本發(fā)明屬于多糖制備技術(shù)及應(yīng)用領(lǐng)域，具體涉及從荔枝草中提取兩種均一多糖及其在制藥、食品領(lǐng)域具有潛在的應(yīng)用價值。

背景技術(shù)：

1、荔枝草(salvia?plebeia?r.br.)又名癩疙寶草、蛤蟆草、癩子草等，一年或二年生直立草本植物，為唇形科植物荔枝草的新鮮或干燥全草。作為中藥始載于《本草綱目》，性涼、味辛，具有清熱解毒、涼血散瘀、消腫利尿等功效，可用于治療呼吸道炎癥、咽喉腫痛、腎炎水腫、小兒驚風(fēng)、痔瘡等疾病。在我國既有野生分布，也有人工栽培，遍布于多個省份，資源豐富，價格低廉，是一種極具價值的藥食同源中藥材。

2、植物多糖因其具有特殊的理化性質(zhì)和較高功效而備受關(guān)注，目前已被廣泛應(yīng)用于食品、藥品等領(lǐng)域。研究表明荔枝草中主要含有苯丙素類、揮發(fā)油類、萜類、黃酮類、多糖類等成分，但目前對于荔枝草的研究多集中于小分子化合物的研究，因此，開展對荔枝草多糖的提取、純化、結(jié)構(gòu)表征及其在食品、藥品研究開發(fā)等領(lǐng)域具有廣闊的開發(fā)前景。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的在于提供兩種荔枝草均一多糖t-spp-c1和t-spp-c2及兩種荔枝草均一多糖的制備方法和用途。

2、將荔枝草全草粉碎成粉末，經(jīng)提取、濃縮、除色、除蛋白質(zhì)、透析、冷凍干燥制得荔枝草粗多糖t-spp，將荔枝草粗多糖t-spp純化分離制得荔枝草純化多糖t-spp-c1和t-spp-c2。

3、具體的制備方法如下：

4、(1)取干燥后的荔枝草全草進行粉碎，過篩，得到荔枝草干粉；

5、(2)在通風(fēng)處使用石油醚進行脫脂處理，抽濾，烘干，得到脫脂后的荔枝草粉末；

6、(3)脫脂后的荔枝草粉末與蒸餾水混合，超聲提取，將濾液濃縮得到多糖粗提液；

7、(4)采用三相分離技術(shù)對多糖粗提液進行脫色、脫蛋白，具體的向多糖粗提液中加入一定量的硫酸銨，攪拌溶解后，按照多糖粗提液與叔丁醇一定體積比加入叔丁醇，恒溫水浴一定時間，離心后形成三相，即上層為有機相，中間層為分離的蛋白質(zhì)相，下層為水相；

8、(5)將下層水相使用透析袋在蒸餾水中透析，濃縮、冷凍干燥后即得荔枝草粗多糖；

9、(6)將荔枝草粗多糖配制成一定濃度后，上樣于deae-52色譜柱中，使用0.3mol/l的nacl溶液進行洗脫，得到多糖洗脫組分t-spp-c；

10、(7)將多糖洗脫組分t-spp-c經(jīng)sephadex?g-100柱色譜分離純化，得到兩個洗脫峰；將兩個洗脫峰的洗脫液進行收集，經(jīng)濃縮、透析、冷凍干燥后，得到荔枝草均一多糖t-spp-c1和荔枝草均一多糖t-spp-c2；

11、荔枝草均一多糖t-spp-c1和荔枝草均一多糖t-spp-c2通過高效液相排阻色譜法測得其分子量分別為107.208kda和10.125kda，均是由阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖、半乳糖醛酸、葡萄糖醛酸、鼠李糖、核糖和甘露糖組成的酸性多糖，其摩爾比分別為1.00:1.91:0.24:0.05:0.12:0.14:0.03:0.15和1.00:1.78:0.26:0.33:0.16:0.46:0.04:0.18。

12、進一步的，所述步驟(2)中石油醚脫脂時間為10-14h，重復(fù)次數(shù)為2-3次。

13、進一步的，所述步驟中(3)中荔枝草粉末與蒸餾水料液比1:30(g/ml)，超聲提取的參數(shù)為超聲提取的參數(shù)為150-200w,20-40khz下處理25-35min，提取4次。

14、進一步的，所述步驟中(4)中硫酸銨質(zhì)量濃度為0.1-0.5g/ml，多糖粗提液與叔丁醇體積比為1-2:1-2(v/v)，水浴溫度為30-40℃，水浴時間為40min。進一步的，所述步驟中(6)中荔枝草粗多糖濃度為20mg/ml。

15、通過對羥基自由基、dpph自由基的清除能力以及亞鐵離子的螯合能力，來評價兩種荔枝草均一多糖的體外抗氧化活性，兩種荔枝草多糖具有較強的抗氧化活性；通過對金黃色葡萄球菌(staphylococcus?aureus)、肺炎克雷伯菌(klebsiella?pneumoniae)、枯草芽孢桿菌(bacillus?subtilis)和大腸桿菌(escherichia?coli)的抑菌圈直徑大小，來評價其體外抑菌活性，兩種荔枝草多糖對金黃色葡萄球菌具有一定的抑制作用；通過對α-葡萄糖苷酶抑制能力和促益生菌增殖能力進行分析，兩種多糖均具有良好的α-葡萄糖苷酶抑制能力和促益生菌增殖能力。因此，能夠廣泛應(yīng)用于食品及藥品行業(yè)，具有良好的開發(fā)前景。

16、本發(fā)明所達到的有益效果是：本發(fā)明的荔枝草均一多糖制備步驟簡單，采用新興技術(shù)三相分離技術(shù)進行脫色、脫蛋白，避免了傳統(tǒng)脫色方法如活性炭法、過氧化氫法及大孔樹脂法操作繁瑣等問題，以及常用的脫蛋白方法-sevag法中所使用有機試劑對人體有害并污染環(huán)境等問題。兩種均一純化多糖純度較高，且具有較強的抗氧化活性、抑菌活性及良好的α-葡萄糖苷酶抑制能力和促益生菌增殖能力。本發(fā)明提供的荔枝草均一多糖制備工藝綠色、高效、環(huán)保，得到的荔枝草均一多糖具有制備多種功能性食品和藥品的應(yīng)用潛質(zhì)。

技術(shù)特征：

1.荔枝草均一多糖的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的荔枝草均一多糖的制備方法，其特征在于，步驟(6)中使用0.3mol/l的nacl溶液進行洗脫；步驟(7)中荔枝草均一多糖t-spp-c1和荔枝草均一多糖t-spp-c2的分子量分別為107.208kda和10.125kda，均是由阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖、半乳糖醛酸、葡萄糖醛酸、鼠李糖、核糖和甘露糖組成的酸性多糖，其摩爾比分別為1.00:1.91:0.24:0.05:0.12:0.14:0.03:0.15和1.00:1.78:0.26:0.33:0.16:0.46:0.04:0.18。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的荔枝草均一多糖的制備方法，其特征在于，步驟(2)中石油醚脫脂時間為10-14h，重復(fù)次數(shù)為2-3次。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的荔枝草均一多糖的制備方法，其特征在于，步驟(3)中荔枝草粉末與蒸餾水料液比1:30(g/ml)，超聲提取的參數(shù)為150-200w,20-30khz下處理25-35min，提取4次。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的荔枝草均一多糖的制備方法，其特征在于，步驟中(4)中硫酸銨質(zhì)量濃度為0.1-0.5g/ml，多糖粗提液與叔丁醇體積比為1-2:1-2(v/v)，水浴溫度為30-40℃，水浴時間為40min。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的荔枝草均一多糖的制備方法，其特征在于，步驟中(6)中荔枝草粗多糖濃度為20mg/ml。

7.荔枝草均一多糖t-spp-c1和/或荔枝草均一多糖t-spp-c2，其特征在于，采用權(quán)利要求1-6任一項所述的方法制備得到。

8.荔枝草均一多糖t-spp-c1和/或荔枝草均一多糖t-spp-c2在制藥和/或功能性食品領(lǐng)域中的用途。

9.如權(quán)利要求8所述的用途，其特征在于，利用荔枝草均一多糖t-spp-c1和/或荔枝草均一多糖t-spp-c2的抗氧化活性、促益生菌增殖能力、α-葡萄糖苷酶抑制能力和/或抑菌活性來制藥和/或用于功能性食品。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明屬于多糖制備技術(shù)及應(yīng)用領(lǐng)域，具體涉及荔枝草多糖的制備方法及其應(yīng)用，它包括以下制備步驟：石油醚對荔枝草粉末進行脫脂后，采用超聲輔助法提取多糖得到荔枝草多糖粗提液，通過三相分離技術(shù)對荔枝草多糖粗提液進行脫色、脫蛋白，經(jīng)濃縮、透析、冷凍干燥后獲得荔枝草粗多糖。采用DEAE?52纖維素柱層析和Sephadex?G?100葡聚糖凝膠柱層析對荔枝草粗多糖進行分離純化，獲得兩種純化均一多糖組分，對兩種多糖進行活性測定，顯示兩種多糖均具有良好的抗氧化活性、抑菌活性、α?葡萄糖苷酶抑制能力和促益生菌增殖能力，具有多種潛在應(yīng)用功能。

技術(shù)研發(fā)人員：張海燕,李超,張宏林,董薇,周叢叢,劉蘭,張澎湃,王道杰
受保護的技術(shù)使用者：河南大學(xué)
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/10/21