本發(fā)明涉及一種用于診斷心肌衰老的標(biāo)志物，具體地說(shuō)是一種circrna標(biāo)志物，同時(shí)也涉及檢測(cè)該circrna標(biāo)志物的試劑盒及其應(yīng)用，屬于醫(yī)學(xué)分子診斷領(lǐng)域。

背景技術(shù)：

1、心血管疾?。ê?jiǎn)寫(xiě)為cvds）是全球范圍內(nèi)導(dǎo)致發(fā)病率和死亡率最高的疾病之一。隨著醫(yī)學(xué)的進(jìn)步，盡管在疾病預(yù)防、診斷標(biāo)記物和治療方面取得了顯著成就，但心血管疾病的威脅依然嚴(yán)峻。特別是在人口老齡化的背景下，心肌衰老及其引發(fā)的心血管疾病成為了研究的熱點(diǎn)。心肌衰老不僅影響心臟功能，還與多種心血管疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。因此，深入探究心肌衰老的分子機(jī)制、尋找有效的診斷標(biāo)記物和治療靶點(diǎn)，對(duì)于提高相關(guān)疾病的診治能力至關(guān)重要。

2、環(huán)狀rna（circrnas）是一種特殊的非編碼rna，由桑格（sanger）在1976年首次發(fā)現(xiàn)。近年來(lái)，研究表明circrnas在心血管疾病中扮演著重要角色，它們通過(guò)與mirna和mrna相互作用，影響基因表達(dá)，從而參與到動(dòng)脈粥樣硬化、冠狀動(dòng)脈疾病、心肌梗死等多種心血管疾病的病理過(guò)程中。circrnas具有穩(wěn)定性和保守性，以及特定的時(shí)空表達(dá)模式，使其成為潛在的心血管疾病生物標(biāo)志物和治療靶點(diǎn)。與傳統(tǒng)線性rna相比，circrnas的環(huán)狀結(jié)構(gòu)使其更加穩(wěn)定，不易被降解。隨著檢測(cè)技術(shù)的進(jìn)步，circrnas的檢測(cè)變得更加可行，這為它們?cè)谛募∷ダ霞跋嚓P(guān)心血管疾病的診斷和治療中的應(yīng)用提供了可能。因此，研究circrnas在心肌衰老中的作用機(jī)制，開(kāi)發(fā)基于circrnas的診斷工具，對(duì)于提高心肌衰老相關(guān)疾病的診治能力具有重要意義。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明所要解決的首要技術(shù)問(wèn)題在于提供一種新的circrna標(biāo)志物的應(yīng)用。該circrna標(biāo)志物不僅可以用于制備診斷、篩查、病情評(píng)估及區(qū)分心肌衰老與其他心臟疾病的物質(zhì)，還可以成為治療心肌衰老相關(guān)疾病的新靶點(diǎn)。

2、本發(fā)明所要解決的另一技術(shù)問(wèn)題在于提供一種檢測(cè)該circrna標(biāo)志物的試劑盒。該試劑盒可以用于診斷、篩查、評(píng)估及區(qū)分心肌衰老與其他心臟疾病。

3、本發(fā)明所要解決的第三個(gè)技術(shù)問(wèn)題在于提供一種檢測(cè)該circrna標(biāo)志物的引物。該引物可以用于診斷、篩查、預(yù)后評(píng)估及區(qū)分心肌衰老與其他心臟疾病。

4、為實(shí)現(xiàn)上述技術(shù)目的，本發(fā)明采用以下的技術(shù)方案：

5、根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例的第一方面，提供一種檢測(cè)circrna標(biāo)志物的物質(zhì)的應(yīng)用，包括下述應(yīng)用中的一種或多種：

6、a1）在制備診斷心肌衰老產(chǎn)品中的應(yīng)用；

7、a2）在制備篩查心肌衰老產(chǎn)品中的應(yīng)用；

8、a3）在制備治療心肌衰老產(chǎn)品中的應(yīng)用；

9、a4）在制備心肌衰老病情評(píng)估產(chǎn)品中的應(yīng)用；

10、a5）在制備區(qū)分心肌衰老與其他心臟疾病產(chǎn)品中的應(yīng)用；

11、所述circrna標(biāo)志物為hsa_circ_0120829，核苷酸序列如seq?id?no.1所示。

12、所述“產(chǎn)品”可以為通過(guò)rt-pcr、實(shí)時(shí)定量pcr、原位雜交、芯片或高通量測(cè)序平臺(tái)檢測(cè)hsa_circ_0120829表達(dá)水平以診斷心肌衰老的產(chǎn)品。

13、上述應(yīng)用中，hsa_circ_0120829在心肌衰老病人的血漿樣本中表達(dá)顯著上調(diào)；健康人群的hsa_circ_0120829表達(dá)水平顯著低于心肌衰老病人。

14、其中較優(yōu)地，所述物質(zhì)為用于檢測(cè)hsa_circ_0120829表達(dá)量，或特異性識(shí)別hsa_circ_0120829的試劑，或用于檢測(cè)hsa_circ_0120829含量的試劑。

15、其中較優(yōu)地，所述物質(zhì)為用于檢測(cè)hsa_circ_0120829的物質(zhì)，具體為下述a）、b）或c）：

16、a）用于檢測(cè)或特異性識(shí)別hsa_circ_0120829的引物；

17、b）含有所述a）的試劑組；

18、c）含有所述a）或所述b）的試劑盒。

19、其中較優(yōu)地，所述引物為seq?id?no.2所示的上游引物和seq?id?no.3所示的下游引物。

20、根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例的第二方面，提供一種檢測(cè)circrna標(biāo)志物的試劑盒，所述試劑盒包括下述應(yīng)用中的一種或多種：

21、a1）在制備診斷心肌衰老產(chǎn)品中的應(yīng)用；

22、a2）在制備篩查心肌衰老產(chǎn)品中的應(yīng)用；

23、a3）在制備治療心肌衰老產(chǎn)品中的應(yīng)用；

24、a4）在制備心肌衰老病情評(píng)估產(chǎn)品中的應(yīng)用；

25、a5）在制備區(qū)分心肌衰老與其他心臟疾病產(chǎn)品中的應(yīng)用；

26、所述circrna標(biāo)志物為hsa_circ_0120829，核苷酸序列如seq?id?no.1所示；所述試劑盒包括用于檢測(cè)或特異性識(shí)別hsa_circ_0120829的試劑，或用于檢測(cè)hsa_circ_0120829表達(dá)量的試劑。

27、利用本發(fā)明所提供的試劑盒，可以檢測(cè)受檢者外周血中seq?id?no.1所示hsa_circ_0120829特征基因序列的表達(dá)情況，然后根據(jù)這些基因表達(dá)上調(diào)或下調(diào)的信息判別受檢者心肌衰老的概率或病情嚴(yán)重情況，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)心肌衰老的診斷和/或篩查等。

28、本發(fā)明所提供的所有試劑盒可包含適當(dāng)?shù)陌b和說(shuō)明書(shū)，用于在本發(fā)明所公開(kāi)的方法中使用。其中較優(yōu)地，本發(fā)明所提供的檢測(cè)試劑盒為核酸檢測(cè)試劑盒，包括rna提取及實(shí)時(shí)熒光定量pcr（qrt-pcr）所需試劑。該試劑盒還可進(jìn)一步包含適當(dāng)?shù)木彌_液和聚合酶，也可以包含對(duì)照引物和/或探針。

29、其中較優(yōu)地，所述用于檢測(cè)或特異性識(shí)別hsa_circ_0120829的試劑為特異性引物，所述特異性引物為seq?id?no.2所示的上游引物和seq?id?no.3所示的下游引物。

30、根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例的第三方面，提供一種用于檢測(cè)circrna標(biāo)志物的引物，所述引物包括下述應(yīng)用中的一種或多種：

31、a1）在制備診斷心肌衰老產(chǎn)品中的應(yīng)用；

32、a2）在制備篩查心肌衰老產(chǎn)品中的應(yīng)用；

33、a3）在制備治療心肌衰老產(chǎn)品中的應(yīng)用；

34、a4）在制備心肌衰老病情評(píng)估產(chǎn)品中的應(yīng)用；

35、a5）在制備區(qū)分心肌衰老與其他心臟疾病產(chǎn)品中的應(yīng)用；

36、所述引物為檢測(cè)hsa_circ_0120829表達(dá)量或特異性識(shí)別hsa_circ_0120829的引物。

37、其中較優(yōu)地，所述引物為seq?id?no.2所示的上游引物和seq?id?no.3所示的下游引物。

38、與現(xiàn)有技術(shù)相比較，本發(fā)明具有以下的技術(shù)效果：

39、（1）本發(fā)明揭示了一種特定的環(huán)狀rna，即hsa_circ_0120829，它在心肌衰老的診斷中具有重要價(jià)值。在臨床驗(yàn)證試驗(yàn)中，發(fā)現(xiàn)心肌衰老患者的血漿中hsa_circ_0120829的含量顯著高于健康對(duì)照組，這一發(fā)現(xiàn)表明hsa_circ_0120829可以作為一種潛在的生物標(biāo)志物，用于心肌衰老的診斷和篩查，同時(shí)也有助于區(qū)分心肌衰老與其他心臟疾病。

40、（2）進(jìn)一步的診斷效能評(píng)估通過(guò)roc曲線分析顯示，hsa_circ_0120829在診斷心肌衰老方面表現(xiàn)出了高靈敏度和高特異性。這意味著hsa_circ_0120829不僅能夠準(zhǔn)確地識(shí)別出心肌衰老的患者，而且還能減少誤診的可能性，從而證實(shí)了其在臨床診斷中的有效性和可靠性。

41、（3）此外，研究還發(fā)現(xiàn)心肌細(xì)胞衰老的標(biāo)志物半乳糖苷酶與hsa_circ_0120829的表達(dá)水平之間存在正相關(guān)關(guān)系。這一相關(guān)性進(jìn)一步證實(shí)了hsa_circ_0120829與心肌細(xì)胞衰老過(guò)程的密切聯(lián)系，并且強(qiáng)調(diào)了其在心肌衰老診斷中的潛在應(yīng)用價(jià)值。因此，hsa_circ_0120829不僅在診斷心肌衰老方面具有重要的臨床意義，而且其與細(xì)胞衰老標(biāo)志物的相關(guān)性也為其作為心肌衰老生物標(biāo)志物的診斷效能提供了有力的支持。

42、（4）在臨床實(shí)驗(yàn)中，觀察到人血漿中的bnp（b型利鈉肽）與hsa_circ_0120829的表達(dá)量之間存在正相關(guān)關(guān)系。bnp是一種在心室壁受到擴(kuò)張或牽拉時(shí)由心臟合成的肽類激素，它能夠反映心臟的代償功能，并作為評(píng)估心功能和診斷心力衰竭的重要生物標(biāo)志物。由于心力衰竭與心肌衰老密切相關(guān)，bnp的水平通常也被用來(lái)反映心肌衰老的情況。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示，hsa_circ_0120829在血漿中的水平與bnp水平正相關(guān)，這意味著hsa_circ_0120829的水平可以作為評(píng)估心肌衰老嚴(yán)重程度的一個(gè)指標(biāo)。因此，hsa_circ_0120829不僅可能成為心肌衰老的診斷生物標(biāo)志物，還有助于評(píng)估病情的嚴(yán)重性，為臨床治療提供指導(dǎo)。

43、（5）在體外細(xì)胞學(xué)驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)中，通過(guò)d-半乳糖（d-gal）處理ac16心肌細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)hsa_circ_0120829（一種環(huán)狀rna）的表達(dá)量相較于正常對(duì)照細(xì)胞顯著升高，這表明hsa_circ_0120829在心肌細(xì)胞老化過(guò)程中表達(dá)增加。這一發(fā)現(xiàn)為hsa_circ_0120829作為心肌衰老的潛在診斷生物標(biāo)志物提供了細(xì)胞分子學(xué)依據(jù)。此外，實(shí)驗(yàn)中通過(guò)敲減（即降低表達(dá)水平）hsa_circ_0120829相關(guān)的小rna，觀察到細(xì)胞衰老現(xiàn)象得到了緩解，這進(jìn)一步支持了hsa_circ_0120829不僅可作為心肌衰老的生物標(biāo)志物，還有可能成為治療心肌衰老的新靶點(diǎn)。