本發(fā)明涉及檢測肺癌組織的生物自熒光，具體是基于檢測肺部組織自熒光強(qiáng)度的減少，作為檢測肺癌組織的標(biāo)志的檢測方法及其應(yīng)用。

背景技術(shù)：

肺癌是世界范圍內(nèi)也是我國發(fā)病率和死亡率最高的惡性腫瘤，其具有惡性程度高、進(jìn)展快、療效差等特點(diǎn)。對(duì)于一個(gè)首次出現(xiàn)肺癌疑似癥狀的人，進(jìn)行一個(gè)胸片檢測能提示明顯的團(tuán)塊，縱隔膜擴(kuò)張，肺不張等問題。ct影像是可以提供更多的疾病信息。支氣管鏡檢以及ct常被用來提取腫瘤樣品用于組織病理學(xué)分析判斷。在胸片上，看到的肺部腫瘤一般是孤立性肺結(jié)節(jié)的形式。然而，由于許多其他疾病也有次特征，包括錯(cuò)構(gòu)瘤，傳染性肉芽瘤等。所以還需進(jìn)一步的診斷。對(duì)于肺癌，決定性的診斷是取疑似腫瘤的腫塊樣品，利用組織病理學(xué)的方法判定。臨床實(shí)踐指南建議定期對(duì)肺結(jié)節(jié)進(jìn)行檢查。但是ct由于其輻射危害，不建議高頻率或者長時(shí)間的使用。

目前臨床上使用ct影像技術(shù)可以檢測較早期的肺癌，如果腫瘤很小，5年存活率可以超過80％。但是主要的問題是，大部分人群沒有定期檢測肺癌的習(xí)慣。同時(shí)ct影像不便于人人檢測。而目前對(duì)于肺癌的檢測方法僅限于這些影像方法，以及咳嗽，呼吸困難,咳血,全身減肥和厭食等表觀粗略的判斷。對(duì)于患者很不方便，耗時(shí)相對(duì)較長而且價(jià)格較昂貴。

因此，發(fā)明一種新型、簡便、實(shí)時(shí)的肺癌檢測方法，具有重大的社會(huì)經(jīng)濟(jì)意義以及臨床價(jià)值。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明人的目的是突破現(xiàn)有技術(shù)的難題，提出一種可以用于活體實(shí)時(shí)檢測肺癌的新型檢測方法和應(yīng)用。

本發(fā)明發(fā)現(xiàn)肺癌患者的肺癌病灶區(qū)域的組織自熒光的光強(qiáng)度顯著低于癌旁以及正常肺部組織的自熒光，以此作為檢測肺部組織中哪些部分為肺癌組織。

本方法發(fā)現(xiàn)肺部組織特定波長自熒光的減少作為肺癌組織的標(biāo)志?；诒景l(fā)現(xiàn)，也可以建立在臨床上快速診斷肺癌組織位置和大小的檢測方法和儀器。

本發(fā)明的具體技術(shù)方案是：

一種基于肺部組織自熒光的減少作為檢測肺癌組織的標(biāo)志的檢測方法，包括以下步驟：

(1)被檢查人的肺部組織置于單光子400-700nm激發(fā)光或者雙光子700-1000nm激發(fā)光，以激發(fā)出該肺部組織的自熒光。

(2)檢測肺部組織樣本發(fā)出的波長在420-800nm范圍內(nèi)的自熒光強(qiáng)度；

(3)將步驟(1)的自熒光強(qiáng)度與其自身其他肺部部位的自熒光強(qiáng)度結(jié)果進(jìn)行對(duì)比

(4)將步驟(1)的自熒光強(qiáng)度與已知的肺癌患者、非肺癌人群的肺部組織自熒光強(qiáng)度結(jié)果進(jìn)行對(duì)比；

(5)根據(jù)上述對(duì)比結(jié)果，完成基于肺部組織自熒光強(qiáng)度作為檢測肺癌發(fā)病的生物標(biāo)志物的檢測方法。肺部組織所發(fā)出的波長為420-800nm自熒光光強(qiáng)度，與該組織是肺癌組織的可能性呈負(fù)相關(guān)關(guān)系：自熒光光強(qiáng)度較高的區(qū)域?yàn)檎＝M織，而自熒光光強(qiáng)度越低的部分是肺癌組織的可能性越大。

進(jìn)一步的，所述利用激發(fā)光激發(fā)肺部組織自熒光的方式包括使用普通的連續(xù)光輸出進(jìn)行激發(fā)的方式、使用電調(diào)制進(jìn)行調(diào)制激發(fā)的方式或者使用脈沖激光進(jìn)行激發(fā)的方式中的至少一種。

進(jìn)一步的，所述肺部組織可以活體直接檢測，也可以對(duì)離體樣本檢測。

進(jìn)一步的，本發(fā)明的檢測方法中，激發(fā)光的波長優(yōu)選為420-680nm的范圍內(nèi)，更優(yōu)選為460-643nm的范圍內(nèi)。

進(jìn)一步的本發(fā)明的檢測方法中，所檢測的自發(fā)熒光的波長優(yōu)選為440-750nm的范圍內(nèi)，更優(yōu)選為450-741nm的范圍內(nèi)。

本發(fā)明還提供了一種基于肺部組織自熒光水平的下降作為檢測肺癌組織的標(biāo)志的應(yīng)用。

本發(fā)明利用肺部組織自熒光強(qiáng)度，檢測肺癌患者肺癌發(fā)病以及肺癌組織區(qū)域，為臨床檢測肺癌疾病建立基礎(chǔ)，可以極大的降低肺癌檢測的時(shí)間，使醫(yī)生可以在手術(shù)時(shí)更準(zhǔn)確的判斷肺癌區(qū)域，同時(shí)比傳統(tǒng)染色的診斷方法更快高效的診斷肺癌組織，使病人可以得到及時(shí)治療。同時(shí)，本發(fā)明提供了檢測方法，作為一種簡化肺癌檢測方法。

附圖說明

圖1：激發(fā)光488nm激發(fā)樣本肺部組織自熒光，接受波長范圍500-530nm的接受光。自熒光改變圖。

圖2：激發(fā)光543.5nm激發(fā)樣本肺部組織自熒光，接受波長范圍553-618nm的接受光。自熒光改變圖。

圖3：雙光子激發(fā)光760nm激發(fā)樣本肺部組織自熒光，接受波長范圍500-550的接受光。自熒光改變圖。

圖4：雙光子激發(fā)光760nm激發(fā)樣本肺部組織自熒光，接受波長范圍640nm-700nm的接受光。自熒光改變圖。

具體實(shí)施方式

下面將通過具體描述，對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說明。

除非另有限定，本文中所使用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語具有與本發(fā)明所屬技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員通常理解相同的含義。

本發(fā)明中使用的術(shù)語“自熒光”，其含義為生物分子在受到適當(dāng)波長的激發(fā)光照射時(shí)，吸收激發(fā)光的能量進(jìn)入激發(fā)態(tài)，再退出激發(fā)態(tài)從而發(fā)射出比激發(fā)光波長更長的光的現(xiàn)象中，所述波長比激發(fā)光波長更長的光。

本發(fā)明中使用的術(shù)語“激發(fā)光”，其含義為能夠激發(fā)生物分子發(fā)生自發(fā)熒光現(xiàn)象的光，其波長應(yīng)比自發(fā)熒光短

發(fā)明人進(jìn)行了一系列實(shí)驗(yàn)，確定了肺部組織自熒光與肺癌發(fā)病之間的關(guān)系。

一、實(shí)驗(yàn)方法：

取肺癌病人或者非肺癌病人肺部組織，使用激光共聚焦顯微鏡對(duì)肺部組織樣本進(jìn)行實(shí)時(shí)成像。

二、實(shí)驗(yàn)結(jié)果和討論

圖1：激發(fā)光488nm激發(fā)樣本肺部組織自熒光，接受波長范圍500-530nm的接受光。肺癌病灶區(qū)域的自熒光顯著高于癌旁組織以及正常肺部組織。

圖2：激發(fā)光543.5nm激發(fā)樣本肺部組織自熒光，接受波長范圍553-618nm的接受光。肺癌病灶區(qū)域的自熒光顯著高于癌旁組織以及正常肺部組織。

圖3：雙光子激發(fā)光760nm激發(fā)樣本肺部組織自熒光，接受波長范圍500-550nm的接受光。肺癌病灶區(qū)域的自熒光顯著高于癌旁組織以及正常肺部組織。

圖4：雙光子激發(fā)光760nm激發(fā)樣本肺部組織自熒光，接受波長范圍640-700nm的接受光。肺癌病灶區(qū)域的自熒光顯著高于癌旁組織以及正常肺部組織。

由以上實(shí)驗(yàn)可以得出，肺癌病灶區(qū)域的自熒光顯著低于癌旁組織以及正常肺部組織。

本發(fā)明基于這一發(fā)現(xiàn)，建立了一種活體實(shí)時(shí)檢測肺癌的方法。方法包括以下步驟：

(1)對(duì)該肺部組織樣本置于波長在400-700nm范圍內(nèi)的激光下，以激發(fā)出肺部組織的自熒光。

(2)檢測肺部組織樣本發(fā)出的波長在420-800nm范圍內(nèi)的自熒光強(qiáng)度；

(3)將步驟(1)的自熒光強(qiáng)度與其自身其他肺部部位的自熒光強(qiáng)度結(jié)果進(jìn)行對(duì)比；

(4)將步驟(1)的自熒光強(qiáng)度與已知的肺癌患者、非肺癌人群的肺部組織自熒光強(qiáng)度結(jié)果進(jìn)行對(duì)比；

(5)根據(jù)上述對(duì)比結(jié)果，完成基于肺部組織自熒光強(qiáng)度作為檢測肺癌發(fā)病的生物標(biāo)志物的檢測方法。

本發(fā)明的利用激發(fā)光激發(fā)皮下自發(fā)熒光的方式包括使用普通的連續(xù)光輸出進(jìn)行激發(fā)的方式、使用電調(diào)制進(jìn)行調(diào)制激發(fā)的方式或者使用脈沖激光進(jìn)行激發(fā)的方式中的至少一種。

本發(fā)明的檢測方法中，激發(fā)光的波長優(yōu)選為420-680nm的范圍內(nèi)，更優(yōu)選為460-643nm的范圍內(nèi)。

本發(fā)明的檢測方法中，所檢測的自發(fā)熒光的波長優(yōu)選為440-750nm的范圍內(nèi)，更優(yōu)選為450-741nm的范圍內(nèi)。

本發(fā)明的活體實(shí)時(shí)檢肺癌的方法，根據(jù)肺部組織自熒光的變化程度與肺癌發(fā)病呈負(fù)相關(guān)的規(guī)律，檢測被實(shí)驗(yàn)對(duì)象的肺癌情況。

應(yīng)該理解的是，本發(fā)明的活體實(shí)時(shí)檢測肺癌的方法的實(shí)施并不依賴于檢測設(shè)備?？梢允褂萌魏文軌虬l(fā)出激發(fā)光并且能夠?qū)ψ詿晒膺M(jìn)行檢測的設(shè)備來實(shí)施本發(fā)明的活體實(shí)時(shí)檢測肺癌的方法。

本領(lǐng)域的技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)明了，盡管為了舉例說明的目的，本文描述了本發(fā)明的具體實(shí)施方式，但可以對(duì)其進(jìn)行各種修改而不偏離本發(fā)明的精神和范圍。因此，本發(fā)明的具體實(shí)施方式和實(shí)施例不應(yīng)當(dāng)視為限制本發(fā)明的范圍。本發(fā)明僅受所附權(quán)利要求的限制。本申請(qǐng)中引用的所有文獻(xiàn)均完整地并入本文作為參考。

本發(fā)明公開了一種基于檢測肺部組織自熒光水平作為檢測肺癌發(fā)病的生物標(biāo)志物的檢測方法及其應(yīng)用。肺癌病灶區(qū)域的特定波長范圍的自熒光強(qiáng)度顯著低于癌旁組織以及正常肺部組織。本發(fā)明首次提出用肺部組織自熒光強(qiáng)度來檢測肺癌的方法和應(yīng)用。該檢測肺癌發(fā)病的方法簡便、實(shí)時(shí)、可以在臨床使用，解決了目前診斷肺癌只能在醫(yī)院病理科用染色方法的局限性，為肺癌診斷提供了很大的便利。