、降血壓、抗菌和抗病毒等多種生物活性?，F(xiàn)代藥理研究證明，桑葉黃酮對(duì)降低四氧嘧啶糖尿病小鼠高血糖、提高其糖耐量的顯著作用，可能通過(guò)抑制雙糖酶、減緩小腸葡萄糖的吸收，抗氧化、減少糖尿病大鼠氧化損傷，以及保護(hù)脾抗氧化酶、改善脾功能等機(jī)制實(shí)現(xiàn)的。
仙鶴草即龍牙草，薔薇科。多年生草本，被毛。分布于北半球，我國(guó)各地皆產(chǎn)。以全草入藥，性微溫、味苦澀，功能止血，主治吐血、便血、尿血、崩漏等癥。全草含有仙鶴草素、鞣質(zhì)、甾醇、有機(jī)酸、酚性成分及仙鶴草內(nèi)酯等成分。仙鶴草黃酮具有調(diào)控體內(nèi)糖苷酶活性、抑制高糖環(huán)境下蛋白質(zhì)非酶糖基化的作用。
將這三種提取物根據(jù)藥理原理，經(jīng)科學(xué)配比和組合，以達(dá)到功能互補(bǔ)，其作用效果將會(huì)更明顯。
根據(jù)上述機(jī)理，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案一種用于治療糖尿病的藥物組合物，其特征是該組合物的組成成分及其重量百分配比如下虎杖提取物48-57％桑葉提取物18-25％仙鶴草提取物 22-33％；其中所述的虎杖提取物是主要活性成份為虎杖鞣酸的虎杖提取物、主要活性成份為虎杖白藜蘆醇的虎杖提取物及主要活性成份為虎杖大黃素的虎杖提取物以20-25∶60-65∶14-16的重量比的混合物；所述的桑葉提取物的主要活性成份為桑葉黃酮；所述的仙鶴草提取物的主要活性成份為仙鶴草黃酮。
上述的一種用于治療糖尿病的藥物組合物在制備降血糖藥物中應(yīng)用。
上述的一種用于治療糖尿病的藥物組合物在制備治療糖尿病藥物中的應(yīng)用。
同現(xiàn)有技術(shù)相比，采用本發(fā)明的用于治療糖尿病的藥物組合物具有顯著降低小鼠餐后血糖和四氧嘧啶糖尿病小鼠血糖的作用，可應(yīng)用于預(yù)防和治療糖尿病及其并發(fā)癥。


圖1是組合物量和抑制劑關(guān)系2藥物組合物對(duì)小鼠餐后血糖影響的效果圖具體實(shí)施方式
本發(fā)明采用的虎杖、桑葉、仙鶴草提取物的制備方法如下主要活性成分為虎杖鞣酸的虎杖提取物1虎杖根莖粗粉，95％乙醇冷浸，冷浸液過(guò)濾、減壓濃縮得浸膏，加水后用氯仿回流萃取，后水液用乙酸乙酯萃取，濾除萃取過(guò)程中乙酸乙酯層產(chǎn)生的沉淀，乙酸乙酯層用NaOH水溶液萃取，NaOH水溶液用稀HCl調(diào)節(jié)pH至4，加5％明膠水溶液得沉淀，沉淀加50％丙酮溶解，離心得丙酮溶液，減壓蒸餾回收丙酮，水液用乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯層減壓蒸餾回收乙酸乙酯，加適量水溶解，濾去沉淀，濃縮干燥得抑制劑粗品(橙黃色粉末)，將抑制劑粗品配成10mg/ml上HZ802大孔吸附樹(shù)脂，用70％乙醇水溶液洗脫。收集活性組分，濃縮，干燥得橙黃色抑制劑粉末。主要活性成分為虎杖鞣酸。
主要活性成分為虎杖白藜蘆醇的虎杖提取物2虎杖根莖粉碎，95％乙醇冷浸48小時(shí)，浸出液旋轉(zhuǎn)蒸干，得浸膏，將浸膏溶于水得懸濁液，后依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，將乙酸乙酯相上硅膠柱進(jìn)行正相層析，流動(dòng)相為乙酸乙酯石油醚(4∶6)，點(diǎn)板跟蹤活性物質(zhì)，將有活性物質(zhì)部分合并第二次過(guò)硅膠柱，流動(dòng)相不變，收集活性組分，經(jīng)干燥得白色粉末，活性部位為虎杖白藜蘆醇。
主要活性成分為虎杖大黃素的虎杖提取物3虎杖根莖粉碎，95％乙醇冷浸48小時(shí)，浸出液旋轉(zhuǎn)蒸干，得浸膏，將浸膏溶于水得懸濁液，后依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，將乙酸乙酯相上硅膠柱進(jìn)行正相層析，流動(dòng)相為乙酸乙酯∶石油醚(3∶7)，點(diǎn)板跟蹤活性物質(zhì)，將有活性物質(zhì)部分合并再過(guò)硅膠柱，流動(dòng)相改為氯仿，收集活性組分，經(jīng)干燥得淡黃色粉末，活性部位為虎杖大黃素。
2、桑葉提取物桑葉干品，粉碎，乙醇回流4小時(shí)，4000rpm取上清液，濃縮后加蒸餾水，離心取上清液，石油醚萃取，得水醇液。上D101吸附樹(shù)脂，水洗至無(wú)色，后用無(wú)水乙醇洗脫至無(wú)色，濃縮干燥即得桑葉提取物，活性部位為桑葉黃酮。
3、仙鶴草提取物仙鶴草粗粉，40％乙醇浸提3次，過(guò)濾得濾液，濃縮，水醇法除去葉綠素，離心娶上清夜，石油醚萃取，取水醇層，濃縮后上D101大孔吸附樹(shù)脂，無(wú)水乙醇洗脫得仙鶴草提取物，活性部位為仙鶴草黃酮實(shí)施例一糖苷酶活性試驗(yàn)藥物組合物的重量百分配比為虎杖提取物51份、桑葉提取物24份、仙鶴草提取物25份。按上述比例分別稱取虎杖提取物51mg(其中虎杖提取物1∶11.73mg、虎杖提取物2∶31.62mg、虎杖提取物3∶7.65mg)、桑葉提取物24mg、仙鶴草提取物25mg，溶解于100mL水(加入少量二甲亞砜助溶)中，配成1mg/mL濃度的溶液。測(cè)定方法根據(jù)Tremblay等(Pierre C，Roland R Tremblay.The Journal of C1inicai Chemistry，1978，24208～211)的方法，即以PNPG(4-硝基苯-α-D-吡喃葡萄糖苷)為底物，0.1mol/L Na2CO3為終止液，于400nm處比色測(cè)定。該組合物對(duì)α-糖苷酶的抑制率和加入抑制劑量之間關(guān)系的抑制實(shí)驗(yàn)，加入量5，10，15，20，25，30(μL)，測(cè)得對(duì)α-糖苷酶抑制率和抑制劑量之間的關(guān)系如圖1。
實(shí)施例二檢測(cè)實(shí)施例1中的組合物配比對(duì)醛糖還原酶的抑制實(shí)驗(yàn)在0.86mL磷酸緩沖液(pH6.5)中加入20μL硫酸鋰(0.4mol/L)，20μL還原型輔酶II(10mmol/L)溶液，10μL抑制劑溶液(1mg/ml)和60μL醛糖還原酶提取液，37℃下保溫4min，再加入30μL DL-甘油醛(10mmol/L)溶液，在340nm下掃描記錄吸光度6min的變化。經(jīng)實(shí)驗(yàn)得出該組合物對(duì)醛糖還原酶抑制率為65.9％。而單獨(dú)采用三種提取物對(duì)醛糖還原酶抑制率分別為虎杖提取物58.2％、桑葉提取物24.1％、仙鶴草提取物2.5％。
實(shí)施例三餐后血糖實(shí)驗(yàn)取正常小鼠24只(實(shí)驗(yàn)前先禁食10小時(shí))，分為3組，灌胃前先取血待測(cè)0時(shí)刻血糖值，再分別用生理鹽水、拜糖平(Glucobay)(100mg/kg)、實(shí)施例1中配比組合物以及單獨(dú)三種提取物灌胃(300mg/kg)，結(jié)束后灌淀粉液(5g/kg)，然后各鼠分別于灌淀粉液后0.5、1、2小時(shí)取血。測(cè)定不同時(shí)間所取血液的血糖值，結(jié)果見(jiàn)表1。圖2為藥物組合物對(duì)小鼠餐后血糖影響的效果圖。
表1組合物對(duì)正常小鼠餐后血糖含量的影響

實(shí)施例四連續(xù)給藥實(shí)驗(yàn)糖尿病小鼠模型的建立取65只正常小鼠喂養(yǎng)三天后，禁食16h(飲水不限)，腹腔注射四氧嘧啶(200mg/kg)后，喂養(yǎng)72h，禁食四小時(shí)后測(cè)血糖濃度，選取血糖值在11.0mmol/L以上者。將糖尿病小鼠分為4組，A、B、C、D組，其中A組灌格華止(Glucophage、鹽酸二甲雙胍)(100mg.kg-1.d-1)，B組灌拜糖平(100mg.kg-1.d-1)，C組灌組合物(200mg.kg-1.d-1)，D組灌生理鹽水，連續(xù)灌藥8天后，末次灌藥后禁食4小時(shí)后測(cè)小鼠血糖值，取血方法為斷尾取血，結(jié)果如表2。
表2組合物連續(xù)多次給藥對(duì)糖尿病小鼠血糖含量的影響

2與1比較p＜0.00權(quán)利要求
1.一種用于治療糖尿病的藥物組合物，其特征是該組合物的組成成分及其重量百分配比如下虎杖提取物 48-57％桑葉提取物 18-25％仙鶴草提取物22-33％；其中所述的虎杖提取物是主要活性成份為虎杖鞣酸的虎杖提取物、主要活性成份為虎杖白藜蘆醇的虎杖提取物及主要活性成份為虎杖大黃素的虎杖提取物以20-25∶60-65∶14-16的重量比的混合物；所述的桑葉提取物的主要活性成份為桑葉黃酮；所述的仙鶴提取物的主要活性成份為仙鶴草黃酮。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用于治療糖尿病的藥物組合物在制備降血糖藥物中的應(yīng)用。
3.如根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用于治療糖尿病的藥物組合物在制備治療糖尿病藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種用于治療糖尿病的藥物組合物，特別是一種以中草藥提取物為原料的藥物組合物。該組合物的組成成分及其重量百分配比如下虎杖提取物48－57％；桑葉提取物18－25％；仙鶴提取物22－33％。本發(fā)明的用于治療糖尿病的藥物組合物具有顯著降低小鼠餐后血糖和四氧嘧啶糖尿病小鼠血糖的作用，可應(yīng)用于預(yù)防和治療糖尿病及其并發(fā)癥。
文檔編號(hào)A61P3/00GK1730046SQ20051002727
公開(kāi)日2006年2月8日 申請(qǐng)日期2005年9月9日 優(yōu)先權(quán)日2005年9月9日
發(fā)明者沈忠明, 王逸蕓, 沈莉娟, 殷建偉, 徐正東 申請(qǐng)人:上海大學(xué)