一種金槍魚碎肉蛋白肽的制備方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種金槍魚碎肉蛋白肽的制備方法，將金槍魚碎肉進行預(yù)處理，然后加入添加劑制成粗提物，最后酶解而制得。本發(fā)明的制備方法生產(chǎn)周期短，得率高，產(chǎn)品純度高，去除了苦腥味，口感好，并利于人體吸收；為補硒保健食品與藥物開發(fā)提供了一種技術(shù)支持。
【專利說明】
一種金槍魚碎肉蛋白肽的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明屬于水產(chǎn)品精深加工技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種提高純度與提取率，去除苦腥味、提高口感、利于人體吸收的金槍魚碎肉蛋白肽的制備方法。【背景技術(shù)】
[0002]金槍魚(Tunas)又叫鮪魚、吞拿魚，屬鱸形目鯖科，作為一種深海魚類，金槍魚不僅肉味鮮美，而且營養(yǎng)價值非常高，富含蛋白質(zhì)，不飽和脂肪酸和維生素，以純天然，營養(yǎng)價值高而享譽國際市場。金槍魚的主要加工種類有藍鰭金槍魚，長鰭金槍魚，黃鰭金槍魚和大眼金槍魚。浙江省是我國金槍魚加工中心，擁有全國最大的金槍魚加工基地，金槍魚除了鮮銷夕卜，其加工產(chǎn)品的附加值非常高，一般經(jīng)過冷凍處理用于制作壽司及罐裝食品。
[0003]魚類制備的蛋白肽是一種重要的功能性基料，不僅營養(yǎng)豐富，而且具有抗腫瘤、抗衰老、增強機體免疫、抗氧化等多種保健功能。目前食品、保健品、生物醫(yī)藥以及功能化妝品等領(lǐng)域?qū)︳~類蛋白肽需求日益旺盛。
[0004]傳統(tǒng)魚類蛋白肽的制備工藝是將新鮮的魚清洗干凈，去內(nèi)臟后，采用魚肉直接進行勻漿與酶解，然后通過固液分離、膜分離、濃縮與干燥等步驟而獲得，該制備過程得到的產(chǎn)品往往帶有濃重的腥臭味，不僅會影響消費者對產(chǎn)品的接受性，而且也會顯著降低其經(jīng)濟效益。
[0005]為了解決魚類蛋白肽產(chǎn)品腥臭味的問題，有的現(xiàn)有技術(shù)采用魚皮、魚鱗等進行蛋白肽的制備，由此獲得的產(chǎn)品雖然腥臭味有所減少，但營養(yǎng)價值大打折扣;有的現(xiàn)有技術(shù)則通過采用多次酶解或?qū)γ附夂蟠之a(chǎn)物進行柱層析吸附等技術(shù)以去除腥臭味，該方法在容易造成營養(yǎng)物質(zhì)損失的同時，還增加了蛋白肽產(chǎn)品的加工難度及生產(chǎn)成本，影響其經(jīng)濟效益。
【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明的目的在于為了解決傳統(tǒng)蛋白肽制備工藝得到的產(chǎn)品腥臭嚴重、營養(yǎng)價值不尚的缺陷而提供一種提尚純度與提取率，去除苦腫味、提尚口感、利于人體吸收的金槍魚碎肉蛋白肽的制備方法。
[0007]為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案:一種金槍魚碎肉蛋白肽的制備方法，所述制備方法包括以下步驟:a)將金槍魚去污、去魚皮、去骨后的魚肉清洗，攪碎得到碎肉，將碎肉浸入浸泡液中，溫度45-55°C，浸泡時間3_6h，撈出后用去離子水清洗，用去離子水制成魚漿液；b)將步驟a)得到的魚漿液加入至l-3mol/L的檸檬酸溶液中，溫度4°C，并通入臭氧，超聲震蕩40-60min，13000-15000r/min離心15min后取上清液，加入添加劑，靜置2-4h后 15000r/min離心15min得到沉淀物，沉淀物干燥后在-15°C下保存6-9h，得到粗提物；c)向步驟b)得到的粗提物中加入去離子水，調(diào)節(jié)pH至3.3-4.3，加入復(fù)合酶A，酶解反應(yīng) l-2h后滅酶活，然后調(diào)節(jié)pH至8.5-9.5，加入復(fù)合酶B，酶解反應(yīng)5-6h，得到酶解產(chǎn)物；d)將步驟c)得到的酶解產(chǎn)物采用2200Da超濾膜進行超濾處理，收集分子量小于2200Da部分，得到超濾酶解液;玻璃吸附柱中裝填質(zhì)量比為4:3的活性炭與納米銀，超濾酶解液以 30-50mL/min的流速進行循環(huán)層析，層析次數(shù)2-4次，然后以12000-150001'/111；[11離心2-4111；[11， 收集上清液，噴霧干燥得到金槍魚碎肉蛋白肽。在本技術(shù)方案中，本發(fā)明以金槍魚魚肉為原材料，工藝步驟簡單，克服了膠原蛋白傳統(tǒng)工藝缺點產(chǎn)品的生產(chǎn)周期長、酶解液除雜不徹底、成品具有苦腥味、口感差、產(chǎn)品分子量分布廣，不利于人體吸收的缺點，本發(fā)明的制備方法生產(chǎn)周期短，得率高，產(chǎn)品純度高，去除了苦腥味，口感好，并利于人體吸收。
[0008]本發(fā)明從腥臭味來源上對海洋魚蛋白肽的制備工藝進行分析發(fā)現(xiàn)，其腥臭味的形成除了與海洋魚生長環(huán)境、新鮮度情況有關(guān)之外，還與海洋魚在加工貯藏過程中脂肪氧化、 蛋白降解后的氨基酸的脫羧與脫氨等有著緊密的聯(lián)系，以新鮮的海洋魚為原料生產(chǎn)的蛋白肽類產(chǎn)品，其腥臭味物質(zhì)主要是脂肪氧化的產(chǎn)物以及蛋白質(zhì)降解成的氨基酸在各種腐敗微生物快速生長與大量繁殖的情況下進一步脫羧、脫氨形成的各種產(chǎn)物。
[0009]本發(fā)明酶解前采用對碎肉進行浸泡，不僅能有效地防止了酶解過程中的脂肪氧化，而且具有抑制腥味臭的功能，采用臭氧對魚漿液進行處理，殺死了微生物，避免了酶解時微生物、尤其是腐敗微生物的大量繁殖與生長，防止了蛋白肽在酶解過程中的脫羧、脫氨作用，從而抑制了腥臭味物質(zhì)的生成;魚肉首先用水進行多次漂洗，除去魚肉表面的油脂； 酶解產(chǎn)物進行循環(huán)層析，促使酶解液中的膠質(zhì)快速沉淀，使油水兩相充分分層，有效除去酶解過程中釋放出來的油脂，脂質(zhì)去除更干凈，防止了油脂的氧化，抑制了腥臭味物質(zhì)的形成。[0〇1〇]作為優(yōu)選，步驟a)中浸泡液由以下重量份的原料組成:色氨酸80-100份、山楂20-25份、兒茶酚14-26份、槲皮素15-25份、沒食子兒茶素30-40份、殼聚糖15-18份、海藻酸鈉 12-15份與水200-350份，魚漿液與浸泡液的質(zhì)量比為1:10。在本技術(shù)方案中，浸泡液主要是為了去除苦腥味。
[0011]作為優(yōu)選，步驟b)中添加劑由以下重量份的原料組成:食鹽3-5份、葡萄糖5-7份、 富硒酵母3-10份、天冬酰胺10-15份、蛋氨酸12-15份，添加劑的加入量為魚漿液質(zhì)量的10-15倍，魚漿液與檸檬酸溶液的料液比為lg: 60mL。在本技術(shù)方案中，硒有抗癌作用、抗氧化作用，能夠增強人體免疫力，科學(xué)界研究發(fā)現(xiàn)，血硒水平的高低與癌的發(fā)生息息相關(guān)。大量的調(diào)查資料說明，一個地區(qū)食物和土壤中硒含量的高低與癌癥的發(fā)病率有直接關(guān)系，例如:此地區(qū)的食物和土壤中的硒含量高，癌癥的發(fā)病率和死亡率就低，反之，這個地區(qū)的癌癥發(fā)病率和死亡率就高，事實說明硒與癌癥的發(fā)生有著密切關(guān)系。同時科學(xué)界也認識到硒具有預(yù)防癌癥作用，是人體微量元素的“防癌之王”。[0〇12]作為優(yōu)選，步驟d)中活性炭的粒度為600目、比表面積1450m2。[〇〇13]作為優(yōu)選，循環(huán)層析時在外部施加磁場，磁場的強度為2-2.4T。
[0014]作為優(yōu)選，步驟c)中復(fù)合酶A為胃蛋白酶與胰蛋白酶的混合物，質(zhì)量比為1.5:1，復(fù)合酶B為風(fēng)味蛋白酶與菠蘿蛋白酶的混合物，質(zhì)量比為1:3.2，復(fù)合酶A的加入量為粗提物重量的0.8-1.2%，復(fù)合酶B的加入量為第一次得到的上清液質(zhì)量的1.1-2.3%。[0〇15]作為優(yōu)選，其特征在于，臭氧的濃度為2.5_4ppm。[〇〇16] 作為優(yōu)選，步驟b)中超聲波功率為55-65kw。
[0017]本發(fā)明的有益效果是:本發(fā)明的制備方法生產(chǎn)周期短，得率高，產(chǎn)品純度高，去除了苦腥味，口感好，并利于人體吸收;為補硒保健食品與藥物開發(fā)提供了一種技術(shù)支持。【具體實施方式】
[0018]以下結(jié)合具體實施例，對本發(fā)明作進一步的解釋:若未特指，其工藝為現(xiàn)有工藝;本發(fā)明所用原料均可從市場購得。
[0019]富硒酵母購自武漢能仁醫(yī)藥化工有限公司；胰蛋白酶，胃蛋白酶購自國藥集團化學(xué)試劑有限公司;風(fēng)味蛋白酶、菠蘿蛋白酶購自廣西南寧龐博生物工程有限公司。
[0020]實施例1一種金槍魚碎肉蛋白肽的制備方法，所述制備方法包括以下步驟:a)將金槍魚去污、去魚皮、去骨后的魚肉清洗，攪碎得到碎肉，將碎肉浸入浸泡液中，溫度45°C，浸泡時間3h，撈出后用去離子水清洗，用去離子水制成魚漿液;浸泡液由以下重量份的原料組成:色氨酸80份、山楂20份、兒茶酚14份、槲皮素15份、沒食子兒茶素30份、殼聚糖15份、海藻酸鈉12份與水200份，魚漿液與浸泡液的質(zhì)量比為1:10;b)將步驟a)得到的魚漿液加入至lmo 1/L的檸檬酸溶液中，溫度4 °C，并通入臭氧，臭氧的濃度為2.5ppm，超聲震蕩40min，超聲波功率為55kw，13000r/min離心15min后取上清液， 加入添加劑，靜置2h后15000r/min離心15min得到沉淀物，沉淀物干燥后在-15 °C下保存6h， 得到粗提物;添加劑由以下重量份的原料組成:食鹽3份、葡萄糖5份、富硒酵母3份、天冬酰胺10份、蛋氨酸12份，添加劑的加入量為魚漿液質(zhì)量的10倍，魚漿液與檸檬酸溶液的料液比為lg:6〇mL;c)向步驟b)得到的粗提物中加入去離子水，調(diào)節(jié)pH至3.3,加入復(fù)合酶A，酶解反應(yīng)lh后滅酶活，然后調(diào)節(jié)pH至8.5，加入復(fù)合酶B，酶解反應(yīng)5h，得到酶解產(chǎn)物;復(fù)合酶A為胃蛋白酶與胰蛋白酶的混合物，質(zhì)量比為1.5:1，復(fù)合酶B為風(fēng)味蛋白酶與菠蘿蛋白酶的混合物，質(zhì)量比為1:3.2，復(fù)合酶A的加入量為粗提液重量的0.8%，復(fù)合酶B的加入量為第一次得到的上清液質(zhì)量的1.1%;d)將步驟c)得到的酶解產(chǎn)物采用2200Da超濾膜進行超濾處理，收集分子量小于2200Da 部分，得到超濾酶解液;玻璃吸附柱中裝填質(zhì)量比為4:3的活性炭與納米銀，活性炭的粒度為600目、比表面積1450m2，超濾酶解液以30mL/min的流速進行循環(huán)層析，層析次數(shù)2次，循環(huán)層析時在外部施加磁場，磁場的強度為2T，然后以12000r/min離心2min，收集上清液，噴霧干燥得到金槍魚碎肉蛋白肽。金槍魚碎肉蛋白肽的得率92%，純度81 %。[〇〇21] 實施例2一種金槍魚碎肉蛋白肽的制備方法，所述制備方法包括以下步驟:a)將金槍魚去污、去魚皮、去骨后的魚肉清洗，攪碎得到碎肉，將碎肉浸入浸泡液中，溫度50°C，浸泡時間4h，撈出后用去離子水清洗，用去離子水制成魚漿液;浸泡液由以下重量份的原料組成:色氨酸90份、山楂22份、兒茶酚21份、槲皮素18份、沒食子兒茶素37份、殼聚糖16份、海藻酸鈉13份與水280份，魚漿液與浸泡液的質(zhì)量比為1:10;b)將步驟a)得到的魚漿液加入至2〇 1/L的檸檬酸溶液中，溫度4 °C，并通入臭氧，臭氧的濃度為3.lppm，超聲震蕩50min，超聲波功率為58kw，14000r/min離心15min后取上清液，加入添加劑，靜置3h后15000r/min離心15min得到沉淀物，沉淀物干燥后在-15 °C下保存7h，得到粗提物;添加劑由以下重量份的原料組成:食鹽4份、葡萄糖6份、富硒酵母6份、天冬酰胺 12份、蛋氨酸14份，添加劑的加入量為魚漿液質(zhì)量的11倍，魚漿液與檸檬酸溶液的料液比為lg:60mL；C)向步驟b)得到的粗提物中加入去離子水，調(diào)節(jié)pH至3.8,加入復(fù)合酶A，酶解反應(yīng)1.5h 后滅酶活，然后調(diào)節(jié)pH至8.9，加入復(fù)合酶B，酶解反應(yīng)5.5h，得到酶解產(chǎn)物;復(fù)合酶A為胃蛋白酶與胰蛋白酶的混合物，質(zhì)量比為1.5:1，復(fù)合酶B為風(fēng)味蛋白酶與菠蘿蛋白酶的混合物， 質(zhì)量比為1: 3.2，復(fù)合酶A的加入量為粗提液重量的1.1 %，復(fù)合酶B的加入量為第一次得到的上清液質(zhì)量的1.7%;d)將步驟c)得到的酶解產(chǎn)物采用2200Da超濾膜進行超濾處理，收集分子量小于2200Da 部分，得到超濾酶解液;玻璃吸附柱中裝填質(zhì)量比為4:3的活性炭與納米銀，活性炭的粒度為600目、比表面積1450m2，超濾酶解液以40mL/min的流速進行循環(huán)層析，層析次數(shù)3次，循環(huán)層析時在外部施加磁場，磁場的強度為2.3T，然后以13000r/min離心3min，收集上清液， 噴霧干燥得到金槍魚碎肉蛋白肽。金槍魚碎肉蛋白肽的得率95%，純度85%。[〇〇22] 實施例3一種金槍魚碎肉蛋白肽的制備方法，所述制備方法包括以下步驟:a)將金槍魚去污、去魚皮、去骨后的魚肉清洗，攪碎得到碎肉，將碎肉浸入浸泡液中，溫度55°C，浸泡時間6h，撈出后用去離子水清洗，用去離子水制成魚漿液;浸泡液由以下重量份的原料組成:色氨酸100份、山楂25份、兒茶酚26份、槲皮素25份、沒食子兒茶素40份、殼聚糖18份、海藻酸鈉15份與水350份，魚漿液與浸泡液的質(zhì)量比為1:10;b)將步驟a)得到的魚漿液加入至3mo 1/L的檸檬酸溶液中，溫度4 °C，并通入臭氧，臭氧的濃度為4ppm，超聲震蕩60min，超聲波功率為65kw，15000r/min離心15min后取上清液，加入添加劑，靜置4h后15000r/min離心15min得到沉淀物，沉淀物干燥后在-15 °C下保存9h，得到粗提物;添加劑由以下重量份的原料組成:食鹽5份、葡萄糖7份、富硒酵母10份、天冬酰胺 15份、蛋氨酸15份，添加劑的加入量為魚漿液質(zhì)量的15倍，魚漿液與檸檬酸溶液的料液比為 lg:60mL；C)向步驟b)得到的粗提物中加入去離子水，調(diào)節(jié)pH至4.3，加入復(fù)合酶A，酶解反應(yīng)2h后滅酶活，然后調(diào)節(jié)pH至9.5，加入復(fù)合酶B，酶解反應(yīng)6h，得到酶解產(chǎn)物;復(fù)合酶A為胃蛋白酶與胰蛋白酶的混合物，質(zhì)量比為1.5:1，復(fù)合酶B為風(fēng)味蛋白酶與菠蘿蛋白酶的混合物，質(zhì)量比為1:3.2，復(fù)合酶A的加入量為粗提液重量的1.2 %，復(fù)合酶B的加入量為第一次得到的上清液質(zhì)量的2.3%;d)將步驟c)得到的酶解產(chǎn)物采用2200Da超濾膜進行超濾處理，收集分子量小于2200Da 部分，得到超濾酶解液;玻璃吸附柱中裝填質(zhì)量比為4:3的活性炭與納米銀，活性炭的粒度為600目、比表面積1450m2，超濾酶解液以50mL/min的流速進行循環(huán)層析，層析次數(shù)4次，循環(huán)層析時在外部施加磁場，磁場的強度為2.4T，然后以15000r/min離心4min，收集上清液， 噴霧干燥得到金槍魚碎肉蛋白肽。金槍魚碎肉蛋白肽的得率94%，純度82%。
[0023]以上所述實施例僅表達了本發(fā)明的幾種實施方式，其描述較為具體和詳細，但并不能因此而理解為對發(fā)明專利范圍的限制。應(yīng)當(dāng)指出的是，對于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明構(gòu)思的前提下，還可以做出若干變形和改進，這些都屬于本發(fā)明的保護范圍。因此，本發(fā)明專利的保護范圍應(yīng)以所附權(quán)利要求為準。
【主權(quán)項】
1.一種金槍魚碎肉蛋白肽的制備方法，其特征在于，所述制備方法包括以下步驟:a)將金槍魚去污、去魚皮、去骨后的魚肉清洗，攪碎得到碎肉，將碎肉浸入浸泡液中，溫 度45-55°C，浸泡時間3-6h，撈出后用去離子水清洗，用去離子水制成魚漿液；b)將步驟a)得到的魚漿液加入至l-3mol/L的檸檬酸溶液中，溫度4°C，并通入臭氧，超 聲震蕩40-60min，13000-15000r/min離心15min后取上清液，加入添加劑，靜置2-4h后 15000r/min離心15min得到沉淀物，沉淀物干燥后在-15°C下保存6-9h，得到粗提物；c)向步驟b)得到的粗提物中加入去離子水，調(diào)節(jié)pH至3.3-4.3,加入復(fù)合酶A，酶解反應(yīng) l-2h后滅酶活，然后調(diào)節(jié)pH至8.5-9.5，加入復(fù)合酶B，酶解反應(yīng)5-6h，得到酶解產(chǎn)物；d)將步驟c)得到的酶解產(chǎn)物采用2200Da超濾膜進行超濾處理，收集分子量小于2200Da 部分，得到超濾酶解液;玻璃吸附柱中裝填質(zhì)量比為4:3的活性炭與納米銀，超濾酶解液以 30-50mL/min的流速進行循環(huán)層析，層析次數(shù)2-4次，然后以12000-150001'/111；[11離心2-4111；[11， 收集上清液，噴霧干燥得到金槍魚碎肉蛋白肽。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種金槍魚碎肉蛋白肽的制備方法，其特征在于，步驟a)中浸 泡液由以下重量份的原料組成:色氨酸80-100份、山楂20-25份、兒茶酚14-26份、槲皮素15-25份、沒食子兒茶素30-40份、殼聚糖15-18份、海藻酸鈉12-15份與水200-350份，魚漿液與 浸泡液的質(zhì)量比為1:10。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種金槍魚碎肉蛋白肽的制備方法，其特征在于，步驟b)中添 加劑由以下重量份的原料組成:食鹽3_5份、葡萄糖5-7份、富硒酵母3-10份、天冬酰胺10-15 份、蛋氨酸12-15份，添加劑的加入量為魚漿液質(zhì)量的10-15倍，魚漿液與檸檬酸溶液的料液 比為 lg:60mL。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種金槍魚碎肉蛋白肽的制備方法，其特征在于，步驟d)中活 性炭的粒度為600目、比表面積1450m2。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種金槍魚碎肉蛋白肽的制備方法，其特征在于，循環(huán)層析時 在外部施加磁場，磁場的強度為2-2.4T。6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種金槍魚碎肉蛋白肽的制備方法，其特征在于，步驟c)中復(fù) 合酶A為胃蛋白酶與胰蛋白酶的混合物，質(zhì)量比為1.5:1，復(fù)合酶B為風(fēng)味蛋白酶與菠蘿蛋白 酶的混合物，質(zhì)量比為1:3.2，復(fù)合酶A的加入量為粗提液重量的0.8-1.2%，復(fù)合酶B的加入 量為第一次得到的上清液質(zhì)量的1.1-2.3%。7.根據(jù)權(quán)利要求1或2或3或4或5所述的一種金槍魚碎肉蛋白肽的制備方法，其特征在 于，臭氧的濃度為2.5-4ppm。8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種金槍魚碎肉蛋白肽的制備方法，其特征在于，步驟b)中超 聲波功率為55-65kw。
【文檔編號】C12P21/06GK106047969SQ201610392478
【公開日】2016年10月26日
【申請日】2016年6月3日
【發(fā)明人】謝超
【申請人】浙江海洋大學(xué)