專(zhuān)利名稱(chēng)：一個(gè)來(lái)自海洋微生物的具有強(qiáng)抗腫瘤活性倍半萜的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及的是從海洋真菌Penicillium sp.BL27-2的乙酸乙酯中分離得到的一個(gè)具有強(qiáng)抗腫瘤活性的倍半萜類(lèi)化合物3-acetyl-13-deoxyphomenone。
背景技術(shù)：
倍半萜類(lèi)是一類(lèi)廣泛存在于植物、微生物、海洋微生物以及某些昆蟲(chóng)中的化合物，具有諸如抗菌、抗腫瘤、抗病毒、細(xì)胞毒、免疫抑制、植物毒、昆蟲(chóng)激素、昆蟲(chóng)據(jù)食等作用。CN03153691.3公開(kāi)了名稱(chēng)為“艾里莫芬烷內(nèi)酯抑制乙肝病毒的用途及其藥物組合物”的專(zhuān)利，是從千里光屬植物中提取分離得到艾里莫芬烷型倍半萜內(nèi)酯，并發(fā)現(xiàn)其具有抑制乙肝病毒氧核糖核酸HBV-DNA以及降低乙肝病毒表面抗原HBsAg的活性。這種艾里莫芬烷型倍半萜內(nèi)酯可以用于抑制乙肝表面抗原、治療乙型病毒性肝炎，通常以含有這種內(nèi)酯的藥物組合物形式使用。
本專(zhuān)利所涉及的化合物是一個(gè)具有艾里莫芬烷骨架的倍半萜。這類(lèi)倍半萜是一種在微生物次級(jí)代謝產(chǎn)物中常見(jiàn)的化合物，具有植物毒素、真菌毒素以及植物激素的作用，某些成分還有促進(jìn)真菌分生孢子生長(zhǎng)的作用，這是一類(lèi)具有強(qiáng)生理活性的物質(zhì)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是為了在海洋微生物中尋找具有抗癌活性的物質(zhì)，對(duì)從白令海采集的海泥分離得到的海洋真菌Penicillium sp.BL27-2進(jìn)行了培養(yǎng)發(fā)酵和代謝成分的系統(tǒng)分離，得到倍半萜類(lèi)化合物3-acetyl-13-deoxyphomenone。
本發(fā)明將從白令海采集的海泥分離得到海洋真菌Penicillium sp.BL27-2的發(fā)酵液過(guò)濾后，用乙酸乙酯對(duì)水層進(jìn)行了反復(fù)的萃取后，綜合利用各種色譜手段對(duì)萃取物進(jìn)行了分離后得到化合物3-acetyl-13-deoxyphomenone。并利用各種化學(xué)和光譜手段，鑒定了該化合物的結(jié)構(gòu)。此化合物的結(jié)構(gòu)如下所示 本發(fā)明是按如下方法完成的麥麩海泥浸汁培養(yǎng)基配方如下麥麩浸汁200ml，海泥浸汁100ml，蛋白胨2g，葡萄糖17g，NaCl10g，MgCl26H2O1.0g，KCl0.1g，蒸餾水1000ml，菌株在該培養(yǎng)基上菌落前期青綠色，后期灰綠色，分生孢子梗頂端排列成帚狀間枝，瓶梗狀，末端尖，分生孢子淺灰綠色，無(wú)橫隔膜，球形或卵圓形，根據(jù)此特征鑒定為青霉屬Penicillium sp.；菌株P(guān)enicillium sp BL27-2.在15℃，150rpm的搖床，振蕩培養(yǎng)12天，大量發(fā)酵得到發(fā)酵液40L，16層紗布過(guò)濾，得到菌絲體和水層，水層用分別用等量的乙酸乙酯反復(fù)萃取3次，得到浸膏3g，乙酸乙酯層浸膏甲醇反復(fù)溶解，除去雜質(zhì)后，中低壓ODS柱進(jìn)行分離，甲醇-水梯度洗脫，收集甲醇∶水70∶30的流份，經(jīng)過(guò)進(jìn)一步純化，得到化合物3-acetyl-13-deoxyphomenone。
本發(fā)明所用的原料海洋真菌采自白令海采集的海泥，經(jīng)國(guó)家海洋局第一海洋研究所田黎教授鑒定為Penicillium sp.。
本發(fā)明所獲得的倍半萜類(lèi)化合物具有很強(qiáng)的細(xì)胞毒活性，有望成為抗癌藥物先導(dǎo)化合物的物質(zhì)。
具體實(shí)施例方式生產(chǎn)菌BL27-2，由1999年7月21日白令海采集的海泥分離得到，經(jīng)培養(yǎng)條件測(cè)試，在麥麩海泥浸汁培養(yǎng)基上產(chǎn)生的抑真菌活性最高，培養(yǎng)配方如下麥麩浸汁200ml，海泥浸汁100ml，蛋白胨2g，葡萄糖17g，NaCl10g，MgCl26H2O1.0g，KCl0.1g，蒸餾水1000ml。菌株在該培養(yǎng)基上菌落前期青綠色，后期灰綠色，分生孢子梗頂端排列成帚狀間枝，瓶梗狀，末端尖，分生孢子淺灰綠色，無(wú)橫隔膜，球形或卵圓形，根據(jù)此特征鑒定為青霉屬Penicillium sp.。
菌株P(guān)enicillium sp BL27-2.在15℃，150rpm的搖床，振蕩培養(yǎng)12天，大量發(fā)酵得到發(fā)酵液40L。16層紗布過(guò)濾，得到菌絲體和水層。水層用分別用等量的乙酸乙酯反復(fù)萃取3次，得到浸膏3g。乙酸乙酯層浸膏甲醇反復(fù)溶解，除去雜質(zhì)后，中低壓ODS柱進(jìn)行分離，甲醇-水梯度洗脫，收集甲醇∶水70∶30的流份，經(jīng)過(guò)進(jìn)一步純化，得到化合物3-acetyl-13-deoxyphomenone化合物的理化性質(zhì)如下及波譜數(shù)據(jù)如下3-acetyl-13-deoxyphomenone無(wú)色油狀物，10％硫酸乙醇顯色劑呈明顯的藍(lán)色斑點(diǎn)；1H-NMR(300MHz，CD3OD)δ1H-NMR(300MHz，CD3OD)δ1.12(3H，d，J＝6.7Hz，H-15)，1.31(3H，s，H-14)，1.41(1H，m，H-2b)，1.82(3H，s，H-16)，1.96(1H，m，H-4)，2.01(3H，s，H-13)，2.15(1H，m，H-2a)，2.37(1H，m，H-1b)，2.65(1H，m，H-1a)，3.42(1H，s，H-6)，4.90(1H，dt，J＝4.8，11.2Hz，H-3)，5.06(2H，d，J＝6.1Hz，H-12)，5.74(1H，d，J＝1.76Hz，H-9)13C-NMR(75MHz，CD3OD)δ194.4(C-8)，172.4(C-16)，165.2(C-10)，140.8(C-11)，121.9(C-9)，114.6(C-12)，74.3(C-3)，69.6(C-6)，64.6(C-7)，43.0(C-4)，42.4(C-5)，32.7(C-2)，31.3(C-1)，21.0(C-17)，19.9(C-13)，18.9(C-14)，11.4(C-15).
經(jīng)體外抗腫瘤活性試驗(yàn)，此化合物對(duì)小鼠白血病P388、人肺腺癌A-549、人白血病HL-60、人肝癌BEL-7402等多種腫瘤細(xì)胞的IC50如表1所示表1化合物對(duì)腫瘤細(xì)胞系的細(xì)胞毒活性(IC50，μmol/L)

權(quán)利要求
1.一個(gè)來(lái)自海洋微生物的具有強(qiáng)抗腫瘤活性倍半萜，其特征在于從采集的海泥分離得到海洋真菌Penicillium sp.BL27-2的發(fā)酵液過(guò)濾后，用乙酸乙酯對(duì)水層進(jìn)行萃取后，綜合利用色譜手段對(duì)萃取物進(jìn)行分離后得到的化合物3-acetyl-13-deoxyphomenone
2.一種如權(quán)利要求1所述的抗腫瘤活性倍半萜的制備方法，其特征在于麥麩海泥浸汁培養(yǎng)基配方如下麥麩浸汁200ml，海泥浸汁100ml，蛋白胨2g，葡萄糖17g，NaCl10g，MgCl26H2O1.0g，KCl0.1g，蒸餾水1000ml，菌株在該培養(yǎng)基上菌落前期青綠色，后期灰綠色，分生孢子梗頂端排列成帚狀間枝，瓶梗狀，末端尖，分生孢子淺灰綠色，無(wú)橫隔膜，球形或卵圓形，根據(jù)此特征鑒定為青霉屬Penicillium sp.；菌株P(guān)enicillium sp BL27-2.在15℃，150rpm的搖床，振蕩培養(yǎng)12天，大量發(fā)酵得到發(fā)酵液40L，16層紗布過(guò)濾，得到菌絲體和水層，水層用分別用等量的乙酸乙酯反復(fù)萃取3次，得到浸膏3g，乙酸乙酯層浸膏甲醇反復(fù)溶解，除去雜質(zhì)后，中低壓ODS柱進(jìn)行分離，甲醇-水梯度洗脫，收集甲醇∶水 70∶30的流份，經(jīng)過(guò)進(jìn)一步純化，得到化合物3-acetyl-13-deoxyphomenone。
全文摘要
本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，公開(kāi)了一種從海洋真菌Penicillium sp.BL27－2的乙酸乙酯中分離得到的一個(gè)倍半萜類(lèi)化合物3－acetyl－13－deoxyphomenone。它是從采集的海泥分離得到海洋真菌Penicillium sp.BL27－2的發(fā)酵液過(guò)濾后，用乙酸乙酯對(duì)水層進(jìn)行萃取后，綜合利用色譜手段對(duì)萃取物進(jìn)行分離后得到的化合物3－acetyl－13－deoxyphomenone，結(jié)構(gòu)式如下。它是一個(gè)具有很強(qiáng)的細(xì)胞毒活性的倍半萜類(lèi)化合物，有望成為抗癌藥物先導(dǎo)化合物物質(zhì)。
文檔編號(hào)C07D303/32GK101020913SQ20071000665
公開(kāi)日2007年8月22日 申請(qǐng)日期2007年1月22日 優(yōu)先權(quán)日2006年7月6日
發(fā)明者黃永富, 裴月湖, 田黎 申請(qǐng)人:沈陽(yáng)藥科大學(xué)