專(zhuān)利名稱(chēng)：一種從黃杞葉中制備花旗松素單體的方法及用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，涉及采用酶解技術(shù)對(duì)黃杞葉提取物進(jìn)行酶解，從酶解產(chǎn)物中分離制備花旗松素單體的方法，并將其用于預(yù)防和治療脂肪肝。
背景技術(shù)：
黃杞葉為胡桃科植物黃杞(Engeihardtia roxburghiana Wall)的干燥葉，具有清熱解毒止痛之功效。在兩廣地區(qū)民間常作保健茶飲，具有一定的活血化瘀、降血脂、降血糖和提高免疫力等保健功能和抗氧化、抑制肥胖、抗過(guò)敏及預(yù)防癌癥等多種生理活性。花旗松素，又名二氫槲皮素、紫杉葉素，其化學(xué)名為-五羥基二氫黃酮，英文名 Taxifolin, Dihydroquercetin, 3, 5, 7, 3 ‘ ,4 ‘ -Pentahydroxyflavanone,分子式為 C15H12O7,分子量為304.洲，結(jié)構(gòu)式如下
權(quán)利要求
1.一種從黃杞葉中制備花旗松素單體的方法，包括以下步驟A、提取將干燥黃杞葉粉碎或切段，加入溶劑提取，提取液濃縮得浸膏。B、酶解將上述浸膏按每克加入30-100ml的比例加入一定pH值的緩沖液混懸或溶解， 在一定的溫度下加入適量的酶進(jìn)行酶解反應(yīng)。C、分離與純化酶解液醇沉除雜，得上清液或?yàn)V液，上清液或?yàn)V液濃縮至無(wú)醇味。所得上清液或?yàn)V液采用一定的分離純化方法即可得到花旗松素粗品。D、重結(jié)晶花旗松素粗品經(jīng)重結(jié)晶，即得純度>99%的花旗松素單體。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于提取方法可以是回流、超聲、滲轆、浸泡等，其中優(yōu)選回流提??；所用溶劑為質(zhì)量百分比濃度為30% -90%的乙醇，優(yōu)選 50% -80%的乙醇。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于B步驟中酶解反應(yīng)的緩沖液的pH值為3-6，優(yōu)選pH值為4. 5-5. 5。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于B步驟中所選的緩沖液可以是磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液、磷酸鹽緩沖液、醋酸-醋酸鈉緩沖液、檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液和檸檬酸-氫氧化鈉-鹽酸緩沖液中的任意一種。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于B步驟中所用的酶可以是β-糖苷酶、纖維素酶、蝸牛酶、柚苷酶、果膠酶中的一種或幾種混合。其中優(yōu)選糖苷酶和纖維素酶。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于Β步驟中按酶/膏狀物質(zhì)量比= 0. 01-5加入酶進(jìn)行酶解，其中優(yōu)選酶/膏狀物質(zhì)量比=0. 1-0. 5。反應(yīng)的溫度為15-70°C， 優(yōu)選37-50°C，反應(yīng)時(shí)間為4-72h。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于C步驟中的醇沉除雜，所用的醇為乙醇或甲醇。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于C步驟中的一定的分離純化方法可采用有機(jī)溶劑萃取的分離純化方法。酶解上清液或?yàn)V液先用石油醚或與之極性相當(dāng)?shù)牡蜆O性的有機(jī)溶劑脫脂，然后再用乙酸乙酯、正丁醇或與之極性相當(dāng)?shù)挠袡C(jī)溶劑反復(fù)萃取完全，濃縮萃取液至有固體析出，放置過(guò)夜，濾出固體即為花旗松素粗品。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于C步驟中的一定的分離純化方法可采用色譜分離純化的方法。其色譜分離介質(zhì)包括大孔樹(shù)脂、聚酰胺和硅膠。其中所用的大孔樹(shù)脂型號(hào)可以是 D101，D201, HPD-100, HPD-200, AB-8, NK-9, NK-II, FL-I 中的任意一種。 其中優(yōu)選樹(shù)脂型號(hào)為FL-1，D101, HPD-100和AB-8。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其特征在于大孔樹(shù)脂和聚酰胺柱具體的分離純化方法為將水解后的上清液或?yàn)V液以2 4倍柱體積的流速通過(guò)大孔吸附樹(shù)脂柱或聚酰胺柱， 直到吸附飽和；用純水及10%乙醇洗脫雜質(zhì)，直到洗流出液近無(wú)色；再用40%的乙醇洗脫至花旗松素洗脫完全，收集乙醇溶液洗脫液，回收乙醇，繼續(xù)濃縮回收溶劑至有固體析出， 該固體即為花旗松素粗品。
11.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其特征是硅膠色譜的分離純化的方法是將水解后的上清液或?yàn)V液蒸干，拌樣、裝柱、有機(jī)溶劑洗脫或梯度洗脫至花旗松素洗脫完全，回收溶劑至有固體析出，該固體即為花旗松素粗品。
12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的方法，其特征是洗脫所用的有機(jī)溶劑為石油醚、低碳鏈的鹵代烷、低碳鏈的醇和低碳鏈的酯，低碳鏈的酮，或其中二類(lèi)溶劑的混合物。其中，低碳鏈的鹵代烷包括鹵代甲烷、鹵代乙烷等，如三氯甲烷、二氯甲烷、二溴乙烷、三溴乙烷等。低碳鏈的醇指Cu的醇，如甲醇、乙醇、丙醇、異丙醇等。低碳鏈的酯指Cp5的酯，如甲酸甲酯、甲酸乙酯、乙酸甲酯、乙酸乙酯等。低碳鏈的酮指CV5的酮，如丙酮、丁酮等。
13.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于重結(jié)晶溶劑為乙醇、甲醇、丙酮與水的混合溶液。
14.一種花旗松素單體的用途，其特征在于用于脂肪肝的預(yù)防和治療。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種從黃杞葉中制備花旗松素單體的方法及用途，它是將干燥的黃杞葉粉碎或切段，加入一定濃度的乙醇提取，所得提取液濃縮至膏狀物。加入pH＝3-6的緩沖液，在一定溫度下，加入適當(dāng)?shù)拿高M(jìn)行酶解，酶解液再經(jīng)分離、富集、純化和重結(jié)晶處理即可得到純度為99％以上的花旗松素單體。本發(fā)明的特點(diǎn)是直接對(duì)黃杞葉的提取物進(jìn)行酶解，得到高純度的花旗松素單體，具有反應(yīng)專(zhuān)屬性強(qiáng)、轉(zhuǎn)化率高、工藝簡(jiǎn)單易行、污染小、適合大規(guī)模工業(yè)生產(chǎn)等優(yōu)點(diǎn)?？朔F(xiàn)有技術(shù)所存在的對(duì)苷元破壞性大、專(zhuān)屬性差、轉(zhuǎn)化率低、對(duì)設(shè)備腐蝕性大、污染嚴(yán)重、工藝繁瑣等缺點(diǎn)。本發(fā)明所制備的花旗松素單體可用于脂肪肝的預(yù)防與治療。
文檔編號(hào)A61P3/06GK102477453SQ201010551639
公開(kāi)日2012年5月30日 申請(qǐng)日期2010年11月22日 優(yōu)先權(quán)日2010年11月22日
發(fā)明者侯文彬, 單淇, 周福軍, 張新鑫, 徐旭, 高賢 申請(qǐng)人:天津藥物研究院