本發(fā)明屬于生物醫(yī)學材料領域，具體涉及一種糖-血紅蛋白納米粒子的制備方法及用途，特別是涉及通過單糖或者雙糖的糖醛基和血紅蛋白肽鏈上的氨基酸殘基之間的偶聯(lián)反應制備出生物相容性好、穩(wěn)定性高的糖-血紅蛋白納米粒子，以及此糖-血紅蛋白納米粒子在藥物遞送和血漿擴容領域的應用。

背景技術：

生物醫(yī)學材料(Biomedical Materials)是用于診斷、治療、修復或替換人體組織、器官或增進其功能的一類高技術新材料。醫(yī)用高分子材料是生物醫(yī)學材料中發(fā)展最早、應用最廣泛、用量最大的材料，它既可以來源于天然產物，又可以人工合成。按照不同的性質，醫(yī)用高分子材料可分為非降解型和可降解型兩類。前者在生物環(huán)境中能長期保持穩(wěn)定，不發(fā)生降解、交聯(lián)或物理磨損等，且本身和少量的降解產物不會對機體產生明顯的毒副作用，主要包括聚乙烯、聚丙烯、聚丙烯酸酯、芳香聚酯、聚硅氧烷、聚甲醛等，主要用作人體軟、硬組織修復體、人工器官、人造血管、接觸鏡、膜材、粘接劑和管腔制品等。后者可在生物環(huán)境作用下發(fā)生結構破壞和性能蛻變，其降解產物能通過正常的新陳代謝被機體吸收利用或排出體外，主要包括蛋白質、線性脂肪族聚酯、甲殼素、纖維素、聚氨基酸、聚乙烯醇、聚己丙酯等，主要用于藥物釋放和送達載體以及非永久性植入裝置。

納米藥物遞送系統(tǒng)是醫(yī)用高分子材料發(fā)展的一個重要分支，其在提高藥物的治療指數以及安全性等方面頗具潛力，可以通過改善藥物的水溶性或穩(wěn)定性，增強藥物療效、降低藥物毒性、延長藥物處于穩(wěn)態(tài)血藥濃度的時間。此外，納米藥物遞送系統(tǒng)還可用于腫瘤的靶向治療。

血紅蛋白來源于動物血液，其產量高，生物相容性好，在生物醫(yī)用材料領域具有潛在價值。作為一種蛋白質材料，其具有以下優(yōu)勢：①從肽鏈結構分析可知，血紅蛋白具有極強的可修飾性，其分子結構中含有多個反應基團，如-NH₂，-COOH，-OH，-SH等，可在其內部或者表面引入多種活性小分子或者大分子，選擇性的提高血紅蛋白的穩(wěn)定性、靶向性以及體內滯留時間。②血紅蛋白具有多樣性的藥物負載方式，其肽鏈中含有多個帶電荷的氨基酸殘基(如賴氨酸、精氨酸、谷氨酸等)，可作為不同藥物的結合位點、實現(xiàn)不同方式的藥物負載。同時血紅蛋白具有不同于其他蛋白質的立體空間結構，其立體構型中包含有四個疏水性“口袋”，可實現(xiàn)對疏水性藥物(如紫杉醇、長春新堿等)的高包封率負載。③血紅蛋白是體內生物活性肽的“肽庫”，分子中存在多種生物活性肽片段，如抗菌肽(α1-23，α107-136，β126-145)、血啡肽(β31-41)、ACE抑制肽(α34-39，β130-135，β64-69)等。

糖是人體必需的一種營養(yǎng)素，提供人體生命活動必需的能量。在整個人體系統(tǒng)中，不同部位對于糖的吸收和利用存在一定的差異。由于腫瘤細胞存在異于正常細胞的糖代謝途徑，造成腫瘤細胞對葡萄糖的過度吞噬現(xiàn)象。肝實質細胞表面存在特異性的受體蛋白，能特異性的識別含有乳糖基或者半乳糖基的分子；而存在于肝非實質細胞、脾臟內皮細胞的甘露糖受體能識別以甘露糖、巖藻糖以及N-乙酰葡萄糖胺為終端的糖類分子。因此，用糖分子修飾載體體系，不但能提高其生物相容性，而且可以賦予載體系統(tǒng)不同的靶向性能。

本發(fā)明立足于體內遞送系統(tǒng)理論，基于血紅蛋白和小分子糖，利用化學工程的方法構建了一種糖-血紅蛋白納米粒子，評價了其作為藥物載體系統(tǒng)的可行性。結果表明，這種糖-血紅蛋白納米粒子具有很好的生物相容性，生物降解性以及體內靶向性，在藥物遞送方面具有廣泛的應用前景。同時，該體系亦表現(xiàn)出良好的膠體特性，具有一定的膠體滲透壓，且在體毒性低，血漿擴容效果好，能夠作為血漿擴容劑使用。

技術實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術的不足，提供一種具有良好生物相容性和可降解性的糖-血紅蛋白納米粒子。

本發(fā)明的第二個目的是提供一種糖-血紅蛋白納米粒子的制備方法。

本發(fā)明的第三個目的是提供一種糖-血紅蛋白納米粒子在藥物遞送方面的用途。

本發(fā)明的第四個目的是提供一種糖-血紅蛋白納米粒子作為血漿擴容劑的用途。

本發(fā)明的目的主要通過以下技術方案實現(xiàn)：

一種糖-血紅蛋白納米粒子，其特征是通過糖分子上的末端醛基和血紅蛋白肽鏈上的氨基酸殘基之間的偶聯(lián)反應制備，所述的血紅蛋白為來源于哺乳動物血液的血紅蛋白或血紅蛋白脫血紅素后得到的珠蛋白，所述的糖為核糖、木糖、阿拉伯糖、葡萄糖、半乳糖、甘露糖或乳糖中的任意一種。

本發(fā)明所述的糖-血紅蛋白納米粒子可通過疏水作用和靜電作用負載抗腫瘤藥物紫杉醇、阿霉素、長春新堿、甲氨蝶呤、順鉑。

本發(fā)明所述的糖-血紅蛋白納米粒子可在糖-血紅蛋白納米粒子中以共價鍵的方式引入熒光素，或者利用京尼平交聯(lián)的方式在其內引入自熒光發(fā)色團。

一種糖-血紅蛋白納米粒子的制備方法，其特征是將摩爾比為10：1～200：1的糖和血紅蛋白溶解于pH＝9～13的緩沖溶液中，37℃攪拌反應30小時，然后加入還原劑終止反應，體系透析、冷凍干燥，即得。所述的還原劑為硼氫化鈉或抗壞血酸。

一種負載親水性抗腫瘤藥物的糖-血紅蛋白納米粒子的制備方法，其特征是將糖-血紅蛋白納米粒子分散在pH＝9的緩沖溶液中，加入抗腫瘤藥物(阿霉素、順鉑)的水溶液，室溫攪拌過夜，體系透析，冷凍干燥，即得。

一種負載疏水性抗腫瘤藥物的糖-血紅蛋白納米粒子的制備方法，其特征是將糖-血紅蛋白納米粒子分散在pH＝9的緩沖溶液中，加入少量二甲基亞砜及疏水性抗腫瘤藥物(紫杉醇、甲氨蝶呤、長春新堿)的二甲基亞砜溶液，室溫攪拌過夜，體系透析、離心除去不溶物、冷凍干燥，即得。

一種鍵合熒光素的糖-血紅蛋白納米粒子的制備方法，其特征是將糖-血紅蛋白納米粒子分散在pH＝9的緩沖溶液中，加入異硫氰酸熒光素(FITC)的二甲基亞砜溶液，4℃攪拌過夜，體系透析、冷凍干燥，即得。

一種京尼平交聯(lián)的糖-血紅蛋白納米粒子的制備方法，其特征是將糖-血紅蛋白納米粒子分散在pH＝9的緩沖溶液中，選擇性加入含有游離氨基的氨基酸溶液，然后加入1～100mM的京尼平溶液，37℃震蕩反應24小時，體系透析，冷凍干燥，即得。

一種糖-血紅蛋白納米粒子在藥物遞送領域的應用。

一種糖-血紅蛋白納米粒子在制備血漿擴容劑中的應用。

與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明的糖-血紅蛋白納米粒子具有如下的優(yōu)勢：

①本發(fā)明的糖-血紅蛋白納米粒子通過糖分子的糖醛基和血紅蛋白肽鏈上的氨基酸殘基之間的偶聯(lián)反應制備，一方面保留了血紅蛋白自身的生物特性，具有良好的生物相容性和生物可降解性；另一方面其表面的糖分子殘基可以選擇性的被腫瘤細胞識別，通過改變糖分子的種類可以選擇性的調節(jié)納米粒子的腫瘤識別性，特異性識別不同種類的腫瘤細胞。

②本發(fā)明的糖-血紅蛋白納米粒子可以通過疏水作用和靜電作用負載紫杉醇、阿霉素、長春新堿、甲氨蝶呤、順鉑等抗腫瘤藥物，實現(xiàn)藥物的有效負載和體內遞送。

③本發(fā)明的糖-血紅蛋白納米粒子表現(xiàn)出良好的膠體性質，具有一定的膠體滲透壓和擴充血容量作用。

④本發(fā)明的糖-血紅蛋白納米粒子制備方法簡單、反應條件溫和，且安全無損，提供了一種新的體內遞送體系類型以及合成方法，具有廣泛的應用前景。

附圖說明

圖1為本發(fā)明實施例3葡萄糖-珠蛋白納米粒子的原子力顯微鏡形貌圖。

圖2為本發(fā)明實施例7核糖-珠蛋白納米粒子的原子力顯微鏡形貌圖。

圖3為本發(fā)明實施例11乳糖-珠蛋白納米粒子的原子力顯微鏡形貌圖。

圖4為本發(fā)明實施例16糖-珠蛋白納米粒子的體外細胞存活率。

圖5為本發(fā)明實施例17負載阿霉素的葡萄糖-珠蛋白納米粒子的體外細胞存活率。

圖6為本發(fā)明實施例18肝癌細胞和肝細胞對鍵合熒光素FITC的葡萄糖-珠蛋白納米粒子的細胞吞噬速度。

圖7為本發(fā)明實施例19肝癌細胞對阿霉素和負載阿霉素的葡萄糖-珠蛋白納米粒子的吞噬速度。

具體實施方式

下面通過實施例對本發(fā)明作進一步說明，其目的僅在于更好的理解本發(fā)明的內容而非限制本發(fā)明的保護范圍：

實施例1葡萄糖-血紅蛋白納米粒子的制備

將摩爾比為100：1的葡萄糖和血紅蛋白溶解于pH＝12的緩沖溶液中，37℃攪拌反應30小時，然后加入硼氫化鈉終止反應，體系透析、冷凍干燥，得到葡萄糖-血紅蛋白納米粒子。馬爾文粒度儀測量：粒徑為173.1nm，粒徑分布為0.168。

實施例2葡萄糖-血紅蛋白納米粒子的制備

將摩爾比為20：1的葡萄糖和血紅蛋白溶解于pH＝13的緩沖溶液中，37℃攪拌反應30小時，然后加入硼氫化鈉終止反應，體系透析、冷凍干燥，得到葡萄糖-血紅蛋白納米粒子。馬爾文粒度儀測量：粒子粒徑為220.2nm，粒徑分布為0.264。

實施例3葡萄糖-珠蛋白納米粒子的制備

將摩爾比為120：1的葡萄糖和珠蛋白溶解于pH＝13的緩沖溶液中，37℃攪拌反應30小時，然后加入硼氫化鈉終止反應，體系透析、冷凍干燥，得到葡萄糖-珠蛋白納米粒子。馬爾文粒度儀測量：粒子粒徑為309.9nm，粒徑分布為0.216。原子力顯微鏡檢測：形狀為球形，粒徑范圍為90～120nm，見圖1。

實施例4甘露糖-血紅蛋白納米粒子的制備

將摩爾比為200：1的甘露糖和血紅蛋白溶解于pH＝13的緩沖溶液中，37℃攪拌反應30小時，然后加入硼氫化鈉終止反應，體系透析、冷凍干燥，得到甘露糖-血紅蛋白納米粒子。馬爾文粒度儀測量：粒子粒徑為197.4nm，粒徑分布為0.134。

實施例5半乳糖-血紅蛋白納米粒子的制備

將摩爾比為100：1的甘露糖和血紅蛋白溶解于pH＝12的緩沖溶液中，37℃攪拌反應30小時，然后加入硼氫化鈉終止反應，體系透析、冷凍干燥，得到半乳糖-血紅蛋白納米粒子。馬爾文粒度儀測量：粒子粒徑為151.7nm，粒徑分布為0.101。

實施例6核糖-血紅蛋白納米粒子的制備

將摩爾比為100：1的核糖和血紅蛋白溶解于pH＝12的緩沖溶液中，37℃攪拌反應30小時，然后加入抗壞血酸終止反應，體系透析、冷凍干燥，得到核糖-血紅蛋白納米粒子。馬爾文粒度儀測量：粒子粒徑為175.8nm，粒徑分布為0.089。

實施例7核糖-珠蛋白納米粒子的制備

將摩爾比為120：1的核糖和珠蛋白溶解于pH＝12的緩沖溶液中，37℃攪拌反應30小時，然后加入硼氫化鈉終止反應，體系透析、冷凍干燥，得到核糖-珠蛋白納米粒子。馬爾文粒度儀測量：粒子粒徑為162.8nm，粒徑分布為0.189。原子力顯微鏡檢測：形狀為球形，粒徑范圍為100～130nm，見圖2。

實施例8阿拉伯糖-血紅蛋白納米粒子的制備

將摩爾比為150：1的阿拉伯糖和血紅蛋白溶解于pH＝9的緩沖溶液中，37℃攪拌反應30小時，然后加入抗壞血酸終止反應，體系透析、冷凍干燥，得到阿拉伯糖-血紅蛋白納米粒子。馬爾文粒度儀測量：粒子粒徑為277.2nm，粒徑分布為0.186。

實施例9木糖-血紅蛋白納米粒子的制備

將摩爾比為100：1的木糖和血紅蛋白溶解于pH＝12的緩沖溶液中，37℃攪拌反應30小時，然后加入抗壞血酸終止反應，體系透析、冷凍干燥，得到木糖-血紅蛋白納米粒子。馬爾文粒度儀測量：粒子粒徑為244.5nm，粒徑分布為0.048。

實施例10乳糖-血紅蛋白納米粒子的制備

將摩爾比為100：1的乳糖和血紅蛋白溶解于pH＝11的緩沖溶液中，37℃攪拌反應30小時，然后加入硼氫化鈉終止反應，體系透析、冷凍干燥，得到乳糖-血紅蛋白納米粒子。馬爾文粒度儀測量：粒子粒徑為172.9nm，粒徑分布為0.106。

實施例11乳糖-珠蛋白納米粒子的制備

將摩爾比為120：1的乳糖和珠蛋白溶解于pH＝11的緩沖溶液中，37℃攪拌反應30小時，然后加入硼氫化鈉終止反應，體系透析、冷凍干燥，得到乳糖-珠蛋白納米粒子。馬爾文粒度儀測量：粒子粒徑為182.7nm，粒徑分布為0.053。原子力顯微鏡檢測：形狀為球形，粒徑范圍為80～120nm，見圖3。

實施例12負載阿霉素的葡萄糖-珠蛋白納米粒子的制備

將實施例3制備的葡萄糖-珠蛋白納米粒子分散在pH＝9的緩沖溶液中，加入一定量的阿霉素水溶液，室溫攪拌過夜，調節(jié)pH11，攪拌2小時，體系透析，冷凍干燥，得到負載阿霉素的葡萄糖-珠蛋白納米粒子。馬爾文粒度儀測量：粒子粒徑為234.5nm，粒徑分布為0.225，藥物負載量為84.93±5.74μg/mg。

實施例13負載紫杉醇的核糖-珠蛋白納米粒子的制備

將實施例7制備的核糖-珠蛋白納米粒子20mg分散在4mL pH＝9的緩沖溶液中，加入2mL二甲基亞砜，室溫攪拌3小時，使其充分溶脹，再加入一定量的紫杉醇的二甲基亞砜溶液，室溫攪拌過夜，體系透析、離心除去不溶物、冷凍干燥，得到負載紫杉醇的核糖-珠蛋白納米粒子。馬爾文粒度儀測量：粒子粒徑為256.8nm，粒徑分布為0.289，藥物負載量為64.93±6.84μg/mg。

實施例14鍵合熒光素FITC的葡萄糖-珠蛋白納米粒子的制備

將實施例3制備的葡萄糖-珠蛋白納米粒子分散在pH＝9的緩沖溶液中，按照熒光素FITC：納米粒子質量比為0.15：1，加入異硫氰酸熒光素(FITC)的二甲基亞砜溶液，4℃攪拌過夜，再加入5mol/L的氯化銨溶液至其終濃度為50mmol/L，4℃攪拌2小時，終止反應。體系透析、冷凍干燥，得到呈黃綠色的鍵合熒光素FITC的葡萄糖-珠蛋白納米粒子。

實施例15京尼平交聯(lián)的葡萄糖-珠蛋白納米粒子的制備

將實施例3制備的葡萄糖-珠蛋白納米粒子分散在pH＝9的緩沖溶液中，加入1％(w/w)的京尼平溶液使反應體系中京尼平的濃度為0.2％，37℃震蕩反應24小時，得藍色溶液，體系透析，冷凍干燥，得到京尼平交聯(lián)的葡萄糖-珠蛋白納米粒子。

實施例16糖-珠蛋白納米粒子的體外細胞存活率

細胞培養(yǎng)：選擇L-O2細胞(人肝細胞)和Hep G2細胞(人肝癌細胞)作為實驗細胞，培養(yǎng)基使用含有10％(體積分數)胎牛血清以及雙抗(100單位/mL)的DMEM培養(yǎng)基，37℃，5％二氧化碳的無菌細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)細胞。

取處于對數生長期的細胞接種于96孔板，細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時，加入利用無糖或者4.5g/L葡萄糖的DMEM培養(yǎng)基配置的糖-珠蛋白納米粒子溶液(實施例3葡萄糖-珠蛋白納米粒子、實施例7核糖-珠蛋白納米粒子、實施例11乳糖-珠蛋白納米粒子)，每組樣品重復5個孔，細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48小時，吸出孔中液體，加入0.1mL MTS檢測試劑，培養(yǎng)箱中孵育1小時，酶標儀檢測各孔在490nm波長處的吸光度值，實驗結果見圖4。

實施例17負載阿霉素的葡萄糖-珠蛋白納米粒子的體外細胞存活率

取處于對數生長期的細胞接種于96孔板，細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時，加入阿霉素溶液和利用含有不同濃度葡萄糖(0，2.5g/L或4.5g/L)的DMEM培養(yǎng)基配置的負載阿霉素的葡萄糖-珠蛋白納米粒子溶液(實施例12)，每組樣品重復5個孔，細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48小時，吸出孔中液體，加入0.1mL MTS檢測試劑，培養(yǎng)箱中孵育1小時，酶標儀檢測各孔在490nm波長處的吸光度值，實驗結果見圖5。

實施例18肝癌細胞和肝細胞對鍵合熒光素FITC的葡萄糖-珠蛋白納米粒子的細胞吞噬速度

取處于對數生長期的細胞接種于96孔板，細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時，吸出孔中液體，加入利用含有不同濃度葡萄糖(0，2.5g/L或4.5g/L)的DMEM培養(yǎng)基配置的鍵合熒光素FITC的葡萄糖-珠蛋白納米粒子溶液(實施例14)，分別于3、6、20、27小時后吸出孔中液體，細胞核染色，用高內涵細胞成像分析系統(tǒng)檢測各孔細胞內的熒光強度，實驗結果見圖6。

實施例19肝癌細胞對阿霉素和負載阿霉素的葡萄糖-珠蛋白納米粒子的吞噬速度

取處于對數生長期的細胞接種于96孔板，細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時，吸出孔中液體，加入濃度為1μg/mL的阿霉素和利用含有不同濃度葡萄糖(0，2.5g/L或4.5g/L)的DMEM培養(yǎng)基配置的負載阿霉素的葡萄糖-珠蛋白納米粒子溶液(實施例12)，分別于3、6、18、24小時后吸出孔中液體，用高內涵細胞成像分析系統(tǒng)檢測各孔細胞內的熒光強度，實驗結果見圖7。

實施例20糖-珠蛋白納米粒子的在體毒性檢測

實驗選擇體重為20±2g的BALB/c雄性裸鼠。將動物分成四組，對照組通過尾靜脈注射0.2mL生理鹽水，實驗組注射0.2mL濃度為10mg/mL的葡萄糖-珠蛋白納米粒子(實施例3)、核糖-珠蛋白納米粒子(實施例7)、乳糖-珠蛋白納米粒子(實施例11)的生理鹽水溶液。常規(guī)飼養(yǎng)14天，觀察對照組和實驗組的裸鼠死亡率。

結果顯示，觀察期內對照組和實驗組的裸鼠無死亡現(xiàn)象，小鼠活動、攝食、毛發(fā)、大小便正常；體重呈逐漸增長趨勢，對照組和實驗組無顯著性差異，說明糖-珠蛋白納米粒子無嚴重急性中毒的危險性。

實施例21糖-珠蛋白納米粒子的理化性能

配制不同濃度的糖-珠蛋白納米粒子溶液(實施例3、實施例7、實施例11)，觀察其理化性質，結果見表1。

表1不同濃度的糖-血紅蛋白納米粒子的理化性質

實施例22糖-珠蛋白納米粒子血漿代用品的膠體滲透壓

用生理鹽水沖洗膠體滲透壓儀滲透膜的兩側，1mL一次性注射器吸取濃度為2.5％的糖-珠蛋白納米粒子血漿代用品，將其插入樣品孔，調零，按提示分步注入樣品，直至出現(xiàn)結果，每份樣品測定3次，取平均值，結果見表2。

表2三種糖-珠蛋白納米粒子血漿代用品的膠體滲透壓

實施例23糖-珠蛋白納米粒子血漿代用品的粘度

將糖-珠蛋白納米粒子血漿代用品于37℃孵育15min，采用RM300+ST-100同軸旋轉粘度計，選擇不同剪切速率測定濃度為2.5％的糖-珠蛋白血漿代用品的粘度，結果見表3。

表3三種糖-珠紅蛋白納米粒子血漿代用品的粘度

實施例24失血性休克模型的制備和血漿代用品的輸注

用2％戊巴比妥鈉(50mg/kg)對大鼠進行腹腔麻醉，常規(guī)手術分離股動脈、股靜脈和頸總動脈并插管，靜脈輸注1000U/kg肝素鈉使全血肝素化。將頸動脈插管與壓力傳感器相連記錄血壓，心電電極按標準肢體導聯(lián)于動物四肢記錄心電和心率，溫度傳感器插入肛門約5cm記錄直腸溫度，股動脈插管聯(lián)于恒流泵以備放血，股靜脈用于全血回輸以及輸注糖-血紅蛋白納米粒子血漿代用品，用手術燈給動物保溫。勻速放血15min，使平均動脈壓MAP降至45mmHg，通過間斷放血使血壓維持在45～65mmHg約45min，制作失血性休克模型。

將模型大鼠隨機分成對照組、葡萄糖-珠蛋白納米粒子血漿代用品給藥組(實施例3)、核糖-珠蛋白納米粒子血漿代用品給藥組(實施例7)和乳糖-珠蛋白納米粒子血漿代用品給藥組(實施例11)，經股靜脈輸注生理鹽水、葡萄糖-珠蛋白納米粒子血漿代用品、核糖-珠蛋白納米粒子血漿代用品和乳糖-珠蛋白納米粒子血漿代用品，用量為失血量的1/2，速度為0.5ml/min，檢測MAP、心電圖、肛溫和失血量，觀測動物的存活情況。

模型大鼠失血量占總血量的百分比[總血量按照體重的6％(ml/g)計算]和血壓的結果表明，失血性休克大鼠模型制備成功，且組間不存在顯著性差異。

采用糖-珠蛋白納米粒子血漿代用品對失血性休克大鼠進行救治，可以觀測到動物血容量擴增。例如，給予糖-珠蛋白納米粒子血漿代用品后某些時間，動物血液中紅細胞壓積較對照組明顯下降(結果見表4)，血漿粘度較對照組明顯下降(結果見表5)。

表4失血性休克大鼠給予糖-珠蛋白納米粒子血漿代用品不同時間的紅細胞壓積

表5失血性休克大鼠給予糖-珠蛋白納米粒子血漿代用品不同時間的血漿粘度