鹽酸伊托必利的藥物組合物及其在生物醫(yī)藥中的應(yīng)用
【專利摘要】本發(fā)明公開了鹽酸伊托必利的藥物組合物及其在生物醫(yī)藥中的應(yīng)用，本發(fā)明提供的鹽酸伊托必利的藥物組合物中含有鹽酸伊托必利和一種結(jié)構(gòu)新穎的天然產(chǎn)物化合物(Ⅰ)，鹽酸伊托必利、化合物(Ⅰ)單獨作用時，對膽囊炎膽石癥具有治療作用；鹽酸伊托必利和化合物(Ⅰ)聯(lián)合作用時，對膽囊炎膽石癥的治療效果進(jìn)一步提高，可以開發(fā)成治療膽囊炎膽石癥的藥物，與現(xiàn)有技術(shù)相比具有突出的實質(zhì)性特點和顯著的進(jìn)步。
【專利說明】
鹽酸伊托必利的藥物組合物及其在生物醫(yī)藥中的應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，涉及鹽酸伊托必利的新用途，具體涉及鹽酸伊托必利 的藥物組合物及其在生物醫(yī)藥中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 鹽酸伊托必利臨床用于緩解功能性消化不良的各種癥狀，如上腹部不適、餐后飽 脹、食欲缺之、惡心、嘔吐等。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明的目的在于提供一種鹽酸伊托必利的藥物組合物，該藥物組合物中含有鹽 酸伊托必利和一種結(jié)構(gòu)新穎的天然產(chǎn)物，鹽酸伊托必利和該天然產(chǎn)物可以協(xié)同治療膽囊炎 膽石癥。
[0004] 本發(fā)明的上述目的是通過下面的技術(shù)方案得以實現(xiàn)的：
[0005] 一種具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物（I)，
[0007] -種鹽酸伊托必利的藥物組合物，包括鹽酸伊托必利、如權(quán)利要求1所述的化合物 (I)和藥學(xué)上可以接受的載體，制備成需要的劑型。
[0008] 進(jìn)一步地，藥學(xué)上可以接受的載體包括稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤劑、 崩解劑、吸收促進(jìn)劑、表面活性劑、吸附載體或潤滑劑。
[0009] 進(jìn)一步地，所述劑型包括片劑、膠囊劑、口服液、口含劑、顆粒劑、沖劑、丸劑、散劑、 膏劑、丹劑、混懸劑、粉劑、溶液劑、注射劑、栓劑、噴霧劑、滴劑或貼劑。
[0010] 上述化合物（I)的制備方法，包含以下操作步驟：（a)將香加皮粉碎，用65~75%乙 醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水飽和的正丁醇萃 取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步驟(a)中正丁醇取物用 大孔樹脂除雜，先用20 %乙醇洗脫9個柱體積，再用65 %乙醇洗脫10個柱體積，收集65 %洗 脫液，減壓濃縮得65%乙醇洗脫濃縮物；（c)步驟(b)中65%乙醇洗脫濃縮物用正相硅膠分 離，依次用體積比為65:1、35:1、15:1和7:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到4個組分；（d)步 驟(c)中組分4用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為12:1、7:1和1:1的二氯甲烷-甲醇梯 度洗脫得到3個組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積百 分濃度為58 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集11~15個柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到 化合物(I)。
[0011] 進(jìn)一步地，化合物（I)的制備方法中，步驟(a)用70%乙醇熱回流提取，合并提取 液。
[0012]進(jìn)一步地，化合物（I)的制備方法中，所述大孔樹脂為D101型大孔吸附樹脂。
[0013]進(jìn)一步地，化合物（I)的制備方法中，步驟(a)中用二氯甲烷代替乙酸乙酯進(jìn)行萃 取，得到二氯甲烷萃取物。
[0014] 上述化合物(I)在制備治療膽囊炎膽石癥的藥物中的應(yīng)用。
[0015] 上述鹽酸伊托必利的藥物組合物在制備治療膽囊炎膽石癥的藥物中的應(yīng)用。
[0016] 本發(fā)明的優(yōu)點：
[0017] 本發(fā)明提供的鹽酸伊托必利的藥物組合物中含有鹽酸伊托必利和一種結(jié)構(gòu)新穎 的天然產(chǎn)物，鹽酸伊托必利、化合物（I)單獨作用時，對膽囊炎膽石癥具有治療作用;鹽酸伊 托必利和化合物（I)聯(lián)合作用時，對膽囊炎膽石癥的治療效果進(jìn)一步提高，可以開發(fā)成治療 膽囊炎膽石癥的藥物。
【具體實施方式】
[0018] 下面結(jié)合實施例進(jìn)一步說明本發(fā)明的實質(zhì)性內(nèi)容，但并不以此限定本發(fā)明保護(hù)范 圍。
[0019] 實施例1:化合物(I)分離制備及結(jié)構(gòu)確證
[0020]分離方法：（a)將香加皮(2kg)粉碎，用70%乙醇熱回流提?。?5LX 3次），合并提取 液，濃縮至無醇味（3L)，依次用石油醚（3L X 3次）、乙酸乙酯（3L X 3次）和水飽和的正丁醇 (3LX3次）萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步驟(a)中 乙酸乙酯萃取物用D101型大孔樹脂除雜，先用20%乙醇洗脫9個柱體積，再用65%乙醇洗脫 10個柱體積，收集65%洗脫液，減壓濃縮得65%乙醇洗脫濃縮物；（c)步驟(b)中65%乙醇洗 脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為65:1 (9個柱體積）、35:1 (10個柱體積）、15:1 (8 個柱體積)和7:1(8個柱體積)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到4個組分；（d)步驟(c)中組分4 用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為12:1(6個柱體積）、7:1(7個柱體積)和1:1(6個柱 體積)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的 反相硅膠分離，用體積百分濃度為58 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集11~15個柱體積洗脫 液，洗脫液減壓濃縮得到化合物(I)(純度大于98% )。
[0021] 結(jié)構(gòu)確證:冊431-]\^顯示[]\?^]+為111/2 457.2206，結(jié)合核磁特征可得分子式為 C24H34〇7，不飽和度為8。核磁共振氫譜數(shù)據(jù)δΗ(ρρπι，CDC1 3，500MHz):H-la( 1 · 19，m)，H-lb (1.32，m)，H-2a(1.82，m)，H-2b(1.90，m)，H-3(5.86，s)，H-5(2.13，m)，H-6a(2.24，m)，H-6b (2.86，d，J=12.9Hz)，H-9(2.17，m，2H)，H-12(1.83，s)，H-13(2.01，s)，H-14(0.95，s)，H-15 (1.54，s)，H-4'（2.26，s)，H-5'（2.32，s)，4-Ac0(1.92，s)，3'-Ac0(1.95，s);核磁共振碳譜 數(shù)據(jù) Sc(ppm，CDCl3，125MHz):32.4(CH2d-C)，22.6(CH2,2-C)，74.3(CH，3-C)，82.4(C，4-C)， 45.5(CH，5-C)，25.8(CH2,6-C)，130.2(C，7-C)，201.1(C，8-C)，59.8(CH2,9-C)，35.5(C，10-C)，145.3(C，11-C)，22.6(CH 3，12-C)，23.8(CH3，13-C)，18.4(CH3，14-C)，17.2(CH3，15-C)， 167.3(C，1'-C)，104.6(C，2'-C)，155.8(C，3'-C)，16.8(CH3,4'-C)，10.7(CH3,5'-C)，170.1 (C，4-Ac0)，22.3(CH 3,4-Ac0)，169.6(C，3'-Ac0)，21.3(CH3,3'-Ac0)。紅外波譜中的 1715cm -1與1680cm-1吸收帶表明結(jié)構(gòu)中存在羰基與雙鍵片段。13C-NMR、DEPT和HSQC譜中顯示有24 個碳信號，包括八個甲基(兩個乙酰甲基），四個亞甲基，兩個次甲基（一個連氧碳），以及十 個季碳（四個羰基碳，四個烯烴碳和一個連氧烯烴碳）。以上功能結(jié)構(gòu)再結(jié)合不飽和數(shù)表明 該化合物為雙環(huán)結(jié)構(gòu)。1H-NMR譜結(jié)合HSQC譜顯示六個甲基質(zhì)子信號δΗ 1.83(3H，s)、2.01 (3H，s)、0.95(3H，s)、1.54(3H，s)、2.26(3H，s)、2.32(3H，s)，兩個乙酰基甲基質(zhì)子信號 δΗ 1.92(3!1，8)與1.95(3!1，8)，一個連氧次甲基質(zhì)子信號6115.86(1!1，8);以上匪1?數(shù)據(jù)可以確 認(rèn)該化合物為闊苞菊酮衍生物，HMBC譜中Η 3-12與C-11、H3-13與C-11、H3-14與C-10以及Η3-15與C-4的相關(guān)信號可以歸屬為闊苞菊酮上的甲基片段，C-3位質(zhì)子信號移向低場說明C-3 羥基被酯化，而通過HMBC譜中的Η-3與C-Γ相關(guān)信號得到進(jìn)一步確認(rèn)。HMBC譜中Η 3-4 '與C-3 '、Η3-5'與C-2'和C-Γ以及3 ' -AcO與C-3 '的相關(guān)性可以確認(rèn)結(jié)構(gòu)中存在3 ' -乙?；?2' -甲 基-2'-丁烯酰氧基邊鏈結(jié)構(gòu)，而質(zhì)子信號δΗ 2.26(3H，s)以及2.32(3H，s)可以歸屬為H-4' 的甲基信號與H-5 ' 的甲基信號。N0ESY譜中Hfs-1/H3-14，Hfs-l/H-3，H-3/H3-15以及H3-14/H3-15的相關(guān)信號表明H-3，H 3-14和H3-15在闊苞菊酮骨架的同側(cè)，并且Ηα-1/Η-5的相關(guān)信號暗 示Η-5在Η-3和Η 3-14的異側(cè)。該化合物的相對構(gòu)型進(jìn)一步通過X-單晶衍射確，C-3位的絕對 構(gòu)型通過酸解反應(yīng)與Mosher法可以確認(rèn)為R構(gòu)型。綜合氫譜、碳譜、HMBC譜和N0ESY譜，以及 文獻(xiàn)關(guān)于相關(guān)類型核磁數(shù)據(jù)，可基本確定該化合物如下所示，立體構(gòu)型進(jìn)一步通過ECD試驗 確定，理論值與實驗值基本一致。該化合物化學(xué)式及碳原子編號如下：
[0023] 實施例2:藥理作用
[0024] 本實施例使用膽總管不全結(jié)扎及膽囊內(nèi)注入大腸桿菌的方法制備膽囊炎膽石癥 兔模型，觀察藥物降低局部組織TNF-a、i3_EP含量、降低膽汁粘滯度等方面的抗膽囊炎膽石 癥作用。
[0025] 1、材料與方法
[0026] 1.1動物
[0027]選3月-4月齡的健康家兔，體重1.3kg_l. 9kg，由湖南醫(yī)科大學(xué)動物學(xué)部提供并飼 養(yǎng)。
[0028] 1.2試劑與樣品
[0029] 鹽酸伊托必利購自中國藥品生物制品檢定所?；衔铮↖)自制，制備方法見實施例 UTNF放免試劑盒由北京東亞生物技術(shù)研究所提供，EP放免試劑盒由北京?？其J生物技術(shù) 中心提供。大腸桿菌由湖南省衛(wèi)生防疫站提供，由中南大學(xué)湘雅醫(yī)院交叉感染科培養(yǎng)并提 供5 X 106/L的大腸桿菌菌液。
[0030] 1.3儀器
[0031]血液流變學(xué)LGR-80系列血液粘度測試儀(錐板式）由北京世帝科學(xué)儀器公司提供。 [0032] 1.4兔分組及模型制備
[0033] 兔隨機分為6組，每組12只，分別為正常對照組、模型對照組、陽性對照組(龍膽瀉 肝湯組，50mg · kg-0和鹽酸伊托必利組(80mg · kg-4、化合物（I)組(80mg · kg-〇、鹽酸伊托 必利與化合物（I)組合物組【40mg · kg<鹽酸伊托必利+40mg · kg<化合物（I)】。正常對照 組:進(jìn)行假手術(shù)，并每日灌胃蒸餾水;模型對照組:進(jìn)行造模手術(shù)，并每日灌胃蒸餾水;龍膽 瀉肝湯組:進(jìn)行造模手術(shù)，并每日灌胃龍膽瀉肝湯；其余組:進(jìn)行造模手術(shù)，并每日灌胃上述 劑量的藥物。給藥時間是從手術(shù)后d2開始，每日上午09:30/10:30給藥1次，共7d。
[0034]造模手術(shù):在兔膽總管外沿膽總管方向放入12#針頭，用1#絲線結(jié)扎后拔出針頭，造 成膽總管局部狹窄。再暴露膽囊，在體部進(jìn)針，注入O.lmL濃度5X106 · Γ1的大腸桿菌菌液。 結(jié)扎針口，縫合切口肌肉皮膚。
[0035] 1.5膽汁粘度測定實驗
[0036] 各組家兔觀察治療7d后處死.抽取膽汁lmL測膽汁粘度。
[0037] 1.6腫瘤壞死因子(TNF-α)及β-內(nèi)啡肽(β-ΕΡ)測定實驗
[0038] 剝離膽囊，取膽囊組織干燥后稱重200mg左右，加 lmL生理鹽水均漿。均漿后 4000r · min-1離心20min，提取上清液擬測腫瘤壞死因子(TNF-a)及β-內(nèi)啡肽(β-ΕΡ)。
[0039] 1.7統(tǒng)計學(xué)方法
[0040]實驗數(shù)據(jù)用均數(shù)土標(biāo)準(zhǔn)差(X土s)表示，應(yīng)用SPSS18.0版統(tǒng)計軟件進(jìn)行單因素方差 分析和t檢驗，以Ρ<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
[0041 ] 2、實驗結(jié)果
[0042] 2.1對膽囊炎膽石癥模型兔膽汁粘滯度的影響
[0043]與正常對照組比，模型對照組兔膽汁粘滯度明顯升高（Ρ<0.01);與模型對照組 比，鹽酸伊托必利與化合物（I)組合物組和陽性對照組兔膽汁粘滯度明顯降低(ρ<0.01); 與模型對照組比，鹽酸伊托必利組、化合物（I)組兔膽汁粘滯度降低(Ρ<〇.05)。結(jié)果見表1。
[0044] 2.2對膽囊炎膽石癥模型兔TNF-a、β-ΕΡ的影響
[0045] 與正常對照組比，模型對照組兔的TNF-a、β-ΕΡ明顯升高(Ρ<0.01)。與模型對照組 比較，鹽酸伊托必利與化合物（I)組合物組和陽性對照組TNF-a、β-ΕΡ顯著降低(Ρ<0.01); 與模型對照組比較，鹽酸伊托必利組、化合物（I)組TNF-aj-EP降低(Ρ<0.05)。
[0046] 試驗結(jié)果見表1。
[0047] 表1對膽囊炎膽石癥模型兔膽汁粘滯度和TNF-a、β-ΕΡ含量的影響
[0048]
[0049] 膽囊炎膽石癥的發(fā)病原因主要為膽汁淤積和細(xì)菌感染。因此在膽囊炎膽石癥的動 物模型中，這也是兩個關(guān)鍵性因素。
[0050] 上述結(jié)果表明，鹽酸伊托必利、化合物（I)單獨作用時，對膽囊炎膽石癥具有治療 作用；鹽酸伊托必利和化合物（I)聯(lián)合作用時，對膽囊炎膽石癥的治療效果進(jìn)一步提高，可 以開發(fā)成治療膽囊炎膽石癥的藥物。
[0051] 上述實施例的作用在于說明本發(fā)明的實質(zhì)性內(nèi)容，但并不以此限定本發(fā)明的保護(hù) 范圍。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以對本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行修改或者等同替換， 而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的實質(zhì)和保護(hù)范圍。
【主權(quán)項】
1. 一種具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物（I)， -零.P2. -種鹽酸伊托必利的藥物組合物，其特征在于:包括鹽酸伊托必利、如權(quán)利要求1所 述的化合物(I)和藥學(xué)上可以接受的載體，制備成需要的劑型。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的鹽酸伊托必利的藥物組合物，其特征在于:藥學(xué)上可以接受的 載體包括稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤劑、崩解劑、吸收促進(jìn)劑、表面活性劑、吸附 載體或潤滑劑。4. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的鹽酸伊托必利的藥物組合物，其特征在于：所述劑型包括片 劑、膠囊劑、□服液、口含劑、顆粒劑、沖劑、丸劑、散劑、膏劑、丹劑、混懸劑、粉劑、溶液劑、注 射劑、栓劑、噴霧劑、滴劑或貼劑。5. 權(quán)利要求1所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于，包含以下操作步驟：（a)將香 加皮粉碎，用65~75%乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味，依次用石油醚、乙酸乙 酯和水飽和的正丁醇萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b) 步驟(a)中正丁醇取物用大孔樹脂除雜，先用20%乙醇洗脫9個柱體積，再用65%乙醇洗脫 10個柱體積，收集65%洗脫液，減壓濃縮得65%乙醇洗脫濃縮物；（c)步驟(b)中65%乙醇洗 脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為65:1、35:1、15:1和7:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗 脫得到4個組分；（d)步驟(c)中組分4用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為12:1、7:1和 1:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反 相硅膠分離，用體積百分濃度為58 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集11~15個柱體積洗脫液， 洗脫液減壓濃縮得到化合物(I)。6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于:步驟(a)用70%乙醇熱回 流提取，合并提取液。7. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于:所述大孔樹脂為DlOl型 大孔吸附樹脂。8. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于:步驟(a)中用二氯甲烷代 替乙酸乙酯進(jìn)行萃取，得到二氯甲烷萃取物。9. 權(quán)利要求1所述的化合物（I)在制備治療膽囊炎膽石癥的藥物中的應(yīng)用。10. 權(quán)利要求2~4任一所述的鹽酸伊托必利的藥物組合物在制備治療膽囊炎膽石癥的 藥物中的應(yīng)用。
【文檔編號】C07C67/48GK105884617SQ201610335397
【公開日】2016年8月24日
【申請日】2016年5月15日
【發(fā)明人】劉雨
【申請人】劉雨