快速檢測mthfr基因多態(tài)性試劑盒的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本實(shí)用新型涉及基因測序分析領(lǐng)域，具體為一種快速檢測葉酸代謝能力MTHFR基因rsl801131和rsl801133位點(diǎn)多態(tài)性的試劑盒的試劑盒。
【背景技術(shù)】
[0002]葉酸(folic acid)也叫維生素B9，是一種水溶性維生素，是合成核酸所必須的元素，是細(xì)胞生長和組織修復(fù)所必需的物質(zhì)，更是胚胎發(fā)育過程中不可缺少的營養(yǎng)素。研究證實(shí)并且機(jī)理研究清楚的與葉酸代謝密切相關(guān)的基因是MTHFR和MTRR。這兩個(gè)基因變異引起的相應(yīng)的酶活性降低可阻抑同型半胱氨酸轉(zhuǎn)化為甲硫氨酸，導(dǎo)致低葉酸血癥和高同型半胱氨酸血癥，從而增加新生兒出生缺陷風(fēng)險(xiǎn)或自發(fā)性流產(chǎn)等風(fēng)險(xiǎn)。MTHFR基因編碼5，10-亞甲基四氫葉酸還原酶，MTHFR基因第八個(gè)外顯子上第1298(1337)核苷酸的一個(gè)A/C多態(tài)，引起MTHFR基因編碼的蛋白質(zhì)第429個(gè)氨基酸由Glu變?yōu)锳la，以致酶活性僅為野生型的68%左右，阻礙了葉酸代謝；MTHFR基因第五個(gè)外顯子上的716(677)位mRNA上一個(gè)C/T多態(tài)，引起MTHFR基因編碼的蛋白質(zhì)第222個(gè)氨基酸由Ala(A)變?yōu)閂al (V)，導(dǎo)致酶活性和熱穩(wěn)定性下降。
[0003]遺傳體質(zhì)的差異導(dǎo)致了機(jī)體對葉酸利用能力的差異，因此，葉酸增補(bǔ)應(yīng)因人而異，增補(bǔ)過多或過少都不利于胎兒健康和孕婦健康。
[0004]我國的葉酸代謝檢測起步較晚，繼一代基因測序技術(shù)之后發(fā)展起來的檢測技術(shù)，但測序技術(shù)需要昂貴的測序儀器，從而限制了推廣使用，無法有效廣泛地用于臨床診斷和科研工作。相對于測序技術(shù)，熒光定量PCR技術(shù)具有高靈敏度、高特異性，操作簡便、快速等特點(diǎn)，因此近年來在臨床檢測分析中被廣泛推廣使用。因此，我們需要尋求一種新的技術(shù)來解決這一問題。
【實(shí)用新型內(nèi)容】
[0005]本實(shí)用新型所解決的技術(shù)問題在于提供一種快速檢測葉酸代謝相關(guān)的MTHFR基因兩個(gè)位點(diǎn)多態(tài)性的試劑盒，以解決上述【背景技術(shù)】中提出的問題。
[0006]本實(shí)用新型所解決的技術(shù)問題采用以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn):
[0007]快速檢測MTHFR基因多態(tài)性試劑盒，包括盒體和盒蓋，包括盒體以及與盒體相連的翻蓋式盒蓋，盒體內(nèi)放置有與盒體尺寸大小相同的海綿托，海綿托上設(shè)有十二個(gè)凹槽，凹槽內(nèi)分別放入反應(yīng)液I，反應(yīng)液11，反應(yīng)液III，反應(yīng)液IV，探針I(yè)，探針I(yè)I，探針I(yè)II，探針I(yè)V，野生標(biāo)準(zhǔn)品，雜合標(biāo)準(zhǔn)品，突變標(biāo)準(zhǔn)品，純化水。
[0008]進(jìn)一步的，反應(yīng)液瓶I，反應(yīng)液瓶11，反應(yīng)液瓶III，反應(yīng)液瓶IV內(nèi)含有不同的特異擴(kuò)增引物，PCR酶，dNTPo
[0009]進(jìn)一步的，探針瓶I，探針瓶II，探針瓶III，探針瓶IV內(nèi)含有不同的熒光探針。
[0010]進(jìn)一步的，野生標(biāo)準(zhǔn)品內(nèi)含位點(diǎn)為野生型的基因；雜合標(biāo)準(zhǔn)品內(nèi)含有位點(diǎn)只有一個(gè)突變的基因，突變標(biāo)準(zhǔn)品內(nèi)含有位點(diǎn)同時(shí)突變的基因。
[0011]本實(shí)用新型的優(yōu)點(diǎn)是:本實(shí)用新型特異性強(qiáng)、靈敏度高、穩(wěn)定、方便，反應(yīng)更充分、迅速，降低了生產(chǎn)成本。
【附圖說明】
[0012]圖1為本實(shí)用新型一實(shí)施方式的試劑盒的結(jié)構(gòu)示意圖。
[0013]圖2為本實(shí)用新型一實(shí)施方式的試劑盒的主視圖。
[0014]圖3為本實(shí)用新型一實(shí)施方式的側(cè)視圖。
[0015]其中:1-盒體；2-翻蓋式盒蓋；3-海綿托；4-凹槽；5-反應(yīng)液I ;6_反應(yīng)液II ;7-反應(yīng)液III ;8_反應(yīng)液IV ;9-探針I(yè) ;10_探針I(yè)I ;11_探針I(yè)II ;12_探針I(yè)V ;13_野生標(biāo)準(zhǔn)品；14_雜合標(biāo)準(zhǔn)品；15_突變標(biāo)準(zhǔn)品；16_純化水。
【具體實(shí)施方式】
[0016]下面結(jié)合附圖對本實(shí)用新型作進(jìn)一步詳細(xì)的說明。
[0017]圖1至圖3示意性地顯示了根據(jù)快速檢測MTHFR基因多態(tài)性試劑盒，包括盒體1以及與盒體1相連的翻蓋式盒蓋2，盒體1內(nèi)放置有與盒體1尺寸大小相同的海綿托3，海綿托3上設(shè)有十二個(gè)凹槽4，凹槽內(nèi)分別放置有反應(yīng)液15，反應(yīng)液116，反應(yīng)液1117，反應(yīng)液IV8，探針19，探針1110，探針11111，探針I(yè)V12，野生標(biāo)準(zhǔn)品13，雜合標(biāo)準(zhǔn)品14，突變標(biāo)準(zhǔn)品15，純化水16。
[0018]進(jìn)一步的，反應(yīng)液瓶15，反應(yīng)液瓶116，反應(yīng)液瓶1117，反應(yīng)液瓶IV8內(nèi)含有不同的特異擴(kuò)增引物，PCR酶，dNTPo
[0019]進(jìn)一步的，探針瓶19，探針瓶1110，探針瓶11111，探針瓶IV12內(nèi)含有不同的熒光探針。
[0020]進(jìn)一步的，野生標(biāo)準(zhǔn)品13內(nèi)含位點(diǎn)為野生型的基因；雜合標(biāo)準(zhǔn)品14內(nèi)含有位點(diǎn)只有一個(gè)突變的基因，突變標(biāo)準(zhǔn)品15內(nèi)含有位點(diǎn)同時(shí)突變的基因
[0021]本實(shí)用新型使用方法如下:在檢測rsl801131位點(diǎn)的標(biāo)本、校準(zhǔn)品中加入反應(yīng)液I，反應(yīng)液II以及探針I(yè)，探針I(yè)I，在檢測rsl801133位點(diǎn)的標(biāo)本、校準(zhǔn)品中加入反應(yīng)液III，反應(yīng)液IV以及探針I(yè)II，探針I(yè)V。探針I(yè)中有特意修飾，使得探針只能與rsl801131位點(diǎn)為A的堿基結(jié)合，探針I(yè)I中的特異修飾使得探針只能與rsl801131位點(diǎn)為C的堿基結(jié)合，只有探針結(jié)合后，才能在熒光定量PCR中收集到擴(kuò)增熒光，根據(jù)熒光信號確定改為點(diǎn)的堿基變化，實(shí)現(xiàn)SNP的檢測。同樣的，探針I(yè)II的特異修飾只能使得該探針與rsl801133位點(diǎn)為C的堿基結(jié)合，探針I(yè)V的特異修飾使得該探針只能與rsl801133位點(diǎn)為T的堿基結(jié)合。
[0022]通過對探針進(jìn)行特異修飾，使得不同的探針識別不同的堿基，從而達(dá)到很好分離基因型的效果，比普通測序的時(shí)間段，靈敏性高，易于推廣檢測。。
[0023]以上所述的僅是本實(shí)用新型的一些實(shí)施方式。對于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本實(shí)用新型創(chuàng)造構(gòu)思的前提下，還可以做出若干變形和改進(jìn)，這些都屬于發(fā)明(本實(shí)用新型)的保護(hù)范圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.快速檢測MTHFR基因多態(tài)性試劑盒，其特征在于:包括盒體以及與盒體相連的翻蓋式盒蓋，盒體內(nèi)放置有與盒體尺寸大小相同的海綿托，所述海綿托上設(shè)有十二個(gè)凹槽，所述凹槽內(nèi)分別放入反應(yīng)液I，反應(yīng)液11，反應(yīng)液III，反應(yīng)液IV，探針I(yè)，探針I(yè)I，探針I(yè)II，探針I(yè)V，野生標(biāo)準(zhǔn)品，雜合標(biāo)準(zhǔn)品，突變標(biāo)準(zhǔn)品，純化水。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的快速檢測MTHFR基因多態(tài)性試劑盒，其特征在于:所述反應(yīng)液瓶I，反應(yīng)液瓶11，反應(yīng)液瓶III，反應(yīng)液瓶IV內(nèi)含有不同的特異擴(kuò)增引物，PCR酶，dNTP。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的快速檢測MTHFR基因多態(tài)性試劑盒，其特征在于:所述探針瓶I，探針瓶II，探針瓶III，探針瓶IV內(nèi)含有不同的熒光探針。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的快速檢測MTHFR基因多態(tài)性試劑盒，其特征在于:所述野生標(biāo)準(zhǔn)品內(nèi)含位點(diǎn)為野生型的基因；所述雜合標(biāo)準(zhǔn)品內(nèi)含有位點(diǎn)只有一個(gè)突變的基因，所述突變標(biāo)準(zhǔn)品內(nèi)含有位點(diǎn)同時(shí)突變的基因。
【專利摘要】本實(shí)用新型公開了快速檢測MTHFR基因多態(tài)性試劑盒，包括盒體和盒蓋，包括盒體以及與盒體相連的翻蓋式盒蓋，盒體內(nèi)放置有與盒體尺寸大小相同的海綿托，海綿托上設(shè)有十二個(gè)凹槽，凹槽內(nèi)分別放入反應(yīng)液I，反應(yīng)液II，反應(yīng)液III，反應(yīng)液IV，探針I(yè)，探針I(yè)I，探針I(yè)II，探針I(yè)V，野生標(biāo)準(zhǔn)品，雜合標(biāo)準(zhǔn)品，突變標(biāo)準(zhǔn)品，純化水。本實(shí)用新型的優(yōu)點(diǎn)是：本實(shí)用新型特異性強(qiáng)、靈敏度高、穩(wěn)定、方便，反應(yīng)更充分、迅速，降低了生產(chǎn)成本。
【IPC分類】C12M1/00, C12Q1/68
【公開號】CN204958889
【申請?zhí)枴緾N201520502664
【發(fā)明人】程誠
【申請人】江蘇蘇博生物醫(yī)學(xué)科技有限公司
【公開日】2016年1月13日
【申請日】2015年7月10日