一種檢測線粒體中硫離子的熒光探針及其應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種檢測線粒體中硫離子的熒光探針。所述的熒光探針為RhS熒光探針，RhS熒光探針的結(jié)構(gòu)通式如(Ⅰ)所示。本發(fā)明的熒光探針能夠快速的定位于線粒體中，并能夠?qū)ζ渲械牧螂x子、硫氫根離子進(jìn)行在線實(shí)時(shí)的檢測，另外，該探針還具有較好的化學(xué)、光穩(wěn)定性，較好的溶解性和生物兼容性，較高的硫離子選擇性，不受其他活性氧和活性氮等物種的干擾。激光共聚焦成像實(shí)驗(yàn)表明這類探針具有較好的細(xì)胞通透性，對細(xì)胞和生物體無毒副作用。。
【專利說明】一種檢測線粒體中硫離子的熒光探針及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一類可定位于活細(xì)胞線粒體，并檢測線粒體中硫離子的熒光探針。
【背景技術(shù)】
[0002]硫化氫在生命科學(xué)中扮演重要角色，是僅次于一氧化氮和一氧化碳的第三個(gè)重要的氣體信使分子。自20世紀(jì)90年代發(fā)現(xiàn)內(nèi)源性硫化氫(hydrogen sulfide, HS)在體內(nèi)發(fā)揮生理病理作用后，人們開始了對HS新的認(rèn)識和探索。近些年的研究表明，機(jī)體有內(nèi)源性HS的生成,它同一氧化氮(nitricoxide, NO)有類似的作用:能夠舒張血管和消化道平滑肌，抑制血管平滑肌細(xì)胞增殖等，并且在神經(jīng)系統(tǒng)中參與重要的調(diào)節(jié)作用。此外，HS是一種相對分子質(zhì)量較小的氣體分子，可以自由通過細(xì)胞膜，其在溶液中主要存在形式為H2S、肥_和32_。對￥_進(jìn)行實(shí)時(shí)、原位、定量的檢測，將有助于我們進(jìn)一步了解硫化氫的生理功能，有助于增進(jìn)對HS生理作用的了解，為新型心血管藥物的研發(fā)提供可視化的檢測工具。 [0003]生命體中的內(nèi)源性硫化氫的生成與多種酶相關(guān)，比如胱硫醚-B-合成酶(cystathionine-B-synthase, CBS),胱硫醚裂解酶(cystathionine-lyase, CSE)和半胱氨酸轉(zhuǎn)移酶，其產(chǎn)生的場所是在線粒體中。來源于線粒體中的硫化氫對于心腦血管系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)以及神經(jīng)系統(tǒng)具有非常重要的調(diào)節(jié)作用。目前對硫離子進(jìn)行檢測的熒光探針種類很多，但是絕大多數(shù)都不具有線粒體定位功能，更無法實(shí)現(xiàn)對線粒體中所產(chǎn)生的硫離子進(jìn)行檢測。為了實(shí)現(xiàn)對線粒體中產(chǎn)生的硫離子進(jìn)行實(shí)時(shí)在線的檢測，急需開發(fā)具有線粒體定位功能的硫尚子滅光探針。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0004]為了解決以上問題，本發(fā)明提供一類可以檢測線粒體中硫離子的高靈敏度熒光探針。
[0005]本發(fā)明采用的技術(shù)方案是:一種檢測線粒體中硫離子的熒光探針，所述的熒光探針為RhS突光探針，RhS突光探針的結(jié)構(gòu)通式如(I )所示:
[0006]
【權(quán)利要求】
1.一種檢測線粒體中硫離子的熒光探針，其特征在于所述的熒光探針為Rhs熒光探針，RhS突光探針的結(jié)構(gòu)通式如(I )所示:
2.如權(quán)利要求1所述的檢測線粒體中硫離子的熒光探針，其特征在于所述的RhS熒光探針的制備方法包括如下步驟:將羅丹明類化合物與三氯氧磷加入到1，2_ 二氯乙烷中，加熱回流反應(yīng)3-5小時(shí)，除去溶劑，加入丙酮和疊氮化鈉水溶液，(TC下反應(yīng)20-26小時(shí)，反應(yīng)液用二氯甲烷萃取、取下層液，無水硫酸鎂干燥，經(jīng)硅膠柱層析提純得到目標(biāo)產(chǎn)物RhS熒光探針。
3.如權(quán)利要求2所述的檢測線粒體中硫離子的熒光探針，其特征在于羅丹明類化合物與三氯氧磷的摩爾比為1:2.5-3.5。
4.如權(quán)利要求1所述的檢測線粒體中硫離子的熒光探針在檢測生理體系中硫離子的應(yīng)用。
5.如權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于，熒光探針在檢測活細(xì)胞線粒體中硫離子的應(yīng)用。
6.如權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的活細(xì)胞為Hela細(xì)胞株、MCF-7細(xì)胞株或RAW264.7細(xì)胞株。
【文檔編號】C09K11/06GK103937490SQ201410168902
【公開日】2014年7月23日 申請日期:2014年4月24日 優(yōu)先權(quán)日:2014年4月24日
【發(fā)明者】宋有濤, 于海波, 王寧, 王杰瓊, 李紅玲, 曹珍 申請人:遼寧大學(xué)