一種檢測(cè)食品中鄰苯二甲酸酯的方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種檢測(cè)食品中鄰苯二甲酸酯（PAEs）的新方法，本發(fā)明的特點(diǎn)在于：（1）采用適量有機(jī)溶劑作為食品樣品中PAEs的萃取劑；（2）用液液微萃取技術(shù)對(duì)食品樣品的提取液進(jìn)行萃?。唬?）通過HPLC進(jìn)行測(cè)定，對(duì)照PAEs的工作曲線判斷PAEs的含量。與現(xiàn)有的檢測(cè)技術(shù)相比，本發(fā)明的方法優(yōu)勢(shì)在于：操作簡(jiǎn)單；綠色環(huán)保；成本低廉；準(zhǔn)確度高；重現(xiàn)性好；檢測(cè)時(shí)間短。適用于食品安全檢測(cè)，具有廣泛的應(yīng)用潛力和廣闊的市場(chǎng)前景。
【專利說明】—種檢測(cè)食品中鄰苯二甲酸酯的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]發(fā)明屬于分析化學(xué)領(lǐng)域，更具體涉及一種食品中鄰苯二甲酸酯的檢測(cè)方法。
【背景技術(shù)】
[0002]塑化劑又稱增塑劑，為鄰苯二甲酸酯類(PAEs)化合物，因增大產(chǎn)品的可塑性和柔韌性而廣泛地應(yīng)用于日常生活中，在潤(rùn)滑劑、驅(qū)蟲劑、化妝品、去泡劑、食品包裝材料、醫(yī)療用具、人造革等生產(chǎn)中都有使用。它具有種類多，難以降解等特點(diǎn)，對(duì)人體、生物體、植物體都有較大的毒性，最主要的表現(xiàn)其對(duì)生殖系統(tǒng)危害和對(duì)嬰兒的致畸性，并有極強(qiáng)的致癌性和免疫抑制性，成為全球性最普遍的污染物之一。在塑料制品中，由于鄰苯二甲酸酯與聚烯烴類塑料分子是相溶的，兩者間并沒有嚴(yán)格的化學(xué)結(jié)合鍵，因此在使用過程中，鄰苯二甲酸酯很容易從塑料中遷移到外環(huán)境，造成對(duì)食品、土壤、水和空氣的污染。由于塑料制品使用方便，在日常生活被廣泛的用來盛裝食品，如各種塑料盒、塑料袋及塑料罐等食品容器等往往都含有PAEs，而PAEs又很容易從塑料中溶出，所以日常生活中喝的水、飲料、吃的蔬菜、水果、畜產(chǎn)品、甚至是熟食的包裝袋都可能含有PAEs。基于上述原因，PAEs污染已受到全世界的高度重視。美國(guó)、日本以及歐洲許多國(guó)家都將PAEs列入優(yōu)先監(jiān)測(cè)的黑名單，美國(guó)環(huán)保局129種重點(diǎn)控制的污染物黑名單中列入了 6種鄰苯二甲酸酯。因此，尋找一種簡(jiǎn)便、快速、精確的檢測(cè)食品中PAEs的方法是非常必要，也是勢(shì)在必行的。
[0003]國(guó)內(nèi)外對(duì)食品中檢測(cè)的報(bào)道較多，基本以氣相色譜檢測(cè)為主，以液相色譜為輔，另外還有一些使用熒光分光光度法檢測(cè)。這些檢測(cè)方法一般都結(jié)合了一些樣品前處理技術(shù)，目前主要采用的有液液萃取(LLE)、濁點(diǎn)萃取(CPE)、固相萃取(SPE)和固相微萃取(SPME)。這些方法在萃取PAEs上或多或少都有自己的缺點(diǎn)。本發(fā)明采用的長(zhǎng)鏈脂肪酸或者長(zhǎng)鏈醇類作為萃取劑進(jìn)行微萃取是一種綠色的樣品前處理技術(shù)，具有萃取率高，綠色環(huán)保等優(yōu)點(diǎn)，與色譜技術(shù)連用能達(dá)到較低的檢出限，得到較好的效果。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的就是針對(duì)現(xiàn)有檢測(cè)PAEs的方法所存在的弊端，研究出一種食品中的PAEs經(jīng)過液液微萃取以后，然后進(jìn)行HPLC分析的方法，該方法快速簡(jiǎn)便、成本低廉、準(zhǔn)確性高、重現(xiàn)性好的適用于食品中PAEs的檢測(cè)方法。
[0005]
本發(fā)明的目的是通過以下方案來實(shí)現(xiàn)的:
(I)工作曲線的繪制:在10ng/mL-1000ng/mL范圍配置不同濃度梯度的混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，按照確定的最佳檢測(cè)條件，以峰面積為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)制作標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，測(cè)定PAEs的回歸方程、相關(guān)系數(shù)、相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差和回收率。
[0006](2)樣品處理
①固體樣品(面包、餅干等)
稱取2.00-5.0Og固體樣品,粉碎后放于潔凈錐形瓶中，向錐形瓶中加入3-6mL無(wú)水乙醇、2-4mL丙酮,然后振搖5-10min后,將萃取液用普通漏斗過濾,將濾液移至容量瓶中用蒸餾水稀釋至25mL，制得樣品提取液。
[0007]②牛奶樣品
取5-10mL牛奶樣品于IOmL離心管中，加入0.1-0.2g乙酸鈉、0.4-0.8g硫酸鎂和0.5-1.0mL乙腈,在3000_6000r/minl離心5_10min沉淀蛋白質(zhì),上清液轉(zhuǎn)移至另一只離心管中，重復(fù)上述的操作，取上清液用0.5%的磷酸二氫鉀緩沖溶液(pH=6.0)稀釋至5mL,然后移至25mL定容瓶中定容,制得樣品提取液。
[0008]③食用油
取食用油5-10mL于潔凈分液漏斗中，向分液漏斗中加入l_2mL無(wú)水甲醇和l_2mL乙腈，振搖，靜置分層，取出上清液，萃取兩次，合并上清液，然后移至25mL容量瓶中定容，制得樣品提取液。
[0009]④果汁樣品
取果汁樣品5-10mL使用普通漏斗過濾，濾液移至25mL容量瓶中定容，制得樣品提
取液。。
[0010](3)取適量樣品提取液于具塞試管中，用緩沖溶液調(diào)pH，然后加入適量?jī)尚匀軇┖烷L(zhǎng)鏈脂肪酸或長(zhǎng)鏈脂肪醇，渦旋，離心， 移除下層溶液，取上層溶液用甲醇稀釋，取適量甲醇溶液進(jìn)液相色譜分析，對(duì)照工作曲線判斷PAEs的含量。
[0011]所述長(zhǎng)鏈脂肪酸或長(zhǎng)鏈脂肪醇為:正癸酸、正己酸、正壬酸、正辛酸、正庚酸、正丁醇、正辛醇、正己醇、正癸醇之一種。
[0012]所述緩沖溶液為pH=8.0磷酸緩沖溶液,將樣品調(diào)至7.0-8.0。
[0013]所述長(zhǎng)鏈脂肪酸或長(zhǎng)鏈脂肪醇萃取劑體積為0.1-1.0mL。
[0014]所述渦旋時(shí)間為l_3min，離心轉(zhuǎn)速2500-5000 r/min時(shí)間為5 -1Omin0
[0015]所述萃取溶液用甲醇稀釋至1.0mL。
[0016]所述色譜條件為:采用的設(shè)備為高效液相色譜儀,流動(dòng)相:乙腈:水(O-1Omin:55%-80 乙臆;10min_12min:80%-100% 乙臆;12min_20min: 100% 乙臆；v/v);流速 1.0 mL/min ;檢測(cè)波長(zhǎng):225nm。
[0017]
本發(fā)明的特點(diǎn)以及與現(xiàn)有技術(shù)相比所具有的優(yōu)點(diǎn):
1.本方法選擇長(zhǎng)鏈脂肪酸和長(zhǎng)鏈脂肪醇作為萃取劑萃取食品中的PAES，由于所選萃取劑只需通過渦旋即可產(chǎn)生乳化均相，之后離心又可分相完全，對(duì)PAEs有較高的萃取率，萃取劑用量少，達(dá)到了分散液液微萃取的效果，而又沒有加入分散劑，對(duì)環(huán)境友好。該檢測(cè)具有較高的靈敏度，能達(dá)到較低的檢出限。
[0018]2.操作簡(jiǎn)單，不需加熱，所需時(shí)間短，只用到渦旋器、小型離心機(jī)進(jìn)行樣品前處理，一般實(shí)驗(yàn)室都能進(jìn)行。
[0019]3.本方法適用范圍廣，可用于一般食品中PAEs的檢測(cè)，并可用于相關(guān)部門的檢測(cè)。
【具體實(shí)施方式】
[0020]下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步地說明，但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不限于此。[0021]具體實(shí)施例1
牛奶中PAEs的含量檢測(cè)方法，包括以下步驟:(I)工作曲線的繪制:將DBEP、DMEP, BBP, DBP、DNOP, DCHP 100 μ g/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液用甲醇分別稀釋成0.1 μ g/mL、0.5 μ g/mL、1.0 μ g/mL、5.0 μ g/mL、10.0 μ g/mL、20.0 μ g/mL、40.0 μ g/mL,然后在下面的色譜條件下進(jìn)樣:C18柱(150 mmX4.6 mm, 1.d, 5 μ m);進(jìn)樣量:20 μ L ;流動(dòng)相:乙腈:水(O-1Omin:55%-80 乙臆;10min_12min:80%-100% 乙臆;12min_20min: 100% 乙臆；v/v);流速1.0 mL/min ;檢測(cè)波長(zhǎng):225 nm?；貧w方程、相關(guān)系數(shù)、相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差、回收率等見表1 ;
(2)樣品處理:取5mL牛奶樣品于IOmL離心管中，加入0.1g乙酸鈉，在6000r/minl離心6min沉淀蛋白質(zhì)，上清溶液轉(zhuǎn)移至另一只離心管中，重復(fù)上述的操作，取上清溶液用0.5%的磷酸二氫鉀緩沖溶液(pH=6.0)稀釋至5mL，然后移至25mL定容瓶中定容，制得樣品提取液；(3)取5mL牛奶樣品提取液，用pH =8.0的磷酸緩沖液調(diào)節(jié)pH至8，取0.5mL正己酸加入離心管，渦旋lmin，然后在5000 r/min離心5 min，用吸管移除下層溶液，取上層有機(jī)相0.4 mL用甲醇溶解至1.0 mL。取所得甲醇溶液20yL，與測(cè)定工作曲線相同的色譜條件，得到相應(yīng)峰面積，代入表1工作曲線，求得牛奶中PAEs的含量:、DMEP、BBP、DBP、DCHP分別為
0.01、0.07、0.10、0.09M<g /mL。
[0022]表1 PAEs的線性方程
【權(quán)利要求】
1.一種檢測(cè)食品中鄰苯二甲酸酯的方法，包括以下步驟: (I)工作曲線的繪制:在10ng/mL-1000ng/mL范圍配置不同濃度梯度的PAEs標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，按照確定的最佳檢測(cè)條件，以峰面積為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)制作標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，測(cè)定PAEs的回歸方程、相關(guān)系數(shù)、相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差和回收率。
2.(2)樣品處理 ①固體樣品(面包、餅干等)
稱取2.00-5.0Og固體樣品,粉碎后放于潔凈錐形瓶中，向錐形瓶中加入3-6mL無(wú)水乙醇、2-4mL丙酮,然后振搖5-10min后,將萃取液用普通漏斗過濾,將濾液移至容量瓶中用蒸餾水稀釋至25mL，制得樣品提取液。
3.②牛奶樣品
取5-10mL牛奶樣品于IOmL離心管中，加入0.1-0.2g乙酸鈉、0.4-0.8g硫酸鎂或0.5-1.0mL乙腈中一種,在3000-6000r/minl離心5_10min沉淀蛋白質(zhì),上清溶液轉(zhuǎn)移至另一只離心管中，重復(fù)上述的操作，取上清溶液用0.5%的磷酸二氫鉀緩沖溶液(pH=6.0)稀釋至5mL,然后移至25mL定容瓶中定容,制得樣品提取液。
4.③食用油
取食用油5-10mL于潔凈分液漏斗中，向分液漏斗中加入l_2mL無(wú)水甲醇和l_2mL乙腈，振搖，靜置分層，取出上清液，萃取兩次，合并上清液，然后移至25mL容量瓶中定容，制得樣品提取液。
5.④果汁樣品
取果汁樣品5-10mL使用普通漏斗過濾，濾液移至25mL容量瓶中定容，制得樣品提取液。
6.(3)取適量樣品提取液于具塞試管中，用緩沖溶液調(diào)pH，加入適量長(zhǎng)鏈脂肪酸或長(zhǎng)鏈脂肪醇，渦旋，離心，移除下層溶液，取上層溶液用甲醇稀釋，取適量甲醇溶液進(jìn)液相色譜分析，對(duì)照工作曲線判斷PAEs的含量。
7.根據(jù)權(quán)利要求書1所述的一種檢測(cè)食品中PAEs的方法，其特征在于PAEs包括:鄰苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯(DBEP)、鄰苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯(DMEP)、鄰苯二甲酸丁基芐基酯(BBP)、鄰苯二甲酸二丁酯(DBP)、鄰苯二甲酸二正辛酯(DN0P)、鄰苯二甲酸二環(huán)己酯(DCHP)中一種或幾種。
8.根據(jù)權(quán)利要求書1所述的一種檢測(cè)食品中PAEs的方法，其特征在于長(zhǎng)鏈脂肪酸或長(zhǎng)鏈脂肪醇為:正癸酸、正己酸、正壬酸、正辛酸、正庚酸、正丁醇、正辛醇、正己醇、正癸醇之一種。
9.根據(jù)權(quán)利要求書1所述的一種檢測(cè)食品中PAEs的方法，其特征在于緩沖溶液為pH=8.0磷酸緩沖溶液，將樣品調(diào)至7.0-8.0。
10.根據(jù)權(quán)利要求書1所述的一種檢測(cè)食品中PAEs的方法，其特征在于加入的長(zhǎng)鏈脂肪酸或長(zhǎng)鏈脂肪醇體積為0.1-1.0mL。
11.根據(jù)權(quán)利要求書1所述的一種檢測(cè)食品中PAEs的方法，其特征在于渦旋時(shí)間為l-3min，離心轉(zhuǎn)速 2500-5000 r/min 時(shí)間為 5-10 min。
12.根據(jù)權(quán)利要求書1所述的一種檢測(cè)食品中PAEs的方法，其特征在于萃取溶液用甲醇稀釋至1.0-1.5mL。
13.根據(jù)權(quán)利要求書I所述的一種檢測(cè)食品中PAEs的方法，其特征在于色譜條件為:采用的設(shè)備為高效液相色譜儀，流動(dòng)相:乙腈:水(O-1Omin:55%-80乙腈；10min_12min:80%-100% 乙臆;12min_20m in:100% 乙臆；v/v);流速 1.0 mL/min ;檢測(cè)波長(zhǎng):225nm。
【文檔編號(hào)】G01N30/02GK103808814SQ201210453332
【公開日】2014年5月21日 申請(qǐng)日期:2012年11月13日 優(yōu)先權(quán)日:2012年11月13日
【發(fā)明者】楊亞玲, 廉源沛, 楊超 申請(qǐng)人:云南健牛生物科技有限公司