專利名稱：：有機硼酸類化合物及其作為熒光探針的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種有機硼酸類熒光探針化合物，特別是一種具有PBAQA結(jié)構(gòu)的有機硼酸類熒光探針化合物及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：1、糖類腫瘤標志物癌癥是當今死亡率最高的疾病之一，其早期診斷和干預是決定能否戰(zhàn)勝癌癥的一個重要因素。在惡性腫瘤細胞中可發(fā)生多種類型的糖基改變。己發(fā)現(xiàn)常見的糖鏈結(jié)構(gòu)的變化有某些結(jié)構(gòu)的表達喪失或表達過度，不完全的或截短的結(jié)構(gòu)的持續(xù)表達，前體的堆積，以及較少見的出現(xiàn)新的結(jié)構(gòu)。腫瘤標志物(tumormarker)是腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移過程中產(chǎn)生的，可以反映腫瘤自身存在的化學物質(zhì)。這些物質(zhì)存在于腫瘤細胞的細胞核、細胞質(zhì)和細胞膜上或分泌在體液中；不存在于正常成人組織而見于胚胎組織中，或在腫瘤組織中其含量超過正常含量，它們的存在或含量的變化可以提示腫瘤的性質(zhì)并有助于了解腫瘤組織起源和細胞分化，從而可以幫助腫瘤的病理診斷、組織學分類、判斷預后及指導臨床治療。20世紀90年代初，人們發(fā)現(xiàn)癌細胞表面的唾液酸化路易斯X(sialylLewisX，sLex)和唾液酸化路易斯A(sialylLewisA，sLea)可作為內(nèi)皮E-選擇素的配基。sLea在下游消化器官，比如結(jié)腸、直腸、胰腺和膽管的腫瘤細胞向內(nèi)皮粘附過程中起顯著作用。而sLex決定子顯示與胸腺、卵巢及肺的腫瘤細胞粘附過程關(guān)系密切。這些細胞的生物學效果立刻增大了癌細胞通過E-選擇素向內(nèi)皮細胞轉(zhuǎn)移的概率，而特異性的糖配體參與了癌細胞的血源性轉(zhuǎn)移過程。原發(fā)性腫瘤損傷部位的腫瘤細胞首先侵入血流中，然后隨著血流流動。在此期間這些腫瘤細胞與粒細胞及血小板等各類血細胞相互作用，最終粘附于外圍血管壁上的內(nèi)皮細胞上，完成腫瘤轉(zhuǎn)移。細胞粘附過程受內(nèi)皮細胞上的E-選擇素與腫瘤細胞上的唾液酸化LewisX/A相互作用所介導。研究發(fā)現(xiàn)，正常細胞表面在癌變過程中會發(fā)生糖鏈的改變。細胞表面糖鏈結(jié)構(gòu)的改變直接與惡性腫瘤的增大、侵襲、轉(zhuǎn)移相關(guān)。根據(jù)惡性腫瘤細胞表面糖鏈結(jié)構(gòu)的異常特征進行癌癥的診斷，是近十多年來發(fā)展的新技術(shù)，目前已有多個糖類標志物應(yīng)用臨床。其中唾液酸化路易斯A和唾液酸化路易斯X都是含唾液酸(臉"c)、半乳糖(GW)、巖藻糖(Fwc)和乙酰葡萄糖胺(G/cA^cO的糖類標志物。監(jiān)測這兩種寡糖的表達并聯(lián)合其它診斷方法，將為胰腺癌、胃癌、結(jié)腸癌等轉(zhuǎn)移性惡性腫瘤的早期診斷、手術(shù)方式選擇、術(shù)后治療及預測提供重要的參考依據(jù)。2、有機硼酸類熒光探針有機硼酸能夠與1,2-二羥基化合物或1,3-二羥基化合物在水溶液中可逆性地共價結(jié)合，形成五元或六元環(huán)狀酯。糖環(huán)結(jié)構(gòu)中的順式鄰二羥基與硼酸的結(jié)合能力比簡單鏈狀鄰二羥基化合物(如乙二醇)更強，因此硼酸可以作為糖的識別位點。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>化學家在研究苯基硼酸類化合物時發(fā)現(xiàn)，硼酸基團易與1,2-二羥基化合物或1,3-二羥基化合物相互作用，在水溶液中形成五元環(huán)或六元環(huán)的硼酸酯(如上圖)。處于糖環(huán)結(jié)構(gòu)中的順式二羥基(C7>dk)l)與苯基硼酸的結(jié)合力更高。這種強烈的相互作用在水溶液中具有可逆性，因此苯基硼酸可以作為糖類化合物理想的識別位點。如果在苯基硼酸的結(jié)構(gòu)中引入熒光團，導致硼酸化合物與糖結(jié)合后產(chǎn)生熒光變化，這樣的有機硼酸就可以作為識別糖類化合物的熒光探針。由于硼酸類熒光探針與各種糖類化合物的結(jié)合能力不同，因此可以應(yīng)用熒光法測定兩者的結(jié)合常數(shù)，從而準確地研究硼酸類熒光探針對不同糖類化合物的選擇性。3、新一代水溶性熒光探針PBAQA<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>PBAQA(2-(4-硼酸苯基)喹啉-4-羧酸)是近年發(fā)現(xiàn)的新型硼酸類熒光分子探針(參見YangW,LinL,WangB.HeterocyclCommun,2004,8:383388.)。該探針具有以下特點1)喹啉(熒光團)不直接與硼酸基團相連；2)結(jié)構(gòu)中有一個游離羧基可與其它官能團反應(yīng)以完成探針的修飾改造；3)與糖結(jié)合后熒光強度改變大。結(jié)果發(fā)現(xiàn)在生理pH下，所有測驗的糖都可以引起顯著的熒光強度的改變。在25mM濃度下，果糖引起熒光強度的改變最大，大約25倍。葡萄糖在較高濃度0.2M，引起熒光強度增大最高可達6倍。更重要的是4)PBAQA水溶性好，性狀穩(wěn)定，產(chǎn)生的熒光不受溫度、溶劑等外界因素的干擾，是識別糖類化合物的理想工具。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種具有PBAQA結(jié)構(gòu)的有機硼酸類化合物及其作為熒光探針的應(yīng)用。本發(fā)明的技術(shù)方案如下具有通式(I)的有機硼酸類化合物，以及其光學異構(gòu)體、非對映異構(gòu)體和消旋體混合物，其藥學上可接受的鹽或溶劑合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>(I)式中,Ri為天然氨基酸衍生物，Cl-12的脂肪鏈氨基酸，芳香氨基酸，芳基垸基氨基酸，雜芳基氨基酸，雜芳基垸基胺，垸基二胺，芳基二胺，芳基垸基二胺，雜芳基二胺或氫；其中，芳基是指芳族碳環(huán)基團，優(yōu)選的芳環(huán)含有6-10個碳原子；雜芳基是芳族雜環(huán)，可以是單環(huán)或雙環(huán)基團。式中,L為酰胺基、氨基酰基，亞甲基或氨基；式中,PA為苯基硼酸，PBAQA，含有鹵素、硝基和/或氰基取代基的苯基硼酸，或者含有鹵素、硝基和/或氰基取代基的PBAQA。優(yōu)選的，所述的有機硼酸化合物(I)具體包括如下化合物3-((4-((2-(4-硼酸苯基)喹啉-4-甲酰胺基)甲基)-1//-1,2,3-三唑-1-基)甲基)苯基硼酸4-((4-((2-(4-硼酸苯基)喹啉-4-甲酰胺基)甲基)-1//-1，2,3-三唑-1-基)甲基)苯基硼酸3-(2-(4-硼酸苯基)喹啉-4-甲酰胺基)苯基硼酸4-(2-(4-硼酸苯基)喹啉-4-甲酰胺基)苯基硼酸3-(2-(2-(4-硼酸苯基)喹啉-4-甲酰胺基)乙酰胺基)苯基硼酸4-(2-(2-(4-硼酸苯基)喹啉-4-甲酰胺基)乙酰胺基)苯基硼酸3-(6-(2-(4-硼酸苯基)喹啉-4-甲酰胺基)己酰氨基)苯基硼酸4-(6-(2-(4-硼酸苯基)喹啉-4-甲酰胺基)己酰氨基)苯基硼酸3-(3-(2-(4-硼酸苯基)喹啉-4-甲酰胺基)苯甲酰胺)苯基硼酸4_(3-(2-(4-硼酸苯基)喹啉-4-甲酰胺基)苯甲酰胺)苯基硼酸3_(12_(2_(4-硼酸苯基)喹啉-4-甲酰胺基)十二酰胺基)苯基硼酸4，4'-(4，4'-(乙烷-1,2-二基二(氮烷二基))二(氧代甲撐)二確啉-4,2-二基))二(4,1-次苯萄二硼酸4,4'-(4,4'-(己垸-1,2-二基二(氮烷二基》二(氧代甲撐)二(喹啉-4,2-二基))二(4,1-次苯基)二硼酸。本發(fā)明的有機硼酸類化合物的應(yīng)用，該化合物作為熒光探針，用于腫瘤細胞表面特異性糖或其它糖的檢測試劑。所述的表面特異性糖包括唾液酸化路易斯X，唾液酸化路易斯A(LewisA)，路易斯X(LewisX)或路易斯Y(LewisY)等。所述的其它糖包括果糖，葡萄糖，半乳糖，阿拉伯糖或山梨醇等。本發(fā)明的有機硼酸類化合物與糖結(jié)合后能引起熒光強度的改變，可作為新型熒光探針識別腫瘤細胞表面特異性的寡糖。為腫瘤高危人群的篩查、惡性腫瘤的早期診斷、預后觀察以及腫瘤復發(fā)、轉(zhuǎn)移評價等提供可靠的依據(jù)，可用作具有臨床應(yīng)用價值的腫瘤診斷試劑的開發(fā)。也可與其它糖結(jié)合后引起熒光強度改變，用于這些糖的檢測及診斷這些糖相關(guān)的疾病。一種藥物組合物，包含(1)上述任一項的化合物，和(2)—種或多種藥學上可接受載體或賦形劑。此外，本發(fā)明還還提供適于口服給予哺乳動物的藥物組合物，包含(1)上述任一項的化合物，和(2)藥學上可接受載體，任選包含(3)—種或多種藥學上可接受的賦形劑。本發(fā)明同樣還提供適于胃腸外給予哺乳動物的藥物組合物，包含(l))上述任一項的硼酸化合物，和(2)藥學上可接受載體，任選包含(3)—種或多種藥學上可接受的賦形劑。發(fā)明詳述所用的定義和術(shù)語本文中所用的術(shù)語和定義含義如下"芳基"是指芳族碳環(huán)基團。優(yōu)選的芳環(huán)含有6-10個碳原子。"雜芳基"是芳族雜環(huán)，可以是單環(huán)或雙環(huán)基團。較佳的雜芳基包括，例如噻吩基，呋喃基、吡咯基、吡啶基、吡嗪基、噻唑基、噴啶基、喹啉基、以及四氮唑基、苯并噻唑基、苯并呋喃基、吲哚基等。"藥學上可接受的鹽"是指式(I)化合物具有療效且無毒的鹽形式。其可由任一酸性基團(如羧基)形成陰離子鹽，或由任一堿性基團(如氨基)形成陽離子鹽。本領(lǐng)域已知許多這樣的鹽。在任何酸性基團(如羧基)上形成的陽離子鹽，或是在任何堿性基團(如氨基)上形成的陰離子鹽。這些鹽由許多式本領(lǐng)域已知的，如陽離子鹽包括堿金屬(如鈉和鉀)和堿土金屬(如鎂和鈣)的鹽以及有機鹽(如銨鹽)。還可通過使用相應(yīng)的酸處理堿性形式的(I)方便地獲得陰離子鹽，這樣的酸包括無機酸如硫酸、硝酸、磷酸等；或有機酸如乙酸、丙酸、羥基乙酸、2-羥基丙酸、2-氧代丙酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、馬來酸、富馬酸、蘋果酸、酒石酸、2-羥基-l,2，3-丙三酸、甲磺酸、乙磺酸、苯甲磺酸、4-甲基苯磺酸、環(huán)己基亞磺酸、2-羥基苯甲酸、4-氨基-2-羥基苯甲酸等。這些鹽是熟練技術(shù)人員熟知的，熟練的技術(shù)人員可制備本領(lǐng)域知識所提供的任何鹽。此外，熟練技術(shù)人員可根據(jù)溶解度、穩(wěn)定性、容易制劑等取某種鹽而舍另一種鹽。這些鹽的測定和最優(yōu)化在熟練技術(shù)人員的經(jīng)驗范圍內(nèi)。"溶劑合物"是溶質(zhì)(如PBAQA類熒光探針分子)和溶劑(如水)組合形成的配合物。本發(fā)明采用的藥學上可接受的溶劑包括不干擾熒光探針的生物活性的那些溶劑，優(yōu)選水、乙醇、乙酸、N，N-二甲基甲酰胺、二甲基亞砜以及該領(lǐng)域技術(shù)人員所知的或容易確定的溶劑。式(I)化合物還可以其它被保護的形式或衍生物的形式存在，這些形式對本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是顯而易見的，均應(yīng)該包含于本發(fā)明的范圍內(nèi)。如上所述的取代基自身還可被一個或多個取代基取代。這樣的取代基包括在C.Hansch禾口A.Leo,SubstituentConstantsforCorrelationAnalysisinChemistryandBiology(1979)中歹[J出的那些取代基。優(yōu)選的取代基包括，例如垸基，烯基，垸氧基，羥基，氧基，硝基，氨基，氨基烷基(如氨甲基等)，氰基，鹵，羧基，羰基垸氧基(如羰基乙氧基等)，硫基，芳基，環(huán)垸基，雜芳基，雜環(huán)烷基(如哌啶基，嗎啉基，吡咯基等)，亞氨基，羥垸基，芳基氧基，芳基垸基，及其結(jié)合。合成方法一上述通式(I)的有機硼酸類化合物的制備方法，以對溴苯乙酮和靛紅為起始原料，首先合成制備2-(4-溴代苯基)喹啉-4-羧酸，在此基礎(chǔ)上通過酰胺縮合、點擊化學(clickchemistry)反應(yīng)，形成二溴代中間體化合物，再經(jīng)鈀催化反應(yīng)轉(zhuǎn)化為目標化合物。方法二上述通式(I)的有機硼酸類化合物的制備方法，以對溴苯乙酮和靛紅為起始原料，先引入硼酸官能團，再通過一步或數(shù)步酰胺縮合、"點擊化學"反應(yīng)合成二硼酸目標化合物?？傊?，通過引入不同結(jié)構(gòu)、不同長度的骨架，提高對腫瘤細胞表面特異性糖的親和力和選擇性。具體合成路線根據(jù)所要制備的某種具體的化合物結(jié)合本領(lǐng)域的現(xiàn)有技術(shù)進行設(shè)計。下面以兩種PBAQA結(jié)構(gòu)的二硼酸化合物為例，說明部分該類化合物的合成路線及制備方法。路線l試劑a.N-溴代丁二酰亞胺(NBS)，光照；b.疊氮鈉，乙腈；C.氫氧化鉀，乙醇；d.N,N，-二環(huán)己基碳化二亞胺(DCC)，丙炔胺；e.硫酸銅，抗壞血酸鈉；f.i)聯(lián)硼酸頻那醇酯，[l,l'-雙(二苯基膦)二茂鐵]二氯化鈀二氯甲垸絡(luò)合物，醋酸鉀ii)高碘酸鈉，醋酸鉀，鹽酸。對溴苯乙酮和靛紅合成的2-(4-溴代苯基)喹啉-4-羧酸與丙炔胺縮合后，與用間(對)溴甲苯經(jīng)芐位溴代、疊氮化后的中間體經(jīng)過"點擊化學"反應(yīng)合成制備二溴代物中間體后，經(jīng)鈀催化反應(yīng)合成目標化合物。路線2<formula>formulaseeoriginaldocumentpage8</formula>試劑g.溴代苯胺，DDC，l-羥基苯并三唑(HOBt)，4-二甲氨基吡啶(DMAP);h.i)聯(lián)硼酸頻那醇酯，[l，l'-雙(二苯基膦)二茂鐵]二氯化鈀二氛甲垸絡(luò)合物，醋酸鉀ii)高碘酸鈉，鹽酸i.DCC，HOBt,DMAP,三乙醇胺(TEA)，j.氫氧化鈉k.溴代苯胺，DCC，HOBt，DMAP，TEAi.i)聯(lián)硼酸頻那醇酯，[i,r-雙(二苯基膦)二茂鐵]二氯化鈀二氯甲垸絡(luò)合物，醋酸鉀ii)高碘酸鈉，鹽酸本領(lǐng)域技術(shù)人員可以對上述步驟進行變動以提高收率，他們可據(jù)本領(lǐng)域的基本知識確定合成的路線，如選擇反應(yīng)物，溶劑和溫度以避免副反應(yīng)的發(fā)生從而提高收率。熒光增敏實驗及對糖結(jié)合選擇性實驗的方法描述于YangW,FangH,GaoX，etal.ChemBiol，2004，11(4):439448.;YangW,LinL，WangB，etal.HeterocyclCommun,2004，8:383388.。應(yīng)用熒光分光光度計檢測低濃度寡糖sLea、sLex及常見糖(葡萄糖、果糖等)與目標化合物溶液混合后是否有明顯的熒光變化以及變化強度。用熒光法測定初篩有效化合物與寡糖以及常見單糖的結(jié)合常數(shù)，證實初篩有效化合物對特定寡糖的選擇性。本發(fā)明的PBAQA衍生物在空間上與腫瘤細胞表面特異性糖的活性位點相匹配，因此在顯示了較高的生物活性。本發(fā)明的PBAQA衍生物可以游離形式或以鹽形式存在。本領(lǐng)域熟練人員已知許多化合物類型的藥學上可接受的鹽及其制備方法。藥學上可接受的鹽包括常規(guī)的無毒性的鹽，包括這樣的化合物堿與無機或有機酸形成的季銨鹽。本發(fā)明的化合物可形成水合物或溶劑合物。本領(lǐng)域熟練人員已知將化合物與水一起凍干時所形成的水合物或在溶液中與合適的有機溶劑濃縮時形成溶劑合物的方法。本發(fā)明包含含有治療量本發(fā)明化合物的藥物，和一種或多種藥學上可接受載體和/或賦形劑的藥物組合物。載體包括如鹽水，緩沖鹽水，葡萄糖，水，甘油，乙醇和它們的結(jié)合物，下文更詳細地論述。如果需要，該組合物還可以包含較小量的潤濕劑或乳化劑，或pH緩沖劑。該組合物可以是液體，懸浮液，乳劑，片劑，丸劑，膠囊，持續(xù)釋放制劑或粉末。該組合物可以用傳統(tǒng)的黏合劑和載體如三酸甘油酯配制成栓劑。口服制劑可以包括標準載體如藥物品級的甘露糖醇，乳糖，淀粉，硬脂酸鎂，糖精鈉，纖維素和碳酸鎂等等。視需要制劑而定，配制可以設(shè)計混合，制粒和壓縮或溶解成分。在另一個途徑中，該組合物可以配制成納米顆粒。使用的藥物載體可以為，例如，固體或者液體。典型的固體載體包括乳糖，石膏粉，蔗糖，滑石，凝膠，瓊脂，果膠，阿拉伯膠，硬脂酸鎂，硬脂酸等等。固體載體可以包括一種或多種可能同時作為增香劑，潤滑劑，增溶劑，懸浮劑，填料，助流劑，壓縮助劑，粘合劑或片劑-崩解劑的物質(zhì)；它還可以是包封材料。在粉末中，載體為精細粉碎的固體，它與精細粉碎的活性成分的混合。在片劑中，火星成分與具有必要的壓縮性質(zhì)的載體以合適的比例混合，以需要的形狀和大小壓縮。粉末和片劑優(yōu)選包含至多99%活性成分。合適的固體載體包括，例如，磷酸鈣，硬脂酸鎂，滑石，糖，乳糖，糊精，淀粉，凝膠，纖維素，甲基纖維素，羧甲基纖維素鈉鹽，聚乙烯吡咯垸酮烷酮，低熔點蠟和離子交換樹脂。典型的液體載體包括糖漿，花生油，橄欖油，水，等等。液體載體用于制備溶液，懸浮液，乳劑，糖漿，酊劑和密封的組合物?；钚猿煞挚梢匀芙饣驊腋∮谒帉W上可接受的液體載體如水，有機溶劑，二者的混合物或藥學上可接受的油類或脂肪。液體載體可以包含其他合適的藥物添加劑如增溶劑，乳化劑，緩沖劑，防腐劑，增甜劑，增香劑，懸浮劑，增稠劑，顏料，粘度調(diào)節(jié)劑，穩(wěn)定形或滲透壓-調(diào)節(jié)劑。用于口服和腸胃外給藥的液體載體的合適的例子包括水(部分地包含如同上述的添加劑，例如纖維素衍生物，優(yōu)選羧甲基纖維素鈉鹽溶液)，醇(包括一元醇和多元醇，例如乙二醇)和它們的衍生物，和油類(例如分餾椰子油和花生油)。用于腸胃外給藥的載體還可以為油脂如油酸乙酯和異丙基肉豆蔻酸鹽。無菌的液體載體用于腸胃外給藥的無菌的液態(tài)組合物。用于加壓組合物的液體載體可以為鹵代烴或其他藥學上可接受的推進劑。無菌溶液或懸浮溶液液體藥物組合物可以用來，例如，靜脈內(nèi)，肌內(nèi)，腹膜內(nèi)或皮下注射。注射時可單次推入或逐漸注入，入30分鐘的經(jīng)脈內(nèi)灌注。該化合物還可以以液體或者固體組合物的形式口服給藥。載體或賦形劑可以包括本領(lǐng)域已知的時間延遲材料，如單硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯，還可包括蠟，乙基纖維素，羥丙基甲基纖維素，異丁烯酸甲酯等等。當制劑用于口服時，公認PHOSALPG-50(phospholipid與1,2-丙二醇濃縮，A,Nattermann&Cie.GmbH)中的0.01%吐溫80用于其他化合物的可接受的口服制劑的配制，可以適應(yīng)于本發(fā)明各種化合物的配制。給予本發(fā)明化合物時可以使用各式各樣的藥物形式。如果使用固體載體，制劑可以為片劑，被放入硬膠囊中的粉末或小藥丸形式或錠劑或糖錠形式。固體載體的量在很大程度上變化，但是優(yōu)選從約25mg到約l.Og。如果使用液體載體，制劑可以為糖漿，乳劑，軟膠囊，在安瓿或小瓶或非水的液體懸浮液中的無菌注射溶液或懸浮液。為了獲得穩(wěn)定的水溶性的劑型，可以將化合物或其藥學上可接受的鹽溶于有機或無機酸的水溶液，0.3M琥珀酸或檸檬酸溶液。選擇性地，酸性的衍生物可以溶于合適的堿性溶液。如果得不到可溶形式，可將化合物溶于合適的共溶劑或它們的結(jié)合。這樣的合適的共溶劑的例子包括，但是不局限于，濃度范圍從0-60%總體積的乙醇，丙二醇，聚乙二醇300，聚山梨酸酯80，甘油，聚氧乙烯脂肪酸酯，脂肪醇或甘油羥脂肪酸酯等等。各種釋放系統(tǒng)是已知的并且可以用于化合物或其他各種制劑的給藥，這些制劑包括片劑，膠囊，可注射的溶液，脂質(zhì)體中的膠囊，微粒，微膠囊，等等。引入的方法包括但是不局限于皮膚的，皮內(nèi)，肌內(nèi)，腹膜內(nèi)的，靜脈內(nèi)的，皮下的，鼻腔內(nèi)的，肺的，硬膜外的，眼睛的和(通常優(yōu)選的)口服途徑?；衔锟梢酝ㄟ^任何方便的或者其它適當?shù)耐緩浇o藥，例如通過注入或快速濃注，通過上皮的或粘膜線路(例如，口腔粘膜，直腸和腸粘膜，等等)吸收或通過負載藥物的支架以及可以于其他生物活性劑一起給藥?？梢匀砘蚓植拷o藥。用于鼻，支氣管或肺疾病的治療或預防時，優(yōu)選的給藥途徑為口服，鼻給藥或支氣管煙霧劑或噴霧器。圖1是4-((4-((2-(3-硼酸苯基)喹啉-4-甲酰胺基)甲基)-1//-1,2,3-三唑-1-基)甲基)苯基硼酸與不同濃度sLea結(jié)合后熒光強度變化；圖2是4-((4-((2-(3-硼酸苯基)喹啉-4-甲酰胺基)甲基)-1//-1，2，3-三唑-1-基)甲基)苯基硼酸與不同濃度sLex結(jié)合后熒光強度變化；其中，橫坐標均為波長，縱坐標均為熒光強度。具體實施例方式下面結(jié)合實施例對本發(fā)明做進一步的說明，但不限于此。實施例l:化合物的合成1)l-溴-3-(溴甲基)苯(2)間溴甲苯(20g,117mmo1),NBS(24.9g,140mmo1)混懸于120mL四氯化碳中，光照下回流24小時至反應(yīng)完全。反應(yīng)液冷卻，濾除反應(yīng)產(chǎn)生的丁二酰亞胺副產(chǎn)物。濾液濃縮得棕色油狀物，乙醇重結(jié)晶得蒼白色針狀結(jié)晶。2)l-(疊氮甲基)-3-溴代苯(3)將間溴溴芐(10g，40mmo1)，疊氮鈉(5.2g，8Ommo1)加入60mL乙腈中室溫攪拌過夜，TLC監(jiān)測反應(yīng)完全。減壓蒸出乙腈，反應(yīng)瓶中加入20mL水，乙酸乙酯萃取。有機相干燥，濃縮得7.7g棕色油狀物。產(chǎn)品未經(jīng)純化，進入下一步反應(yīng)。3)2-(4-溴代苯基)喹啉-4-羧酸(6)對溴苯乙酮(24g，0.12mol)，靛紅(15g,0.102mol)放入反應(yīng)瓶中，然后依次加入乙醇122mL和33%的KOH溶液60mL。攪拌回流8小時后減壓蒸出乙醇，用鹽酸調(diào)溶液pH至3，過濾水洗，冰醋酸重結(jié)晶得淺棕色結(jié)晶(收率70%)。熔點240241°C(lit.239240。C)。4)2-(4-溴代苯基)-N-(丙-2-炔基)喹啉-4-甲酰胺(7)化合物5(5.0g，15.2mmo1)加入20mL氯化亞砜，升溫回流3小時，減壓蒸除二氯亞砜得黃色固體。將所得固體溶于50mLCH2Cl2，在冰浴下滴入炔丙胺(lg，18.1mmol)，攪拌下逐漸升至室溫。反應(yīng)混合物用檸檬酸、碳酸氫鈉、飽和食鹽水洗，干燥，濃縮。柱層析純化(石油醚/乙酸乙酯，4:l)得白色固體2.0g(收率36%)。1H-NMR(DMS0-d6,ppm):S12.34(s,1H),8.88(d,1H),7.17(s，2H)，4.53(m,1H),4.42(s,2H),3.83(s，6H),3.71(s,3H),2.18(dt,2H),2.11(dt,2H);ESI-MS附/z[M+l]+381.3。5)N-((l-(3-溴代苯基)-l樂l，2，3-三唑-4-基)甲基)-2-(4-溴代苯基)喹啉-4-甲酰胺)(8)化合物7(1.5g，4.11mmo1)，化合物3(1.05g，4.93mmol)，0.16g抗壞血酸鈉(0.882mmol)以及CuS045H20(0.3mg，0.0441mmol)加入40mlLDMSO，反應(yīng)攪拌過夜。力口100mL水，乙酸乙酯萃取，有機相干燥，濃縮。柱層析純化(石油醚/乙酸乙酯，1:1)得白色固體粉末。(收率39%)ESI國MS:m/s576.5/578.6/580.5(M+l)'H-NMR(CD3OD):4.77(s，2H);5.65(s，2H);7.318.15(14H，m，ArH)ppm。6)4-((4-((2-(3-硼酸苯基)喹啉-4-甲酰胺基)甲萄-1樂1,2，3-三唑-1-萄甲基)苯基硼酸(9)氮氣保護下，化合物8(0.60g，1.04mmo1)，聯(lián)硼酸頻那醇酯(0.79g，3.12mmo1)，雙(二苯基膦)二茂鐵]二氯化鈀二氯甲垸絡(luò)合物(85mg，0.104mmo1)以及醋酸鉀(0.60g，6.14mmol)加入10mLDMSO，80。C下攪拌反應(yīng)過夜。反應(yīng)液用乙酸乙酯萃取，水洗，干燥濃縮后溶于THF/H20(4:1，10mL)，并加入高碘酸鈉(1.31g，6.14mmo1),室溫攪拌溶解后加入2NHCl(2mL)室溫攪拌過夜。反應(yīng)液用乙酸乙酯萃取(30mLX4)。有機相經(jīng)水洗，干燥，濃縮。柱層析純化(MeOH/CH2Cl2:1/10)得棕黃色粉末(收率38%)。ESI-MS:m/z508.4(M+l)IR(KBr,cm—1)vNH3385，i/"CH2923，/CH2854,vc=01649'H-NMR(CD3OD)S8.09-8.20(m,4H),8.09(s,1H),8.06(m,1H),7.79-7.84(m,3H),7.57-7.62(m,2H),7.39-7,41(m,2H),5.65(s，2H)，4.76(s,2H)。實施例2.熒光增敏實驗?zāi)繕嘶衔镌趌x10—5M濃度下溶于0.1M的磷酸鹽緩沖液(pP^7.4)。寡糖濃度溶于0.1M的磷酸鹽緩沖液(pH-7.4)，配制溶液濃度為10(iM。60|iL待測熒光探針分子溶液與40寡糖溶液混合。20分鐘后，取8(^L混合液轉(zhuǎn)入微量比色池，記錄熒光強度改變?？瞻讓φ战M(不加糖)以相同方法測定。3-((4-((2-(4-硼酸苯基)喹啉-4-甲酰胺基)甲基)-1//-1,2,3-三唑-l-基)甲基)苯基硼酸的實驗結(jié)果見圖1，圖2。實施例3.與糖結(jié)合常數(shù)測試目標化合物在0.1M磷酸鹽緩沖液(pH=7.40)中配成lx10—SM濃度溶液。同時用0.1M磷酸鹽緩沖液(pH=7.40)與測定的糖配成不同濃度溶液。將目標化合物的溶液與不同濃度的糖溶液等體積混合，靜置20分鐘后，記錄熒光強度(If)。通過(l/AIf)與(l/C-sugar)作圖，計算結(jié)合常數(shù)Ka。3-((4-((2-(4-硼酸苯基)喹啉-4-甲酰胺基)甲基)-1//-1,2,3-三唑-1-基)甲萄苯基硼酸的實驗結(jié)果見表一。表一目標化合物與各種糖的結(jié)合常數(shù)<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>權(quán)利要求1.式I的有機硼酸化合物，或其光學異構(gòu)體、非對映異構(gòu)體或消旋體混合物，其藥學上可接受的鹽或溶劑合物R1為天然氨基酸衍生物，C1-12的脂肪鏈氨基酸，芳香氨基酸，芳基烷基氨基酸，雜芳基氨基酸，雜芳基烷基胺，烷基二胺，芳基二胺，芳基烷基二胺，雜芳基二胺，氫；其中，芳基是指芳族碳環(huán)基團，優(yōu)選的芳環(huán)含有6-10個碳原子；雜芳基是芳族雜環(huán)，可以是單環(huán)或雙環(huán)基團；L為酰胺基或氨基?；?，亞甲基，氨基；PA為苯基硼酸，PBAQA，含有鹵素、硝基和/或氰基取代基的苯基硼酸，或含有鹵素、硝基和/或氰基取代基的PBAQA。2.如權(quán)利要求1所述的有機硼酸化合物，其特征在于，包括如下化合物3-((4-((2-(4-硼酸苯基)喹啉斗甲酰胺基)甲基)-1//-1,2,3-三唑-1-基)甲基)苯基硼酸4-((4-((2-(4-硼酸苯基)喹啉-4-甲酰胺基)甲基)-1//-1,2,3-三唑-1-基)甲基)苯基硼酸3-(2-(4-硼酸苯基)喹啉-4-甲酰胺基)苯基硼酸4-(2-(4-硼酸苯基)喹啉-4-甲酰胺基)苯基硼酸3-(2-(2-(4-硼酸苯基)喹啉-4-甲酰胺基)乙酰胺基)苯基硼酸4-(2-(2-(4-硼酸苯基)喹啉-4—甲酰胺基)乙酰胺基)苯基硼酸3-(6-(2-(4-硼酸苯基)喹啉-4-甲酰胺基)己酰氨基)苯基硼酸4-(6-(2-(4-硼酸苯基)喹啉-4-甲酰胺基)己酰氨基)苯基硼酸3_(3_(2_(4-硼酸苯基)喹啉-4-甲酰胺基)苯甲酰胺)苯基硼酸4-(3-(2-(4-硼酸苯基)喹啉-4-甲酰胺基)苯甲酰胺)苯基硼酸3-(l2-(2-(4-硼酸苯基)喹啉-4-甲酰胺基)十二酰胺基)苯基硼酸4,4'-(4,4'-(乙烷-1,2-二基二(氮垸二基》二(氧代甲撐)二贈啉-4,2-二基》二(4,l-次苯基)二硼酸4,4'-(4,4'-(己垸-1,2-二基二(氮垸二基))二(氧代甲撐)二峰啉-4,2-二基》二(4，1-次苯基)二硼酸3.權(quán)利要求l-2任一項有機硼酸化合物的應(yīng)用，該化合物作為熒光探針，用于腫瘤細胞表面特異性糖或其它糖的檢測試劑。4.如權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的表面特異性糖包括唾液酸化路易斯X，唾液酸化路易斯A，路易斯X，或路易斯Y。5.如權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的其它糖包括果糖，葡萄糖，半乳糖，阿拉伯糖或山梨醇。6.—種藥物組合物，包含(1)權(quán)利要求l-2任一項的硼酸化合物，和(2)—種或多種藥學上可接受載體或賦形劑。7.—種適于口服給予哺乳動物的藥物組合物，包含(1)權(quán)利要求1-2任一項的硼酸化合物，和(2)藥學上可接受載體，任選包含(3)—種或多種藥學上可接受的賦形劑。8.—種適于胃腸外給予哺乳動物的藥物組合物，包含(1)權(quán)利要求1-2任一項的硼酸化合物，和(2)藥學上可接受載體，任選包含(3)—種或多種藥學上可接受的賦形劑。全文摘要本發(fā)明涉及有機硼酸類化合物及其作為熒光探針的應(yīng)用。它具有通式(I)，該化合物對腫瘤細胞表面特異性寡糖唾液酸化LewisA和唾液酸化LewisX體現(xiàn)出顯著的選擇性，可用于該類腫瘤診斷試劑的開發(fā)。本發(fā)明還涉及該化合物藥學上可接受的鹽以及溶劑合物。本發(fā)明還涉及該化合物的藥物組合物及其制藥用途。文檔編號C07F5/02GK101289460SQ20081001674公開日2008年10月22日申請日期2008年6月6日優(yōu)先權(quán)日2008年6月6日發(fā)明者吳忠玉,浩方,王炳和申請人:山東大學