一種提取蟲(chóng)草中氨基酸的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及提取冬蟲(chóng)夏草中氨基酸的方法。更具體地說(shuō)，本發(fā)明涉及用柱層層析發(fā)提取氨基酸的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]冬蟲(chóng)夏草是我國(guó)的一種名貴中藥材，屬于藥用真菌，是寄生于昆蟲(chóng)體上的真菌與其寄生昆蟲(chóng)形成的蟲(chóng)菌復(fù)合體，隸屬于子囊菌綱、麥角菌科和蟲(chóng)草屬。在近年的研宄表明，冬蟲(chóng)夏草具有鎮(zhèn)靜、抑菌、抑制癌癥、增強(qiáng)機(jī)體免疫功能等多方面的藥理作用。
[0003]冬蟲(chóng)夏草具有多種有效成分，這些有效成分具有廣泛的藥理作用。蟲(chóng)草多糖可以增強(qiáng)免疫力，抗腫瘤及降血糖作用；D-甘露醇；脂肪和脂肪酸，目前發(fā)現(xiàn)有12種脂肪酸；抗菌活性成分；生物堿，其含量較少，包含蟲(chóng)草素、尿嘧啶、胸腺嘧啶、腺嘌呤等13種，具有抗腫瘤、抗菌抗病毒、免疫調(diào)節(jié)和清除自由基等多種藥理作用；微量元素，具有30多種微量元素；其他成分，包括一些酶、維生素和抗生素成分；蛋白和氨基酸，其含有天門冬、絲、蘇、谷、脯、甘、頡、蛋、異亮、亮、苯丙、絡(luò)、賴、胱、半胱、精和色氨酸18種氨基酸，其中8種為人體必須氨基酸，以谷氨酸、精氨酸及絡(luò)氨酸為主要有效成分，其含量在20-30%之間，與蟲(chóng)草具有補(bǔ)虧虛、輔助治療消化系統(tǒng)及增強(qiáng)免疫功能等作用有必然的聯(lián)系，從蟲(chóng)草中將氨基酸提取出來(lái)用于醫(yī)學(xué)研宄或者保健品研發(fā)。
[0004]專利申請(qǐng)?zhí)?01310535298.1公布了一種冬蟲(chóng)夏草精華物質(zhì)的提取方法，其經(jīng)過(guò)預(yù)處理、純水萃取、萃取液精密分離、萃取液微孔膜過(guò)濾、反滲透膜濃縮、減壓濃縮和干燥共7步提取凈化物質(zhì)，提取的精華物含量為50-70%。此方法工藝較復(fù)雜不利于工業(yè)應(yīng)用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]作為各種廣泛且細(xì)致的研宄和實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，本發(fā)明的發(fā)明人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)一種提取蟲(chóng)草中氨基酸的方法，將提取工藝簡(jiǎn)化為3步，和并在柱層層析分離步驟中采用丙酮和乙酸乙酯混合溶液作為解吸劑分離氨基酸和脂肪類物質(zhì)，省略去除脂肪類物質(zhì)這一步驟。基于這種發(fā)現(xiàn)，完成了本發(fā)明。
[0006]本發(fā)明的一個(gè)目的是解決至少上述問(wèn)題，并提供至少后面將說(shuō)明的優(yōu)點(diǎn)。
[0007]為了實(shí)現(xiàn)根據(jù)本發(fā)明的這些目的和其它優(yōu)點(diǎn)，提供了一種提取蟲(chóng)草中氨基酸的方法，包括以下步驟:
[0008]步驟1:將冬蟲(chóng)夏草粉碎成100目，蟲(chóng)草放入錐形瓶中，錐形瓶置于震蕩儀中用35-65°C水提取3次，每次水提過(guò)程蟲(chóng)草與水的質(zhì)量比為1: 3?5 ;
[0009]步驟2:水提后的冬蟲(chóng)夏草烘干放入錐形瓶，錐形瓶置于震蕩儀中用溶劑提取3?8次，收集上清液，精餾除掉上清液中溶劑，每次醇提取過(guò)程蟲(chóng)草與醇的質(zhì)量比為1:1?4 ；
[0010]步驟3:用吸管吸取濃縮液，吸管沿層析柱內(nèi)壁緩緩加入濃縮液，待樣品進(jìn)柱后，用丙酮濃度為I?6%的乙酸乙酯溶液沖洗，分別收集層析柱底的各層流出液。
[0011]優(yōu)選的是，其中，所述步驟I的水溫優(yōu)選為50°C。
[0012]優(yōu)選的是，其中，所述步驟I中每次水提過(guò)程蟲(chóng)草與水的質(zhì)量比優(yōu)選為1: 3.5。
[0013]優(yōu)選的是，其中，所述步驟2提取次數(shù)為5次。
[0014]優(yōu)選的是，其中，所述步驟2中溶劑優(yōu)選為乙醇、甲醇、乙二醇、丙三醇中的一種或幾種。
[0015]優(yōu)選的是，其中，所述步驟2中每次醇提取過(guò)程蟲(chóng)草與醇的質(zhì)量比優(yōu)選為1: 2.3。
[0016]優(yōu)選的是，其中，所述步驟3中層析柱中的吸附劑優(yōu)選為硅膠。
[0017]優(yōu)選的是，其中，所述硅膠目數(shù)優(yōu)選為80目。
[0018]本發(fā)明至少包括以下有益效果:本發(fā)明采用溶劑提取和柱層層析結(jié)合的工藝方式提取蟲(chóng)草中氨基酸，將提取工藝簡(jiǎn)化為3步，并在柱層層析分離步驟中采用丙酮和乙酸乙酯混合溶液作為解吸劑分離氨基酸和脂肪類物質(zhì)，分離效果好且解吸劑沸點(diǎn)低易于后續(xù)氨基酸的濃縮。
【具體實(shí)施方式】
[0019]下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明，以令本領(lǐng)域技術(shù)人員參照說(shuō)明書(shū)文字能夠據(jù)以實(shí)施。
[0020]應(yīng)當(dāng)理解，本文所使用的諸如“具有”、“包含”以及“包括”術(shù)語(yǔ)并不配出一個(gè)或多個(gè)其它元件或其組合的存在或添加。
[0021]〈實(shí)例1>
[0022]冬蟲(chóng)夏草的前處理:冬蟲(chóng)夏草經(jīng)洗滌、除雜后，晾曬至干燥。
[0023]步驟1:將2g冬蟲(chóng)夏草粉碎成100目，50ml錐形瓶中加入50°C水7g和蟲(chóng)草，錐形瓶置于震蕩儀中提取10分鐘，重復(fù)實(shí)驗(yàn)3次，收集3次實(shí)驗(yàn)的水溶液。
[0024]步驟2:水提后的冬蟲(chóng)夏草烘干放入50ml錐形瓶，之后加入4.6g乙醇；錐形瓶置于震蕩儀中提取10分鐘，重復(fù)實(shí)驗(yàn)5次，收集上清液；常壓精餾除掉上清液中乙醇。
[0025]步驟3:用吸管吸取步驟2所得濃縮液，吸管沿層析柱內(nèi)壁緩緩加入濃縮液，待樣品進(jìn)柱后，用丙酮濃度I %的乙酸乙酯溶液沖洗，觀察到層析柱內(nèi)分成2層層析帶，分別用試管分別收集2層層析帶的流出液，用色譜測(cè)試2流出液提純物發(fā)現(xiàn)，層析帶中氨基酸與脂肪類未分離。
[0026]< 實(shí)例 2>
[0027]冬蟲(chóng)夏草的前處理:冬蟲(chóng)夏草經(jīng)洗滌、除雜后，晾曬至干燥。
[0028]步驟1:將2g冬蟲(chóng)夏草粉碎成100目，50ml錐形瓶中加入50°C水7g和蟲(chóng)草，錐形瓶置于震蕩儀中提取10分鐘，重復(fù)實(shí)驗(yàn)3次，收集3次實(shí)驗(yàn)的水溶液。
[0029]步驟2:水提后的冬蟲(chóng)夏草烘干放入50ml錐形瓶，之后加入4.6g乙醇；錐形瓶置于震蕩儀中提取10分鐘，重復(fù)實(shí)驗(yàn)5次，收集上清液；常壓精餾除掉上清液中乙醇。
[0030]步驟3:用吸管吸取步驟2所得濃縮液，吸管沿層析柱內(nèi)壁緩緩加入濃縮液，待樣品進(jìn)柱后，用丙酮濃度2%的乙酸乙酯溶液沖洗，觀察到層析柱內(nèi)分成2層層析帶，分別用試管分別收集2層層析帶的流出液，用色譜測(cè)試2流出液提純物發(fā)現(xiàn)，層析帶中氨基酸與脂肪類未分離。
[0031]〈實(shí)例3>
[0032]冬蟲(chóng)夏草的前處理:冬蟲(chóng)夏草經(jīng)洗滌、除雜后，晾曬至干燥。
[0033]步驟1:將2g冬蟲(chóng)夏草粉碎成100目，50ml錐形瓶中加入50°C水7g和蟲(chóng)草，錐形瓶置于震蕩儀中提取10分鐘，重復(fù)實(shí)驗(yàn)3次，收集3次實(shí)驗(yàn)的水溶液。
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