專利名稱：多糖金磁復(fù)合微粒載藥體及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種金磁復(fù)合微粒載藥體及其制備方法，特別涉及一種以金磁微粒為
核心，以天然或人工合成的可生物降解的多糖，如葡聚糖，環(huán)糊精及其衍生物為材料，合成 具有更好生物相容性和載藥性的多糖金磁復(fù)合微粒載藥體及其制備方法。
背景技術(shù)：
磁性藥物微球作為第四代靶向制劑，有利于提高藥物療效，降低毒副作用，為化療 藥物的臨床應(yīng)用開(kāi)辟了新途徑。它是將抗腫瘤藥物和磁性物質(zhì)共同包埋或吸附于高分子材 料，特別是具有生物相容性的生物大分子中制成穩(wěn)定制劑。該制劑注入體內(nèi)后在足夠強(qiáng)的 外磁場(chǎng)作用下逐漸集中于腫瘤部位，藥物載體通過(guò)酶的催化或理化條件如pH，滲透壓或溫 度的改變而降解，緩慢釋放化療藥物，使腫瘤部位保持較高的血藥濃度，相應(yīng)減少了全身其 他部位的藥物水平，從而起到高效、緩釋、低毒的作用。 磁性微球由磁性材料、載體材料兩部分組成。通常應(yīng)用的磁性物質(zhì)有純鐵粉、 羰基鐵、磁鐵礦、鐵鈷合金等，尤以？6304磁流體居多，粒度要求越小越好，一般直徑在10 30nm，另外還應(yīng)具有非常良好的磁響應(yīng)性。常用的載體材料包括白蛋白、明膠、殼聚糖、葡聚 糖、淀粉等天然高分子，以及聚碳酸酯、聚烷基氰基丙烯酸酯、聚乙烯吡咯烷酮、聚乳酸及其 共聚物等合成高分子。它們能夠降低系統(tǒng)毒性并且增加生物相容性，減少內(nèi)皮細(xì)胞的清除 作用。另外，這些雙功能材料一方面可以與磁性粒子通過(guò)化學(xué)鍵合或物理吸附結(jié)合，另一方 面也可以和藥物結(jié)合，從而具有一定的藥物緩釋控釋作用。 1996年，德國(guó)的Lubbe等首先完成了世界上第一例應(yīng)用磁性藥物耙向治療的臨 床實(shí)驗(yàn)，在14個(gè)晚期實(shí)體瘤患者的磁靶向治療中，發(fā)現(xiàn)患者對(duì)磁靶向藥物的耐受性很好。 2002年美國(guó)FeRx公司磁導(dǎo)向載體一阿霉素(MTC-DOX)技術(shù)已通過(guò)美國(guó)FDA認(rèn)證，主要用于 肝癌(肝細(xì)胞癌-HCC)的治療，在2002年ll月"分子靶向和癌癥治療"的年會(huì)上，F(xiàn)eRx公司 報(bào)道了靶向治療肝細(xì)胞癌的I/II期臨床試驗(yàn)結(jié)果，預(yù)示了這項(xiàng)新技術(shù)在治療肝癌上的巨 大潛力。Liang等氨基修飾的超順磁性氧化鐵納米粒子作為一種新型的生物磁性靶向的載 體，研究其在磁靶向性肝癌治療中的應(yīng)用。中南大學(xué)張陽(yáng)德教授等以磁性阿霉素白蛋白對(duì) 移植性肝癌的治療研究中表明磁性阿霉素白蛋白在外加磁場(chǎng)作用下具有良好的治療效果。 慕蓉進(jìn)行了載阿霉素磁性殼聚糖微球靶向治療大鼠移植性肝癌的研究，結(jié)果顯示磁性殼聚 糖載藥具有良好的靶向療效。有關(guān)納米金在生物醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用也有很多報(bào)道。Priyabrata Mukherjee等人將納米金和血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子偶聯(lián)，治療慢性淋巴細(xì)胞性白血病。研 究表明，單獨(dú)使用一定劑量的納米金不會(huì)引起細(xì)胞大量凋亡；而偶聯(lián)血管內(nèi)皮細(xì)胞的納米 金可顯著得引起細(xì)胞凋亡。這些發(fā)現(xiàn)證實(shí)了運(yùn)用納米金載藥系統(tǒng)治療人類惡性疾病的優(yōu) 點(diǎn)。Giulio等膠體金作為負(fù)載腫瘤抑制因子的載體用于靶向給藥的療效，毒性等研究，表 明膠體金對(duì)細(xì)胞沒(méi)有明顯的傷害，而負(fù)載腫瘤抑制因子的膠體金對(duì)腫瘤細(xì)胞有明顯殺傷作 用。姚翠萍等人將免疫膠體金與牛腸堿性磷酸酯酶特異抗體結(jié)合，然后用激光照射后，治療 人類惡性淋巴瘤細(xì)胞Karpas299 ;結(jié)果表明，激光照射后，結(jié)合金微粒的Karpas299細(xì)胞死亡率達(dá)到95^以上，而沒(méi)有結(jié)合金微粒的K^細(xì)胞基本上沒(méi)有發(fā)生變化。表明金微粒對(duì)人體 細(xì)胞沒(méi)有明顯的傷害。Zharov等設(shè)計(jì)了一套系統(tǒng)，把40nm的金微粒通過(guò)抗體與MDA-MB-231 乳腺癌細(xì)胞上的抗原結(jié)合，然后用激光照射細(xì)胞微粒結(jié)合體，可以觀察到在納米簇周?chē)a(chǎn) 生大量的氣泡從而導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞的死亡。E1-Sayed等利用免疫膠體金對(duì)癌癥細(xì)胞診斷進(jìn)行 了先行性的研究，得到一定的反響。以上研究表明，將磁性微粒與納米金結(jié)合起來(lái)用于肝癌 靶向治療，可以把磁性微粒的磁靶向性和金元素本身具有增強(qiáng)機(jī)體非特異性免疫反應(yīng)能力 結(jié)合起來(lái)，起到靶向給藥和提高機(jī)體免疫力的作用，有著巨大的應(yīng)用前景。
美國(guó)專利(Pat. No. 7226636 B2)報(bào)道了一種金包被的磁性納米粒子的合成過(guò)程。 該專利公開(kāi)了合成方法，即在適宜的液體溶液中，向磁流體懸液中加入一定量的還原性的 金的化合物和還原性介質(zhì)，反應(yīng)一定的時(shí)間，就可以合成金包被的磁性納米粒子。英國(guó)專 利(Pat. GB2415374 A)報(bào)道了一種合成克級(jí)核殼型磁性納米粒子的方法，該專利中的核是 Y -Fe203，殼層是金。美國(guó)專利Pat. No. 7232471 B2報(bào)道了一種環(huán)糊精修飾的納米金的合成 方法。中國(guó)專利ZL03124061.5和ZL 03153486. 4公開(kāi)了本申請(qǐng)人的核殼型和組裝型金磁 微粒的合成方法，但未涉及金磁微粒的進(jìn)一步修飾和在靶向給藥中的應(yīng)用。
本課題組2006年申請(qǐng)的專利超順磁性載藥體及其制備方法(專利申請(qǐng)?zhí)?200610104757. 0)中，涉及了金磁復(fù)合微粒載藥體的制備過(guò)程及用于靶向治療，但權(quán)利要求 涉及面寬， 一些指標(biāo)較為籠統(tǒng)，保護(hù)性不強(qiáng)，沒(méi)有給出具體的超順磁性復(fù)合微粒的粒徑，磁 化飽和強(qiáng)度，磁響應(yīng)性，載藥率，包封率等，并且沒(méi)有具體的多糖金磁復(fù)合微粒載藥體的制 備方法和理化指標(biāo)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的 為了解決背景技術(shù)中存在的上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明提供了一種生物相容性好，無(wú) 毒副作用，有一定的粒徑，具有好的藥物緩釋和控釋作用，包封率符合藥典規(guī)定的具有超順 磁性的多糖金磁復(fù)合微粒載藥體及其制備方法。
本發(fā)明的技術(shù)方案 多糖金磁復(fù)合微粒載藥體，其特殊之處在于是由多糖金磁復(fù)合微粒與藥物溶液 直接混合，通過(guò)物理吸附，將藥物負(fù)載于金磁復(fù)合微粒上，形成的載藥復(fù)合體，該多糖金磁 復(fù)合微粒是由組裝型或核殼型金磁微粒與天然或人工合成的多糖類高分子材料混和，通過(guò) 化學(xué)鍵合或物理吸附，將高分子聚合物包被于金磁微粒上形成的，或者是以金磁微粒為核 心，通過(guò)交聯(lián)劑的交聯(lián)作用，使多糖分子連成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)形成的。 金磁微粒包括核殼型和組裝型。核殼型金磁微粒由磁性材料的核心部分(Fe304) 和包覆于其表面的膠體金外殼部分組成，粒徑為約為40納米；組裝型金磁微粒是將磁性材 料的核心部分(Fe304)經(jīng)硅烷化修飾，再通過(guò)Au-S鍵，將膠體金外殼部分包覆于核心部分表 面，粒徑約為3-5微米。 天然或人工合成的多糖分子具有良好的生物相容性，無(wú)毒副作用，可生物降解等 特點(diǎn)，包括葡聚糖，環(huán)糊精及其衍生物等。其中葡聚糖包括分子量為10000， 20000， 30000， 40000， 50000和70000六種。 環(huán)糊精是一類兩端開(kāi)口直徑不同的圓錐狀中空筒型環(huán)狀多糖化合物。環(huán)糊精及其衍生物的最大特點(diǎn)是具有特定的空腔，不同尺度的空腔，可以與特定大小和性狀的小分 子作用形成包合物。由6、7、8個(gè)葡萄糖分子通過(guò)l，4-糖苷鍵連接而成的的環(huán)糊精分別稱 為a， e， Y-環(huán)糊精。環(huán)糊精衍生物包括羥丙基-a-環(huán)糊精，羥丙基-!3-環(huán)糊精，羥丙 基_ Y _環(huán)糊精，甲基_ P _環(huán)糊精等。 藥物是單藥，或是兩種、兩種以上的復(fù)合藥物，可以是抗癌化療藥物、蛋白藥物、基 因藥物或抗生素類藥物，其中抗癌化療藥物包括鹽酸阿霉素、5-氟尿嘧啶、順鉑、洛鉑、卡 鉬、甲氨喋呤、阿糖胞苷；蛋白藥物包括腫瘤抑制因子；基因藥物包括核酸疫苗；抗生素類 藥物包括阿克拉霉素、紅霉素、鹽酸多西環(huán)素。 制備該多糖金磁復(fù)合微粒載藥體的方法，其特殊之處在于包括以下步驟步驟1)
制備多糖金磁復(fù)合微粒 步驟l. 1)配制多糖溶液 將濃度為0. 5-4mol/L堿溶液加入到多糖中，配制成濃度為20 100mg/ml的多糖 溶液； 步驟1. 2)合成多糖金磁復(fù)合微粒 取金磁微粒和濃度為0. 5 4mol/L的堿溶液加入到步驟1. 1)制得的多糖溶液中 得到混合體系，將該混合體系邊反應(yīng)邊攪拌，合成多糖金磁復(fù)合微粒懸液；其中步驟1. 1) 中多糖與步驟1. 2)所加金磁微粒的量比為5 40 : 1 ;
步驟1.3)清洗 將步驟1. 2)制得的多糖金磁復(fù)合微粒懸液反復(fù)磁分離，棄去上清，直到最后溶液 pH為7 ; 步驟2)制備多糖金磁復(fù)合微粒載藥體
步驟2. 1)清洗 取多糖金磁復(fù)合微粒置于離心管中，磁分離，棄去上清；
步驟2. 2)載藥 加入濃度為0. 5 1. 0mg/ml的藥物溶液，補(bǔ)加超純水，置于恒溫?fù)u床震蕩，反應(yīng)完 成后磁分離，棄去上清，冷凍干燥，制得多糖金磁復(fù)合微粒載藥體，其中所加藥物溶液與多 糖金磁復(fù)合微粒的質(zhì)量比為1 4 : 20。 上述步驟1. 2)的混合體系升溫到35 45t:后再加入交聯(lián)劑或堿溶液，再升溫至 50 6(TC，反應(yīng)5 8h，其中所加交聯(lián)劑或堿溶液占混合體系的比例為10% 20% ;將步 驟1.3)制得的多糖金磁復(fù)合微粒懸液中先加入乙醇，經(jīng)磁分離清洗，除去殘余的有機(jī)相， 再用超純水反復(fù)清洗，直到溶液pH為7。 上述步驟l. 1)在20 4(TC條件下進(jìn)行，可用電動(dòng)攪拌器加速溶解，轉(zhuǎn)速為300 900轉(zhuǎn)/分鐘，攪拌時(shí)間為5 20min為宜；步驟1. 2)中攪拌速度為300 900轉(zhuǎn)/分鐘， 反應(yīng)時(shí)間為4 8h為宜；步驟2. 1)磁分離的時(shí)間為5 15min為宜；步驟2. 2)恒溫震蕩 的溫度為25 40min，震蕩的轉(zhuǎn)速為100 200轉(zhuǎn)/分鐘，震蕩時(shí)間為4 20h為宜，磁分 離的時(shí)間為5 15min為宜。 上述步驟2. 2)的藥物溶液為阿霉素溶液時(shí)，離心管要用鋁箔包裹好。 上述多糖是葡聚糖、環(huán)糊精或羥丙基-|3 -環(huán)糊精等環(huán)糊精衍生物；堿溶液是NaOH
或NH40H，其中NaOH溶液的濃度為0. 5 4mol/L， NH40H溶液的濃度為10 18% 。；交聯(lián)劑
6為甲醛、戊二醛或環(huán)氧氯丙烷；藥物為單藥，或是兩種、兩種以上的復(fù)合藥物，可為抗癌化療 藥物、蛋白藥物、基因藥物或抗生素類藥物；抗癌化療藥物包括鹽酸阿霉素、5-氟尿嘧啶、 順鉑、洛鉑、卡鉑、甲氨喋呤、阿糖胞苷；蛋白藥物包括腫瘤抑制因子；基因藥物包括核酸疫 苗；抗生素類包括阿克拉霉素，紅霉素，鹽酸多西環(huán)素。 藥物和多糖金磁復(fù)合微粒通過(guò)物理吸附結(jié)合，不改變藥物的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)；并可根 據(jù)需要，改變條件合成不同粒徑和金磁復(fù)合微粒。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn) 1、用于載藥的多糖金磁復(fù)合微粒分散性好，粒徑均一，如用葡聚糖包被的金磁復(fù)
合微粒，粒徑為220nm，粒徑均一，無(wú)聚集現(xiàn)象。 2、用于載藥的多糖金磁復(fù)合微粒具有更好生物相容性。 3、合成方法簡(jiǎn)單，具體，可操作性強(qiáng)；并可根據(jù)需要，改變條件合成不同粒徑的多 糖金磁復(fù)合微粒。 4、該多糖金磁復(fù)合微粒載藥體具有良好的藥物緩釋和控釋效應(yīng)，如載阿霉素葡 聚糖超順磁性金磁復(fù)合微粒，體外實(shí)驗(yàn)表明，在2h，24h，和72h天的累積釋藥率分別為 18. 1%，51. 4%和77. 1%。 5、該多糖金磁復(fù)合微粒用于藥物載體時(shí)包封率和載藥率高，如葡聚糖超順磁性金 磁復(fù)合微粒最高可達(dá)93%以上，最高載藥率載藥可達(dá)15. 8% ，符合中國(guó)藥典的要求。


圖1是220nm葡聚糖金磁復(fù)合微粒的粒徑分布圖。
圖2是220nm葡聚糖金磁復(fù)合微粒掃描電鏡圖。
圖3葡聚糖金磁復(fù)合微粒的磁飽和強(qiáng)度圖。 圖4是阿霉素投入量與阿霉素磁性毫微粒載藥量、包封率的關(guān)系圖。
圖5是載阿霉素葡聚糖金磁復(fù)合微粒的釋藥曲線。
具體實(shí)施例方式
多糖金磁復(fù)合微粒載藥體，是由多糖金磁復(fù)合微粒與藥物溶液直接混合，通過(guò)物
理吸附，將藥物負(fù)載于金磁復(fù)合微粒上，形成的載藥復(fù)合體，該多糖金磁復(fù)合微粒是由組裝
型或核殼型金磁微粒與天然或人工合成的多糖類高分子材料混和，通過(guò)化學(xué)鍵合或物理吸
附，將高分子聚合物包被于金磁微粒上形成的，或者是以金磁微粒為核心，通過(guò)交聯(lián)劑的交
聯(lián)作用，使多糖分子連成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)形成的。 多糖是葡聚糖、環(huán)糊精或環(huán)糊精衍生物； 藥物是抗癌化療藥物、蛋白藥物、基因藥物或抗生素類藥物；抗癌化療藥物包括鹽 酸阿霉素、5-氟尿嘧啶、順鉑、洛鉑、卡鉬、甲氨喋呤、阿糖胞苷；蛋白藥物包括腫瘤抑制因 子；基因藥物包括核酸疫苗；抗生素類藥物包括阿克拉霉素、紅霉素、鹽酸多西環(huán)素。
多糖金磁復(fù)合微粒載藥體的制備方法，包括以下步驟
步驟1)制備多糖金磁復(fù)合微粒
步驟1. 1)配制多糖溶液 將濃度為0. 5-4mol/L堿溶液加入到多糖中，配制成濃度為20 100mg/ml的多糖 溶液；
步驟1. 2)合成多糖金磁復(fù)合微粒 取金磁微粒和濃度為0. 5 4mol/L的堿溶液加入到步驟1. 1)制得的多糖溶液中 得到混合體系，將該混合體系邊反應(yīng)邊攪拌，合成多糖金磁復(fù)合微粒懸液；其中步驟1. 1) 中多糖與步驟1. 2)所加金磁微粒的量比為5 40 : 1 ; 當(dāng)多糖為葡聚糖時(shí)，可將步驟1. 2)的混合體系升溫到35 45t:后再加入交聯(lián) 劑或堿溶液，再升溫至50 60°C ，反應(yīng)5 8h，所加交聯(lián)劑或堿溶液占混合體系的比例為 10% 20% ;將步驟1. 3)制得的多糖金磁復(fù)合微粒懸液中先加入乙醇經(jīng)磁分離清洗，除去 殘余的有機(jī)相，再用超純水反復(fù)清洗，直到溶液PH為7。
步驟1. 3)清洗 將步驟1. 2)制得的多糖金磁復(fù)合微粒懸液反復(fù)磁分離，棄去上清，直到最后溶液 pH為7 ; 步驟2)制備多糖金磁復(fù)合微粒載藥體
步驟2. 1)清洗 取多糖金磁復(fù)合微粒置于離心管中，磁分離，棄去上清；
步驟2. 2)載藥 加入濃度為0. 5 1. 0mg/ml的藥物溶液，補(bǔ)加超純水，置于恒溫?fù)u床震蕩，反應(yīng)完 成后磁分離，棄去上清，冷凍干燥，制得多糖金磁復(fù)合微粒載藥體，所加藥物溶液與多糖金 磁復(fù)合微粒的質(zhì)量比為1 4 : 20。 步驟1. 1)在20 4(TC條件下進(jìn)行，可用電動(dòng)攪拌器加速溶解，轉(zhuǎn)速為300 900 轉(zhuǎn)/分鐘，攪拌時(shí)間為5 20min ;步驟1. 2)中攪拌速度為300 900轉(zhuǎn)/分鐘，反應(yīng)時(shí)間為 4 8h ;步驟2. 1)磁分離的時(shí)間為5 15min ;步驟2. 2)恒溫震蕩的溫度為25 40min， 震蕩的轉(zhuǎn)速為100 200轉(zhuǎn)/分鐘，震蕩時(shí)間為4 20h，磁分離的時(shí)間為5 15min。
步驟2. 2)的藥物溶液為阿霉素溶液時(shí)，離心管要用鋁箔包裹好。
上述多糖是葡聚糖、環(huán)糊精或環(huán)糊精衍生物；堿溶液是NaOH或NH40H ;交聯(lián)劑為 甲醛、戊二醛或環(huán)氧氯丙烷；藥物可為抗癌化療藥物、蛋白藥物、基因藥物或抗生素類藥物； 抗癌化療藥物包括鹽酸阿霉素、5_氟尿嘧啶、順鉑、洛鉑、卡鉬、甲氨喋呤、阿糖胞苷；蛋白 藥物包括腫瘤抑制因子；基因藥物包括核酸疫苗；抗生素類藥物包括阿克拉霉素，紅霉素， 鹽酸多西環(huán)素。 該多糖金磁復(fù)合微粒用于藥物載體時(shí)包封率和載藥率高，如葡聚糖超順磁性金磁 復(fù)合微粒最高可達(dá)93%以上，載藥量載藥可達(dá)15. 9% ，符合中國(guó)藥典的要求。
該多糖金磁復(fù)合微粒載藥體具有良好的藥物緩釋和控釋效應(yīng)，如載阿霉素葡聚糖 超順磁性金磁復(fù)合微粒，體外實(shí)驗(yàn)表明，在2h，24h，和72h天的累積釋藥率分別為18. 1%， 51. 4%和77. 1%。 以下結(jié)合實(shí)施例對(duì)發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明
具體實(shí)施例1 本實(shí)例中的多糖為葡聚糖，藥物為阿霉素。 在25t:條件下，將100mg的葡聚糖加入100ml 二頸燒瓶中，加入lml的超純水和 lml lmol/L NaOH溶液，開(kāi)動(dòng)電動(dòng)攪拌器，轉(zhuǎn)速為300轉(zhuǎn)/分鐘，攪拌10min，使葡聚糖徹底溶 解；然后邊攪拌 邊將2ml (10mg/ml)的核殼型金磁微粒加入二頸燒瓶中，再加入2ml lmol/LNaOH溶液，300轉(zhuǎn)/分鐘，反應(yīng)6h。反應(yīng)完后，將反應(yīng)后的懸液倒到入一個(gè)干凈的燒杯，然后 將燒杯放在5000高斯的磁鐵上，磁分離，棄去上清；再加入一定量的超純水，混勻，再磁分 離，棄去上清，重復(fù)三次，直到最后溶液的ra為7。經(jīng)檢測(cè)其粒徑為2. 1 ii m左右；磁化飽和 強(qiáng)度為42emu/g。 在5ml的離心管中加入2mg金磁復(fù)合微粒，磁分離5min，棄上清；然后加入0. 4ml 濃度為lmg/ml的阿霉素溶液，再補(bǔ)加1. 6ml超純水至2ml。蓋好離心管蓋，用鋁箔包裹好， 置于37t:恒溫?fù)u床，180rpm震蕩；反應(yīng)4小時(shí)后取出離心管，10min磁分離，取20ul上清。 在紫外分光光度計(jì)下測(cè)480納米的吸收值，計(jì)算得出該葡聚糖金磁復(fù)合微粒的載藥率可達(dá) 12. 5%。 載藥量按以下公式計(jì)算 載藥率=(總的阿霉素質(zhì)量_上清中阿霉素質(zhì)量)/磁粒質(zhì)量X 100%
具體實(shí)施例2 本實(shí)例中的多糖為葡聚糖，藥物為阿霉素。 在25。C條件下，將100mg的葡聚糖加入100ml 二頸燒瓶中，加入2mll0mg/ml的金 磁微粒，開(kāi)動(dòng)電動(dòng)攪拌器，轉(zhuǎn)速為300轉(zhuǎn)/分鐘，攪拌10min，使葡聚糖徹底溶解并與金磁微 粒充分混合。然后邊攪拌邊向二頸燒瓶中逐滴加入3ml 18% NH40H，升溫至60°C ，以300轉(zhuǎn) /分鐘的速度繼續(xù)攪拌，反應(yīng)30min。反應(yīng)完后，將反應(yīng)后的懸液倒入一個(gè)干凈的燒杯，然后 將燒杯放在5000高斯的磁鐵上，磁分離，棄去上清；再加入一定量的超純水，混勻，再磁分 離，棄去上清，重復(fù)三次，直到最后溶液的ra為7。經(jīng)檢測(cè)其粒徑為0.22ym左右，見(jiàn)圖1 ; 磁化飽和強(qiáng)度38. 8emu/g，見(jiàn)圖3。 在5ml的離心管中加入2mg金磁復(fù)合微粒，磁分離5min，棄上清；然后加入0. 4ml 濃度為lmg/ml的阿霉素溶液，再補(bǔ)加1. 6ml超純水至2ml。蓋好離心管蓋，用鋁箔包裹好，置 于37t:恒溫?fù)u床，以180rpm的轉(zhuǎn)速震蕩；反應(yīng)4小時(shí)后取出離心管，磁分離10min，取20ul 上清。在紫外分光光度計(jì)下測(cè)480納米的吸收值，計(jì)算出該葡聚糖金磁復(fù)合微粒的載藥量 可達(dá)12. 05%，見(jiàn)圖4。
具體實(shí)施例3 本實(shí)例中的多糖為葡聚糖，交聯(lián)劑為環(huán)氧氯丙烷，藥物為阿霉素。
在25t:條件下，將100mg的葡聚糖加入100ml 二頸燒瓶中，接著加入lmllmol/L NaOH溶液，開(kāi)動(dòng)電動(dòng)攪拌器，以300rpm的轉(zhuǎn)速攪拌10min，使葡聚糖完全溶解；然后邊攪拌 邊向二頸燒瓶中加入2ml 10mg/ml的金磁微粒，反應(yīng)lh。然后將反應(yīng)體系升溫到40°C ，再 加入2ml環(huán)氧氯丙烷，再升溫至55t:，繼續(xù)反應(yīng)6小時(shí)。反應(yīng)完后，將反應(yīng)后的懸液倒入一 個(gè)干凈的燒杯，然后將燒杯放在5000高斯磁鐵上，磁分離，棄上清；再加入一定量的乙醇， 磁分離，清洗三次，除去殘余的有機(jī)相，再用超純水清洗三次，直到溶液Kl為7。經(jīng)檢測(cè)其粒 徑為4. 2 ii m左右；磁化飽和強(qiáng)度為48. 5emu/g。 在5ml的離心管中加入2mg金磁復(fù)合微粒，磁分離5min，棄上清；然后加入0. 4ml 濃度為lmg/ml的阿霉素溶液，再補(bǔ)加1. 6ml超純水至2ml。蓋好離心管蓋，用鋁箔包裹好， 置于37t:恒溫?fù)u床，180rpm震蕩；反應(yīng)4小時(shí)后取出離心管，10min磁分離，取20ul上清。 在紫外分光光度計(jì)下測(cè)480納米的吸收值，計(jì)算出該葡聚糖金磁復(fù)合微粒的載藥量可達(dá) 12. 8%。
具體實(shí)施例4 本實(shí)例中的多糖為環(huán)糊精，藥物為阿霉素。 在25。C條件下，將100mg環(huán)糊精加入100ml二頸燒瓶中，接著加入lmllmol/L NaOH溶液，開(kāi)動(dòng)電動(dòng)攪拌器，以300rpm的轉(zhuǎn)速攪拌10min，使環(huán)糊精徹底溶解。邊攪拌邊加入2ml10mg/ml的金磁微粒，升溫到4(TC時(shí)，加入0. 8ml16. 5% NH4OH。再繼續(xù)加熱至5(TC并反應(yīng)5h。反應(yīng)完后，將反應(yīng)后的懸液倒入一個(gè)干凈的燒杯，然后將燒杯放在5000高斯的磁鐵上，磁分離，棄上清；再加入一定量的超純水，混勻，再磁分離，棄上清，重復(fù)三次，直到最后溶液的pH為7。經(jīng)檢測(cè)其粒徑為0. 32 ii m左右，見(jiàn)圖1 ;磁化飽和強(qiáng)度為38. 5emu/g。
在5ml的離心管中加入2mg金磁復(fù)合微粒，磁分離5min，棄上清；然后加入0. 4ml濃度為lmg/ml的阿霉素溶液，再補(bǔ)加1. 6ml超純水至2ml。蓋好離心管蓋，用鋁箔包裹好，置于37t:恒溫?fù)u床，以180rpm的轉(zhuǎn)速震蕩；反應(yīng)4小時(shí)后取出離心管，磁分離10min，取20ul上清。在紫外分光光度計(jì)下測(cè)480納米的吸收值，計(jì)算出該環(huán)糊精金磁復(fù)合微粒的載藥量可達(dá)9. 05%。
具體實(shí)施例5 本實(shí)例中的多糖為羥丙基-13 _環(huán)糊精，藥物為阿霉素。 將150mg羥丙基-P -環(huán)糊精加入100ml 二頸燒瓶中，開(kāi)動(dòng)電動(dòng)攪拌器，以300rpm的轉(zhuǎn)速攪拌10min，使羥丙基-13 -環(huán)糊精徹底溶解。邊攪拌邊加入2mll0mg/ml的金磁微粒，繼續(xù)攪拌，然后升溫到4(TC時(shí)，加入0. 8ml 16. 5% NH4OH。再繼續(xù)加熱至5(TC并攪拌，反應(yīng)5h。反應(yīng)完后，得到的磁性復(fù)合微粒分散液用磁鐵(5000高斯)磁分離，用超純水反復(fù)洗滌后至上清pH約為7。經(jīng)檢測(cè)其粒徑為420nm左右；磁化飽和強(qiáng)度40. 5emu/g。
在5ml的離心管中加入2mg金磁復(fù)合微粒，5min磁分離，棄上清；然后加入0. 4ml濃度為lmg/ml的阿霉素溶液，再補(bǔ)加1. 6ml超純水至2ml 。蓋好離心管蓋，用鋁箔包裹好，置于37t:恒溫?fù)u床，以180rpm的轉(zhuǎn)速震蕩；反應(yīng)4小時(shí)后取出離心管，磁分離10min，取20ul上清。在紫外分光光度計(jì)下測(cè)480納米的吸收值，計(jì)算出該羥丙基_ 13 _環(huán)糊精金磁復(fù)合微粒的載藥量為9.55%。
權(quán)利要求
多糖金磁復(fù)合微粒載藥體，其特征在于是由多糖金磁復(fù)合微粒與藥物溶液直接混合，通過(guò)物理吸附，將藥物負(fù)載于金磁復(fù)合微粒上，形成的載藥復(fù)合體，所述多糖金磁復(fù)合微粒是由組裝型或核殼型金磁微粒與天然或人工合成的多糖類高分子材料混和，通過(guò)化學(xué)鍵合或物理吸附，將高分子聚合物包被于金磁微粒上形成的，或者是以金磁微粒為核心，通過(guò)交聯(lián)劑的交聯(lián)作用，使多糖分子連成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)形成的。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的多糖金磁復(fù)合微粒載藥體，其特征在于所述多糖是葡聚糖、 環(huán)糊精或環(huán)糊精衍生物；所述藥物是單藥，或是兩種、兩種以上的復(fù)合藥物。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的多糖金磁復(fù)合微粒載藥體，其特征在于所述藥物是 抗癌化療藥物、蛋白藥物、基因藥物或抗生素類藥物；所述抗癌化療藥物包括鹽酸阿霉素、 5_氟尿嘧啶、順鉑、洛鉑、卡鉬、甲氨喋呤、阿糖胞苷；蛋白藥物包括腫瘤抑制因子；基因藥 物包括核酸疫苗；抗生素類藥物包括阿克拉霉素、紅霉素、鹽酸多西環(huán)素。
4. 一種制備如權(quán)利要求1所述的多糖金磁復(fù)合微粒載藥體的方法，其特征在于包括 以下步驟步驟1)制備多糖金磁復(fù)合微粒 步驟1. 1)配制多糖溶液將濃度為0. 5-4mol/L堿溶液加入到多糖中，配制成濃度為20 100mg/ml的多糖溶液；步驟1. 2)合成多糖金磁復(fù)合微粒取金磁微粒和濃度為0. 5 4mol/L的堿溶液加入到步驟1. 1)制得的多糖溶液中得到 混合體系，將該混合體系邊反應(yīng)邊攪拌，合成多糖金磁復(fù)合微粒懸液；其中步驟1. 1)中多 糖與步驟1. 2)所加金磁微粒的量比為5 40 : 1 ;步驟1. 3)清洗將步驟1. 2)制得的多糖金磁復(fù)合微粒懸液反復(fù)磁分離，棄去上清，直到最后溶液pH為7 ;步驟2)制備多糖金磁復(fù)合微粒載藥體 步驟2. 1)清洗取多糖金磁復(fù)合微粒置于離心管中，磁分離，棄去上清； 步驟2. 2)載藥加入濃度為0. 5 1. 0mg/ml的藥物溶液，補(bǔ)加超純水，置于恒溫?fù)u床震蕩，反應(yīng)完成后 磁分離，棄去上清，冷凍干燥，制得多糖金磁復(fù)合微粒載藥體，所加藥物溶液與多糖金磁復(fù) 合微粒的質(zhì)量比為1 4 : 20。
5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的多糖金磁復(fù)合微粒載藥體的制備方法，其特征在于將步驟 1. 2)的混合體系升溫到35 45t:后再加入交聯(lián)劑或堿溶液，再升溫至50 6(rC，反應(yīng)5 8h，所加交聯(lián)劑或堿溶液占混合體系的比例為10% 20%;將步驟1. 3)制得的多糖金磁復(fù) 合微粒懸液中先加入乙醇經(jīng)磁分離清洗，除去殘余的有機(jī)相，再用超純水反復(fù)清洗，直到溶 液pH為7。
6. 根據(jù)權(quán)利要求4或5所述的多糖金磁復(fù)合微粒載藥體的制備方法，其特征在于步 驟1. 1)在20 4(TC條件下進(jìn)行，可用電動(dòng)攪拌器加速溶解，轉(zhuǎn)速為300 900轉(zhuǎn)/分鐘， 攪拌時(shí)間為5 20min ;步驟1. 2)中攪拌速度為300 900轉(zhuǎn)/分鐘，反應(yīng)時(shí)間為4 8h ;步驟2. 1)磁分離的時(shí)間為5 15min ;步驟2. 2)恒溫震蕩的溫度為25 40min，震蕩的轉(zhuǎn) 速為100 200轉(zhuǎn)/分鐘，震蕩時(shí)間為4 20h，磁分離的時(shí)間為5 15min。
7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的多糖金磁復(fù)合微粒載藥體的制備方法，其特征在于所述步 驟2. 2)的藥物溶液為阿霉素溶液時(shí)，離心管要用鋁箔包裹好。
8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的多糖金磁復(fù)合微粒載藥體的制備方法，其特征在于所述多 糖是葡聚糖、環(huán)糊精或羥丙基_ P _環(huán)糊精；所述堿溶液是NaOH或NH4OH ;所述交聯(lián)劑為甲 醛、戊二醛或環(huán)氧氯丙烷；所述藥物為單藥，或是兩種、兩種以上的復(fù)合藥物。
9. 根據(jù)權(quán)利要求8所述的多糖金磁復(fù)合微粒載藥體的制備方法，其特征在于所述的 藥物為抗癌化療藥物、蛋白藥物、基因藥物或抗生素類藥物；抗癌化療藥物包括鹽酸阿霉 素、5-氟尿嘧啶、順鉑、洛鉑、卡鉑、甲氨喋呤、阿糖胞苷；蛋白藥物包括腫瘤抑制因子；基因 藥物包括核酸疫苗；抗生素類藥物包括阿克拉霉素，紅霉素，鹽酸多西環(huán)素。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種以金磁微粒為核心，以葡聚糖，環(huán)糊精及其衍生物等可生物降解的多糖為材料，合成具有更好生物相容性和載藥性的多糖金磁復(fù)合微粒載藥體及其制備方法。該多糖金磁復(fù)合微粒載藥體是由多糖金磁復(fù)合微粒與藥物溶液直接混合，通過(guò)物理吸附，將藥物負(fù)載于金磁復(fù)合微粒上形成的載藥復(fù)合體。該多糖金磁復(fù)合微粒載藥體的制備方法包括制備多糖金磁復(fù)合微粒、制備多糖金磁復(fù)合微粒載藥體。解決了現(xiàn)有金磁復(fù)合微粒載藥體制備方法不具體，載藥量等理化指標(biāo)不明確等技術(shù)問(wèn)題，所制備的用于載藥的多糖金磁復(fù)合微粒分散性好，粒徑均一，有更好生物相容性，多糖金磁復(fù)合微粒載藥體具有良好的藥物緩釋和控釋效應(yīng)，合成方法簡(jiǎn)單，具體，可操作性強(qiáng)。
文檔編號(hào)A61K47/36GK101766818SQ200810236540
公開(kāi)日2010年7月7日 申請(qǐng)日期2008年12月30日 優(yōu)先權(quán)日2008年12月30日
發(fā)明者崔亞麗, 彭明麗, 惠文利, 晁旭, 李珂, 辛小芳, 陳超 申請(qǐng)人:陜西北美基因股份有限公司