具有改善胰島素抵抗作用的澤瀉多糖及其提取方法和應用
【專利摘要】本發(fā)明涉及中藥制備技術領域，具體涉及一種具有改善胰島素抵抗作用的澤瀉多糖及其提取方法和應用。所述具有改善胰島素抵抗作用的澤瀉多糖的提取方法，包括如下步驟：選用粉碎的干燥物料粒度為40?100目澤瀉粉末，采用纖維素酶提取，酶濃度0.4％，酶解溫度35?40度，酶解時間120?180min，pH4?4.5，料液質量體積比為1:20?1:30；升溫滅活后得澤瀉多糖提取液。本發(fā)明的有益效果在于：本發(fā)明的具有改善胰島素抵抗作用的澤瀉多糖的提取方法采用酶提法提取澤瀉多糖，工藝簡單，并且提高了澤瀉多糖的得率，本發(fā)明方法澤瀉多糖的提取率可高達18.89％。本發(fā)明的提取方法所得澤瀉多糖具有明顯的降血糖功能，為澤瀉的精深加工開拓了新的途徑。
【專利說明】
具有改善胰島素抵抗作用的澤瀉多糖及其提取方法和應用
技術領域
[0001] 本發(fā)明涉及中藥制備技術領域，具體涉及一種具有改善胰島素抵抗作用的澤瀉多 糖及其提取方法和應用。
【背景技術】
[0002] 胰島素抵抗(insulin resistance，IR)是指是指胰島素作用的革E器官對胰島素作 用的敏感性下降，表現(xiàn)為外周組織主要是肌肉和脂肪組織對葡萄糖的利用障礙。IR不僅是2 型糖尿病(T2DM)發(fā)生的關鍵環(huán)節(jié)和主要特征，也與其他并發(fā)癥如高血壓、動脈粥硬化、代謝 綜合征、卵巢囊腫、阿爾茨海默癥、腫瘤的發(fā)生有著密切相關。目前臨床應用于改善和治療 胰島素抵抗的藥物如胰島素增敏劑噻唑烷二酮類藥物如比吡格列酮和羅格列酮，這類藥物 引起的副作用有水腫以及體重增加;二甲雙胍能引起血液中乳酸的堆積。同時這2類藥物的 肝腎毒性比較大。因此對胰島素抵抗防治研究顯得非常重要。
[0003] 澤瀉為澤瀉科植物澤瀉Alisma orientale(Samuels) Juzep ·的干燥塊莖。近來的 研究表明其主要含有多糖、三萜、倍半萜等成分，其藥效學研究表明，澤瀉具有降血糖、利 尿、抗脂肪肝、降血脂、降血壓、抗過敏以及調(diào)節(jié)免疫力等作用。多糖為澤瀉水溶性成分是其 主要活性成分之一。多糖為天然產(chǎn)物，來源廣泛，具有毒副作用小、無殘留、不產(chǎn)生耐藥性等 優(yōu)點因而備受研究者的重視。目前隨著對多糖的研究，發(fā)現(xiàn)其具有降血糖的功效，且來源廣 泛且沒有細胞毒，因此對中藥多糖的研究具有很重大的意義，已成為醫(yī)藥界的熱點研究領 域。
[0004] 多糖的提取方法主要有加熱浸提法、酶解法、超聲提取法等，這些提取方法各自都 有自己的優(yōu)劣，現(xiàn)有澤瀉多糖構成十分復雜，分離純化各個物質比較困難，分離純化多糖比 較難，改善胰島素抵抗的單種糖類很難明確。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明所要解決的技術問題是:提供一種具有改善胰島素抵抗作用的澤瀉多糖及 其提取方法和應用。
[0006] 為了解決上述技術問題，本發(fā)明采用的技術方案為：提供一種具有改善胰島素抵 抗作用的澤瀉多糖的提取方法，包括如下步驟:選用粉碎的干燥物料粒度為40-100目澤瀉 粉末，采用纖維素酶提取，酶質量體積濃度為〇. 4-0.6%，酶解溫度35-40度，酶解時間120_ 180min，pH4-4.5，料液質量體積比為1:20-1:30;升溫滅活后得澤瀉多糖提取液。
[0007] 優(yōu)選的，上述的具有改善胰島素抵抗作用的澤瀉多糖的提取方法中，所述升溫具 體為:95-100度處理lOmin。
[0008] 優(yōu)選的，上述的具有改善胰島素抵抗作用的澤瀉多糖的提取方法中，還包括步驟： 將所得的澤瀉多糖提取液再經(jīng)濃縮、沉淀干燥得改善胰島素抵抗作用的澤瀉多糖粉末。
[0009] 優(yōu)選的，上述的具有改善胰島素抵抗作用的澤瀉多糖的提取方法中，所述濃縮具 體為:將所得的澤瀉多糖提取液過濾，收集濾液，4000r/min離心15min，收集上清液，將上清 液濃縮至原來體積的1/3，得濃縮液。
[0010]優(yōu)選的，上述的具有改善胰島素抵抗作用的澤瀉多糖的提取方法中，所述"沉淀干 燥得具有改善胰島素抵抗作用的澤瀉多糖粉末具體為"：在濃縮液中加入4倍重量的乙醇， 取下層沉淀，4000r/min離心15min，收集沉淀，真空干燥得具有改善胰島素抵抗作用的澤瀉 多糖粉末。
[0011]優(yōu)選的，上述的具有改善胰島素抵抗作用的澤瀉多糖的提取方法中，具體包括如 下步驟:取40目澤瀉粉末，以料液質量體積比為1:20，加入pH為4.5的纖維素酶質量體積濃 度為0.4 %檸檬酸緩沖液得混合液，將混合液至于40度恒溫水浴鍋中加熱酶解2h，之后在沸 水中滅活l〇min，得澤瀉多糖提取液。
[0012] 本發(fā)明提供的另一技術方案為提供一種上述的具有改善胰島素抵抗作用的澤瀉 多糖的提取方法所制備的澤瀉多糖。
[0013] 本發(fā)明提供的又一技術方案為:提供一種上述的澤瀉多糖在制備具有改善胰島素 抵抗作用的藥物中的作用。
[0014] 本發(fā)明提供的又一技術方案為:提供一種藥物組合物，包括醫(yī)藥學上可接受的載 體和治療有效量的上述的澤瀉多糖。
[0015]優(yōu)選的，上述的藥物組合物中，所述藥物組合物為顆粒、散劑、片劑、膠囊或口服 液。
[0016] 本發(fā)明的有益效果在于:本發(fā)明的具有改善胰島素抵抗作用的澤瀉多糖的提取方 法采用酶提法提取澤瀉多糖，工藝簡單，并且提高了澤瀉多糖的得率，本發(fā)明方法澤瀉多糖 的提取率可高達18.89%。本發(fā)明的提取方法所得澤瀉多糖具有明顯的降血糖功能，為澤瀉 的精深加工開拓了新的途徑。
【附圖說明】
[0017] 圖1為本發(fā)明實施例2中造模8周末正常與模型組葡萄糖耐量圖；
[0018] 圖2為澤瀉多糖干預2周末葡萄糖耐量實驗結果圖；
[0019] 圖3為澤瀉多糖干預4周末丙酮酸耐量實驗結果圖。
【具體實施方式】
[0020] 為詳細說明本發(fā)明的技術內(nèi)容、所實現(xiàn)目的及效果，以下結合實施方式并配合附 圖予以說明。
[0021] 本發(fā)明最關鍵的構思在于:本發(fā)明的具有改善胰島素抵抗作用的澤瀉多糖的提取 方法采用酶提法提取澤瀉多糖，工藝簡單，并且提高了澤瀉多糖的得率。
[0022] 實施例1
[0023]取40目澤瀉粉末，以料液質量體積比為1:20,加入pH為4.5的纖維素酶質量濃度為 0.6%檸檬酸緩沖液得混合液，將混合液至于40度恒溫水浴鍋中加熱2h，之后再沸水中滅活 lOmin，得澤瀉多糖提取液。
[0024]取100目澤瀉粉末，以料液質量體積比為1:25,加入pH為4的纖維素酶質量體積濃 度為0.5 %檸檬酸緩沖液得混合液，將混合液至于40度恒溫水浴鍋中加熱2h，之后再沸水中 滅活lOmin，得澤瀉多糖提取液。將所得的澤瀉多糖提取液過濾，收集濾液，4000r/min離心 15min，收集上清液，將上清液濃縮至原來體積的I /3，得濃縮液。在濃縮液中加入4倍重量的 乙醇，取下層沉淀，4000r/min離心15min，收集沉淀，真空干燥得具有改善胰島素抵抗作用 的澤瀉多糖粉末。
[0025] 精確稱取80目澤瀉粉末2.OOOg，以料液比1:20(g/mL)加入pH為4.5的纖維素酶濃 度為0.4 %的檸檬酸緩沖液;將上述混合的原料至于40度恒溫水浴鍋中加熱2h，之后再沸水 中滅活lOmin，得提取液。將提取液用紗布過濾，收集濾液，4000r/min離心15min，收集上清 液，真空濃縮至原來體積的1/3,在濃縮液中加入4倍量的無水乙醇，乙醇混勻，得乙醇體積 分數(shù)為80%，密封后放置4度冰箱過夜，次日取出在4000r/min條件下離心15min，沉淀即為 澤瀉多糖，將沉淀放置冷凍干燥機干燥，得澤瀉多糖粉末。
[0026]實施例2本發(fā)明具有改善胰島素抵抗作用的澤瀉多糖的提取分析 [0027](一)本發(fā)明澤瀉多糖及其提取方法
[0028] 1、分別考察澤瀉粉末的粒度（〈40、40-80、40-100、100-150、150-180、>180目），料 液比（1:1〇、1:20-1:30、1:30、1:40g/mL)，pH(4、4.5、5、5.5、6、6.5)，纖維素酶濃度(0、0.1、 0.2、0.3、0.4、0.5、0.6%)，酶解溫度（35、40、45、50、55、60度），酶解時間（30、60、90、120、 150、180min)對于澤瀉多糖提取率的影響。得出最佳工藝，再用響應面法優(yōu)化提取工藝得出 最佳的工藝條件。
[0029] 2、精確稱取40-100目澤瀉粉末2 .OOOg，以料液比1: 20(g/mL)加入pH為4.5的纖維 素酶濃度為〇. 4%檸檬酸緩沖液;將上述混合的原料至于40度恒溫水浴鍋中加熱2h，之后再 沸水中滅活lOmin，得提取液。上述混合的原料至于40度恒溫水浴鍋中加熱2h，之后再沸水 中滅活lOmin，得提取液。將提取液用紗布過濾，收集濾液，4000r/min離心15min，收集上清 液，真空濃縮至原來體積的1/3,在濃縮液中加入4倍量的無水乙醇，乙醇混勻，得乙醇體積 分數(shù)為80%，密封后放置4度冰箱過夜，次日取出在4000r/min條件下離心15min，沉淀即為 澤瀉多糖，將沉淀放置冷凍干燥機干燥，得澤瀉多糖粉末。
[0030] 3、響應面實驗設計：利用軟件Design-Expert. V8.0.6中的BOX-Behnken試驗設計 原理，以料液比、酶濃度以及pH值為自變量，以多糖的提取率為響應值設計試驗。
[0031] 4.響應面結果，如表1和表2所示。
[0032] 表1 Box-Behnken試驗設計方案及結果

[0037] 綜上所述在單因素基礎上，通過Box-Behnken分析，建立回歸方程，經(jīng)響應面回歸 分析得到優(yōu)化組合條件為:料液比1: 20、酶濃度0.4 %、酶解溫度40度、酶解時間120min、pH 為4.5。纖維素酶提取澤與多糖的提取率尚達18.89%。
[0038](二)本發(fā)明澤瀉多糖的藥效試驗 [0039] 1.試驗條件
[0040] 1.1樣品:本發(fā)明制備的澤瀉多糖。
[00411 1.2試驗動物:C57BL/6J小鼠適，體重18-22g，SPF級，購自北京華阜康生物科技股 份有限公司；許可證號:SCXK (京)2009-0004。
[0042] 1.3造模、分組及處理 [0043] 1)造模
[0044]按體重將小鼠隨機分設正常組和高脂組，正常組給予低脂飼料自由進食，高脂組 給予高脂飼料自由進食。自由飲水，飼養(yǎng)10周，通過體重差異及糖耐量實驗結果判斷造模成 功。
[0045] 糖耐量試驗:各組隨機選取5只小鼠，禁食12h。測定空腹血糖后，腹腔注射葡萄糖 溶液(2g/kg體重）。準確計時，于0、15、30、60、120min尾靜脈取血測定血糖，繪制血糖-時間 曲線，比較各個時間點血糖值。
[0046] 丙酮酸耐量試驗；
[0047] 2)分組
[0048]造模成功后，除正常組小鼠外，將高脂組小鼠隨機分為5組，分別為模型組、陽性藥 羅格列酮組、澤瀉多糖低劑量組、澤瀉多糖高劑量組。為防止模型自愈，在給藥期間，正常組 小鼠繼續(xù)用低脂飼料喂養(yǎng)，其余組小鼠繼續(xù)用高脂飼料喂養(yǎng)。
[0049] 空白對照組:正常組小鼠每日
[0050] 模型組:胰島素抵抗模型小鼠每日灌胃等量蒸餾水
[0051] 給予受試物組:低、高劑量組分別以0.15g · kg< · CfSOJg · kg] · Cf1澤瀉多糖灌 胃胰島素抵抗模型小鼠。
[0052]陽性藥物組:羅格列酮濃度為lmg/mL。給藥劑量為O.Olg kg"1 · cf1。
[0053] 1.4數(shù)據(jù)分析
[0054] 采用SPSS進行數(shù)據(jù)分析
[0055] 2、試驗結果
[0056] 造模結果與澤瀉多糖對試驗動物糖耐量的影響如圖1圖2圖3所示。
[0057] 圖1 :造模8周末正常與模型組葡萄糖耐量（文士 S )，注a:與正常組比較：*P< 0.05，**Ρ<0.01。
[0058] 圖2:澤瀉多糖干預2周末葡萄糖耐量實驗結果，注a:與模型組比較:*P<0.05，**P <0·01〇
[0059] 圖3:澤瀉多糖干預4周末丙酮酸耐量實驗結果，注a:與模型組比較:*Ρ<0.05，**Ρ <0·01〇
[0060] 造模第8周時，葡萄糖耐量數(shù)據(jù)結果顯示，高脂組在腹腔注射葡萄糖后30min， 60min和120min時間點的血糖值與正常組有顯著差異。造模成功。
[0061] 給藥2周時，葡萄糖耐量數(shù)據(jù)結果顯示，羅格列酮陽性藥組在腹腔注射葡萄糖后 15min，30min，60min和120min時間點的血糖值與模型組有顯著差異，提示對于高脂飼料誘 導的小鼠胰島素抵抗模型，陽性藥羅格列酮能發(fā)揮其降糖作用。澤瀉多糖低、高劑量組在 15min，30min，60min和120min時與模型組差異顯著，給藥4周時，丙酮酸耐量數(shù)據(jù)結果顯不， 多糖高劑量組在腹腔注射丙酮酸后1511^11，3〇1^11，6〇1^11，12〇1^11血糖值與模型組有顯著差 異提示澤瀉多糖具有一定改善胰島素抵抗效果且具有劑量相關性。
[0062] 綜上所述，澤瀉多糖0.15g · kg< · Cf1AJg · kg< · Cf1劑量組與模型對照組相比 較均可顯著降低胰島素抵抗模型小鼠空腹血糖水平。
[0063]以上所述僅為本發(fā)明的實施例，并非因此限制本發(fā)明的專利范圍，凡是利用本發(fā) 明說明書及附圖內(nèi)容所作的等同變換，或直接或間接運用在相關的技術領域，均同理包括 在本發(fā)明的專利保護范圍內(nèi)。
【主權項】
1. 一種具有改善胰島素抵抗作用的澤瀉多糖的提取方法，其特征在于，包括如下步驟： 選用粉碎的干燥物料粒度為40-100目澤瀉粉末，采用纖維素酶提取，酶質量體積濃度為 0.4-0.6%，酶解溫度35-40度，酶解時間120-180min，pH4-4.5，料液質量體積比為1:20-1: 30;升溫滅活后得澤瀉多糖提取液。2. 根據(jù)權利要求1所述的具有改善胰島素抵抗作用的澤瀉多糖的提取方法，其特征在 于，所述升溫具體為:95-100度處理lOmin。3. 根據(jù)權利要求1所述的具有改善胰島素抵抗作用的澤瀉多糖的提取方法，其特征在 于，還包括步驟:將所得的澤瀉多糖提取液再經(jīng)濃縮、沉淀干燥得改善胰島素抵抗作用的澤 瀉多糖粉末。4. 根據(jù)權利要求3所述的具有改善胰島素抵抗作用的澤瀉多糖的提取方法，其特征在 于:所述濃縮具體為:將所得的澤瀉多糖提取液過濾，收集濾液，4000r/min離心15min，收集 上清液，將上清液濃縮至原來體積的1 /3，得濃縮液。5. 根據(jù)權利要求4所述的具有改善胰島素抵抗作用的澤瀉多糖的提取方法，其特征在 于，所述"沉淀干燥得具有改善胰島素抵抗作用的澤瀉多糖粉末具體為"：在濃縮液中加入4 倍重量的乙醇，取下層沉淀，4000r/min離心15min，收集沉淀，真空干燥得具有改善胰島素 抵抗作用的澤瀉多糖粉末。6. 根據(jù)權利要求1所述的具有改善胰島素抵抗作用的澤瀉多糖的提取方法，其特征在 于，具體包括如下步驟:取40目澤瀉粉末，以料液質量體積比為1:20，加入pH為4.5的纖維素 酶質量體積濃度為0.4%檸檬酸緩沖液得混合液，將混合液至于40度恒溫水浴鍋中加熱酶 解2h，之后在沸水中滅活lOmin，得澤瀉多糖提取液。7. -種權利要求1-6任一項所述的具有改善胰島素抵抗作用的澤瀉多糖的提取方法所 制備的澤瀉多糖。8. 權利要求7所述的澤瀉多糖在制備具有改善胰島素抵抗作用的藥物中的作用。9. 一種藥物組合物，其特征在于，包括醫(yī)藥學上可接受的載體和治療有效量的權利要 求7所述的澤瀉多糖。10. 根據(jù)權利要求9所述的藥物組合物，其特征在于，所述藥物組合物為顆粒、散劑、片 劑、膠囊或口服液。
【文檔編號】C08B37/00GK105859901SQ201610272958
【公開日】2016年8月17日
【申請日】2016年4月28日
【發(fā)明人】吳水生, 許文, 黃小強, 張雪, 羅奮熔, 李小艷
【申請人】福建中醫(yī)藥大學