1,2,4-三取代哌嗪化合物在制備抗流感病毒藥物中的用圖
【專利摘要】本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術領域，特別是涉及1，2，4?三取代哌嗪化合物在制備抗流感病毒藥物中的用途。細胞實驗證明，1，2，4?三取代哌嗪化合物對甲型流感病毒具有較強的抑制作用，其半數(shù)抑制濃度IC50為29.97μM，且1，2，4?三取代哌嗪化合物對細胞毒性低，藥物使用安全性高，其細胞半數(shù)毒性濃度CC50≥400μM。因此，1，2，4?三取代哌嗪化合物在治療甲型流感病毒感染疾病中具有廣泛的應用背景，可應用于制備抗流感病毒藥物。
【專利說明】
1，2,4-Ξ取代脈瞎化合物在制備抗流感病毒藥物中的用途
技術領域
[0001 ]本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術領域，具體設及1，2，4-Ξ取代贓嗦化合物在制備抗流感病毒 藥物中的用途。
【背景技術】
[0002] 流行性感冒簡稱流感，是由流感病毒引起的急性發(fā)熱性呼吸道傳染病，主要傳播 途徑是帶有流感病毒的飛沫，經(jīng)呼吸道進入體內(nèi)，少數(shù)也可經(jīng)共用手帕、毛巾等間接接觸而 感染，臨床典型特征為突起畏寒、高熱、頭痛、全身酸痛、疲弱乏力等全身中毒癥狀，而呼吸 道癥狀較輕。流感具有流行面廣、傳染性強、發(fā)病率高等特點，在嬰幼兒、老年人、有屯、肺疾 病及其他慢性疾病患者或免疫功能低下者可并發(fā)肺炎，預后較差。
[0003] 流感病毒屬正黏病毒科，是一種有包膜的RNA病毒，其包膜成分中含有血凝素化Α) 及神經(jīng)氨酸酶(ΝΑ)兩種類型的糖蛋白突起，運兩種糖蛋白突起均具有抗原性，并有亞型特 異性。流感病毒變異的來源主要是由于ΗΑ和ΝΑ抗原結構的改變。全球每年有25萬-50萬人死 于流感或流感病毒感染引發(fā)的并發(fā)癥。近年來，隨著全球物種活動范圍的加大，流感病毒的 變異性增強，人、禽、豬和(或)其他種屬間流感病毒相互作用產(chǎn)生具有高致病性的新變種病 毒，人感染高致病性禽流感病例的發(fā)生、新發(fā)病毒的人群間高傳染性及感染者的高死亡率， 曾一度引起了全球范圍對流感的恐慌，嚴重影響了人類的日常生活和經(jīng)濟穩(wěn)定發(fā)展。
[0004] 應對流感病毒的主要方式是疫苗和藥物治療。疫苗預防的有效性是建立在疫苗的 病毒株與正在流行的流感病毒株相似的基礎上的，只對已知的流感病毒亞型有預防作用， 而對于由抗原性漂移或抗原性轉換所產(chǎn)生的新型流感病毒保護率不高或無效，目前通過現(xiàn) 有手段無法預測將要流行的流感病毒株，因此疫苗對流感病毒的作用有限。因此，抗流感藥 物始終是有效對抗流感、保護人類健康的第一道防線。當前許多國家應用的抗流感病毒藥 物為鹽酸金剛燒胺，包括金剛燒胺和金剛乙胺，可預防甲型流感病毒，但對乙型流感病毒則 無效。在甲型流感流行期間，預防性給予健康成人或兒童金剛燒胺或金剛乙胺，對于預防甲 型流感病毒具有70 % -90 %的有效率，已感染者起病后4她內(nèi)給予運兩種藥物，也能發(fā)揮治 療作用，可減輕病情和縮短病程。神經(jīng)氨酸酶抑制劑是可用于預防流感的另一類藥物，可W 在流感病毒流行期間試用于健康成人。但是目前運兩類抗流感病毒藥物均面臨的一個共性 問題就是經(jīng)常出現(xiàn)不同程度的耐藥性。因此，尋找具有預防和治療作用的新型抗流感病毒 藥物就顯得尤其重要和緊迫。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的是提供1，2,4-Ξ取代贓嗦化合物在制備抗流感病毒藥物中的用途。
[0006] 本發(fā)明所述1，2,4-Ξ取代贓嗦化合物由法國己黎第屯大學合成和提供，其分子式 為C3日也2斯〇1日，分子量為627.68，具有如式（I)所示的結構：
[0007]
[000引本發(fā)明提供的1，2,4-Ξ取代贓嗦化合物可單獨應用于制備抗流感病毒藥物，還可 W與其他具有防治流行性感冒功效的成分復配形成組合物應用于制備抗流感病毒藥物。
[0009] 優(yōu)選地，所述流感病毒為甲型流感病毒。
[0010] 優(yōu)選地，所述抗流感病毒藥物可制成任何一種適合于臨床上使用的劑型，如制成 片劑、膠囊劑、顆粒劑、散劑、口服液、針劑、粉針劑、注射液或噴霧劑等。
[0011] 與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明的有益效果在于本發(fā)明首次公開1，2,4-Ξ取代贓嗦化合 物在制備抗流感病毒藥物中的用途。細胞實驗證明，1，2，4-Ξ取代贓嗦化合物對甲型流感 病毒具有較強的抑制作用，其半數(shù)抑制濃度IC50為29.97μΜ，且1，2，4-Ξ取代贓嗦化合物對 細胞毒性低，藥物使用安全性高，其細胞半數(shù)毒性濃度CC5〇>400μΜ，因此，1，2，4-Ξ取代贓 嗦化合物在治療甲型流感病毒感染疾病中具有廣泛的的應用背景，可應用于制備抗流感病 毒藥物。
【具體實施方式】
[0012] W下通過具體實施例對本發(fā)明作進一步詳細的說明。
[0013] 本發(fā)明實施例中，所述MDCK細胞(犬腎細胞)為暨南大學暨南生物醫(yī)藥基地自存的 細胞;所述流感病毒為Inf luenza A/PR/8化1Ν1)，為暨南大學暨南生物醫(yī)藥基地自存的甲 型流感病毒，將其接種于10日齡雞胚尿囊腔內(nèi)，接種量為2(K)yL，35°C培養(yǎng)2天后回收尿囊 液，于-80°C保存?zhèn)溆茫《景霐?shù)組織培養(yǎng)感染劑量(TCIDso) = 10-5;所述1，2，4-立取代贓嗦 化合物由法國己黎第屯大學合成和提供，1，2,4-Ξ取代贓嗦化合物粉末經(jīng)二甲基亞諷 (DMS0)(購自Sigma公司）充分溶解后-20°C保存?zhèn)溆谩?br>[0014] 實施例1 1，2,4-Ξ取代贓嗦化合物細胞毒性測定
[001引將細胞密度為1.2Xl05cells/mL的MDCK細胞接種于96孔板中，每孔100化，在含體 積百分比濃度為10% (v/v)的胎牛血清（購自廣州百旺生物科技有限公司）的DMEM培養(yǎng)基 (品牌為gibco,購自英濰捷基貿(mào)易有限公司）中培養(yǎng)24h后，吸取除去培養(yǎng)基，將1，2,4-Ξ取 代贓嗦化合物用不含血清的DMEM培養(yǎng)基W2倍比做系列稀釋(400μΜ-6.25μΜ)后按稀釋順序 接種于96孔板中的MDCK細胞上，每孔10化L，每個濃度平行設置3個實驗復孔，同時設細胞對 照組。在37°C，5%C02培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4她后用ΜΤΤ法進行檢測，在570皿波長下測吸光度0D值， 將藥物實驗組與細胞對照組的0D值相比計算細胞存活率，根據(jù)Reed-Muench法計算細胞半 數(shù)毒性濃度CC50。重復4次實驗，取平均值。
[0016] 實驗結果:細胞對照組細胞在顯微鏡下觀察，細胞貼壁緊密、形態(tài)良好。根據(jù)MTT結 果，采用Reed-Muench法計算1，2,4-Ξ取代贓嗦化合物的細胞半數(shù)毒性濃度(Χ5〇>400ιχΜ。
[0017]實施例2 1，2,4-Ξ取代贓嗦化合物抗流感病毒活性的CPE觀察
[001引將細胞密度為1.2X105cells/mL的MDCK細胞接種于96孔板中，每孔lOOyL，在含體 積百分比濃度為10 % (v/v)的胎牛血清的培養(yǎng)基中培養(yǎng)2地后，吸取除去培養(yǎng)基，將1， 2.4- Ξ取代贓嗦化合物用不含血清的DMEM培養(yǎng)基W2倍比做系列稀釋(200μΜ-6.25μΜ)后按 稀釋順序接種于96孔板中的MDCK細胞上，每孔10化L，每個濃度平行設置3個實驗復孔，加藥 完畢后每孔加100TCID50的流感病毒1(Κ)化作為1，2,4-Ξ取代贓嗦化合物藥物實驗組，同時 設細胞對照組（即正常對照組）和病毒對照組。將陽性對照藥利己韋林（粉末批號 is2013081301，購自廣州愛純醫(yī)藥科技有限公司，經(jīng)DMS0充分溶解后使用）用不含血清的 DMEM培養(yǎng)基W2倍比做系列稀釋(200μΜ-6.25μΜ)后按稀釋順序接種于96孔板中的MDCK細胞 上，每孔l(K)yL，每個濃度平行設置3個實驗復孔，加藥完畢后每孔加100TCI化0的流感病毒 100化作為陽性對照藥利己韋林藥物實驗組。在37°C，5 %C02培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4她后，觀察1，2， 4-Ξ取代贓嗦化合物和利己韋林的抗病毒活性，并與正常對照組和病毒對照組比較，觀察 并記錄細胞病變(CPE)情況。實驗結果見表1。
[0019] 表1 1，2,4-Ξ取代贓嗦化合物和利己韋林的CPE觀察
[0020]
[0021] 注:與正常對照組相比，"-":細胞無病變；"+":細胞病變率〇-24%;"++":細胞病變 率25-49% :細胞病變率50-74% ;''++++":細胞病變率75-100%。
[0022] 實驗結果：顯微鏡下觀察，正常對照組細胞貼壁致密、形態(tài)良好，流感病毒在MDCK 中的CPEW折光性增強、壞死、破碎為主要特征。藥物實驗組各組細胞，按照藥物稀釋梯度， 梯度規(guī)律出現(xiàn)CPE，且由表1結果可知C陽隨1，2，4-Ξ取代贓嗦化合物濃度減少而逐漸加重。 同時，通過對比1，2,4-Ξ取代贓嗦化合物與利己韋林的抗病毒活性，可W發(fā)現(xiàn)1，2,4-Ξ取 代贓嗦化合物與利己韋林相比，1，2,4-Ξ取代贓嗦化合物抗病毒活性更好，對宿主細胞的 活性更低。
[0023] 實施例3 1，2,4-Ξ取代贓嗦化合物抗流感病毒活性測定
[0024] 將細胞密度為1.2X105cells/mL的MDCK細胞接種于96孔板中，每孔10化L，在含體 積百分比濃度為10% (v/v)的胎牛血清的培養(yǎng)基中培養(yǎng)2地后，吸取除去培養(yǎng)基，將1， 2.4- Ξ取代贓嗦化合物用不含血清的DMEM培養(yǎng)基W2倍比做系列稀釋(200μΜ-6.25μΜ)后按 稀釋順序接種于96孔板中的MDCK細胞上，每孔50yL，每個濃度平行設置3個實驗復孔，加藥 完畢后每孔加100TCID50的流感病毒50化作為1，2，4-Ξ取代贓嗦化合物藥物試驗組，同時 設細胞對照組、病毒對照組和陽性對照組，陽性對照藥為利己韋林。在37°C，5%C〇2培養(yǎng)箱 中培養(yǎng)72h后用MTT法進行檢測，在570nm波長下測吸光度OD值，計算藥物抗病毒有效率 化R)，計算公式為邸％ =(藥物處理組平均OD值-病毒對照組平均OD值)/(細胞對照組平均 OD值-病毒對照組平均OD值）X 100%，根據(jù)Reed-Muench法計算藥物對流感病毒致C陽產(chǎn)生 50 %抑制的濃度，即半數(shù)抑制濃度IC5Q，重復4次實驗，取平均值，并按照公式TI = CCsq/ICso 計算藥物治療指數(shù)ΤΙ。
[002引實驗結果:根據(jù)ΜΤΤ結果，采用Reed-Muench法計算1，2，4-立取代贓嗦化合物的半 數(shù)抑制濃度IC50為29.97μΜ，治療指數(shù)TI > 13.34。
[00%]結論：1，2,4-Ξ取代贓嗦化合物對甲型流感病毒具有較強的抑制作用，且藥物使 用安全性高，因此1，2，4-Ξ取代贓嗦化合物在治療甲型流感病毒感染疾病中具有廣泛的的 應用背景，可應用于制備抗流感病毒藥物。
[0027] W上內(nèi)容是結合具體的優(yōu)選實施方式對本發(fā)明所作的進一步詳細說明，不能認定 本發(fā)明的具體實施只局限于運些說明。對于本發(fā)明所屬技術領域的普通技術人員來說，在 不脫離本發(fā)明構思的前提下，還可W做出若干簡單推演或替換，都應當視為屬于本發(fā)明的 保護犯i圍。
【主權項】
1.1，2,4-三取代哌嗪化合物在制備抗流感病毒藥物中的用途，其特征在于，所述1，2， 4_三取代哌嗪化合物具有如式(I)所示的結構：2. 如權利要求1所述的用途，其特征在于，所述流感病毒為甲型流感病毒。3. 如權利要求1所述的用途，其特征在于，所述抗流感病毒藥物制成片劑、膠囊劑、顆粒 劑、散劑或口服液。4. 如權利要求1所述的用途，其特征在于，所述抗流感病毒藥物制成針劑、粉針劑、注射 液或噴霧劑。
【文檔編號】A61K31/495GK105920004SQ201610351594
【公開日】2016年9月7日
【申請日】2016年5月24日
【發(fā)明人】劉忠, 張卓, 王飛, 王一飛, 董長治
【申請人】暨南大學