用于生長激素遞送的脂肪酸?；陌被岬闹谱鞣椒?br>【技術領域】
[0001] 本發(fā)明的技術領域涉及用于口服遞送治療性生長激素化合物的脂肪酸酰化的氨 基酸（FA-aa)和包含此類FA-aa的藥物組合物。
[0002] 背景 許多由某些大分子（例如蛋白和肽）的產生的缺陷或完全失效引起的病理學狀態(tài)用治 療性大分子（諸如親水肽或蛋白）的侵襲性且不方便的胃腸外施用來治療。其一個實例是 通常通過每日一次劑量的hGH施用人生長激素（hGH)用于治療生長激素缺陷或其中患者得 益于循環(huán)生長激素的量增加的疾病或病癥。相比于此，由于它的非侵襲性性質對于口服施 用藥物而言是期望的，且具有減少患者的與藥物施用相關的不適和增加藥物依從性的巨大 潛力。然而，存在幾個障礙；諸如在胃腸（GI)道中的酶促降解，藥物流出泵，從腸粘膜的吸 收的不足和變化，以及在肝臟中的首過代謝，并且迄今為止尚未發(fā)現(xiàn)用于口服遞送治療性 親水蛋白的廣品面市。
[0003] 生長激素（GH)是一種由哺乳動物垂體前葉分泌的多肽激素。根據物種，GH是一 種由約190個氨基酸殘基組成的蛋白，相當于約22 kDa的分子量。GH與細胞表面受體GH 受體（GHR)結合，并通過GH受體信號傳導。GH在促進生長、保持正常身體組成、合成代謝 和脂質代謝中發(fā)揮關鍵作用。它還對中間代謝具有直接作用，諸如葡萄糖攝取降低、脂解作 用增加以及氨基酸攝取和蛋白合成的增加。該激素還對其它組織發(fā)揮作用，包括脂肪組織、 肝、腸、腎、骨骼、結締組織和肌肉。重組hGH已經生產且可商業(yè)獲得，例如 ：Gen〇tr〇pin? (Pharmacia Upjohn)、Nutropin? 和Protropin? (Genentech)、Humatrope? (Eli Lilly)、 Serostim ? (Serono)、諾地托品(Norditropin) (Novo Nordisk)、Omnitrope (Sandoz)、 Nutropin Depot (Genentech和Alkermes)。另外，在N末端具有額外甲硫氨酸殘基的變體 還作為例如 Somatonorm? (Pharmacia Upjohn/Pfizer)銷售。
[0004] 人生長激素被存在于胃中（胃蛋白酶）、腸腔中（糜蛋白酶、胰蛋白酶、彈性酶、羧 肽酶等）和胃腸道粘膜表面中（氨肽酶、羧肽酶、腸肽酶、二肽基肽酶、內肽酶等）的多種消 化酶降解。
[0005] 已經探索用于獲得蛋白酶穩(wěn)定化的人生長激素化合物的各種途徑，并且此類分子 的實例描述于W0 2011/089250和W02011/089255。隨后用于獲得口服治療劑的挑戰(zhàn)是口服 施用的化合物的增加的生物利用率。
[0006] 其次，口服施用的蛋白化合物必須在其進程過程中通過胃腸道吸收?？漳c與十二 指腸和回腸連接，并且專門吸收消化產物，諸如糖、氨基酸和脂肪酸，這得到粘膜的大表面 積的幫助。
[0007] 空腸和回腸內襯的上皮細胞實現(xiàn)了營養(yǎng)素的被動轉運和氨基酸、小肽、維生素和 葡萄糖的主動轉運。上皮細胞對肽和特別大的蛋白分子的攝取因此對于生成口服藥物組合 物非常關鍵。
[0008] 正在探索多種技術，且本發(fā)明涉及脂肪酸?；陌被岬挠猛?，所述脂肪酸?；?的氨基酸是來自化妝品的先前已知成分，且主要用于增加經皮吸收。
[0009] F5ger等人描述了分子量對親水肽藥物的口服吸收的影響，并顯示，滲透性隨著此 類親水肽藥物的分子量增加而降低（Amino Acids(2008) 25: 233-241，D0I10. 1007/S00726-007-0581-5)。
[0010] 對具有低刺激作用的新表面活性劑的研宄，已經導致了源自氨基酸的不同表面活 性劑的開發(fā)（Mitjans 等人，2003; Benavides 等人，2004; Sdnchez 等人，ZOC^oFA-aa 是基于氨基酸的表面活性劑，并且因此是具有低毒性的、溫和的可生物降解的表面活性劑。
[0011] US2004147578 (W0 0207506)涉及脂肪酸?；陌被?，其被用作疏水分子包括 疏水大分子（諸如環(huán)孢菌素）的滲透增強劑。
[0012] W02001035998涉及?；陌被?，其被用作大分子（諸如親水肽或蛋白）的經皮 和經粘膜吸收促進劑。
[0013] W02004064758涉及一種口服組合物，其用于遞送藥用肽，諸如胰島素、生長激素和 GLP-1，其中活性肽在不是天然酰胺化的位點被酰胺化。所述組合物可以包含吸收增強劑， 例如酰基肉毒堿，其使用PTH1-34的制劑中的月桂酰肉毒堿例舉。
[0014] US2005282756涉及一種干粉組合物，其包含胰島素和吸收增強劑。
[0015] W02003030865涉及胰島素組合物，其包含表面活性劑諸如離子型表面活性劑，并 且還含有油或脂質化合物諸如甘油三酯，且進一步包含長鏈酯化的脂肪酸。
[0016] W02004064758涉及一種用于遞送藥用肽的口服藥物組合物，其包含吸收增強劑 (諸如?；舛緣A、磷脂和膽汁酸）。
[0017] US2006093632涉及可注射組合物，當注入水中時，其形成沉淀，導致產生持續(xù)釋放 制劑。
[0018] EP0552405公開了用于化合物諸如吲哚美辛和鄰氨基苯甲酸衍生物的經皮吸收促 進劑。
[0019] 口服施用途徑對于高分子量化合物諸如生長激素是非常復雜的，并且需要進一步 改進以建立適合于治療患者的可接受的組合物，其具有生長激素化合物的有效的生物利用 率。
[0020] 概述 已經令人驚訝地發(fā)現(xiàn)，脂肪酸氨基酸（FA-aa)例如N-?；陌被嵩黾涌诜┯煤蟮?生長激素化合物的吸收。
[0021] 由于它們的低毒性和增加治療性大分子（諸如親水肽或蛋白）的口服生物利用率 的作用，根據本發(fā)明的FA-aa是口服藥物組合物中的有價值的成分。根據本發(fā)明的FA-aa 在包含生長激素化合物的口服藥物組合物中是特別有價值的。這對于需要長期施用治療性 大分子（例如生長激素）的疾病（但不限于此）而言是重要的，因為最非侵襲性的、無毒的 藥物施用在任何治療中通常是有利的，對于治療劑的偶爾施用或大批施用也是如此。
[0022] 到目前為止，沒有任何生長激素化合物可用作口服制劑，這主要是由于此類化合 物的酶促降解和非常低的腸滲透性的巨大挑戰(zhàn)。
[0023] 本發(fā)明的一個方面是藥物組合物，其包含在其a -氨基被8至18個碳的脂肪酸酰 化的某些氨基酸和活性成分，諸如生長激素化合物。藥物組合物的組成使得其適合于口服 施用，因為觀察到增加的生物利用率。
[0024] 本發(fā)明涉及適合用于口服施用生長激素化合物的藥物組合物，其包含充當滲透增 強劑的FA-aa。
[0025] 本發(fā)明還可以解決其它問題，這從示例性實施方案的公開內容來看是顯而易見 的。本發(fā)明涉及包含F(xiàn)A-aa的藥物組合物，所述FA-aa適合用于增加生長激素化合物的吸 收和/或生物利用率，這對于待口服施用的藥物組合物特別重要。
[0026] 如從本文公開內容將顯而易見的是，目標化合物被描述為（脂肪酸）?；陌被?酸或脂肪酸N-?；陌被幔蚝唵蔚?，簡稱FA-aa，其描述具有氨基酸基本結構的化合 物，其中a氨基通過形成肽樣鍵被脂肪酸?；?。
[0027] 本發(fā)明的一個方面涉及包含至少一種生長激素化合物和至少一種FA-aa的藥物 組合物。本文所述的FA-aa包括脂肪酸部分和作為核心結構的氨基酸骨架。已經發(fā)現(xiàn)該 化合物增加當施用于腸時生長激素化合物的生物利用率。在進一步方面，所述組合物包含 FA-aa，其中脂肪酸部分具有12、14或16個碳原子。
[0028] 生長激素化合物相比于人生長激素增加的穩(wěn)定性對于獲得可以口服和/或以足 夠間隔施用的制劑是有利的。在進一步的方面，組合物包含T/ 2高于30分鐘的生長激素化 合物。
[0029] 在進一步方面，本發(fā)明涉及用于增加生長激素化合物的生物利用率的方法，其包 括在生長激素化合物的藥物組合物中包括FA-aa的步驟。本發(fā)明的其他方法旨在增加生長 激素化合物的血漿濃度，其包括以下步驟：使個體的胃腸道暴露于包含生長激素化合物和 FA-aa的藥物組合物，由此在所述個體中觀察到所述生長激素化合物的血漿濃度增加。其還 涉及到考慮，在組合物中包括FA-aa使得施用的生長激素化合物的生物利用率或血漿濃度 的增加大于當不包括至少一種FA-aa的情況下施用該化合物觀察到的增加。
[0030] 本發(fā)明的一個方面涉及用于治療生長激素相關的疾病或病癥的方法，其包括施用 包含生長激素化合物和至少一種FA-aa的藥物組合物。
[0031] 附圖簡要說明 圖1.類似于實施例8和11中描述的程序使用有（實心標記）和沒有（空心標記） C16-G1U的制劑腸內施用后隨著時間的生長激素類似物GH-A2的平均血漿濃度。
[0032] 圖2.從含水緩沖液中配制的化合物GH-A1的藥代動力學概況測定的平均AUC。 所比較的脂肪酸?；陌被岬臐舛葹?0 mg/ml。平均AUC值基于各種數(shù)量的體內研宄： 無增強劑（69次研宄，其中n=6)，C~12-肌氨酸鹽（2次研宄，其中n=6)，和C16-肌氨酸鹽 (14次研宄，其中n=6)。
[0033] 圖3.從含水緩沖液中配制的化合物GH-A2的藥代動力學概況測定的平均AUC。所 比較的脂肪酸?；陌被岬臐舛葹?0 mg/ml。平均AUC值基于各種數(shù)量的體內研宄：無 增強劑（12次研宄，其中n從6-12變化），C10-Gly (1次研宄，n=12)，C12-His (1次研宄， n=12)，C12-Pro (1次研宄中，n=12)，C16-肌氨酸鹽（5次研宄，n從6-12變化）和C16-G1U (1次研宄，n=12)。
[0034] 圖4.從含水緩沖液中配制的化合物GH-A3的藥代動力學概況測定的平均AUC。 所比較的脂肪酸?；陌被岬臐舛葹?0 mg/ml。平均AUC值基于各種數(shù)量的體內研宄： 無增強劑（2次研宄，其中n=6)，C8-His (2次研宄，其中n=6)，C8-肌氨酸鹽（2次研宄， 其中 n=6)，ClO-Asp (2 次研宄，其中 n=6)，C10-Gln (2 次研宄，其中 n=6)，C12-Trp (2 次研宄，其中n=6)，C12-肌氨酸鹽（2次研宄，其中n=6)，C12-Pro (2次研宄，其中n=6)， C16-肌氨酸鹽（7次研宄，其中n=6)，C16-Glu (2次研宄，其中n=6)和C18=肌氨酸鹽（2 次研宄，其中n=6)。
[0035] 圖5.從含水緩沖液中配制的化合物GH-A1的藥代動力學概況測定的平均AUC。 緩沖液用和不用脂肪酸酰化的氨基酸C16-肌氨酸鹽（30 mg/ml)且用或不用大豆胰蛋白酶 抑制劑SBTI (2%)制備。平均AUC值基于各種數(shù)量的體內研宄：無增強劑（69次研宄，其 中n=6)，C16-肌氨酸鹽（14次研宄，其中n=6)，SBTI (1次研宄，n=6)和C16-肌氨酸鹽+ SBTI (1 次研宄，n=6)。
[0036] 圖6.從含水緩沖液中配制的化合物GH-A2的藥代動力學概況測定的平均AUC。緩 沖液用和不用脂肪酸?；陌被酑16-肌氨酸鹽（30 mg/ml)且用或不用大豆胰蛋白酶抑 制劑SBTI (2%)制備。平均AUC值基于各種數(shù)量的體內研宄：無抑制劑（12次研宄，其中 n從6-12變化），C16-肌氨酸鹽（5次研宄，其中n從6-12變化），SBTI (3次研宄，其中n 從6-9變化）和C16-肌氨酸鹽+ SBTI (5次研宄，其中n從6-9變化）。
[0037] 圖7.從含水緩沖液中配制的化合物GH-A3的藥代動力學概況測定的平均AUC。 緩沖液用和不用脂肪酸?；陌被酑16-肌氨酸鹽（30 mg/ml)且用或不用大豆胰蛋白酶 抑制劑SBTI (2%)制備。平均AUC值基于各種數(shù)量的體內研宄：無抑制劑（2次研宄，其 中n=6)，C16-肌氨酸鹽（7次研宄，其中n=6)，SBTI (1次研宄，n=6)，和C16-肌氨酸鹽+ SBTI (1 次研宄，n=6)。
[0038] 詳述 所選定義 如本文所使用的術語"多肽"和"肽"是指通過肽鍵連接的至少兩個氨基酸構成的化合 物。
[0039] 術語"氨基酸"包括遺傳密碼編碼的氨基酸（其在本文中被稱為標準氨基酸）的 組。還包括的是并非由遺傳密碼編碼的天然氨基酸以及合成氨基酸。通常已知的天然氨基 酸包括Y_羧基谷氨酸、羥脯氨酸、鳥氨酸、肌氨酸和磷酸絲氨酸。通常已知的合成氨基酸 包括通過化學合成制備的氨基酸，諸如Aib (a-氨基異丁酸）、Abu (a-氨基丁酸）、He (叔丁基甘氨酸）、0 _丙氨酸、3-氨基甲基苯甲酸、鄰氨基苯甲酸。
[0040] 如本文所使用的術語"蛋白"是指由一個或多個多肽組成的生化化合物。
[0041] 當本文中使用時，術語"藥物"、"治療劑"、"藥劑"或"藥品"是指藥物組合物中使 用的活性成分，其可以在治療中使用。
[0042] 自然界中已經描述了至少300種氨基酸，但這些中只有二十種通常作為人肽和蛋 白中的組分存在。
[0043] 細胞在肽生物合成中使用20種標準氨基酸，并且這些由一般遺傳密碼指定。所述 二十種標準氨基酸是丙氨酸（Ala)、纈氨酸（Val)、亮氨酸（Leu)、異亮氨酸（lie)、苯丙氨酸 (Phe)、色氨酸（Trp)、甲硫氨酸（Met)、脯氨酸（Pro)、天冬氨酸（Asp)、谷氨酸（Glu)、甘氨酸 (Gly)、絲氨酸（Ser)、蘇氨酸（Thr)、半胱氨酸（Cys)、酪氨酸（Tyr)、天冬酰胺（Asn)、谷氨酰 胺（Gin)、賴氨酸（Lys)、精氨酸（Arg)和組氨酸（His)。肌氨酸與甘氨酸的差異在于用_ CH 3交換-H，且對于以下也被認為是氨基酸。
[0044]標準氨基酸可以分成極性氨基酸和非極性氨基酸。極性氨基酸是天冬氨酸（Asp)、 谷氨酸（Glu)、賴氨酸（Lys)、精氨酸（Arg)、組氨酸（His)、谷氨酰胺（Gln)、天冬酰胺 (Asn)、絲氨酸（Ser)、蘇氨酸（Thr)和半胱氨酸（Cys)，且非極性氨基酸是甘氨酸（Gly)、丙 氨酸（Ala)、亮氨酸（Leu)、纈氨酸（Val)、異亮氨酸（lie)、甲硫氨酸（Met)、脯氨酸（Pro)、 酪氨酸（Tyr)、色氨酸（Trp)和苯丙氨酸（Phe)。
[0045] 極性氨基酸可以被細分為不帶電的極性氨基酸（谷氨酰胺（Gln)、天冬酰胺 (Asn)、絲氨酸（Ser)、蘇氨酸（Thr)和半胱氨酸（Cys))和帶電的極性氨基酸（天冬氨酸 (Asp)、谷氨酸（Glu)、賴氨酸（Lys)、精氨酸（Arg)和組氨酸（His))。
[0046] 非極性氨基酸可以根據疏水性區(qū)分，使得非極性且疏水中性氨基酸是甘氨酸和丙 氨酸，和非極性且疏水性氨基酸是亮氨酸（Leu)、纈氨酸（Val)、異亮氨酸（lie)、甲硫氨酸 (Met)、脯氨酸（Pro)、酪氨酸（Tyr)、色氨酸（Trp)和苯丙氨酸（Phe)。
[0047]后一組可以基于側鏈是脂族（亮氨酸（Leu)、纈氨酸（Val)、異亮氨酸（lie)、甲硫 氨酸（Met)和脯氨酸（Pro))或芳族（酪氨酸（Tyr)、色氨酸（Trp)、苯丙氨酸（Phe))區(qū)分。 [0048] 脂肪酸是具有長脂族尾（鏈）的羧酸。
[0049] 術語"脂肪酸氨基酸"、"脂肪酸N-?；陌被?或"?；陌被?或"脂肪酸 ?；陌被?可互換使用，并且當本文中使用時是指在其a -氨基被脂肪酸?；陌被?酸。該分子簡稱為"FA-aa"。
[0050] 術語"口服生物利用率"在本文中是指，施用的藥物劑量的部分，所述部分在已經 口服施用之后到達全身循環(huán)。通過定義，當靜脈內施用藥物時，其生物利用率是100%。然 而，當口服施用藥物時，活性成分的生物利用率由于降解、不完全吸收和首過代謝而下降。
[0051] 術語"生物活性"應當表示生長激素化合物在相關參考系統(tǒng)中的活性，并且可以在 本領域技術人員已知的各種測定，例如，諸如實施例1中所述的BAF測定中進行測量。
[0052] 如本文所使用的術語"表面活性劑"是指可以吸附在表面和界面（諸如但不限于 液體-空氣、液體-液體、液體-容器或液體-任何固體）處的任何物質，尤其是去污劑。
[0053] 如本文所使用的術語"非離子型表面活性劑"是指可以吸附在表面和界面（如液 體-空氣、液體-液體、液體-容器或液體-任何固體）處的任何物質，尤其是去污劑，且其 在其（一個或多個）親水基團（有時被稱為"頭"）中不具有帶電荷的基團。非離子型表面 活性劑可以選自去污劑諸如聚山梨醋，諸如聚山梨酯-20、聚山梨酯-40、聚山梨酯-60、聚 山梨酯-80、超級精制的聚山梨酯（其中術語"超級精制的"由供應商Croda針對他們的高 純度吐溫產品而使用）、泊洛沙姆諸如泊洛沙姆188和泊洛沙姆407、聚氧乙烯脫水山梨糖 醇脂肪酸酯、聚氧乙烯衍生物諸如烷基化的和烷氧基化的衍生物（吐溫，例如吐溫-20或吐 溫-80)， 如本文所使用的術語"助表面活性劑"是指當存在第一種表面活性劑時添加至組合物 或制劑中的額外表面活性劑。
[0054] 如本文所使用的術語"滲透增強劑"是指促進藥物的吸收的生物品或化學品。
[0055] 術語"增強劑"當測試FA-aa增加給定GH化合物的AUC的能力時使用。GH化合物 的AUC在測試化合物（增強劑）存在的情況下測量，并且與增強劑（測試化合物）不存在 的情況下測量的AUC進行比較。
[0056] 如本文所使用的術語"防腐劑"是指，加入藥物組合物中以防止或延遲微生物活動 (生長和代謝）的化合物。藥學上可接受的防腐劑的實例是苯酚、間甲酚以及苯酚和間甲酚 的混合物。
[0057] 如本文所使用的術語"微乳預濃縮物"是指這樣的組合物：其在口服施用后，在含 水介質中（例如水中或胃腸液中）自發(fā)形成微乳或納米乳（例如，水包油微乳或納米乳、溶 脹膠束、膠束溶液）。在含水介質中以例如1: 5、1:10、1:50、1:100或更高的稀釋度稀釋后， 所述組合物自乳化。在一個實施方案中，根據本發(fā)明的組合物形成微乳或納米乳，其包含直 徑大小小于l〇〇nm的顆?；蛴颍╠omain)。如本文所使用的術語"域大小"或"粒徑"是指重 復散射單位，且可以通過例如小角度X-射線來測量。顆粒/微滴大小可以基于動態(tài)光散射 (DLS)，其估計分散顆?；蛭⒌蔚钠骄睆?。在本發(fā)明的一個實施方案中，所述域大小小于 150nm，在另一個實施方案中，小于100nm，且在另一個實施方案中，小于50nm，在另一個實 施方案中，小于20nm，在另一個實施方案中，小于15nm，諸如約12nm〇
[0058] "SEDDS"（自乳化藥物遞送系統(tǒng)）在本文中被定義為親水組分、表面活性劑、任 選的助表面活性劑或脂質組分和治療性大分子的混合物，在輕輕攪拌或將在胃