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卡介菌多糖核酸制備過(guò)程中透析新工藝的制作方法

文檔序號(hào):3648132閱讀:613來(lái)源:國(guó)知局

專利名稱::卡介菌多糖核酸制備過(guò)程中透析新工藝的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域
:本發(fā)明涉及卡介菌多糖核酸原粉制備過(guò)程中透析新工藝,特別涉及到將卡介菌提取液中苯酚去除,采用中空纖維透析器透析除酚。
背景技術(shù)
:卡介菌多糖核酸(BCGPolysaccharideandNucleic)具有調(diào)節(jié)人體的免疫功能、主要用于預(yù)防和治療慢性支氣管炎、感冒、哮喘?,F(xiàn)有的卡介菌多糖核酸原粉制備全過(guò)程是培養(yǎng)基制備、接種、培養(yǎng)、收菌、破菌、提取、透析、精制和制備干粉。其中透析除酚這道工序,直接關(guān)系到原粉的質(zhì)量以及對(duì)員工的勞動(dòng)保護(hù),是至關(guān)重要的。目前國(guó)內(nèi)生產(chǎn)廠家一般采用這種經(jīng)典的、原始的透析袋方法透析?,F(xiàn)有的卡介菌多糖核酸原粉制備過(guò)程中透析袋方法是將破菌后的提取液灌入透析袋內(nèi),扎緊袋口,放入裝有純化水的容器內(nèi),進(jìn)行靜置透析,透析途中需定時(shí)換純化水,直至透析外液即純化水中用三氯化鐵定性測(cè)定苯酚,測(cè)不出苯酚即透析完畢,透析時(shí)間大約需要72小時(shí)。然后再進(jìn)入下一步工序,最后制得卡介菌多糖核酸原粉。更重要是由于透析袋法操作,手工灌袋近距離接觸苯酚,人體皮膚易受傷害,而透析柱法不必人員直接操作,這樣就避免了人體受傷害的可能。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明提供了卡介菌多糖核酸原粉制備過(guò)程中透析新工藝,采用中空纖維透析柱進(jìn)行透析,將提取液中苯酚去除,獲得卡介菌菌體內(nèi)的多糖和核酸。卡介菌多糖核酸原料提取過(guò)程是培養(yǎng)基制備一接種一培養(yǎng)一收菌一破菌一離心一透析一醇沉一精制干燥一制備原粉??ń榫嗵呛怂嵩壑苽溥^(guò)程中透析新工藝為透析的具體操作步驟是透析器有內(nèi)液與外液兩個(gè)通道,需要透析的液體是走內(nèi)液通道,能去除雜質(zhì)的純化水是走外液通道,內(nèi)通道的流向必須是由下而上,而外通道的流向是由上而下。首先取離心上清液,集中倒入一容器內(nèi),該容器內(nèi)液體必須高于透析器的高度,這樣可以利用位差將液體通過(guò)透析柱時(shí)能自下而上逆流而出,采用調(diào)節(jié)閥來(lái)控制流速,以每分鐘20毫升恒定流量。同時(shí)開(kāi)啟透析柱外液通道,將純化水接入,自上而下流出,每分鐘流量控制在600800毫升左右,內(nèi)液與外液流速比為1:3040,外液流速的調(diào)節(jié)是根據(jù)內(nèi)液流出不含苯酚為準(zhǔn)。測(cè)定方法取2毫升透析內(nèi)液,加一滴10%三氯化鐵試液搖勻,透析液不得出現(xiàn)紫色反應(yīng),說(shuō)明不含苯酚。然后收集不含有苯酚的流出液。一批料透析時(shí)間約為4小時(shí),透析完畢,制備的透析液進(jìn)入下一道工序,最后制得卡介菌多糖核酸原粉。本發(fā)明由于改變了透析方式,即采用中空纖維透析柱透析,在不增加任何賦形劑,且透析的原理未改變的情況下,最后制備的原粉中酚殘留和雜蛋白明顯減少,從而使質(zhì)量3提高并完全符合檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn),工作時(shí)間從72小時(shí)縮短至4小時(shí),操作工從3人減至為1人,同時(shí)改善了員工的勞動(dòng)保護(hù),生產(chǎn)成本也下降。然而我公司現(xiàn)有的制備工藝,將提取液直接通過(guò)中空纖維透析柱,自下而上逆流透析,1分鐘后流出的透析內(nèi)液即不含苯酚了,整批提取液通過(guò)透析柱透析時(shí)間只需4小時(shí)左右。根據(jù)用高效液相法定量測(cè)定殘留苯酚,獲得數(shù)據(jù)分析,透析袋比透析柱法液體中酚殘留多4-5倍,由此可見(jiàn)用透析柱法得到的原粉質(zhì)量更好,生產(chǎn)時(shí)間大幅度縮短,成本下降。實(shí)施例1將6公斤菌體加40升純化水破菌,再加40升苯酚萃取,最后可獲得提取液25升。然后把提取液倒入不銹鋼容器內(nèi),再把不銹鋼桶放到高位槽上,利用位差將提取液接入透析柱的內(nèi)管下口,液體自下而上逆流而出,用三氯化鐵測(cè)定透析內(nèi)液的結(jié)果來(lái)控制流速,同時(shí)純化水進(jìn)入透析柱外管上口,自上而下流出,帶走提取液中的苯酚。整個(gè)透析時(shí)間為4小時(shí),透析完畢,制備的透析液進(jìn)入下一道工序,最后制得卡介菌多糖核酸原粉。比較實(shí)施例1取6公斤菌體加40升純化水破菌,再加40升苯酚萃取,最后可獲得提取液25升。然后將提取液用手工方法灌入透析袋內(nèi)并扎緊袋口,每支透析袋可裝500毫升左右,大約可灌50支透析袋,最后把透析袋放入裝有純化水的透析池內(nèi),進(jìn)行靜置透析,透析中途定時(shí)換棄純化水,直至透析袋外液即純化水中用三氯化鐵定性測(cè)定,測(cè)不出苯酚,大約需要換水10次左右,整個(gè)透析時(shí)間約72小時(shí)。然后再進(jìn)入下一步工序,最后制得卡介菌多糖核酸原粉。由于人工近距離操作,難免含有苯酚的液體直接侵蝕人體皮膚,氣體剌激人的呼吸系統(tǒng),導(dǎo)致接觸液體的皮膚腐蝕變白,并有頭疼、口麻、惡心等癥狀。新老工藝對(duì)比<table>tableseeoriginaldocumentpage4</column></row><table>2008年5月對(duì)不同透析設(shè)備的驗(yàn)證數(shù)據(jù)<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>從表中可以看出采用中空纖維透析柱法與透析袋法相比較,無(wú)論從質(zhì)量、人力、物力、生產(chǎn)時(shí)間、勞動(dòng)保護(hù)等方面來(lái)說(shuō)透析柱確確實(shí)實(shí)是優(yōu)勝的。本發(fā)明方法可提高卡介菌多糖核酸原粉的質(zhì)量,縮短了整個(gè)生產(chǎn)周期,節(jié)約了生產(chǎn)力,降低了生產(chǎn)總成本。雖然以上具體描述了本發(fā)明某些實(shí)施方案和實(shí)施例,但本領(lǐng)域所屬技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解,在不脫離本發(fā)明基本精神和范圍的前提下可對(duì)本發(fā)明實(shí)施方案進(jìn)行各種修改和替換,而這些修改和替換均應(yīng)包括在本發(fā)明的等同范圍內(nèi)。權(quán)利要求卡介菌多糖核酸原粉制備過(guò)程中透析新工藝,其特征在于透析的具體操作步驟是透析器有內(nèi)液與外液兩個(gè)通道,需要透析的液體是走內(nèi)液通道,能去除雜質(zhì)的純化水是走外液通道,內(nèi)通道的流向必須是由下而上,而外通道的流向是由上而下;首先取離心上清液,集中倒入一容器內(nèi),該容器內(nèi)液體必須高于透析器的高度,這樣可以利用位差將液體通過(guò)透析柱時(shí)能自下而上逆流而出,采用調(diào)節(jié)閥來(lái)控制流速,以每分鐘20毫升恒定流量;同時(shí)開(kāi)啟透析柱外液通道,將純化水接入,自上而下流出,每分鐘流量控制在600~800毫升左右,內(nèi)液與外液流速比為1∶30~40,外液流速的調(diào)節(jié)是根據(jù)內(nèi)液流出不含苯酚為準(zhǔn)。全文摘要本發(fā)明卡介菌多糖核酸原粉制備過(guò)程中透析新工藝,其特征在于透析的具體操作步驟是透析器有內(nèi)液與外液兩個(gè)通道,需要透析的液體是走內(nèi)液通道,能去除雜質(zhì)的純化水是走外液通道,內(nèi)通道的流向必須是由下而上,而外通道的流向是由上而下;首先取離心上清液,集中倒入一容器內(nèi),該容器內(nèi)液體必須高于透析器的高度,這樣可以利用位差將液體通過(guò)透析柱時(shí)能自下而上逆流而出,采用調(diào)節(jié)閥來(lái)控制流速,以每分鐘20毫升恒定流量。同時(shí)開(kāi)啟透析柱外液通道,將純化水接入,自上而下流出,每分鐘流量控制在600~800毫升左右,內(nèi)液與外液流速比為1∶30~40,外液流速的調(diào)節(jié)是根據(jù)內(nèi)液流出不含苯酚為準(zhǔn)。文檔編號(hào)C08B37/00GK101712725SQ200910152978公開(kāi)日2010年5月26日申請(qǐng)日期2009年9月24日優(yōu)先權(quán)日2009年9月24日發(fā)明者李革芳,江克光,蔣瑞紅,閻曉文申請(qǐng)人:浙江萬(wàn)馬藥業(yè)有限公司
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