本發(fā)明屬于中藥、天然藥物制藥領(lǐng)域，具體涉及一種治療橋本氏甲狀腺炎的藥物組合物及其制備方法和用途。
背景技術(shù)：
：橋本甲狀腺炎(hashimotothyroiditis，簡稱ht)又稱慢性淋巴細胞性甲狀腺炎，是臨床最常見的自身免疫性甲狀腺病，是一種以免疫活性細胞浸潤、甲狀腺特異性自身抗體和甲狀腺自身抗原特異性的t淋巴細胞存在，以及濾泡結(jié)構(gòu)破壞為特征的疾病。近年來，ht的發(fā)病率逐漸升高，且發(fā)病呈現(xiàn)年輕化趨勢。目前臨床上對ht甲狀腺功能減低的治療方案主要是甲狀腺激素替代治療，尚無針對病因的治療措施。研究表明th1/th2細胞比例失衡是本病的發(fā)病機制之一。th1細胞和th2細胞各有不同的功能，它們的正反饋機制對迅速放大機體的免疫功能、盡快有效地啟動特異性免疫系統(tǒng)和消除病原體或抗原很有必要。然而，倘若免疫應(yīng)答的保護使命趨于完成，而機體沒有相應(yīng)的反向調(diào)節(jié)機制進行有效的阻遏，則會造成病理損傷，從而導(dǎo)致疾病的發(fā)生。th1細胞在ht發(fā)病中起主導(dǎo)作用，th2細胞起保護作用。中醫(yī)中藥是中華民族的偉大瑰寶，采用中醫(yī)藥在臨床上用于自身免疫系統(tǒng)疾病的治療具有重要地位。橋本甲狀腺炎在中醫(yī)學(xué)上可歸屬于“癭病”“虛勞”等范疇?！鞍`病”是由于情志內(nèi)傷，飲食及水土失宜等因素引起的，以致氣滯、痰凝、血瘀壅結(jié)頸前為基本病機，以頸前喉結(jié)兩旁結(jié)塊腫大為主要臨床特征的一類疾病。橋本甲狀腺炎發(fā)病部位主要在甲狀腺。甲狀腺在頸前結(jié)喉處，為肝經(jīng)所屬。肝主疏泄，中藏相火，從病因看，情志變化是本病最主要的致病因素，氣滯痰凝血滯為其主要病機，故在治療上予以理氣化痰活血為主。瓜蔞為葫蘆科植物栝樓(trichosantheskirilowiimaxim.)或雙邊栝樓(trichosan-thesrosthorniiharms)的干燥成熟果實，具有調(diào)肝理氣化痰的功效，在我國應(yīng)用歷史悠久，范圍廣泛。瓜蔞多糖的活性研究鮮有報道，越來越多的研究發(fā)現(xiàn)，多糖具有較多的生物活性，如增強免疫力、抗氧化、降血糖、抗腫瘤等，利用價值較高。無花果(ficuscarical.)屬?？?moracea)榕屬植物，因其小花隱藏在花托內(nèi)，只能看到花托形成的假果而看不到花，故稱“無花果”。無花果果實具有較高的營養(yǎng)價值和藥用價值，是一種特殊的藥食同源的天然保健果品。中醫(yī)認為無花果性涼、味甘，具有理氣化痰的功效，用于治療咽喉腫痛、腸熱便秘、消化不良、腹瀉等病癥。無花果多糖作為無花果的重要功能因子，可以顯著改善實驗動物的免疫功能，是較好的免疫調(diào)節(jié)劑。目前尚未見以瓜蔞皮和無花果配伍應(yīng)用用于治療橋本甲狀腺炎的報道，更未見以主要提取瓜蔞皮和無花果的提取工藝，以及應(yīng)用瓜蔞皮多糖和無花果多糖用于治療橋本甲狀腺炎的報道。技術(shù)實現(xiàn)要素：本發(fā)明所解決的技術(shù)問題是提供一種治療橋本氏甲狀腺炎的藥物組合物。本發(fā)明治療橋本氏甲狀腺炎的藥物組合物，其特征在于：包括如下重量配比的原料藥：瓜蔞皮1份，無花果干1-20份。進一步優(yōu)選，本發(fā)明組合物包括如下重量配比的原料藥：瓜蔞皮1份，無花果干5-10份。最優(yōu)選，本發(fā)明組合物包括如下重量配比的原料藥：瓜蔞皮1份，無花果干6份。本發(fā)明組合物以上述重量配比的組分為原料藥，按照常規(guī)方法制成口服制劑；或加入藥學(xué)上或保健品上可接受的輔料制成常用口服制劑。如散劑、膠囊劑、片劑、顆粒劑、膠囊劑、口服液等。針對本發(fā)明藥物的應(yīng)用特點，還提供了該組合物的制備方法。如：方法一：將各原料藥粉碎成細粉，混合即成散劑；方法二：將各原料藥粉碎成細粉，裝膠囊即成膠囊劑；方法三：將各原料藥粉碎成細粉，壓片即成片劑；方法四：將各原料藥用水煎煮提取后，濃縮提取液制成顆粒，即成顆粒劑；方法五：將各原料藥用水煎煮提取后，濃縮提取液制成顆粒，裝膠囊即成膠囊劑；方法六：將各原料藥用水煎煮提取后，濃縮提取液制成顆粒，壓片即成片劑；方法七：將各原料藥用水煎煮提取后，制成口服液。為了有效利用上述藥物組合物，本發(fā)明藥物組合物優(yōu)選按照前述重量配比稱取瓜蔞皮，無花果干，采用以下步驟制備成多糖提取物后，再加入藥學(xué)上或保健品上可接受的輔料制成常用口服制劑：(1)取瓜蔞皮和無花果干，粉碎，加5-10倍量的有機溶劑浸泡12-24小時，過濾得藥渣；(2)藥渣按照料液比1:2-5加水，煮沸后持續(xù)時間為2-4小時；連續(xù)用水提取2-3次，過濾，合并濾液；在60-80℃下，用濃縮濾液至首次加水體積的1/2-1/4，濃縮液備用；(3)步驟(2)所得的濃縮液中加入濃度為80-100％v/v乙醇，靜置，使粗多糖析出，靜置溫度為4℃或25℃過濾得到粗多糖濾餅；(4)向步驟(3)所得粗多糖濾餅中加水，采用servage法對步驟(3)所得濾餅粗多糖進行脫蛋白，即得多糖提取物。步驟(1)所述有機溶劑為乙醇、甲醇、乙酸乙酯或二氯甲烷。步驟(4)servage法脫蛋白為常規(guī)方法，即按氯仿:正丁醇4:1的比例加入濾餅；混勻后，將樣品以速度為500-1000g的速度進行離心，離心時間為20-60min；隨后合并上清液；隨后采用普通的纖維素透析袋進行透析24-48h，除去氯仿和正丁醇；隨后濃縮透析液至50-100ml；進一步按1:2-4倍加入乙醇，靜置過夜；回收濾餅，在真空干燥溫度為40-60℃的條件下減壓干燥濾餅12-24h，即得多糖提取物。采用苯酚-硫酸比色法，用葡萄糖建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，490nm下測定吸光值，測得采用該方法獲得的提取物多糖含量均在80％以上。對本發(fā)明提取物進行了體內(nèi)外抗甲狀腺癌藥理作用的實驗。實驗結(jié)果表明，本發(fā)明的多糖提取物，能降低ht的高滴度自身抗體tgab和tpoab，降低il-2，升高il-4，抑制th1細胞功能的過度亢進，促使th1向th2漂移，從而緩解橋本甲狀腺炎。本發(fā)明的有益效果如下：1)首次提供了制備以瓜蔞皮和無花果干配伍應(yīng)用于橋本甲狀腺炎的復(fù)方藥物組合物。2)本發(fā)明制備方法得到的提取物多糖含量均在80％以上。3)本發(fā)明多糖提取物通過體內(nèi)外抗甲狀腺癌藥理試驗明確了其對于緩解橋本甲狀腺炎有明確的治療效果。4)本發(fā)明的制備方法工藝經(jīng)濟、簡便、適用于工業(yè)化大生產(chǎn)。具體實施方式以下通過實施例形式的具體實施方式，對本發(fā)明的上述內(nèi)容再作進一步的詳細說明，說明但不限制本發(fā)明。實施例一瓜蔞皮和無花果干的多糖提取物的制備(一)取瓜蔞皮100g和無花果干500g，粉碎，加入3l倍量的乙酸乙酯浸泡12小時；棄去有機溶劑，往藥渣中加入1.3l水，煮沸提取2小時，提取2次，過濾，合并濾液；用薄膜蒸發(fā)儀濃縮水提液至600ml，溫度設(shè)為60℃，濃縮液備用；往濃縮液中加入1.5l80％的乙醇，25℃靜置，使粗多糖析出，過濾，得粗多糖濾餅8.6g；加入200ml水溶解濾餅，采用servage法對濾餅粗多糖進行脫蛋白(32ml氯仿/8ml正丁醇)，混勻后，離心，轉(zhuǎn)速為500g，離心30min；合并上清；隨后采用普通的纖維素透析袋進行透析24h，除去氯仿和正丁醇；隨后濃縮透析液至50ml；進一步乙醇100ml，靜置過夜；過濾，回收濾餅，40℃真空干燥12h，得干多糖提取物。采用苯酚-硫酸比色法，測得該方法獲得提取物的多糖含量為82％。實施例二瓜蔞皮和無花果干的多糖提取物的制備(二)取瓜蔞皮100g和無花果干100g，粉碎，加入2l倍量的二氯甲烷浸泡24小時；棄去有機溶劑，往藥渣中加入1l水，煮沸提取3小時，提取3次，過濾，合并濾液；用薄膜蒸發(fā)儀濃縮水提液至300ml，溫度設(shè)為80℃，濃縮液備用；往濃縮液中加入1.2l乙醇，4℃靜置，使粗多糖析出，過濾，得粗多糖濾餅4.2g；加入200ml水溶解濾餅，采用servage法對濾餅粗多糖進行脫蛋白(32ml氯仿/8ml正丁醇)，混勻后，離心，轉(zhuǎn)速為1000g，離心60min；合并上清；隨后采用普通的纖維素透析袋進行透析48h，除去氯仿和正丁醇；隨后濃縮透析液至70ml；進一步乙醇280ml，靜置過夜；過濾，回收濾餅，60℃真空干燥24h，得多糖提取物。采用苯酚-硫酸比色法，測得該方法獲得的提取物多糖含量為92％。實施例三瓜蔞皮和無花果干的多糖提取物的制備(三)取瓜蔞皮20g和無花果干400g，粉碎，加入4.2l倍量的乙醇水溶液(80％v/v-90％v/v)浸泡12小時；棄去有機溶劑，往藥渣中加入1.5l水，煮沸提取4小時，提取2次，過濾，合并濾液；用薄膜蒸發(fā)儀濃縮水提液至400ml，溫度設(shè)為75℃，濃縮液備用；往濃縮液中加入1l90％的乙醇，4℃靜置，使粗多糖析出，過濾，得粗多糖濾餅12.4g；加入600ml水溶解濾餅，采用servage法對濾餅粗多糖進行脫蛋白(96ml氯仿/24ml正丁醇)，混勻后，離心，轉(zhuǎn)速為800g，離心20min；合并上清；隨后采用普通的纖維素透析袋進行透析24h，除去氯仿和正丁醇；隨后濃縮透析液至90ml；進一步乙醇270ml，靜置過夜；過濾，回收濾餅，40℃真空干燥24h，得多糖提取物。采用苯酚-硫酸比色法，測得該方法獲得的提取物多糖含量為90％。實施例四瓜蔞皮和無花果干的多糖提取物的制備(四)取瓜蔞皮20g和無花果干300g，粉碎，加入2.6l倍量的丙酮浸泡24小時；棄去有機溶劑，往藥渣中加入1l水，煮沸提取2小時，提取3次，過濾，合并濾液；用薄膜蒸發(fā)儀濃縮水提液至500ml，溫度設(shè)為68℃，濃縮液備用；往濃縮液中加入1.5l80％的乙醇，4℃靜置，使粗多糖析出，過濾，得粗多糖濾餅9.5g；加入400ml水溶解濾餅，采用servage法對濾餅粗多糖進行脫蛋白(64ml氯仿/16ml正丁醇)，混勻后，離心，轉(zhuǎn)速為1000g，離心40min；合并上清；隨后采用普通的纖維素透析袋進行透析48h，除去氯仿和正丁醇；隨后濃縮透析液至100ml；進一步乙醇200ml，靜置過夜；過濾，回收濾餅，40℃真空干燥12h，得多糖提取物。采用苯酚-硫酸比色法，測得獲得的提取物多糖含量為88％。實施例五瓜蔞皮和無花果干的多糖提取物的制備(五)取瓜蔞皮40g和無花果干400g，粉碎，加入3.8l倍量的乙酸乙酯浸泡24小時；棄去有機溶劑，往藥渣中加入1.6l水，煮沸提取4小時，提取3次，過濾，合并濾液；用薄膜蒸發(fā)儀濃縮水提液至800ml，溫度設(shè)為72℃，濃縮液備用；往濃縮液中加入2.4l乙醇，4℃靜置，使粗多糖析出，過濾，得粗多糖濾餅11.3g；加入150ml水溶解濾餅，采用servage法對濾餅粗多糖進行脫蛋白(24ml氯仿/6ml正丁醇)，混勻后，離心，轉(zhuǎn)速為1000g，離心60min；合并上清；隨后采用普通的纖維素透析袋進行透析24h，除去氯仿和正丁醇；隨后濃縮透析液至60ml；進一步乙醇220ml，靜置過夜；過濾，回收濾餅，60℃真空干燥24h，得多糖提取物。采用苯酚-硫酸比色法，測得該方法獲得的提取物多糖含量為90％。實施例六瓜蔞皮和無花果干的多糖提取物對大鼠血清甲狀腺球蛋白抗體(tgab)、甲狀腺過氧化物酶抗體(tpoab)、白細胞介素-2(il-2)、白細胞介素-4(il-4)的表達的影響將購置的大鼠在適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，隨機分成正常組、模型組及瓜蔞皮和無花果干的多糖提取物低、中、高劑量組，每組6只。除正常組外，其余各組大鼠按如下方法建立橋本甲狀腺炎模型。用pbs緩沖液將豬甲狀腺球蛋白(ptg)溶解成含量為2mg/ml的溶液，并與等體積的完全弗氏佐劑(cfa)混合充分乳化，以100g/只的劑量在大鼠足墊部皮下注射，作為初次免疫。1周后，再次配置上述乳化液，按100g/只的劑量在大鼠四肢內(nèi)側(cè)及背部皮下多點注射，連續(xù)注射六周。造模結(jié)束后，開始進行灌胃給藥，每日灌胃1次，連續(xù)給藥60天，周末休息兩天。其中低、中、高劑量瓜蔞皮和無花果干的多糖提取物分別按給予100、200和400mg/kg進行給藥，正常組及模型組給予等量蒸餾水。給藥結(jié)束后，進行心臟取血，1500r/min離心獲取血清，根據(jù)甲狀腺球蛋白抗體(tgab)和甲狀腺過氧化物酶抗體(tpoab)測定試劑盒說明書采用放射免疫法測定tgab和tpoab在血清中的含量。使用il-2及il-4酶聯(lián)免疫檢測試劑盒，按照說明書進行操作，采用elisa法檢測il-2和il-4在血清中的含量。甲狀腺球蛋白抗體(tgab)是主要的特異性甲狀腺自身抗體，是甲狀腺上皮細胞分泌的糖蛋白。甲狀腺過氧化物酶抗體(tpoab)是自身免疫性甲狀腺疾病的一種重要抗體。ht患者血清中的tgab和tpoab均會現(xiàn)在升高。對該指標(biāo)的檢測可以判斷建模的情況，同時還可以考察提取物對橋本甲狀腺炎大鼠疾病的緩解情況。結(jié)果表明各組大鼠血清中的tgab和tpoab水平比較與正常組比較，模型組大鼠tgab、tpoab顯著增加(p<0.01)；與模型組比較，瓜蔞皮和無花果干的多糖提取物低、中、高劑量組大鼠tgab、tpoab有一定程度下降(p<0.01)，各組別間無劑量依存關(guān)系，說明瓜蔞皮和無花果干的多糖提取物對橋本甲狀腺炎具有一定的緩解效果。結(jié)果見表1。表1各組大鼠tgab和tpoab抗體水平比較(iu/ml)注：與正常組比較，*p<0.01；與模型組比較，**p<0.01th1主要分泌th1型細胞因子，包括ifn-γ、tnf、il-2等，它們能促進th1的進一步增殖，進而發(fā)揮細胞免疫的效應(yīng)，同時還能抑制th2增殖。th2主要分泌th2型細胞因子，包括il-4、il-5、il-10及il-13等，它們能促進th2細胞的增殖，進而輔助b細胞活化，發(fā)揮體液免疫的作用，同時抑制th1增殖。通過對il-2和il-4檢測，能考察提取物對免疫th1/th2細胞的失衡的緩解狀況。各組大鼠血清il-2、il-4水平比較與正常組比較，模型組大鼠il-2顯著升高、il-4顯著下降(p<0.01)；與模型組比較，瓜蔞皮和無花果干的多糖提取物低、中、高劑量組大鼠il-2明顯下降，il-4顯著上升，說明瓜蔞皮和無花果干的多糖提取物對橋本甲狀腺炎具有一定的緩解效果。結(jié)果見表2。表2各組大鼠血清中il-2和il-4水平比較(ng/l)組別動物數(shù)il-2il-4正常組646.15±13.8459.76±14.33模型組674.53±9.78*22.16±13.45*低劑量組670.48±16.8423.55±16.74中劑量組660.93±14.23**48.21±16.14高劑量組662.76±17.51**49.02±15.59**注：與正常組比較，*p<0.01；與模型組比較，**p<0.01。當(dāng)前第1頁12