專利名稱：一種枸杞多糖的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物制品和化學(xué)工程技術(shù)，特別涉及一種從枸杞中提取枸杞多糖的方法。
背景技術(shù)：
枸杞(Lycium chinense Mill.)既是常用的中藥材，又是保健食品，醫(yī)食同源。枸杞的別名很多，又叫貢果、血杞子、枸杞豆，產(chǎn)地稱為“紅果子”、“明目子”等。它是匣科落葉灌木植物枸杞的成熟果實，落葉灌木，因栽培經(jīng)人工整枝而形成具有樹冠的直立灌木，單主干莖粗直徑10-20cm，株高1.5m左右，冠徑1.6m左右，葉互生或簇生，披針形或長橢圓狀披針形，花冠漏斗狀，紫堇色，果實為漿果，紅色，形似紡錘，更似紅瑪瑙墜。歷史上是皇室貢品，素有“紅寶”美稱，富含植物多糖、蛋白質(zhì)、維生素等營養(yǎng)成分。枸杞的主要功效為滋補肝腎，益精明目；用于虛癆精虧、腰膝酸痛；眩暈耳鳴、內(nèi)熱肖渴、血虛萎黃，目昏不明。歷代養(yǎng)生家、醫(yī)學(xué)家都很看重枸杞的補養(yǎng)功效。早在《神農(nóng)本草經(jīng)》中就指出久服堅筋骨；《名醫(yī)別錄》謂枸杞擅長“補益精氣”；《食療本草》也記載枸杞“能益人，去虛勞”。枸杞在滋補肝腎、益精明目方面的功效不僅為歷代醫(yī)家和食療學(xué)家所推崇?，F(xiàn)代藥理研究證明，枸杞所含主要成份枸杞多糖(Lycium chinense polysaccharide，簡稱LBP)是枸杞中最重要的功效成分，是一種水溶性多糖，已明確該多糖系蛋白多糖，分子量為22～25kD，是由六種乙碳單糖ARA、CLC、GAL、MAN、XYL和RHA組成的多糖側(cè)鏈和十八種氨基酸組成的蛋白質(zhì)主鏈構(gòu)成。枸杞多糖是枸杞子調(diào)節(jié)免疫、延緩衰老的主要活性成分，能提高人的免疫功能，促進(jìn)機體產(chǎn)生NK-殺傷細(xì)胞，并提高其活性，通過提高機體免疫功能可以間接起到抗病毒作用，對均衡神經(jīng)一內(nèi)分泌一免疫網(wǎng)絡(luò)有著重要作用，能直接作用于人體的下丘腦一垂體，促進(jìn)代謝功能、內(nèi)分泌功能和生殖功能的調(diào)節(jié)，其對惡性腫瘤、艾滋病的預(yù)防與治療也能起到積極作用，另外其可改善老年人易疲勞、食欲不振和視力模糊等癥狀，并具有降血脂、抗脂肪肝、抗腫瘤、抗衰老等作用。
經(jīng)過專利檢索，發(fā)現(xiàn)專利“申請?zhí)?00510046785.7發(fā)酵法提取枸杞多糖”，該發(fā)明公開了一種應(yīng)用生物工程技術(shù)提取加工枸杞多糖的方法，是利用安琪酵母生長過程中消耗單糖、雙糖、含氮物質(zhì)的手段來提高枸杞多糖的純度，整個工藝過程包括粉碎，浸泡，有氧發(fā)酵，過濾，脫色，除雜，真空蒸餾。該方法，采用發(fā)酵工藝，生產(chǎn)過程中易出現(xiàn)發(fā)酵不完全，雜質(zhì)多等問題。專利“申請?zhí)?2115382.5一種枸杞多糖及其制備方法和應(yīng)用”，公開了枸杞多糖的制備方法以中藥枸杞為原料，加入8～20倍50～100℃的熱水，用高速剪切機剪切10～40分鐘，壓榨，取壓榨出的汁高速離心，離心液用截留分子量為5～10萬的超濾膜過濾，超濾液再用截留分子量為3000～10000的超濾膜濃縮，冷凍干燥，即得。該方法，采用膜分離，生產(chǎn)中收率低。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種利用現(xiàn)代生物方法提取枸杞多糖的技術(shù)，來達(dá)到提高枸杞多糖純度、減少工業(yè)廢物排放、縮短生產(chǎn)過程，降低生產(chǎn)成本的目的。
本發(fā)明解決其技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案是提供一種枸杞多糖的提取加工方法，具體提取加工步驟為1、原料的選擇及前處理選用新鮮枸杞或枸杞干果，清水洗滌多次以去除雜質(zhì)，洗滌時間以30秒至1分鐘為宜；2、浸泡枸杞與純凈水的體積比為1∶3-5的比例常溫浸泡，枸杞干果浸泡時間以6～8小時為宜，新鮮枸杞可適當(dāng)縮短至2～3小時；
3、破碎將浸泡后的枸杞和浸泡液一起注入粉碎機進(jìn)行破碎；4、提取按枸杞破碎液與純凈水的體積比為1∶1-2的比例添加純凈水后提取，提取溫度為80-100℃，壓力為60-80KPa，提取時間為1-2小時；收集提取液，殘渣重新以10倍劑量純水提取2次；5、酶解合并提取液，按0.05-0.5g/L的量加入果膠酶，于50-60℃保溫酶解2-3小時，加熱提取液至沸騰，終止酶解反應(yīng)；6、濃縮提取液過濾后離心，合并上清液，殘渣以純凈水洗滌后過濾，將濾液和離心后的上清液合并，進(jìn)行減壓濃縮；7、柱層析將濃縮后的溶液通過柱層析樹脂柱，用相當(dāng)于進(jìn)柱液體體積3-5倍的純凈水清洗樹脂，以去除溶液中的色素，當(dāng)流出液變淺黃時，開始收集流出液，當(dāng)流出液顏色由淺黃變淺紅再變淺，當(dāng)流出液顏色接近無色時，停止洗脫，樹脂柱再用75％以上濃度的乙醇清洗處理，洗去吸附的色素等物質(zhì)；8、醇沉濃縮洗脫液，往濃縮液中加入95％以上濃度的乙醇，加入醇的劑量一般為濃縮洗脫液體積的5～7倍，調(diào)整溶液醇濃度達(dá)80％以上，然后，于2-10℃靜置4～8小時充分沉淀；9、脫醇過濾，收集沉淀，用95％濃度乙醇洗滌沉淀2～3次，以純凈水溶解沉淀后減壓濃縮，至25～30婆美度浸膏；10、干燥將浸膏進(jìn)行冷凍干燥，粉碎后得到枸杞多糖粉末。
本發(fā)明，步驟1中枸杞與純凈水的體積比最佳為1∶4；步驟2中，枸杞干果浸泡最佳時間為7小時、新鮮枸杞浸泡最佳時間為2小時，時間過短會影響浸出率，浸泡時間過長會影響生產(chǎn)周期或容易染菌；步驟4中，最佳提取溫度為90℃、壓力為70KPa，溫度過高、壓力過大會破壞枸杞中的活性物質(zhì)；步驟5中，果膠酶的適宜用量為0.1-0.2g/L；步驟7中，柱層析樹脂選自型號為D101型、D201型、DA201型、AB-8型的大孔吸附樹脂、型號為HP20SS或SP20SS的小粒度合成吸附樹脂；步驟8中，靜置時最佳溫度為4℃，溫度過高不利于沉淀，溫度過低則增加能耗。
本發(fā)明的制備方法得到的枸杞多糖為金黃色、味微甜或無味、顆粒細(xì)小的粉末，其中枸杞多糖的含量為40％以上。
本發(fā)明提取加工方法與現(xiàn)有的技術(shù)相比具有如下優(yōu)點●反應(yīng)過程簡單目前國內(nèi)應(yīng)用的乙醇沉淀提取法步驟煩雜，僅無水乙醇洗滌一項就需洗滌數(shù)次，本發(fā)明結(jié)合柱層析技術(shù)，減少了乙醇沉淀法的步驟；●原料消耗減少，乙醇沉淀提取法大量消耗無水乙醇，對提取原料是一種無形的浪費；●生產(chǎn)工藝簡單、生產(chǎn)周期短、工藝過程利于控制，避免了發(fā)酵法的微生物發(fā)酵不完全、膜分離的收率低等缺陷。
具體實施例方式
實施例11、原料的選擇及前處理選用新鮮枸杞適量，清水洗滌多次以去除雜質(zhì)，洗滌時間以30秒至1分鐘為宜；2、浸泡按枸杞與純凈水的體積比為1∶3的比例常溫浸泡，新鮮枸杞可適當(dāng)縮短至3小時；3、破碎將浸泡后的枸杞和浸泡液一起注入粉碎機進(jìn)行破碎；4、提取按枸杞破碎液與純凈水的體積比為1∶1的比例添加純凈水后提取，提取溫度為80℃，壓力為60KPa，提取時間為1小時；收集提取液，殘渣重新以10倍劑量純水提取2次；5、酶解合并提取液，按0.05g/L的量加入果膠酶，于50-60℃保溫酶解2-3小時，加熱提取液至沸騰，終止酶解反應(yīng)；6、濃縮提取液過濾后離心，合并上清液，殘渣以純凈水洗滌后過濾，將濾液和離心后的上清液合并，進(jìn)行減壓濃縮；7、柱層析將濃縮后的溶液通過柱層析，型號為D201樹脂柱，用相當(dāng)于進(jìn)柱液體體積3-5倍的純凈水清洗樹脂，以去除溶液中的色素，當(dāng)流出液變淺黃時，開始收集流出液，當(dāng)流出液顏色由淺黃變淺紅再變淺，當(dāng)流出液顏色接近無色時，停止洗脫，樹脂柱再用75％以上濃度的乙醇清洗處理，洗去吸附的色素等物質(zhì)；8、醇沉濃縮洗脫液，往濃縮液中加入95％以上濃度的乙醇，加入醇的劑量一般為濃縮洗脫液體積的5～7倍，調(diào)整溶液醇濃度達(dá)80％以上，然后，于2℃靜置4小時充分沉淀；9、脫醇過濾，收集沉淀，用95％濃度乙醇洗滌沉淀2～3次，以純凈水溶解沉淀后減壓濃縮，至25～30婆美度浸膏；10、干燥將浸膏進(jìn)行冷凍干燥，粉碎后得到枸杞多糖粉末。
實施例21、原料的選擇及前處理選用枸杞干果適量，清水洗滌多次以去除雜質(zhì)，洗滌時間以30秒至1分鐘為宜；2、浸泡按枸杞與純凈水的體積比為1∶4的比例常溫浸泡，新鮮枸杞可適當(dāng)縮短至7小時；3、破碎將浸泡后的枸杞和浸泡液一起注入粉碎機進(jìn)行破碎；4、提取按枸杞破碎液與純凈水的體積比為1∶2的比例添加純凈水后提取，提取溫度為90℃，壓力為70KPa，提取時間為1小時；收集提取液，殘渣重新以10倍劑量純水提取2次；5、酶解合并提取液，按0.2g/L的量加入果膠酶，于50-60℃保溫酶解2-3小時，加熱提取液至沸騰，終止酶解反應(yīng)；6、濃縮提取液過濾后離心，合并上清液，殘渣以純凈水洗滌后過濾，將濾液和離心后的上清液合并，進(jìn)行減壓濃縮；7、柱層析將濃縮后的溶液通過柱層析，型號為D101樹脂柱，用相當(dāng)于進(jìn)柱液體體積3-5倍的純凈水清洗樹脂，以去除溶液中的色素，當(dāng)流出液變淺黃時，開始收集流出液，當(dāng)流出液顏色由淺黃變淺紅再變淺，當(dāng)流出液顏色接近無色時，停止洗脫，樹脂柱再用75％以上濃度的乙醇清洗處理，洗去吸附的色素等物質(zhì)；8、醇沉濃縮洗脫液，往濃縮液中加入95％以上濃度的乙醇，加入醇的劑量一般為濃縮洗脫液體積的5～7倍，調(diào)整溶液醇濃度達(dá)80％以上，然后，于4℃靜置6小時充分沉淀；9、脫醇過濾，收集沉淀，用95％濃度乙醇洗滌沉淀2～3次，以純凈水溶解沉淀后減壓濃縮，至25～30婆美度浸膏；10、干燥將浸膏進(jìn)行冷凍干燥，粉碎后得到枸杞多糖粉末。
實施例31、原料的選擇及前處理選用枸杞干果適量，清水洗滌多次以去除雜質(zhì)，洗滌時間以30秒至1分鐘為宜；2、浸泡按枸杞與純凈水的體積比為1∶5的比例常溫浸泡，新鮮枸杞可適當(dāng)縮短至8小時；3、破碎將浸泡后的枸杞和浸泡液一起注入粉碎機進(jìn)行破碎；4、提取按枸杞破碎液與純凈水的體積比為1∶2的比例添加純凈水后提取，提取溫度為100℃，壓力為80KPa，提取時間為1小時；收集提取液，殘渣重新以10倍劑量純水提取2次；5、酶解合并提取液，按0.5g/L的量加入果膠酶，于50-60℃保溫酶解2-3小時，加熱提取液至沸騰，終止酶解反應(yīng)；6、濃縮提取液過濾后離心，合并上清液，殘渣以純凈水洗滌后過濾，將濾液和離心后的上清液合并，進(jìn)行減壓濃縮；7、柱層析將濃縮后的溶液通過柱層析，型號為HP20SS的小粒度合成吸附柱，用相當(dāng)于進(jìn)柱液體體積3-5倍的純凈水清洗樹脂，以去除溶液中的色素，當(dāng)流出液變淺黃時，開始收集流出液，當(dāng)流出液顏色由淺黃變淺紅再變淺，當(dāng)流出液顏色接近無色時，停止洗脫，樹脂柱再用75％以上濃度的乙醇清洗處理，洗去吸附的色素等物質(zhì)；8、醇沉濃縮洗脫液，往濃縮液中加入95％以上濃度的乙醇，加入醇的劑量一般為濃縮洗脫液體積的5～7倍，調(diào)整溶液醇濃度達(dá)80％以上，然后，于10℃靜置8小時充分沉淀；9、脫醇過濾，收集沉淀，用95％濃度乙醇洗滌沉淀2～3次，以純凈水溶解沉淀后減壓濃縮，至25～30婆美度浸膏；10、干燥將浸膏進(jìn)行冷凍干燥，粉碎后得到枸杞多糖粉末。
權(quán)利要求
1.一種枸杞多糖的制備方法，其特征在于從枸杞子中提取枸杞多糖，具體步驟為1)、原料的選擇及前處理選用新鮮枸杞或枸杞干果，清水洗滌多次以去除雜質(zhì)，洗滌時間以30秒至1分鐘為宜；2)、浸泡按枸杞與純凈水的體積比為1∶3-5的比例常溫浸泡，枸杞干果浸泡時間以6～8小時為宜，新鮮枸杞可適當(dāng)縮短至2～3小時；3)、破碎將浸泡后的枸杞和浸泡液一起注入粉碎機進(jìn)行破碎；4)、提取按枸杞破碎液與純凈水的體積比為1∶1-2的比例添加純凈水后提取，提取溫度為80-100℃，壓力為60-80KPa，提取時間為1-2小時；收集提取液，殘渣重新以10倍劑量純水提取2次；5)、酶解合并提取液，按0.05-0.5g/L的量加入果膠酶，于50-60℃保溫酶解2-3小時，加熱提取液至沸騰，終止酶解反應(yīng)；6)、濃縮提取液過濾后離心，合并上清液，殘渣以純凈水洗滌后過濾，將濾液和離心后的上清液合并，進(jìn)行減壓濃縮；7)、柱層析將濃縮后的溶液通過柱層析樹脂柱，用相當(dāng)于進(jìn)柱液體體積3-5倍的純凈水清洗樹脂，以去除溶液中的色素，當(dāng)流出液變淺黃時，開始收集流出液，當(dāng)流出液顏色由淺黃變淺紅再變淺，當(dāng)流出液顏色接近無色時，停止洗脫，樹脂柱再用75％以上濃度的乙醇清洗處理，洗去吸附的色素等物質(zhì)；8)、醇沉濃縮洗脫液，往濃縮液中加入95％以上濃度的乙醇，加入醇的劑量一般為濃縮洗脫液體積的5～7倍，調(diào)整溶液醇濃度達(dá)80％以上，然后，于2-10℃靜置4～8小時充分沉淀；9)、脫醇過濾，收集沉淀，用95％濃度乙醇洗滌沉淀2～3次，以純凈水溶解沉淀后減壓濃縮，至25～30婆美度浸膏；10)、干燥將浸膏進(jìn)行冷凍干燥，粉碎后得到枸杞多糖粉末。
2.如權(quán)利1所述的一種枸杞多糖的制備方法，其特征在于步驟1)中枸杞與純凈水的體積比最佳為1∶4。
3.如權(quán)利1所述的一種枸杞多糖的制備方法，其特征在于步驟2)中，構(gòu)杞干果浸泡最佳時間為7小時、新鮮枸杞浸泡最佳時間為2小時。
4.如權(quán)利1所述的一種枸杞多糖的制備方法，其特征在于步驟4)中，最佳提取溫度為90℃、壓力為70KPa。
5.如權(quán)利1所述的一種枸杞多糖的制備方法，其特征在于步驟5)中，果膠酶的適宜用量為0.1-0.2g/L。
6.如權(quán)利1所述的一種枸杞多糖的制備方法，其特征在于步驟7)中，柱層析樹脂選自型號為D101型、D201型、DA201型、AB-8型的大孔吸附樹脂、型號為HP20SS或SP20SS的小粒度合成吸附樹脂。
7.如權(quán)利1所述的一種枸杞多糖的制備方法，其特征在于步驟8)中，靜置時最佳溫度為4℃。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種枸杞多糖的制備方法，是利用枸杞干\鮮果為原料，利用柱層析來提高枸杞多糖的純度，整個工藝過程包括浸泡、破碎、提取、酶解、柱層析、醇沉、脫醇、干燥等步驟，工藝簡單、生產(chǎn)周期短、工藝過程利于控制、原料消耗少、生產(chǎn)成本低。
文檔編號C08B37/00GK101029088SQ200710090210
公開日2007年9月5日 申請日期2007年4月13日 優(yōu)先權(quán)日2007年4月13日
發(fā)明者孫步祥, 湯凌志, 易永基, 唐淑萍, 王智慧 申請人:桂林萊茵生物科技股份有限公司