專利名稱:用于汞離子檢測(cè)的dna電化學(xué)生物傳感器及其構(gòu)建方法
技術(shù)領(lǐng)域:
本發(fā)明涉及一種電化學(xué)生物傳感器,尤其是涉及一種用于汞離子檢測(cè)的DNA電化學(xué)生物傳感器及其構(gòu)建方法。
背景技術(shù):
生物傳感器是是發(fā)展生物技術(shù)必不可少的一種先進(jìn)的檢測(cè)方法與監(jiān)控方法,也是物質(zhì)分子水平的快速、微量分析方法。電化學(xué)生物傳感器具有快速、簡(jiǎn)便、靈敏和價(jià)廉等優(yōu)點(diǎn),在環(huán)境監(jiān)測(cè)、臨床檢驗(yàn)、食品和藥物分析、生化分析等研究中有著廣泛的應(yīng)用前景。自從 Hg2+介導(dǎo)的胸腺嘧啶(T)錯(cuò)配被發(fā)現(xiàn)后,不斷地涌現(xiàn)出各種基于DNA的檢測(cè)方法,并逐漸成為監(jiān)測(cè)Hg2+的主要方法。對(duì)于DNA電化學(xué)生物傳感器的制備及在其汞離子檢測(cè)中的應(yīng)用進(jìn)行研究,目的是為了進(jìn)一步提高對(duì)重要生命物質(zhì)DNA的認(rèn)識(shí)和利用能力。過(guò)氧化氫含有三價(jià)鐵離子,具有電化學(xué)活性,在電極表面會(huì)發(fā)生氧化還原反應(yīng),過(guò)氧化氫上的三價(jià)鐵離子在電極表面被還原成二價(jià)鐵離子,產(chǎn)生電化學(xué)信號(hào)。循環(huán)伏安法、差分脈沖伏安法是電化學(xué)分析中的常用方法。循環(huán)伏安法是改變電位以得到氧化還原電流方向的電化學(xué)分析方法,主要是以施加一循環(huán)電位的方式來(lái)進(jìn)行,從一起始電位以固定速率施加到一終點(diǎn)電位,再以相同速率改變回起始電位,此為一個(gè)循環(huán),并記錄電流-電勢(shì)曲線。當(dāng)某物質(zhì)具有電化學(xué)活性時(shí),會(huì)出現(xiàn)氧化峰和還原峰,當(dāng)從低電位往高電位掃描時(shí),會(huì)使分析物產(chǎn)生一氧化電流的氧化峰,當(dāng)從高電位往低電位掃描時(shí),則產(chǎn)生一還原電流的還原峰。對(duì)于一個(gè)新的電化學(xué)體系,首選的研究方法往往就是循環(huán)伏安法,可稱之為“電化學(xué)的譜圖”,常用于電極反應(yīng)的性質(zhì)、機(jī)理和電極過(guò)程動(dòng)力學(xué)參數(shù)的研究。差分脈沖伏安法是在一個(gè)線性變化的掃描電壓上, 施加一等振幅的脈沖,所測(cè)定的是施加脈沖振幅前后的電流差A(yù)i,記錄的曲線只有氧化峰或還原峰,同樣,當(dāng)從低電位往高電位掃描時(shí),會(huì)使分析物產(chǎn)生一氧化電流的氧化峰,當(dāng)從高電位往低電位掃描時(shí),則產(chǎn)生一還原電流的還原峰。差分脈沖伏安法靈敏度好、分辨率高,具有很好的檢測(cè)能力,常被用來(lái)定量分析。中國(guó)專利CN101846648A公開一種石墨烯量子點(diǎn)修飾的電化學(xué)生物傳感器及其制備方法。該電化學(xué)生物傳感器為三電極體系傳感器,所述的三電極中的對(duì)電極是鉬電極,參比電極是飽和甘汞電極,工作電極為表面包覆有I 4層石墨烯量子點(diǎn)的玻碳電極。該發(fā)明的石墨烯量子點(diǎn)修飾的電化學(xué)生物傳感器能成功識(shí)別最低濃度為50nM的目標(biāo)單鏈DNA 的電化學(xué)生物傳感器,當(dāng)有目標(biāo)單鏈DNA時(shí),取等量互補(bǔ)單鏈DNA與其形成雙鏈DNA,其電化學(xué)信號(hào)與僅有互補(bǔ)單鏈DNA有明顯差別,便能起到快速檢測(cè)目標(biāo)單鏈DNA的作用。而且該段單鏈DNA不需巰基或熒光基團(tuán)修飾,應(yīng)用方便。該發(fā)明所檢測(cè)的單鏈DNA是一段任意序列的核酸,理論上,該發(fā)明適用于不能形成內(nèi)部雙鏈的任意單鏈核酸序列,因此,將其置換成跟疾病相關(guān)的特異序列基因,即可用于疾病相關(guān)的基因檢測(cè),應(yīng)用前景廣泛。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種簡(jiǎn)便的、廉價(jià)的用于汞離子檢測(cè)的DNA電化學(xué)生物傳感器及其構(gòu)建方法,可通過(guò)汞離子特異性地與探針DNA結(jié)合引起的電化學(xué)信號(hào)變化達(dá)到能夠特異性地檢測(cè)水溶液中的汞離子檢測(cè)水溶液中汞離子的目的。所述用于汞離子檢測(cè)的DNA電化學(xué)生物傳感器是利用DNA分子中的巰基和金盤電極的表面形成穩(wěn)定的Au-S鍵,將DNA分子自組裝到金盤電極的表面,然后利用汞離子與DNA 分子中的胸腺嘧啶(T)特異性結(jié)合,特異性檢測(cè)水溶液中的汞離子。所述用于汞離子檢測(cè)的DNA電化學(xué)生物傳感器設(shè)有金盤電極和信號(hào)劑,在金盤電極表面自組裝單鏈DNA分子層,所述單鏈DNA分子層作為探針,每條探針序列均為5’ -(T) η-3’,η > 5,5’端修飾有巰基;所述信號(hào)劑為過(guò)氧化氫溶液。所述金盤電極的直徑可為2mm。所述用于汞離子檢測(cè)的DNA電化學(xué)生物傳感器的構(gòu)建方法包括以下步驟I)將金盤電極進(jìn)行清洗,吹干;2)在離心管中加入巰基化DNA,將步驟I)吹干后的金盤電極插入離心管中孵育, 巰基修飾的DNA便可通過(guò)Au-S鍵固定在金電極表面;3)將固定DNA探針的金盤電極浸入巰基己醇中,室溫下孵育后,得到排列整齊的 DNA探針,即用于汞離子檢測(cè)的DNA電化學(xué)生物傳感器。在步驟I)中,所述金盤電極的直徑可為2_,所述清洗可將金盤電極依次進(jìn)行拋光、超聲和電化學(xué)清洗,然后用純水清洗;所述吹干可采用氮?dú)獯蹈?。在步驟2)中,所述巰基化DNA可采用200 μ L濃度為I 10 μ M的巰基化DNA ;所述孵育可放置4 °C冰箱孵育。在步驟3)中,所述巰基己醇可采用ImM巰基己醇;所述室溫下孵育的時(shí)間可為 Ih0本發(fā)明構(gòu)建的DNA電化學(xué)傳感器有以下優(yōu)勢(shì)I)所構(gòu)建的用于汞離子檢測(cè)的DNA電化學(xué)生物傳感器在不需進(jìn)行電化學(xué)標(biāo)記且檢測(cè)時(shí)間和成本較少的條件下,獲得了較高的靈敏性,檢測(cè)下限達(dá)50nM。2)所構(gòu)建的用于汞離子檢測(cè)的DNA電化學(xué)生物傳感器在多種其他金屬離子與汞離子同時(shí)存在的條件下仍能特異性地檢測(cè)汞離子,具有良好的選擇性。3)所構(gòu)建的用于汞離子檢測(cè)的DNA電化學(xué)生物傳感器在對(duì)海水等實(shí)際樣品的檢測(cè)中不受其中干擾物質(zhì)的影響,對(duì)汞離子具有良好的回收率(104. 55% 105. 72% )。4)所構(gòu)建的用于汞離子檢測(cè)的DNA電化學(xué)生物傳感器在不同時(shí)期(O天、2天和7 天)對(duì)汞離子均能保持較好的靈敏性,具有良好的重現(xiàn)性和較高的穩(wěn)定性。
圖I為本發(fā)明所述用于汞離子檢測(cè)的DNA電化學(xué)生物傳感器檢測(cè)汞離子的示意圖。由圖I可見,單鏈DNA通過(guò)巰基連接在電極上時(shí)呈無(wú)規(guī)卷曲狀排列,經(jīng)巰基己醇(MCH) 處理后得到排列整齊的單鏈DNA。若不存在汞離子或銀離子,排列整齊的單鏈DNA能夠有效地阻止水溶液中過(guò)氧化氫在電極表面發(fā)生電子轉(zhuǎn)移;然而當(dāng)水溶液中存在汞離子或銀離子時(shí),對(duì)應(yīng)的傳感器電極表面單鏈DNA轉(zhuǎn)變成雙鏈DNA,自組裝形成的單分子層出現(xiàn)空隙,導(dǎo)致過(guò)氧化氫能夠接觸到電極表面而產(chǎn)生電化學(xué)信號(hào)。圖2為T5/MCH修飾電極與5μΜ汞離子反應(yīng)Ih前后的循環(huán)伏安圖。結(jié)果顯示當(dāng)溶液中不存在汞離子時(shí),循環(huán)伏安電流較弱,在-O. 4V電位上的電流僅為-O. 303μ??; 而當(dāng)溶液中存在5μ M的汞離子時(shí),循環(huán)伏安電流增大了 13倍,在-O. 4V電位上的電流達(dá)到-3. 98 μ Α。表明汞離子的存在導(dǎo)致電極表面DNA結(jié)構(gòu)改變,使過(guò)氧化氫能夠接觸到金電極表面產(chǎn)生電子轉(zhuǎn)移。圖2中橫坐標(biāo)為循環(huán)電位E vs(Ag/AgCl) (V),縱坐標(biāo)為循環(huán)電流 I ( μ A),點(diǎn)線為T5/MCH修飾電極與5 μ M汞離子反應(yīng)前,實(shí)線為T5/MCH修飾電極與5 μ M汞離子反應(yīng)Ih后。圖3為T5/MCH修飾電極在不同掃描電位范圍內(nèi)與2 μ M汞離子反應(yīng)前后的循環(huán)伏安圖。結(jié)果顯示T5/MCH修飾電極在不同掃描電位范圍內(nèi)與2μΜ汞離子反應(yīng)前電流信號(hào)很弱,與2 μ M萊離子反應(yīng)后電流信號(hào)明顯增強(qiáng);圖3中橫坐標(biāo)為循環(huán)電位E vs (Ag/AgCl) (V),縱坐標(biāo)為循環(huán)電流I ( μ A)。點(diǎn)線表示T5/MCH修飾電極在不同掃描電位范圍內(nèi)與2 μ M 汞離子反應(yīng)前的循環(huán)伏安圖;實(shí)線表示T5/MCH修飾電極在不同掃描電位范圍內(nèi)與2 μ M汞尚子反應(yīng)Ih后的循環(huán)伏安圖。圖4為在不同電位上傳感器與汞離子反應(yīng)前后的電流變化值(I-IciVIci :1。為反應(yīng)前的電流值,I為反應(yīng)后的電流值。結(jié)果顯示= (I-Itl)Acl值隨著掃描電位的增加出現(xiàn)先增大后減小,掃描范圍在O. I -O. 4V時(shí)達(dá)到最高值,為7. 39±0. 13。圖4中橫坐標(biāo)為循環(huán)電位E vs (Ag/AgCl) (V),縱坐標(biāo)為與汞離子反應(yīng)前后的電流變化值(I-IJ/I。。圖5為T5修飾電極和T5/MCH修飾電極與2 μ M汞離子反應(yīng)不同時(shí)間后的電流變化值(I-IciVIci, I0和I分別為反應(yīng)前和反應(yīng)后-O. 4V電位上的電流值。結(jié)果顯示τ5修飾電極隨著反應(yīng)時(shí)間的增加,電流變化不明顯,即使反應(yīng)SOmin后電流變化值(I-Itl)Atl也僅為 1.51±0. 15。修飾電極出現(xiàn)大幅增加,在反應(yīng)80min后電流變化值為
6.71±0. 19。表明無(wú)MCH修飾的電極,排列紊亂的單鏈DNA探針不能有效地阻止過(guò)氧化氫的電子轉(zhuǎn)移。因此構(gòu)建以過(guò)氧化氫為氧化還原指示劑的DNA生物傳感器必需用MCH處理。 圖5中橫坐標(biāo)為電極與2μ M汞離子反應(yīng)的時(shí)間t(min),縱坐標(biāo)為反應(yīng)前后的電流變化值 (I-I0)/I0^曲線a*T5修飾電極與2μΜ汞離子反應(yīng)不同時(shí)間后的電流變化值(I-IW曲線b為T5/MCH修飾電極與2 μ M汞離子反應(yīng)不同時(shí)間后的電流變化值(I-g/%。圖6ST5/MCH修飾電極與不同濃度汞離子反應(yīng)Ih后的循環(huán)伏安圖。結(jié)果顯示隨著汞離子濃度的增加,循環(huán)伏安電流逐漸增大。這是由于汞離子的濃度越大,金電極表面形成的雙鏈DNA越多,在DNA單分子層間出現(xiàn)更多的空隙,導(dǎo)致更多的過(guò)氧化氫能夠接觸金電極表面發(fā)生電子轉(zhuǎn)移而產(chǎn)生電化學(xué)信號(hào)。圖6中橫坐標(biāo)為循環(huán)電位E vs (Ag/AgCl) (V),縱坐標(biāo)為循環(huán)電流I ( μ A),圖中曲線由上至下依次表示T5/MCH修飾電極與汞離子濃度為0, O. 05,0. 2,0. 5,1,2 和 3μΜ。圖7為汞離子的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖,顯示汞離子濃度在O I μΜ的范圍內(nèi)具有很好的線性關(guān)系y = -I. 2814x-0. 3197 (R2 = O. 9984),且檢測(cè)極限達(dá)到20nM。圖7中橫坐標(biāo)為汞離子濃度C ( μ M),縱坐標(biāo)為循環(huán)電流I ( μ Α)。圖8為T5/MCH修飾電極與不同離子反應(yīng)后于-O. 4V電位上電流值的對(duì)比圖。結(jié)果顯示,其它各種金屬離子如 Na+,K+,Li+,Ca2+,Mg2+,Co2+,Cd2+,Ni2+,Ba2+,Cu2+ 和 Mn2+ 等所產(chǎn)生的循環(huán)伏安電流值都很微弱,而汞離子即使在含有其它金屬離子的條件下均能產(chǎn)生強(qiáng)的電流。表明汞離子能夠與兩個(gè)T堿基特異地結(jié)合形成T-Hg2+-T復(fù)合物,而其它金屬離子均無(wú)此特性,因此此種DNA電化學(xué)生物傳感器具有較好的選擇性。圖8中左起第一個(gè)柱子代表5 μ M Hg2+,第二個(gè)柱子代表5 μ M Hg2+與其它所有離子(各ImM)的混合液。圖9為T5/MCH修飾電極在O天、2天和7天與O. I μ M汞離子反應(yīng)前后的還原峰電流變化值(I-Ic1)Ac1=Ic1為反應(yīng)前的電流值,I為反應(yīng)后的電流值。結(jié)果顯示,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差 (RSDs) < 6%,表明此種傳感器具有較好的重現(xiàn)性。通過(guò)SPSS軟件分別對(duì)O天與2天、O天與7天兩組進(jìn)行T檢驗(yàn)分析,顯示P值均大于O. 5,表明本研究設(shè)計(jì)的DNA電化學(xué)生物傳感器具有聞的穩(wěn)定性。圖10為所構(gòu)建的用于汞離子檢測(cè)的DNA電化學(xué)生物傳感器結(jié)構(gòu)組成,分別由直徑為2_的金盤電極和自組裝在金盤電極表面作為探針的單鏈DNA分子層,每條探針序列均為5’ _(Τ)η_3’,η彡5,5’端修飾有巰基。表I為自來(lái)水、湖水和海水三個(gè)實(shí)際樣品中Hg2+的檢測(cè)結(jié)果。在實(shí)際樣品中檢測(cè) Hg2+具有較好的回收率(104. 55% 105. 72%)。表明實(shí)際樣品中的干擾因素幾乎可以忽略,證實(shí)了此種傳感器能夠用于實(shí)際樣品中汞離子的檢測(cè)。表I實(shí)際樣品中汞離子的檢測(cè)
樣品a標(biāo)準(zhǔn)加入量測(cè)定值bRSD (%)c回收率(%)自來(lái)水0.10.10574.28105.72海水0.20.21145.91105.68湖水0.30.31363.11104.55a所有的水樣品來(lái)自中國(guó)廈門,b平均值(n = 3),c相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(η = 3)。
具體實(shí)施例方式I)將直徑為2_的金盤電極依次進(jìn)行拋光、超聲和電化學(xué)清洗,然后用純水清洗, 氮?dú)獯蹈伞?)取2mL的離心管,加入200 μ L濃度為I 10 μ M的巰基化DNA,將處理好的金電極插入離心管中,放置4°C冰箱孵育,巰基修飾的DNA便可通過(guò)Au-S鍵固定在金電極表面。3)將固定DNA探針的金電極浸入ImM巰基己醇中,常溫(25°C )下孵育lh,得到排列整齊的DNA探針如圖I所示。4)將電極浸入 Tris-HCl 緩沖液,分別在 O. 2 -O. IV,O. I _0.2V、0. I -0.3V、
O.I -O. 4V、0. I -O. 5V和O. I -O. 6V的電位區(qū)間以O(shè). lV/s的掃描速度進(jìn)行掃描,獲得電極與汞離子反應(yīng)前的循環(huán)伏安曲線。之后將電極浸在含I 5 μ M的汞離子的TriS-HCl緩沖液中反應(yīng)lh,之后取出,重新于Tris-HCl緩沖液中,在O. 2 -O. IV、
O.I -O. 2V、0. I -O. 3V、0. I -O. 4V、0. I -O. 5V 和 O. I -O. 6V 的電位區(qū)間以O(shè). 1V/S的掃描速度進(jìn)行掃描,獲得電極與汞離子反應(yīng)后的循環(huán)伏安曲線。分別取-O. IV、-O. 2V、-O. 3V、-O. 4V、-O. 5V 和-O. 6V 電位上的電流值作圖(圖 4)。5)將T5修飾電極和T5/MCH修飾電極浸在含I 5 μ M的汞離子的Tris-HCl緩沖液中反應(yīng)不同時(shí)間(O 48min),之后取出,于Tris-HCl緩沖液中,在-O. 4 O. IV的電位區(qū)間進(jìn)行掃描,獲得電極與汞離子反應(yīng)不同時(shí)間后的電流變化值(Ι-Ιο)/Ι。=I0為反應(yīng)前的電流值,I為反應(yīng)后的電流值(如圖5所示)。6)將電極分別浸在含不同濃度汞離子的Tris-HCl緩沖液中反應(yīng)lh,之后取出,于 Tris-HCl緩沖液中,在-O. 4 O. IV的電位區(qū)間進(jìn)行掃描,獲得圖6所示的電極與不同濃度汞離子反應(yīng)Ih后的循環(huán)伏安曲線。圖7為取-O. 4V電位對(duì)應(yīng)的電流對(duì)汞離子濃度做標(biāo)準(zhǔn)曲線。7)將電極分別浸在含 1-5 μ M 萊離子和 I 5μΜ Na+, K., Li+, Ca2+, Mg2+, Co2+, Cd2+, Ni2+,Ba2+,Cu2+和Mn2+的Tris-HCl緩沖液以及同時(shí)含有這些金屬離子與汞離子的Tris-HCl 緩沖液中反應(yīng)lh,之后取出,于含I 5mM過(guò)氧化氫的Tris-HCl緩沖液中,在-O. 4 O. IV 的電位區(qū)間進(jìn)行掃描,-O. 4V電位上的電流值作得圖8所示的柱狀圖。11)各取5mL自來(lái)水、湖水與海水樣品,向其中分別加入O. I μ M、0. 2 μ M和O. 3 μ M 汞離子,之后將修飾后的電極分別浸入三種樣品反應(yīng)lh,取出于含I 5mM過(guò)氧化氫的 Tris-HCl緩沖液中,在-O. 5 OV的電位區(qū)間進(jìn)行掃描,根據(jù)還原峰電流計(jì)算樣品中汞離子含量,與實(shí)際加入量對(duì)比,計(jì)算RSD和回收率,所得結(jié)果列于表I中。12)將修飾好的電極分別在4°C下放置O天、2天和7天后浸入含I 5 μ M汞離子的Tris-HCl緩沖液,在-O. 4 O. IV的電位區(qū)間進(jìn)行掃描,測(cè)其還原峰電流并計(jì)算電流變化值(I-Itl)/%,對(duì)O天、2天與7天作得圖9所示的柱狀圖。通過(guò)SPSS軟件分別對(duì)O天與 2天、O天與7天兩組進(jìn)行T檢驗(yàn)分析。
權(quán)利要求
1.用于汞離子檢測(cè)的DNA電化學(xué)生物傳感器,其特征在于設(shè)有金盤電極和信號(hào)劑,在金盤電極表面自組裝單鏈DNA分子層,所述單鏈DNA分子層作為探針,每條探針序列均為 5’ _(Τ)η_3’,η > 5,5’端修飾有巰基;所述信號(hào)劑為過(guò)氧化氫溶液。
2.如權(quán)利要求I所述的用于汞離子檢測(cè)的DNA電化學(xué)生物傳感器,其特征在于所述金盤電極的直徑為2mm。
3.如權(quán)利要求I所述的用于汞離子檢測(cè)的DNA電化學(xué)生物傳感器的構(gòu)建方法,其特征在于包括以下步驟1)將金盤電極進(jìn)行清洗,吹干;2)在離心管中加入巰基化DNA,將步驟I)吹干后的金盤電極插入離心管中孵育,巰基修飾的DNA便可通過(guò)Au-S鍵固定在金電極表面;3)將固定DNA探針的金盤電極浸入巰基己醇中,室溫下孵育后,得到排列整齊的DNA探針,即用于汞離子檢測(cè)的DNA電化學(xué)生物傳感器。
4.如權(quán)利要求3所述的用于汞離子檢測(cè)的DNA電化學(xué)生物傳感器的構(gòu)建方法,其特征在于在步驟I)中,所述清洗是將金盤電極依次進(jìn)行拋光、超聲和電化學(xué)清洗,然后用純水清洗。
5.如權(quán)利要求3所述的用于汞離子檢測(cè)的DNA電化學(xué)生物傳感器的構(gòu)建方法,其特征在于在步驟I)中,所述吹干是采用氮?dú)獯蹈伞?br>
6.如權(quán)利要求3所述的用于汞離子檢測(cè)的DNA電化學(xué)生物傳感器的構(gòu)建方法,其特征在于在步驟2)中,所述巰基化DNA是采用200 μ L濃度為I 10 μ M的巰基化DNA。
7.如權(quán)利要求3所述的用于汞離子檢測(cè)的DNA電化學(xué)生物傳感器的構(gòu)建方法,其特征在于在步驟2)中,所述孵育是放置4°C冰箱孵育。
8.如權(quán)利要求3所述的用于汞離子檢測(cè)的DNA電化學(xué)生物傳感器的構(gòu)建方法,其特征在于在步驟3)中,所述巰基己醇采用ImM巰基己醇。
9.如權(quán)利要求3所述的用于汞離子檢測(cè)的DNA電化學(xué)生物傳感器的構(gòu)建方法,其特征在于在步驟3)中,所述室溫下孵育的時(shí)間為lh。
全文摘要
用于汞離子檢測(cè)的DNA電化學(xué)生物傳感器及其構(gòu)建方法,涉及一種電化學(xué)生物傳感器。傳感器設(shè)有金盤電極和信號(hào)劑,在金盤電極表面自組裝單鏈DNA分子層,所述單鏈DNA分子層作為探針,每條探針序列均為5’-(T)n-3’,n≥5,5’端修飾有巰基;所述信號(hào)劑為過(guò)氧化氫溶液。將金盤電極進(jìn)行清洗,吹干;在離心管中加入巰基化DNA,將吹干后的金盤電極插入離心管中孵育,巰基修飾的DNA便可通過(guò)Au-S鍵固定在金電極表面;將固定DNA探針的金盤電極浸入巰基己醇中,室溫下孵育后,得到排列整齊的DNA探針,即用于汞離子檢測(cè)的DNA電化學(xué)生物傳感器。
文檔編號(hào)G01N27/327GK102608179SQ20121006621
公開日2012年7月25日 申請(qǐng)日期2012年3月14日 優(yōu)先權(quán)日2012年3月14日
發(fā)明者孫莉萍, 胡楠, 賈靜, 賴友群 申請(qǐng)人:廈門大學(xué)