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一種rhTRAIL菌體的分離純化方法

文檔序號(hào):3477965閱讀:586來(lái)源:國(guó)知局
一種rhTRAIL菌體的分離純化方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種rhTRAIL菌體的分離純化方法,包含粗純工藝和精純工藝,粗純工藝為:將由重組DNA技術(shù)所得的rhTRAIL工程菌經(jīng)擴(kuò)大培養(yǎng)發(fā)酵所收集的菌體進(jìn)行高壓勻漿破碎、高速離心分離、微濾處理;精純工藝為:將上一步粗純工藝所得的粗純樣進(jìn)行離子層析、疏水層析、凝膠過濾層析、濃縮,最終得到符合質(zhì)量要求的樣品。本發(fā)明工作周期短,回收率高,生產(chǎn)成本較低,適合大規(guī)模工業(yè)生產(chǎn)。
【專利說明】—種rhTRAIL菌體的分離純化方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及生物制品的分離純化領(lǐng)域,具體涉及一種rhTRAIL菌體的分離純化方法。
【背景技術(shù)】
[0002]腫瘤壞死因子相關(guān)的凋亡誘導(dǎo)配體(TNF-related apoptosis-1nducing ligand,TRAIL)或稱凋亡素2配體(Apo2 ligand, Apo2L),是1995年發(fā)現(xiàn)的TNF家族新成員。無(wú)論在體內(nèi)還是體外,可溶形式TRAIL均可誘導(dǎo)多種腫瘤細(xì)胞發(fā)生凋亡。人全長(zhǎng)的TRAIL分子由281個(gè)氨基酸組成,屬II型跨膜蛋白,包括胞漿區(qū)、跨膜區(qū)和胞膜外區(qū),分子量為32.5kD,等電點(diǎn)為7.63。TRAIL分子在第114位~281位氨基酸為可溶性肽段,可通過一個(gè)鋅離子形成活性最強(qiáng)的同源三聚體結(jié)構(gòu)。TRAIL是通過與其細(xì)胞膜受體結(jié)合發(fā)揮其誘導(dǎo)凋亡作用的。目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的 TRAIL 受體有 5 種:TRAIL-R1 (DR4)、TRAIL_R2 (DR5)、TRAIL_R3 (DcRl)、TRAIL-R4 (DcR2)和護(hù)骨素(osteoprotegerin,0PG)。TRAIL與死亡受體結(jié)合可以激活線粒體依賴和非線粒體依賴兩條細(xì)胞凋亡信號(hào)途徑,介導(dǎo)死亡信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)入細(xì)胞內(nèi),啟動(dòng)效應(yīng)酶胱天蛋白酶3 (caspase-3),最終引起腫瘤細(xì)胞凋亡。與TNF家族其它成員相比,TRAIL具有可選擇性誘導(dǎo)多種腫瘤細(xì)胞凋亡,但對(duì)正常細(xì)胞毒副作用小的優(yōu)點(diǎn),被認(rèn)為是一種具有廣闊發(fā)展前景的抗腫瘤藥物,從2000年以來(lái),一直受到國(guó)內(nèi)許多研究者的廣泛關(guān)注。利用DNA重組技術(shù)和大腸桿菌表達(dá)體系經(jīng)下游純化得到的重組人腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體(rhTRAIL)成功的用于臨床研究,但為給后期的大量用藥和工業(yè)生產(chǎn)中提供保障,還需開發(fā)出一種適合rhTRAIL大規(guī)模生產(chǎn)的高純化效率的工藝。
[0003]原有的純化工藝雖然最后能得到的符合質(zhì)量要求的樣品,但是工作周期長(zhǎng),回收率低,生產(chǎn)成本過大的的原因,不太適合大規(guī)模工業(yè)生產(chǎn)的需求。`
【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]為解決上述技術(shù)問題,本發(fā)明的目的在于提供一種工作周期短,回收率高,生產(chǎn)成本較低,適合大規(guī)模工業(yè)生產(chǎn)的rhTRAIL菌體的分離純化方法。
[0005]本發(fā)明的一種rhTRAIL菌體的分離純化方法,包含粗純工藝和精純工藝:
[0006]所述粗純工藝為:將由重組DNA技術(shù)所得的rhTRAIL工程菌經(jīng)擴(kuò)大培養(yǎng)發(fā)酵所收集的菌體進(jìn)行高壓勻漿破碎、高速離心分離、微濾處理;
[0007]所述精純工藝為:將上一步所述粗純工藝所得的粗純樣進(jìn)行離子層析、疏水層析、凝膠過濾層析、濃縮得樣品。
[0008]進(jìn)一步地,
[0009]在所述粗純工藝中,
[0010]所述高壓勻漿破碎為:稱取一定量冷凍保藏的rhTRAIL菌體加入適量的BI液后用組織搗碎機(jī)搗碎均勻至沒有塊狀菌體,再一次加入適量的BI液使最終菌體濃度為10%,將搗碎均勻的菌體混懸液進(jìn)行1500bar的壓力破碎一次,收集勻漿破碎液并置于4_8°C冷藏備用;
[0011]所述高速離心分離為:將上述高壓勻漿破碎所得的勻漿破碎液進(jìn)行13000r離心30min,收集上清液并置于4-8°C冷藏備用;
[0012]所述微濾為:將上述高速離心分離所得的上清液進(jìn)行微濾處理,收集透膜微濾液并置于4-8°C冷藏備用,所收集的微濾液即為粗純樣;
[0013]在所述精純工藝中, [0014]所述離子層析為:UNOQ陰離子層析,先用0.5M/L NaOH以15ml/min處理UNOQ陰離子層析柱120min,再用B液以40ml/min處理柱子2個(gè)柱體積,然后用D液以40ml/min再生柱子I個(gè)柱體積,接著再用B液以40ml/min平衡柱子2個(gè)柱體積;柱子平衡完后,將上述微濾所得的粗純樣以40ml/min上樣UNOQ陰離子層析柱,再用B液以40ml/min淋洗柱子2.5個(gè)柱體積,最后用C液以40ml/min進(jìn)行洗脫,收集電導(dǎo)為8mS/cm的洗脫峰樣;
[0015]所述疏水層析為:Phenyl疏水層析,即先用0.5M/L NaOH以15ml/min處理Phenyl疏水層析柱120min,再用F液以40ml/min平衡疏水柱2個(gè)柱體積;柱子平衡完后,將上述離子層析收集的洗脫峰樣加入比例體積的G液后以40ml/min上樣疏水柱;用E液以40ml/min淋洗柱子2個(gè)柱體積,最后用E液以40ml/min —步洗脫,收集電導(dǎo)為150ms/cm的洗脫峰樣;
[0016]所述凝膠過濾層析為:Sepacryl S200層析,即先用0.5M/L NaOH以15ml/min處理S200層析柱120min,再用H液以40ml/min平衡柱子3個(gè)2.5個(gè)柱體積;柱子平衡完后,將上述疏水層析收集的洗脫峰樣以40ml/min上樣,最后用H液一步洗脫收集洗脫峰樣;
[0017]所述濃縮為:將上述凝膠過濾層析中收集的洗脫峰樣進(jìn)行超濾濃縮,濃縮10倍,收集濃縮樣置于4-8°C冷藏備用。
[0018]優(yōu)選地,
[0019]所述BI液為50mM/L Tris-HCl,pH8.5的緩沖液,使用前按菌體量加入0.1% DTT ;
[0020]所述B 液為 20mM/L Tris-HCl, pH8.5 的緩沖液;
[0021]所述C 液為 20mM/L Tris-HCl,80M NaCl,pH8.5 的緩沖液;
[0022]所述D 液為 20mM/L Tris-HCl, 2M NaCl,ρΗ8.5 的緩沖液;
[0023]所述E 液為 20mM/L Tris-HCl, 1.5M NaCl,ρΗ8.5 的緩沖液;
[0024]所述F 液為 20mM/L Tris-HCl, 3M NaCl,ρΗ8.5 的緩沖液;
[0025]所述G 液為 20mM/L Tris-HCl, 4M NaCl,ρΗ8.5 的緩沖液;
[0026]所述H 液為 10mM/L Na2HPO4、IOmM/L NaH2PO4、50mM/L NaCl、pH7.0 的緩沖液。
[0027]所述BI液、C液、D液、E液、F液、G液與H液用注射用水配制,配制完成用0.22um的濾膜進(jìn)行除菌過濾。
[0028]進(jìn)一步地,
[0029]在所述微濾中,
[0030]所述微濾處理為微濾膜系統(tǒng)處理,所述微濾膜系統(tǒng)在使用前經(jīng)0.5M/L NaOH以15ml/min 處理 2L, B 液以 300ml/min 平衡 2L ;
[0031]所述微濾膜系統(tǒng)中的微濾膜規(guī)格為0.45um,膜面積為0.1m2 ;
[0032]在所述離子層析中,
[0033]所述層析柱的規(guī)格為BPG100/500,柱體積為1.5L ;[0034]在所述疏水層析中,
[0035]所述層析柱的規(guī)格為BPG100/500,柱體積為2L ;
[0036]在所述濃縮中,
[0037]所述超濾濃縮為超濾膜系統(tǒng)濃縮,所述超濾膜系統(tǒng)在使用前經(jīng)0.5M/L NaOH以15ml/min 處理 120min, H 液以 200ml/min 平衡 2L ;
[0038]所述超濾膜系統(tǒng)中的超濾膜的規(guī)格為10KD,0.lm2。
[0039]進(jìn)一步地,
[0040]在所述微濾中,
[0041]所述微濾處理的進(jìn)樣流速為300ml/min ;
[0042]在所述濃縮中,
[0043]所述超濾濃縮的進(jìn)樣速度為200ml/min。
[0044]進(jìn)一步地,
[0045]在精純工藝中,
[0046]所述離子層析在GMP要求的C級(jí)潔凈區(qū)完成;
[0047]所述疏水層析在GMP要·求的C級(jí)潔凈區(qū)完成;
[0048]所述凝膠過濾層析在GMP要求的C級(jí)潔凈區(qū)完成;
[0049]所述濃縮在GMP要求的B級(jí)潔凈區(qū)完成。
[0050]本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)有:
[0051]1.本發(fā)明工藝縮短了工藝流程,每生產(chǎn)批次工作時(shí)間在原工藝基礎(chǔ)上縮短一半。
[0052]2.本發(fā)明工藝每批次生產(chǎn)量約為原工藝的1.5倍。
[0053]3.本發(fā)明工藝的回收率約為原工藝的2倍。
[0054]4.經(jīng)本工藝分離純化后,最終所得樣品經(jīng)PAGE-SDS(即十二烷基磺酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳)和HPLC (即高效液相色譜)分析出的純度>99.9%,生物學(xué)活性≤2.0X 104IU/mg,熱源檢驗(yàn)合格。
[0055]5.本發(fā)明簡(jiǎn)單的工藝流程,相對(duì)節(jié)約的生產(chǎn)成本,也方便工作人員的操作和維護(hù),可進(jìn)行有效的質(zhì)量控制,并且生產(chǎn)效率高,適于大規(guī)模的工藝生產(chǎn)。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0056]圖1為本發(fā)明工藝流程圖。
【具體實(shí)施方式】
[0057]在本發(fā)明中,為了縮短工作周期,提高回收率,降低生產(chǎn)成本,將粗純后的分離純化技術(shù)進(jìn)一步改進(jìn),縮短層析操作的步驟,如圖1所示,粗純之后是離子層析、疏水層析、凝膠過濾層析、濃縮,縮短為四步驟。
[0058]下面對(duì)此圖1所示的各個(gè)步驟通過本發(fā)明的具體實(shí)施例來(lái)進(jìn)一步闡述。
[0059]實(shí)施例
[0060]參見圖1,按下述步驟,將樣品rhTRAIL菌體進(jìn)行分離純化:
[0061]步驟1:粗純:
[0062]1.1高壓勻漿破碎:[0063]稱取一定量冷凍保藏的rhTRAIL菌體加入適量的BI液后用組織搗碎機(jī)搗碎均勻至沒有塊狀菌體,再一次加入適量的BI液使最終菌體濃度為10%,將搗碎均勻的菌體混懸液進(jìn)行1500bar的壓力破碎一次,收集勻漿破碎液并置于4_8°C冷藏備用。
[0064]所述BI液為50mM/L Tris-HCl,pH8.5的緩沖液,使用前已按菌體量加入了 0.1%DTT ;并用注射用水配制,配制完成用0.22um的濾膜進(jìn)行除菌過濾。
[0065]1.2高速離心分離
[0066]將步驟1.1中所得的勻漿破碎液進(jìn)行13000r離心30min,收集上清液并置于4-8 °C冷藏備用。
[0067]1.3 微濾
[0068]將步驟1.2中所得的上清液進(jìn)行微濾處理,收集透膜微濾液并置于4_8°C冷藏備用,所收集的微濾液即為粗純樣。
[0069]微濾處理中微濾膜系統(tǒng)在使用前經(jīng)0.5M/L NaOH以15ml/min處理2L,B液以300ml/min 平衡 2L ;所述 B 液為 20mM/L Tris-HCl, ρΗ8.5 的緩沖液。0.5M/L NaOH, B 液用注射用水配制。
[0070]微濾膜系統(tǒng)中用到的微濾膜規(guī)格為0.45um,膜面積為0.1m2 ;微濾處理進(jìn)樣流速為 300ml/min。
[0071]步驟2:離子層析
[0072]即UNOQ陰離子層析。先用0.5M/L NaOH以15ml/min處理UNOQ陰離子層析柱120min,再用B液以40ml/min處理柱子2個(gè)柱體積,然后用D液以40ml/min再生柱子I個(gè)柱體積,接著再用B液以40 ml/min平衡柱子2個(gè)柱體積。柱子平衡完后,將1.3中所得的粗純樣以40ml/mim上樣UNOQ陰離子層析柱,再用B液以40ml/min淋洗柱子2.5個(gè)柱體積,最后用C液以40ml/min進(jìn)行洗脫,收集電導(dǎo)為8mS/cm的洗脫峰樣。
[0073]所述B 液為 20mM/L Tris-HCl, ρΗ8.5 的緩沖液。
[0074]所述D 液為 20mM/L Tris-HCl, 2M NaCl,ρΗ8.5 的緩沖液。
[0075]所述C 液為 20mM/L:Tris-HCl,80M NaCl,ρΗ8.5 的緩沖液。
[0076]所述0.5M/L NaOH、B、C、D液用注射用水配制。其中B、C、D液配制完成用0.22um的濾膜進(jìn)行除菌過濾。
[0077]所述層析柱的規(guī)格為BPG100/500,柱體積為1.5L。
[0078]此離子層析工藝在GMP要求的C級(jí)潔凈區(qū)完成。
[0079]步驟3:疏水層析
[0080]即Phenyl疏水層析。先用0.5M/L NaOH以15ml/min處理Phenyl疏水層析柱120min,再用F液以40ml/min平衡疏水柱2個(gè)柱體積。柱子平衡完后,將步驟2中收集的洗脫峰樣液加入G液稀釋,使樣液最后所舍NaCl濃度與F液中NaCl濃度一致,然后以40ml/min上樣疏水柱。用E液以40ml/min淋洗柱子2個(gè)柱體積,最后用E液以40ml/min —步洗脫,收集電導(dǎo)為150ms/cm的洗脫峰樣。
[0081]所述F 液為 20mM/L Tris-HCl, 3M NaCl,pH8.5 的緩沖液。
[0082]所述G 液為 20mM/L Tris-HCl, 4M NaCl,ρΗ8.5 的緩沖液。
[0083]所述E 液為 20mM/L Tris-HCl, 1.5M NaCl,ρΗ8.5 的緩沖液。
[0084]所述0.5M/L NaOH、F、G、E液用注射用水配制。其中F、G、E液配制完成用0.22um的濾膜進(jìn)行除菌過濾。
[0085]所述層析柱的規(guī)格為BPG100/500,柱體積為2L。
[0086]此疏水層析工藝在GMP要求的C級(jí)潔凈區(qū)完成。
[0087]步驟4:凝膠過濾層析
[0088]即S印acryl S200 層析。先用 0.5M/L NaOH 以 15ml/min 處理 S200 層析柱 120min,再用H液以40ml/min平衡柱子3個(gè)2.5個(gè)柱體積。柱子平衡完后,將步驟3中收集的洗脫峰樣以40ml/min上樣,最后用H液一步洗脫收集洗脫峰樣。
[0089]所述H 液為 10mM/L Na2HP04、10mM/L NaH2P04、50mM/L NaCl、pH7.0 的緩沖液。
[0090]所述0.5M/L NaOH、H液用注射用水配制。其中H液配制完成用0.22um的濾膜進(jìn)行除菌過濾。
[0091]所述層析柱的規(guī)格為BPG100/500,柱體積為4L。
[0092]此凝膠過濾層析工藝在GMP要求的C級(jí)潔凈區(qū)完成。
[0093]步驟5:濃縮
[0094]將步驟4中收集的洗脫峰樣進(jìn)行超濾濃縮,濃縮10倍,收集濃縮樣置于4_8°C冷藏備用。
[0095]所述超濾濃縮為超濾膜系統(tǒng)濃縮,超濾膜系統(tǒng)在使用前經(jīng)0.5M/L NaOH以15ml/min 處理 120min,H 液以 200ml/min 平衡 2L ;所述 H 液為 10mM/L Na2HP04、10mM/L NaH2P04、50mM/L NaCl、pH7.0的緩沖液,0`.5M/L NaOH、H液用注射用水配制。其中H液配制完成用
0.22um的濾膜進(jìn)行除菌過濾。
[0096]超濾膜系統(tǒng)中的超濾膜的規(guī)格為10KD,0.1m2.[0097]超濾濃縮的進(jìn)樣速度為200ml/min.[0098]此濃縮工藝在GMP要求的B級(jí)潔凈區(qū)完成。
[0099]最后,將經(jīng)步驟5得到的樣品經(jīng)PAGE-SDS (即十二烷基磺酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳)和HPLC (即高效液相色譜)測(cè)試:
[0100]分析出的生物活性為2.5X104IU/mg
[0101]分析出的純度為99.95%。
[0102]上述所述的是本發(fā)明優(yōu)選的實(shí)施例,但不是對(duì)本發(fā)明的限定,對(duì)于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員根據(jù)本
【發(fā)明內(nèi)容】
所作的一些非本質(zhì)的改進(jìn)與調(diào)整,也視為落在本發(fā)明的保護(hù)范圍內(nèi)。
【權(quán)利要求】
1.一種rhTRAIL菌體的分離純化方法,其特征在于,包含粗純工藝和精純工藝: 所述粗純工藝為:將由重組DNA技術(shù)所得的rhTRAIL工程菌經(jīng)擴(kuò)大培養(yǎng)發(fā)酵所收集的菌體進(jìn)行高壓勻漿破碎、高速離心分離、微濾處理; 所述精純工藝為:將上一步所述粗純工藝所得的粗純樣進(jìn)行離子層析、疏水層析、凝膠過濾層析、濃縮得樣品。
2.如權(quán)利要求1所述的一種rhTRAIL菌體的分離純化方法,其特征在于, 在所述粗純工藝中,所述高壓勻漿破碎為:稱取一定量冷凍保藏的rhTRAIL菌體加入適量的BI液后用組織搗碎機(jī)搗碎均勻至沒有塊狀菌體,再一次加入適量的BI液使最終菌體濃度為10%,將搗碎均勻的菌體混懸液進(jìn)行1500bar的壓力破碎一次,收集勻漿破碎液并置于4_8°C冷藏備用;所述高速離心分離為:將上述高壓勻漿破碎所得的勻漿破碎液進(jìn)行13000r離心30min,收集上清液并置于4-8°C冷藏備用; 所述微濾為:將上述高速離心分離所得的上清液進(jìn)行微濾處理,收集透膜微濾液并置于4-8°C冷藏備用,所收集的微濾液即為粗純樣; 在所述精純工藝中, 所述離子層析為=UNOQ陰離子層析,先用0.5M/L NaOH以15ml/min處理UNOQ陰離子層析柱120min,再用B液以40ml/min處理柱子2個(gè)柱體積,然后用D液以40ml/min再生柱子I個(gè)柱體積,接著再用B液以40ml/min平衡柱子2個(gè)柱體積;柱子平衡完后,將上述微濾所得的粗純樣以40ml/min 上樣UNOQ陰離子層析柱,再用B液以40ml/min淋洗柱子2.5個(gè)柱體積,最后用C液以40ml/min進(jìn)行洗脫,收集電導(dǎo)為8mS/cm的洗脫峰樣; 所述疏水層析為=Phenyl疏水層析,即先用0.5M/L NaOH以15ml/min處理Phenyl疏水層析柱120min,再用F液以40ml/min平衡疏水柱2個(gè)柱體積;柱子平衡完后,將上述離子層析收集的洗脫峰樣加入比例體積的G液后以40ml/min上樣疏水柱;用E液以40ml/min淋洗柱子2個(gè)柱體積,最后用E液以40ml/min —步洗脫,收集電導(dǎo)為150ms/cm的洗脫峰樣;所述凝膠過濾層析為:S^acryl S200層析,即先用0.5M/L NaOH以15ml/min處理S200層析柱120min,再用H液以40ml/min平衡柱子3個(gè)柱體積;柱子平衡完后,將上述疏水層析收集的洗脫峰樣以40ml/min上樣,最后用H液一步洗脫收集洗脫峰樣; 所述濃縮為:將上述凝膠過濾層析中收集的洗脫峰樣進(jìn)行超濾濃縮,濃縮10倍,收集濃縮樣置于4-8°C冷藏備用。
3.如權(quán)利要求2所述的一種rhTRAIL菌體的分離純化方法,其特征在于, 所述BI液為50mM/L Tris-HCl, pH8.5的緩沖液,使用前按菌體量加入0.1 % DTT ; 所述B液為20mM/L Tris-HCl,ρΗ8.5的緩沖液; 所述 C 液為 20mM/L Tris-HCl,80M NaCl, ρΗ8.5 的緩沖液; 所述 D 液為 20mM/L Tris-HCl, 2M NaCl,ρΗ8.5 的緩沖液; 所述 E 液為 20mM/L Tris-HCl, 1.5M NaCl,ρΗ8.5 的緩沖液; 所述 F 液為 20mM/L Tris-HCl, 3M NaCl,ρΗ8.5 的緩沖液; 所述 G 液為 20mM/L Tris-HCl,4M NaCl,ρΗ8.5 的緩沖液; 所述 H 液為 10mM/L Na2HPO4UOmM/L NaH2PO4、50mM/L NaCl、pH7.0 的緩沖液。
4.如權(quán)利要求3所述的一種rhTRAIL菌體的分離純化方法,其特征在于,所述BI液、C液、D液、E液、F液、G液與H液用注射用水配制,配制完成用0.22um的濾膜進(jìn)行除菌過濾。
5.如權(quán)利要求4所述的一種rhTRAIL菌體的分離純化方法,其特征在于, 在所述微濾中, 所述微濾處理為微濾膜系統(tǒng)處理,所述微濾膜系統(tǒng)在使用前經(jīng)0.5M/L NaOH以15ml/min 處理 2L, B 液以 300ml/min 平衡 2L ; 所述微濾膜系統(tǒng)中的微濾膜規(guī)格為0.45um,膜面積為0.1m2 ; 在所述離子層析中,
所述層析柱的規(guī)格為BPG100/500,柱體積為1.5L ; 在所述疏水層析中, 所述層析柱的規(guī)格為BPG100/500,柱體積為2L ; 在所述凝膠過濾層析中, 所述層析柱的規(guī)格為BPG100/500,柱體積為4L ; 在所述濃縮中, 所述超濾濃縮為超濾膜系統(tǒng)濃縮,所述超濾膜系統(tǒng)在使用前經(jīng)0.5M/L NaOH以15ml/min 處理 120min, H 液以 200ml/min 平衡 2L ; 所述超濾膜系統(tǒng)中的超濾膜的規(guī)格為10KD,0.lm2。
6.如權(quán)利要求5所述的一種rhTRAIL菌體的分離純化方法,其特征在于, 在所述微濾中, 所述微濾處理的進(jìn)樣流速為300ml/min ; 在所述濃縮中, 所述超濾濃縮的進(jìn)樣速度為200ml/min。
7.如權(quán)利要求6所述的一種rhTRAIL菌體的分離純化方法,其特征在于, 在精純工藝中, 所述離子層析在GMP要求的C級(jí)潔凈區(qū)完成; 所述疏水層析在GMP要求的C級(jí)潔凈區(qū)完成; 所述凝膠過濾層析在GMP要求的C級(jí)潔凈區(qū)完成; 所述濃縮在GMP要求的B級(jí)潔凈區(qū)完成。
【文檔編號(hào)】C07K1/34GK103588871SQ201210291064
【公開日】2014年2月19日 申請(qǐng)日期:2012年8月16日 優(yōu)先權(quán)日:2012年8月16日
【發(fā)明者】王軍, 張靜, 李靖文 申請(qǐng)人:深圳新鵬生物工程有限公司
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