專利名稱：一種抗腫瘤活性化合物氮烯菲林及其制法的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，是一種抗腫瘤活性化合物氮烯菲林及其制法與醫(yī)藥用途。
背景技術(shù)：
1962年在美國發(fā)明了氮烯脒胺DTIC這一新結(jié)構(gòu)類型的細(xì)胞毒類抗癌藥，并在惡性黑色素瘤的治療上獲得成功。但由于其化學(xué)性質(zhì)不穩(wěn)定，故使用受到很大限制。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供一類新型化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定、抗腫瘤活性高、毒性較低的抗腫瘤活性化合物氮烯菲林，其結(jié)構(gòu)式如下 本發(fā)明三氮烯類化合物的合成方法以茶堿為原料，經(jīng)過硝化、還原、重氮化、偶合，再經(jīng)乙基化反應(yīng)得到氮烯菲林。合成反應(yīng)的路線如下 具體合成步驟1.茶堿(I)在冰醋酸中與濃硝酸回流發(fā)生硝化反應(yīng)生成8-硝基茶堿(II)2. 8-硝基茶堿(II)與保險(xiǎn)粉反應(yīng)還原生成8-氨基茶堿(III)3. 8-氨基茶堿(III)經(jīng)重氮化反應(yīng)生成8-重氮基茶堿(IV)4. 8-重氮基茶堿(IV)與二甲胺偶合生成8-(3，3-二甲基-1-三氮烯基)茶堿(V)5. 8-(3，3-二甲基-1-三氮烯基)茶堿(V)與硫酸二乙酯進(jìn)行乙基化反應(yīng)即生成8-(3，3-二甲基-1-三氮烯基)-7-乙基茶堿(VI)，亦即氮烯菲林。
具體實(shí)施例方式氮烯菲林(VI)的制備1)8-硝基茶堿(II)的制備取700ml的冰醋酸置2000ml反應(yīng)瓶中，邊攪拌邊加熱，同時(shí)加入茶堿(I)420g(2.3mol)，然后再加入140ml冰醋酸，密封加溫?cái)嚢柚寥?，慢慢滴加濃硝?94ml(3mol)，反應(yīng)溫度控制在90℃左右，然后攪拌反應(yīng)30分鐘，放置冷卻，過濾，抽干，用冰冷的蒸餾水約200ml抽洗，70℃烘干，研細(xì)備用。得406g(1.8mol)8-硝基茶堿(II)，產(chǎn)率為77.3％，熔點(diǎn)為285～287℃。
2)8-氨基茶堿(III)的制備將盛有1000ml蒸餾水的燒杯，放到控溫式磁力攪拌器上，攪拌加熱，加入8-硝基茶堿150g(0.67mol)，邊加連二亞硫酸鈉250g(1.4mol)邊加20％KOH溶液，反應(yīng)溫度控制在90℃以下，反應(yīng)液酸堿度由PH5逐步升至PH9，最后呈強(qiáng)堿性，待反應(yīng)液澄明，加活性炭脫色，趁熱抽濾，濾液以2∶1的鹽酸調(diào)PH值至3～4，放置沉淀2小時(shí)，抽濾，100ml蒸餾水洗2次，80℃烘干，研細(xì)得106g(0.54mol)8-氨基茶堿(III)，產(chǎn)率為81.6％，熔點(diǎn)300℃以上。
3)8-重氮基茶堿(IV)的制備燒杯中加入8-氨基茶堿(III)45g(0.23mol)和5％的鹽酸溶液1500ml，加熱至全溶，趁熱過濾，濾液移至反應(yīng)瓶于冰浴上冷至10℃以下，邊攪拌邊慢慢加入22.5g(0.33mol)亞硝酸鈉，快速攪拌至攪不動(dòng)為止，冰浴放置反應(yīng)30分鐘，過濾，甲醇洗2次，抽干，得重氮鹽濕品約67g，將濕品折算成干品直接投入下步反應(yīng)。
4)8-(3，3-二甲基-1-三氮烯基)茶堿(V)的制備將67g濕重氮鹽，相當(dāng)于干品41.4g(0.2mol)，放入反應(yīng)瓶中，加入丙酮3000ml，室溫?cái)嚢?，滴?3％的二甲胺50ml，冰浴攪拌反應(yīng)1小時(shí)，過濾，丙酮洗，真空干燥，得黃色晶體46g(0.18mol)，熔點(diǎn)218-9℃。產(chǎn)率為91.6％。
5)氮烯菲林(VI)的制備取8-(3，3-二甲基-1-三氮烯基)茶堿(V)98g(0.39mol)于燒杯中，加入5％KOH溶液1000ml，微熱溶解，過濾，將濾液移至反應(yīng)瓶中，控制溫度為50℃左右，滴加硫酸二乙酯91ml(0.59mol)，繼續(xù)攪拌反應(yīng)約30分鐘，停止加熱，室溫?cái)嚢璺磻?yīng)2小時(shí)，析出大量淡黃色纖維狀結(jié)晶。濾取結(jié)晶，抽干，濾餅用水洗滌，再用少量乙醚洗，80℃干燥。得8-(3，3-二甲基-1-三氮烯基)-7-乙基茶堿即氮烯菲林(VI)88g，熔點(diǎn)為191～2℃。產(chǎn)率為81％。
6)氮烯菲林(VI)的精制方法取丙酮1000ml，加入上述制得的氮烯菲林50g，水浴加熱回流攪拌溶解成溶液，加入10g活性炭，加熱攪拌脫色15分鐘，趁熱濾去活性炭，放置析晶，濾取淡黃色針狀結(jié)晶，即為精制的氮烯菲林(VI)，80℃烘干，熔點(diǎn)為192～3℃，收率93％。
本發(fā)明抗腫瘤活性化合物氮烯菲林是一種高效低毒的抗腫瘤活性化合物，對肺癌、惡性黑色素瘤等多種腫瘤有明顯抑制活性，其主要藥效學(xué)試驗(yàn)結(jié)果如下。
1.試驗(yàn)方法1)C57BL/6小鼠B16黑色素瘤的實(shí)驗(yàn)肺轉(zhuǎn)移療效試驗(yàn)取對數(shù)生長期的B16黑色素瘤體外單層培養(yǎng)細(xì)胞，除去上清液加入0.2％胰酶和0.02％EDTA液進(jìn)行細(xì)胞脫壁消化，以后除去消化液，加入RPM1640培養(yǎng)基制備成2.5×105/ml濃度的細(xì)胞懸液，每只小鼠靜脈接種0.2ml(5×104細(xì)胞)。接種后24小時(shí)開始治療，三周后解剖動(dòng)物取肺臟計(jì)算肺克隆指數(shù)CI(克隆指數(shù)＝克隆分?jǐn)?shù)×系數(shù))，與對照組進(jìn)行比較，計(jì)算肺克隆抑制率。
克隆抑制率＝1-(CI試驗(yàn)/CI對照)×100％2)istar大鼠模型對W256療效試驗(yàn)取生長旺盛的W256瘤源，無菌條件下抽取腹水液以生理鹽水稀釋成1～2×107/ml濃度的細(xì)胞懸液，接種于宿主右腋皮下0.2ml/只，次日隨機(jī)分組，按方案進(jìn)行治療，二周后解剖所有動(dòng)物剖取腫瘤稱重，與對照組進(jìn)行比較，按常規(guī)方法求出腫瘤抑制率。
3)體肺腺癌LAX及小細(xì)胞肺癌SPC的治療試驗(yàn)取對數(shù)生長期荷LAX或SPC的裸小鼠，無菌條件取出瘤源制成1～2×107/ml濃度的細(xì)胞勻漿懸液，接種于裸小鼠腋皮下，每只0.2ml，次日隨機(jī)分組，按方案進(jìn)行治療，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物置于SPF條件飼養(yǎng)和操作，2～3周間結(jié)束實(shí)驗(yàn)剖取各組腫瘤與相應(yīng)對照組進(jìn)行比較，按規(guī)定方法進(jìn)行計(jì)算，量效關(guān)系試驗(yàn)按各組抑制率以直線回歸方程求出ED50值。
試驗(yàn)對照空白對照為試驗(yàn)組相應(yīng)溶劑靜注用生理鹽水，口服用0.5％CMC-Na液；陽性對照為臨床用抗癌藥氮烯脒胺(DTIC)。2.試驗(yàn)結(jié)果(見表1)體內(nèi)療效結(jié)果表明氮烯菲林對動(dòng)物腫瘤模型W256、B16肺轉(zhuǎn)移及人體腫瘤異種移植模型肺腺癌(LAX)及小細(xì)胞肺癌(SPC)的靜脈和口服兩種途徑給藥均有不同程度顯著的抗腫瘤效果，效果確切且具有量效關(guān)系，靜脈給藥對B16肺轉(zhuǎn)移ED50為1.26mg/kg(3.78mg/m2)，其化療指數(shù)達(dá)到130.98，而DTIC的ED50是22.32mg/kg(66.96mg/m2)，化療指數(shù)僅為28.67。
表1 氮烯菲林體內(nèi)抗腫瘤療效試驗(yàn)結(jié)果劑 量譜 給藥途徑 抑瘤率％mg/kgmg/m210 42 靜注 87.29～89.8W256 14.2靜注 50.17～59.670.1 0.42 靜注 7.26～21.7260 252口服 91.74～94.68W256 30 126口服 73.87～80.5015 63 口服 32.32～35.0210 30 靜注 93.95～96.56B1613 靜注 82.80～90.000.1 0.3靜注 42.36～47.5030 90 口服 91.61～95.94B1610 30 口服 81.94～87.883.3 15 口服 62.90～68.0110 30 靜注 90.95～93.59LAX515 靜注 81.93～84.722.5 7.5靜注 50.52～59.0430 90 口服 90.07～91.46LAX15 45 口服 67.24～73.027.5 22.5 口服 51.05～54.8810 30 靜注 56.86～59.06SPC515 靜注 42.16～49.552.5 7.5靜注 25.00～30.8030 90 口服 63.21～66.68SPC15 45 口服 44.81～47.207.5 22.5 口服 29.25～32.31研究證明氮烯菲林對肺癌轉(zhuǎn)移瘤、各種轉(zhuǎn)移性肝癌、惡性網(wǎng)組織細(xì)胞瘤和惡性淋巴瘤等多種惡性腫瘤有明顯療效，可用于制備抗腫瘤藥物。
權(quán)利要求
1.一種抗腫瘤活性的化合物氮烯菲林，其特征在于該化合物的結(jié)構(gòu)式為
2.權(quán)力要求1所述的抗腫瘤活性化合物氮烯菲林的制備方法，其特征在于合成路線如下 具體合成步驟為(1)茶堿(I)在冰醋酸中與濃硝酸回流發(fā)生硝化反應(yīng)生成8-硝基茶堿(II)；(2)8-硝基茶堿(II)與保險(xiǎn)粉反應(yīng)還原生成8-氨基茶堿(III)；(3)8-氨基茶堿(III)經(jīng)重氮化反應(yīng)生成8-重氮基茶堿(IV)；(4)8-重氮基茶堿(IV)與二甲胺偶合生成8-(3，3-二甲基-1-三氮烯基)茶堿(V)；(5)8-(3，3-二甲基-1-三氮烯基)茶堿(V)與硫酸二乙酯進(jìn)行乙基化反應(yīng)生成氮烯菲林(VI)。
3.權(quán)利要求1所述的抗腫瘤活性化合物氮烯菲林用于制備抗腫瘤藥物的用途。
全文摘要
本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域,是一種具有抗腫瘤活性化合物氮烯菲林及其制備方法與醫(yī)藥用途。氮烯菲林的化學(xué)結(jié)構(gòu)式如右式,本發(fā)明以茶堿為原料,經(jīng)過硝化、還原、重氮化、偶合反應(yīng),再進(jìn)行乙基化反應(yīng)即得到氮烯菲林。本發(fā)明的化合物氮烯菲林對肺癌轉(zhuǎn)移瘤、各種轉(zhuǎn)移性肝癌、惡性網(wǎng)組織細(xì)胞瘤和惡性淋巴瘤等多種惡性腫瘤有明顯療效,可用于制備抗腫瘤藥物。
文檔編號C07D473/00GK1374308SQ0211089
公開日2002年10月16日 申請日期2002年2月26日 優(yōu)先權(quán)日2002年2月26日
發(fā)明者張萬年, 徐衛(wèi)明, 呂加國, 周有駿, 朱駒, 季海濤, 宋云龍 申請人:中國人民解放軍第二軍醫(yī)大學(xué)