專利名稱：人或動(dòng)物體表感染的治療的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及人或動(dòng)物體表感染特別是人指甲區(qū)域的真菌感染的治療。
背景技術(shù)：
處于明顯良好的狀況下的健康指甲是很重要的并且是人的外觀的高度珍視的方面。指甲的外觀、強(qiáng)度以及健康經(jīng)?？赡軙?huì)不利地受到病原真菌細(xì)胞(典型地是發(fā)癬菌)感染的影響，并且對(duì)于通過(guò)消除感染的真菌而改善受累的指甲的外觀的療法存在一個(gè)強(qiáng)烈需求。盡管在市場(chǎng)上存在許多補(bǔ)救辦法，但是對(duì)可獲得的技術(shù)和產(chǎn)品仍然存在普遍的不滿意。全身性遞送的藥劑可以通過(guò)血流到達(dá)指甲區(qū)域，但是從循環(huán)進(jìn)入指甲區(qū)域的差的滲透以及嚴(yán)重的負(fù)作用限制了該方法的有用性。在侵入真菌的作用下，常常致使真菌感染的指甲是多孔的或開(kāi)放的。因此，通常指甲是被細(xì)菌共定植的，通過(guò)釋放額外的破壞性酶類和局部活性毒素這些細(xì)菌能夠使真菌的損傷效應(yīng)加劇。普遍公認(rèn)的是，即使真菌性指甲感染通過(guò)一種已知療法被減輕了，但是它很少完全被消除并且通常在治療停止之后不久感染會(huì)復(fù)發(fā)。

發(fā)明內(nèi)容
諸位發(fā)明人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，活性成分不容易滲透指甲，并且很少(如果有一些的話)的應(yīng)用到頂部表面的材料到達(dá)下面的結(jié)構(gòu)，在這些結(jié)構(gòu)中這些真菌細(xì)胞能夠相對(duì)安全地駐
&3 甶ο在一個(gè)第一方面，本發(fā)明涉及一種治療人或動(dòng)物體表感染(例如，真菌感染)的方法，包括將一種水性液體應(yīng)用到感染的體表(例如，指甲區(qū)域)，然后應(yīng)用一種包括過(guò)氧化氫源的敷料。在一個(gè)第二方面，本發(fā)明涉及在人或動(dòng)物體表感染(例如，具體地但不唯一地是人或動(dòng)物的指甲區(qū)域的真菌感染)的治療中的一種水性液體與包括過(guò)氧化氫源的一種敷料的組合。在一個(gè)第三方面，本發(fā)明涉及一種水性液體與包括過(guò)氧化氫源的一種敷料的組合在制造用于人或動(dòng)物體表感染(例如，具體地但不唯一地是人或動(dòng)物的指甲區(qū)域的真菌感染)的治療的藥物中的用途。通過(guò)將一種水性液體應(yīng)用到感染的體表，體表變得柔軟并且變得更加多孔。例如， 這可以允許該液體經(jīng)由現(xiàn)有的多孔性進(jìn)入指甲區(qū)域的內(nèi)部。因此該液體提供了一種到體表 (例如指甲區(qū)域)的內(nèi)部的水性流動(dòng)路徑。因此包括一種過(guò)氧化氫源的敷料的后續(xù)應(yīng)用導(dǎo)致了過(guò)氧化氫沿著產(chǎn)生的水性流動(dòng)路徑的有效擴(kuò)散，進(jìn)入體表(例如，指甲區(qū)域)的內(nèi)部的更不易接近的部分，使得過(guò)氧化氫能夠深入地滲透，這允許顯著減輕或消除感染(例如像在指甲區(qū)域的所有構(gòu)件中的真菌感染)。
當(dāng)考慮針對(duì)甲板以及下面的甲床以及所有相關(guān)結(jié)構(gòu)的新的治療方法時(shí)，必須了解指甲具有一種特殊解剖以及構(gòu)成。指甲的最突出部分(甲板)由一種堅(jiān)硬的角質(zhì)化結(jié)構(gòu)組成，由死角質(zhì)化細(xì)胞(角質(zhì)細(xì)胞)構(gòu)成，從指甲基部的基質(zhì)向上推移(push up)。甲板的大部分是半透明的，允許皮膚中的血液供給的顏色徹底顯現(xiàn)，給出一種粉紅的顏色。指甲本身是相對(duì)缺乏水分的但是，當(dāng)將其暴露于水時(shí)，它可以變得相對(duì)含水的，假設(shè)一種軟化的以及柔韌的狀態(tài)。甲廓，與指甲的側(cè)面重疊的皮膚褶，將甲板保持在恰當(dāng)?shù)奈恢貌⑶冶Ｗo(hù)其邊緣。指甲的唯一活的、再生的部分是直接位于角質(zhì)層下面的甲母質(zhì)。在這個(gè)點(diǎn)處新的細(xì)胞形成并且隨著它們的成熟而不斷向前推進(jìn)以產(chǎn)生甲板。甲母質(zhì)也被提供有神經(jīng)以及豐富的血管以便為細(xì)胞提供營(yíng)養(yǎng)和氧氣。甲板支撐在甲床上，甲床與甲母質(zhì)是連續(xù)的。它也被豐富地供應(yīng)了血管以及神經(jīng)。 其表面形成許多平行的脊，與在甲板的下表面上的脊精確地吻合。角質(zhì)層是與指甲重疊的皮膚表皮的一部分。它保護(hù)了甲母質(zhì)免受細(xì)菌侵入和物理?yè)p傷。真菌細(xì)胞可以駐留并且生長(zhǎng)在這些結(jié)構(gòu)的任何部分中，并且滲透所有的區(qū)域?qū)τ谌魏沃委熓侵匾模员阆魏螝堄喔腥静≡钜约跋诩装宓闹鲄^(qū)域中的感染。在此定義了術(shù)語(yǔ)“甲區(qū)域”，包括甲板、甲床、甲母質(zhì)、甲廓以及角質(zhì)層。本發(fā)明還涉及一種治療人類乳頭瘤病毒感染的細(xì)胞的方法，該方法包括將如在此定義的一種水性液體應(yīng)用于這些感染的細(xì)胞，然后應(yīng)用一種包括如在此定義的一種過(guò)氧化氫源的敷料。本發(fā)明還涉及在治療人類乳頭瘤病毒感染的細(xì)胞中的如在此定義的一種水性液體與如在此定義的包括一種過(guò)氧化氫源的一種敷料的組合。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，該水性液體包括一種過(guò)氧化物酶。過(guò)氧化物酶擴(kuò)散進(jìn)入體表(例如，指甲區(qū)域)的內(nèi)部。過(guò)氧化物酶，當(dāng)它已經(jīng)滲透體表(例如指甲)的內(nèi)部區(qū)域時(shí)，實(shí)質(zhì)上保持是無(wú)活性的，直到過(guò)氧化氫經(jīng)由來(lái)自敷料的水性途徑擴(kuò)散時(shí)為止。在過(guò)氧化物酶的存在下，過(guò)氧化氫的氧化作用被增強(qiáng)。因此已經(jīng)發(fā)現(xiàn)過(guò)氧化物酶實(shí)質(zhì)性地增強(qiáng)了過(guò)氧化氫的活性，特別是抗真菌活性， 因?yàn)樗呋嗽谡婢?xì)胞的細(xì)胞膜和/或細(xì)胞質(zhì)之上或之內(nèi)的這些脆弱而重要的真菌分子的氧化。可以采用一些適合的過(guò)氧化物酶，包括乳過(guò)氧化物酶、辣根過(guò)氧化物酶、碘化過(guò)氧化物酶、氯化物過(guò)氧化物酶以及髓過(guò)氧化物酶。然而乳過(guò)氧化物酶以及辣根過(guò)氧化物酶目前是優(yōu)選的。在水性液體中過(guò)氧化物酶的濃度優(yōu)選地是在從1 Pg/ml至1000 μδ/πι1的范圍內(nèi)， 優(yōu)選地是從50 μδ/πι1至1000 Pg/ml，更優(yōu)選地是從100 μδ/πι1至500 Pg/ml。該水性液體還優(yōu)選地包括表面活性劑和/或溶劑，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)它們?cè)鰪?qiáng)了液體進(jìn)入體表(例如，指甲)的滲透。該敷料優(yōu)選地處于一種水合條件下，以便在應(yīng)用該敷料時(shí)過(guò)氧化氫可以有效地?cái)U(kuò)散進(jìn)入指甲區(qū)域。敷料中的足夠的水是必需的，以便在指甲區(qū)域與該敷料之間形成一個(gè)接觸液界。
優(yōu)選地，該水性液體的滲透強(qiáng)度與該敷料中的液體的滲透強(qiáng)度是相同的或相似的，以增加所希望的流體以及溶質(zhì)流量。在使用中該敷料優(yōu)選地將水提供到指甲區(qū)域，這通過(guò)以已知的方式選擇適當(dāng)?shù)臐B透特性而實(shí)現(xiàn)。該敷料的材料可以是處于水凝膠、海綿、泡沫的形式或一些其他的親水基質(zhì)的形式，這些形式可以保持足夠的水以允許在該敷料與指甲區(qū)域之間的受控的擴(kuò)散路徑。優(yōu)選地，該敷料將包含用于通過(guò)例如氫鍵結(jié)合而調(diào)節(jié)過(guò)氧化氫的通路的溶質(zhì)，該氫鍵結(jié)合可以通過(guò)適當(dāng)?shù)木酆衔?例如，多糖，包括糖胺聚糖)濃度而實(shí)現(xiàn)。該敷料可以包括一種濕潤(rùn)的棉敷料或可以包括一種帶有濕潤(rùn)成分的結(jié)構(gòu)芯材料。 然而，優(yōu)選地該敷料包含一種或多種水基凝膠或水性凝膠，也被稱為水合水凝膠。這種凝膠可以由多種材料形成并且可以包含如將在下面討論的多種試劑。典型地，該敷料將處于一種薄片、層或薄膜的形式。可替代地，該敷料可可以是處于一種無(wú)定形凝膠或洗液的形式，優(yōu)選地是能夠三維變形或成形(包括通過(guò)一個(gè)噴嘴進(jìn)行擠壓的)的不具有固定形式或形狀的一種水凝膠。無(wú)定形凝膠典型地不是交聯(lián)的或具有低水平的交聯(lián)?？梢允褂靡环N剪切稀化的無(wú)定形凝膠。當(dāng)其經(jīng)受剪切應(yīng)力(例如，當(dāng)通過(guò)一個(gè)噴嘴被注出或擠出時(shí))時(shí)這樣的凝膠是一種液體但是在靜態(tài)時(shí)該凝膠是固定的。在WO 03/090800中披露了適合的水合水凝膠。該水合水凝膠合宜地包括親水聚合物材料。適合的親水聚合物材料包括聚丙烯酸酯以及甲基丙烯酸酯，例如，如由First Water Ltd提供的處于薄片水凝膠的形式，包括聚2_丙烯酰氨基_2_甲基丙磺酸(聚AMPS) 或它的鹽類(例如，在WO 01/96422中所描述的)、多糖例如多糖膠特別地黃原膠(例如，在商標(biāo)Keltrol下可獲得的)、各種糖類、多聚羧酸(例如，在來(lái)自ISP歐洲的商標(biāo)Gantrez AN-169 BF下可獲得的)、聚(甲基乙烯基醚馬來(lái)酸酐共聚物)(例如在商標(biāo)Gantrez AN 139 下可獲得的，具有一個(gè)在20，000至40，000范圍的分子量)、聚乙烯吡咯烷酮(例如處于可商購(gòu)的被稱為PVP K-30和PVP K-90的等級(jí)形式)、聚環(huán)氧乙烷(例如，在商標(biāo)Polyox WSR-301 下可獲得的)、聚乙烯醇(例如，在商標(biāo)Elvanol下可獲得的)、交聯(lián)聚丙烯酸聚合物(例如，在商標(biāo)Carbopol EZ-I下獲得的)、纖維素以及改性纖維素包括羥丙基纖維素(例如，在商標(biāo) Klucel EEF下可獲得的)、羧甲基纖維素鈉(例如，在商標(biāo)Cellulose Gum 7LF下可獲得的) 以及羥乙基纖維素(例如，在商標(biāo)Natrosol 250 LR下可獲得的)?？梢詫⒂H水聚合物材料混合物使用在一種凝膠中。在親水聚合物材料的一種水合水凝膠中，該親水聚合物材料令人希望地以基于該凝膠的總重量的按重量計(jì)至少0. 1%、優(yōu)選至少0. 5%、優(yōu)選至少1%、優(yōu)選至少洲、更優(yōu)選至少 5%、還更優(yōu)選至少10%、或至少20%、令人希望地至少25%并且甚至更令人希望地至少30%的濃度而存在?；谠撃z的總重量的甚至更高的量，按重量計(jì)高達(dá)大約40%。一種優(yōu)選的水合水凝膠包括聚2-丙烯酰氨基-2-甲基丙磺酸(聚AMPS)或它的鹽類，優(yōu)選地以該凝膠的總重量的按重量計(jì)大約20%的量。該過(guò)氧化氫源可以包括過(guò)氧化氫本身或過(guò)氧化氫與另一個(gè)實(shí)體的組合或復(fù)合?？商娲?，該過(guò)氧化氫源可以是一種過(guò)氧化氫產(chǎn)生手段。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，該過(guò)氧化氫源是一種過(guò)氧化氫產(chǎn)生手段，該手段包括氧化還原酶、一種氧源以及一種用于酶的底物源。氧化還原酶催化了一種適當(dāng)?shù)牡孜锱c氧的反應(yīng)以產(chǎn)生過(guò)氧化氫。 適合用于本發(fā)明中的氧化還原酶以及對(duì)應(yīng)的底物(這些底物存在于血液和組織液中)包括以下各項(xiàng)
酶底物葡萄糖氧化酶β -D葡萄糖己糖氧化酶己糖膽固醇氧化酶膽固醇半乳糖氧化酶D-半乳糖吡喃糖氧化酶吡喃糖膽堿氧化酶膽堿丙酮酸氧化酶丙酮酸羥基乙酸氧化酶羥基乙酸氨基酸氧化酶氨基酸
目前該優(yōu)選的氧化還原酶是葡萄糖氧化酶。其催化了 β-D葡萄糖底物的反應(yīng)以給出過(guò)氧化氫以及葡萄糖酸?？梢允褂靡环N氧化還原酶的混合物。氧化還原酶和葡萄糖可以任選地與一種氧源精細(xì)地共混在一起?？梢酝ㄟ^(guò)任何方便的氧供體提供氧，但是一種方便的來(lái)源是大氣氧。當(dāng)氧源是大氣氧時(shí)，該敷料優(yōu)選地包括不連續(xù)的第一層和第二層。該第一層包括氧化還原酶并且定位于該敷料的外部分的附近，即，在使用中遠(yuǎn)離指甲區(qū)域，在此處大氣氧水平是最高的。該第二層包括該底物源并且定位于該敷料的內(nèi)部分的附近，即，鄰近指甲區(qū)域，這樣使得產(chǎn)生的水凝膠過(guò)氧化物可以直接進(jìn)入指甲區(qū)域。該分層的實(shí)施方案的一種優(yōu)選的形式是其中該第一層和該第二層兩者都包含交聯(lián)的水合水凝膠?？梢詫⑺z設(shè)計(jì)(cast)在一個(gè)機(jī)械增強(qiáng)結(jié)構(gòu)(例如一個(gè)棉紗布片或一個(gè)惰性柔性網(wǎng))的周圍，例如，以此提供一種結(jié)構(gòu)增強(qiáng)的水凝膠層或厚片?？商娲?，該第一含酶層可以處于干燥的條件下但是在使用過(guò)程中被置于與該第二層的流體連通中，這導(dǎo)致水遷移到該第一層以使該酶水化。在該分層的實(shí)施方案中優(yōu)選的是，該第一層是較薄的，即從0.01 mm至2.0 mm，而該第二層是較厚的，即從0.5 mm至5.0 mm。如果該第一層是一種水合水凝膠，則它優(yōu)選地是從0. 1 mm至2. 0 mm厚。如果該第一層是一種干膜，則它優(yōu)選地是從0. 01 mm至0. 1 mm厚。第一層的厚度與該第二層的厚度的比率優(yōu)選地是從1 2至1 200，優(yōu)選地從1 5至1 50，更優(yōu)選地從1 5至1 20。氧化還原酶可以被合宜地固定，這樣可防止它朝著該第二層遷移。該底物(例如葡萄糖)可以按不同的形式存在，包括溶解在一種水合水凝膠結(jié)構(gòu)之內(nèi)，作為一種緩慢溶解的固體而存在，或被包封在用于緩釋的另一個(gè)結(jié)構(gòu)之內(nèi)。優(yōu)選的是安排該敷料以具有過(guò)量的底物，這樣該敷料能夠在使用中發(fā)揮作用以生成過(guò)氧化氫經(jīng)過(guò)一個(gè)延長(zhǎng)的時(shí)期，例如，至少一個(gè)小時(shí)，例如從1至10個(gè)小時(shí)或更長(zhǎng)。根據(jù)本發(fā)明的該組合典型地是一種包裝的套件，該套件包括一種水溶液與一種敷料的組合，該敷料包括如以上所述的一種過(guò)氧化氫源。這些組件典型地是密封的、不滲透水的封裝。現(xiàn)在通過(guò)舉例并且參照以下圖形來(lái)說(shuō)明本發(fā)明，其中

圖1是顯示了測(cè)量的電流對(duì)時(shí)間的一個(gè)圖表，顯示了過(guò)氧化氫的產(chǎn)生。圖加是顯示了真菌紅色毛癬菌的殺菌曲線的一個(gè)圖表。圖2b是顯示了真菌紅色毛癬菌的殺菌曲線的另一個(gè)圖表。實(shí)例實(shí)驗(yàn)概沭
將測(cè)試盤在含有IO7個(gè)真菌細(xì)胞的50%的血清中浸泡以再產(chǎn)生一種高蛋白質(zhì)環(huán)境。將它們置于在一個(gè)凝膠床上，該凝膠床也含有50%的血清以模擬與甲床的接觸。對(duì)這些盤給予一定劑量的辣根過(guò)氧化物酶或乳過(guò)氧化物酶的二者之一的水溶液，每套盤具有這些酶類的不同劑量水平。對(duì)照盤沒(méi)有留下任何種類的過(guò)氧化物。一些盤未被覆蓋而留置作為額外的實(shí)驗(yàn)對(duì)照，以確定當(dāng)未經(jīng)處理時(shí)這些真菌細(xì)胞存活得如何好。在設(shè)定的時(shí)間間隔中，將有代表性的盤移開(kāi)用于采樣，并且通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)方法確定存活的真菌細(xì)胞的數(shù)量。這些實(shí)驗(yàn)顯示， 如果在合適的地方保留幾個(gè)小時(shí)，由分層的凝膠貼片遞送的過(guò)氧化氫可以殺死這些真菌細(xì)胞。然而，通過(guò)另外的與真菌接觸的過(guò)氧化物酶的存在而大大地提高了真菌殺死率。辣根過(guò)氧化物酶比乳過(guò)氧化物酶是更加有效的，并且其效果通常隨著劑量的增加而增強(qiáng)。實(shí)例1 根據(jù)過(guò)氧化氫的產(chǎn)生對(duì)過(guò)氧化氫提供的分層的層貼片(stratified layer patch)進(jìn)行構(gòu)造和評(píng)價(jià)。使用電化學(xué)(緩慢而長(zhǎng)期的技術(shù))測(cè)量了過(guò)氧化氫(H2O2)的產(chǎn)生。將一種敷料置于定制的傳感器上，施加越過(guò)電極的電位并且測(cè)量H2A的存在。該敷料包括兩層(i)水合水凝膠層以及(ii)包含葡萄糖氧化酶的干膜活化層。層1的制備如下所示制備了一種水凝膠片
制備了具有20%的2-丙烯酰氨基-2-甲基丙磺酸鈉(Lubrizol Corporation, 50%的含水儲(chǔ)備溶液)、10%的葡萄糖(Fisher Scientific,分析級(jí))、以及0. 1%的乳酸鋅 (Aldrich)的水溶液。包含了聚乙二醇700 二丙烯酸酯(Aldrich)作為交聯(lián)劑以及2-羥基-2-甲基苯丙酮(Aldrich)作為光引發(fā)劑。將6. 5 g和13 g的該溶液分散到10 χ 10 cm的培養(yǎng)皿(petri dish)中并且使其經(jīng)受100 mff/cm2的UV光照射持續(xù)20秒。層2的制備如下所示制備了一種干膜
制備了 25% w/w的PVA (Gohsenol聚乙烯醇，通過(guò)日本Gohsei提供的代碼為EG05P) 溶液的水溶液。此外，將40. 3 mg葡萄糖氧化酶(8丨003丨&178丨8，150，000單位/克)+ 300 mg組氨酸(Sigma)+ 150 mg檸檬酸(Fisher，分析級(jí))+ 75 mg碘化鉀(Sigma)溶解在2 ml 的分析級(jí)水(Fisher)中。將30 g的25% PVA溶液與葡萄糖氧化酶/組氨酸/檸檬酸/碘化鉀溶解混合并且允許沉降以移除任何截留的氣泡。然后將該混合物在50° C下進(jìn)行干燥以給出一直厚度為40-45微米的干膜。電化學(xué)分析
使用了定制的3個(gè)電極傳感器(工作電極、對(duì)電極以及參比電極)進(jìn)行分析。Ezescan 儀器和軟件購(gòu)自英國(guó)盧頓市的Whistonbrook Technologies公司。將這些電極安裝在一個(gè)特氟隆盒子內(nèi)并且置于一個(gè)25° C的培養(yǎng)箱內(nèi)。在使用中，將20 μ 的0. 1 M KCl溶液施用在傳感器的電極末端。將層1水凝膠片切割成1. 5 χ 2 cm的切片(6. 5 g和13 g的設(shè)計(jì)重量)并且置于KCl溶液之上，確保與這些電極均勻接觸并且在凝膠與傳感器之間沒(méi)有截
7留氣泡。將這些凝膠覆蓋以減少蒸發(fā)。將+ 950 mV的電位施加越過(guò)這些電極并且記錄產(chǎn)生的電流。當(dāng)獲得穩(wěn)定的基線電流時(shí)，將1.5 χ 2 cm的干膜切片施用到層1水凝膠片的表面。記錄所產(chǎn)生的電流。參見(jiàn)圖1:
圖1用實(shí)例說(shuō)明了當(dāng)將+ 950 mV的一個(gè)電勢(shì)應(yīng)用于該傳感器的該層1水凝膠片，存在非常小的可測(cè)量的背景電流，因此存在非常小的來(lái)自這些材料的干擾在此給定的電勢(shì)下用于該水凝膠的制備。在施用干酶膜之后(在該圖上在大約4000秒處)，葡萄糖氧化酶的化學(xué)作用被激活并且產(chǎn)生了 H2O2, H2A通過(guò)該層1水凝膠迅速擴(kuò)散通過(guò)該電極，在此處測(cè)量到一個(gè)顯著的電流上升。這清楚地表明該雙層體系在該雙層體系之內(nèi)產(chǎn)生了 H2A并且將其遞送到接觸表面。關(guān)于該圖表的主要穩(wěn)定時(shí)期(在5，000秒與13，000秒之間)所產(chǎn)生的電流通常等同于大約0.1%的H2A (水溶液)。此外，該層1水凝膠的不同厚度產(chǎn)生了非常相似的曲線，除了較薄的凝膠(每10 χ 10 cm面積6. 5 g凝膠)在施用的一小時(shí)(在活化之后大約 3000秒)處給出了顯著較高的峰電流(因此H2A的濃度)以外。然后，H2O2測(cè)量值逐漸下降直到這些曲線在活化之后大約40，000秒(大約11小時(shí))處返回到平坦響應(yīng)(flat response)。實(shí)例2 包含引物樣品的過(guò)氧化物酶制劑(如水溶液)。如下所示制備了一種適合的過(guò)氧化物酶的基本載體將50 mM的pH 6-6. 5的磷酸鈉緩沖液與0.的Tween 20 (Sigma)表面活性劑混合。將過(guò)氧化物酶溶解在其中以給出一個(gè)100 μδ/πι1的的終濃度。可以改變?cè)撦d體的配方以提供所需要的不同的特性。例如，可以改變緩沖鹽的濃度和類型以提供一個(gè)范圍的緩沖極限值并且可以改變?cè)撊芤旱腜H值，取決于所使用的酶 (例如，過(guò)氧化物酶)的施用和最適PH ；可以改變表面活性劑的濃度和類型以提供不同的濕潤(rùn)特征；可以包含另外的聚合物增稠劑以降低該流體的流動(dòng)特征(例如，以有助于防止在施用時(shí)該溶液流出指甲)；還可以改變所使用的酶的水平，以允許在該處理的結(jié)構(gòu)上或其之內(nèi)的過(guò)氧化物酶介導(dǎo)的作用更強(qiáng)或減弱。還可以結(jié)合另外的添加劑(例如，抗微生物劑)以改善該敷料的功效。實(shí)例3 在一個(gè)模型系統(tǒng)中針對(duì)ir咨毛廣盧測(cè)試本發(fā)明的抗真菌處理系統(tǒng)。―于在“工]! vitro diffusion bed, 3~day repeat challenge ' capacity' test for antimicrobial wound dressings，，，J. Greenman, R. M. S. Thorn, S. Saad, A. Austin International Wound Journal (2006), 3，322-3 中描述的技術(shù)，使用了一種體外平臺(tái)靜態(tài)擴(kuò)散模型。通過(guò)在沙保氏液體培養(yǎng)基中的馬鈴薯葡萄糖瓊脂上乳化ir咨毛—的成熟的表面生長(zhǎng)生物質(zhì)(surface growth biomass)制備測(cè)試接種物，移開(kāi)懸浮液，進(jìn)行渦旋混合， 進(jìn)而允許大顆粒從溶液中沉降出來(lái)。通過(guò)分光光度法調(diào)整該生成的懸浮液以給出大約IO7 cfu ml—1的標(biāo)準(zhǔn)化接種物，該接種物是足夠稠的以使任何殺真菌效應(yīng)能過(guò)被檢測(cè)出(觀察到 > IO3 Cfu的減少指示一種殺菌效應(yīng))。在一個(gè)聚AMPS測(cè)試臺(tái)的表面上，將100 μ 1體積的確定的接種物再懸浮在重復(fù)的纖維素盤中(其配制與如在實(shí)例1中所描述的層1水凝膠是相同的，但是設(shè)計(jì)為每個(gè)10 X 10 cm盤25 g凝膠片)，由此能夠施用測(cè)試產(chǎn)品(圖1)。測(cè)試了一種雙層敷料。如在實(shí)例 1中描述制備了這些層。在使用之前通過(guò)以所需要的濃度溶解在分析水中制備了乳過(guò)氧化物酶或辣根過(guò)氧化物酶。乳過(guò)氧化物酶被認(rèn)為可以增強(qiáng)該新穎的局部處理的一些抗真菌效果，并且用乳過(guò)氧化物酶或辣根過(guò)氧化物酶溶液針對(duì)一些實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)的纖維素盤進(jìn)行預(yù)處理來(lái)確定不同的效果。所提出的實(shí)驗(yàn)測(cè)試和對(duì)照條件的范圍顯示于表1中。通過(guò)使這兩個(gè)層結(jié)合在一起而激活這些雙層敷料。放置該水凝膠片使其與纖維素盤接觸，進(jìn)而將干膜施用到該水凝膠片的最高表面上。在C下孵育測(cè)試臺(tái)，并設(shè)置時(shí)間間隔(0，1，2，4 &以及24 h);將這些纖維素盤移開(kāi)，在PBM中再次懸浮，進(jìn)行連續(xù)稀釋，進(jìn)而螺旋地鋪板到沙保氏葡萄糖瓊脂上。在孵育(5天)之后，通過(guò)集落計(jì)數(shù)(cfu disc—1)確定在處理暴露之后的不同時(shí)間點(diǎn)處皮膚真菌存活者的數(shù)量。使用GraphPad Prism (v. 4) 將這些結(jié)果進(jìn)行繪圖和分析。結(jié)果
這些實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示于圖2中，并且明顯的是所有這些測(cè)試條件都引出了顯著的抗微生物效應(yīng)，而通過(guò)3個(gè)小時(shí)的處理暴露之后，在這些局部處理下方不能檢測(cè)到活細(xì)胞。在該盤之內(nèi)的乳過(guò)氧化物酶顯得以濃度依賴性方式增強(qiáng)了該局部處理的效果，盡管相比于該單獨(dú)的測(cè)試處理1 yg mr1沒(méi)有顯著的效果(圖加)。在該盤之內(nèi)的辣根過(guò)氧化物酶也以濃度依賴性方式增強(qiáng)了該局部處理的效果，其中甚至最低的濃度(1 Ug ml—1)仍具有顯著的效果(圖2b)。在這些對(duì)照樣品之內(nèi)，在貧咨毛■細(xì)胞的數(shù)目方面存在著輕微的下降，這表明這種微生物在這些真菌測(cè)試臺(tái)測(cè)定板上不被良好支持(特別是在孵育M小時(shí)之后);盡管相比于對(duì)照而言所有測(cè)試處理都顯示出顯著的效果。有趣的是，相比于在M小時(shí)處的未覆蓋的對(duì)照，無(wú)活性的處理對(duì)照顯得對(duì)該微生物提供了一定的保護(hù)。結(jié)論
從這些結(jié)果可見(jiàn)，單獨(dú)的局部處理對(duì)于ir咨毛廣盧具有顯著的抗微生物效應(yīng)，在3小時(shí)之內(nèi)將活細(xì)胞數(shù)減少到低于此系統(tǒng)的最低檢測(cè)點(diǎn)(2 χ IO2個(gè)細(xì)胞)，這指示了一種殺真菌效果(減少〉3個(gè)對(duì)數(shù)倍)。過(guò)氧化物酶和辣根過(guò)氧化物酶兩者都增強(qiáng)了局部處理的效果，盡管明顯的是辣根過(guò)氧化物酶是更有效的。表1.用于確定不同的新穎處理的抗真菌潛力的實(shí)驗(yàn)測(cè)試和對(duì)照條件。
對(duì)照1未覆蓋的盤對(duì)照2無(wú)活性局部處理測(cè)試1活性局部處理測(cè)試2活性局部處理+在盤中的1 μ g/ml的乳過(guò)氧化物酶測(cè)試3活性局部處理+在盤中的100 μ g/ml的乳過(guò)氧化物SI測(cè)試4活性局部治療+在盤中的500μ g/ml的乳過(guò)氧化物SI測(cè)試5活性局部處理+在盤中的1 μ g/ml的辣根過(guò)氧化物SI測(cè)試6活性局部處理+在盤中的100 μ g/ml的辣根過(guò)氧化物酶測(cè)試7活性局部處理+在盤中的500 μ g/ml的辣根過(guò)氧化物酶
權(quán)利要求
1.一種水性液體與一種敷料的組合，該敷料包括用于在人或動(dòng)物體表感染的治療中使用的一種過(guò)氧化氫源。
2.一種人或動(dòng)物體表感染的治療方法，該方法包括將一種水性液體應(yīng)用到該感染的體表，然后應(yīng)用包括一種過(guò)氧化氫源的一種敷料。
3.—種水性液體與包括過(guò)氧化氫源的一種敷料的組合在制造用于人或動(dòng)物體表感染的治療的藥物中的用途。
4.根據(jù)以上權(quán)利要求的任一項(xiàng)所述的發(fā)明，其中該身體表感染是一種真菌感染。
5.根據(jù)以上權(quán)利要求的任一項(xiàng)所述的發(fā)明，其中該體表是指甲區(qū)域，具體而言是人的指甲區(qū)域。
6.根據(jù)以上權(quán)利要求的任一項(xiàng)所述的發(fā)明，其中該水性液體包括一種過(guò)氧化物酶。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的發(fā)明，其中過(guò)氧化物酶包括乳過(guò)氧化物酶、辣根過(guò)氧化物酶或它們的一種混合物。
8.根據(jù)權(quán)利要求6或7所述的發(fā)明，其中在該水性液體中過(guò)氧化物酶的濃度是在從1 Pg/ml 至 1000 μδ/πι1 的范圍內(nèi)。
9.根據(jù)以上權(quán)利要求的任一項(xiàng)所述的發(fā)明，其中該水性液體包括表面活性劑和/或溶劑。
10.根據(jù)以上權(quán)利要求的任一項(xiàng)所述的發(fā)明，其中該敷料在使用中向指甲區(qū)域提供水。
11.根據(jù)以上權(quán)利要求的任一項(xiàng)所述的發(fā)明，其中該敷料包括一種水合水凝膠材料。
12.根據(jù)以上權(quán)利要求的任一項(xiàng)所述的發(fā)明，其中該過(guò)氧化氫源是一種過(guò)氧化氫產(chǎn)生手段，包括氧化還原酶、一種氧源以及一種用于酶的底物源。
13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的發(fā)明，其中氧化還原酶包括葡萄糖氧化酶。
14.根據(jù)權(quán)利要求12或13所述的發(fā)明，其中該敷料包括不連續(xù)的第一層和第二層，該第一層包括氧化還原酶并且被定位于該敷料的外部分的附近，該第二層包括該底物源并且被定位于該敷料的內(nèi)部分的附近。
全文摘要
一種人或動(dòng)物體表感染特別是真菌感染的治療方法，包括將一種水性液體應(yīng)用到感染的體表(例如，指甲區(qū)域)上，然后應(yīng)用一種包括過(guò)氧化氫源的敷料。在此還提供了在該方法中使用的該液體與該敷料的一種組合。
文檔編號(hào)A61L26/00GK102405065SQ201080017388
公開(kāi)日2012年4月4日 申請(qǐng)日期2010年4月30日 優(yōu)先權(quán)日2009年5月1日
發(fā)明者奧斯丁 A., 戴維斯 P. 申請(qǐng)人:香榭有限公司