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回避內源性脂蛋白的影響的方法及試劑的制作方法

文檔序號:8317804閱讀:365來源:國知局
回避內源性脂蛋白的影響的方法及試劑的制作方法
【專利說明】回避內源性脂蛋白的影響的方法及試劑
[0001]本申請是申請?zhí)枮?01180017602.2、發(fā)明名稱為“回避內源性脂蛋白的影響的方法及試劑”的分案申請。
技術領域
[0002]發(fā)明涉及一種回避內源性脂蛋白的影響的方法以及使用該方法的抗磷脂抗體測定試劑及前列腺特異抗原測定試劑。
【背景技術】
[0003]抗磷脂抗體因下面二種疾病而在生物體內產(chǎn)生。一種是在感染了梅毒的病原體梅毒螺旋體(Treponema Pallidum)的情況下,另一種是在屬于全身性紅斑狼瘡(SLE)等自身免疫疾病的抗磷脂抗體綜合征發(fā)病的情況下。
[0004]任何抗磷脂抗體均為對于以一種叫心磷脂的磷脂為主要成分的磷脂抗原而產(chǎn)生的抗體,其診斷中使用的檢查試劑含有心磷脂。
[0005]目前,作為使用上述磷脂的梅毒檢查方法,正在使用的有以碳或高嶺土粉末為載體的VDRL (性病研宄實驗室)法、RPR (快速血漿反應素)卡片試驗法(非專利文獻I)、以由聚苯乙烯共聚物等形成的乳膠為載體、用生化自動分析儀進行測定的乳膠凝集法(專利文獻I)等。
[0006]另一方面,作為磷脂抗體綜合征的檢查方法,用ELISA法進行測定(專利文獻2)。
[0007]前列腺癌是一種在男性中出現(xiàn)的惡性疾病,尤其是在美國及日本,是一種正在急劇增加的腫瘤。由于前列腺癌是一種增殖緩慢的腫瘤,而且具有放射療法、抗雄激素療法容易起效的特點,因而,其早期發(fā)現(xiàn)是一個很重要的課題。
[0008]前列腺特異抗原(Prostate Specific Antigen,下面有時簡稱“PSA”)是一種由前列腺上皮細胞分泌的絲氨酸蛋白酶,是一種分子量為33000?34000道爾頓的糖蛋白。若前列腺發(fā)生疾病,則該PSA在血液中的濃度較健康正常人高,因而對前列腺疾病(尤其是前列腺癌)的早期發(fā)現(xiàn)有用。PSA有在血中與蛋白酶抑制劑結合的復合物型和非結合的游離型PSA(下面有時稱“fPSA”),但血中的PSA多為復合物型,存在前列腺特異抗原_α I 一抗胰凝乳蛋白酶復合物(下面有時稱“PSA-ACT”)、前列腺特異抗原-α 2 —巨球蛋白復合物等。其中,能用免疫學測定方法測定的為fPSA和PSA-ACT 二種。
[0009]s專利文獻
[0010]專利文獻1:日本特開平7-103980號公報
[0011]專利文獻2:日本特開平6-148193號公報
[0012]專利文獻3:日本特開2001-242171號公報
[0013]非專利文獻
[0014]非專利文獻1-Public Health Reports Vol.75 (1960),985-988
【發(fā)明內容】

[0015]通過對用抗原抗體反應進行的免疫凝集反應進行光學測定來診斷是否患有疾病的試劑一般會受到檢體中的干擾成分的影響,測定值會出現(xiàn)不規(guī)則降低。這種現(xiàn)象可由將被測物添加到生理鹽水、緩沖液等不受檢體中的干擾成分影響的溶液中時和含有血清及血漿等干擾成分時測定值大不相同這一點而變得清晰。
[0016]作為由發(fā)生這種現(xiàn)象所引發(fā)的問題,可以列舉以下二點。
[0017](I)檢體中的抗體量或抗原量少時,由于干擾成分的影響,免疫凝集反應進行不充分,存在雖然患病但仍漏檢的可能性。
[0018](2)要測定含有測定試劑的測定范圍以上的抗體量或抗原量的檢體的準確抗體量或抗原量,目前采用的方法是,用生理鹽水或血清等對該檢體進行稀釋,使抗體量或抗原量減少至測定范圍內進行測定,之后乘以稀釋倍數(shù),算出準確的抗體量或抗原量。然而,由于生理鹽水中不含上述干擾成分,用不含抗體或抗原的血清對檢體進行稀釋時和用生理鹽水進行稀釋時的測定結果會背離,不能準確測定抗體量或抗原量。
[0019]因此,本發(fā)明的課題在于提供一種查清上述血清、血漿中的干擾成分、回避該干擾成分的影響的手段。
[0020]因此,為了查清存在于前述血清、血漿中的免疫測定干擾成分,本發(fā)明者進行了各種研宄,結果,完全意外地,從通過抗原抗體反應測得的吸光度在用向生理鹽水中添加脂蛋白而成的溶液作為檢體時會下降這一事發(fā)現(xiàn),該干擾成分為內源性脂蛋白。進一步研宄發(fā)現(xiàn),若向免疫反應的反應系中添加甘油磷脂,則能回避該內源性脂蛋白對測定值的影響,可以更準確地測定檢體中的抗體或抗原,由此完成了本發(fā)明。
[0021]S卩,本發(fā)明提供以下發(fā)明。
[0022](I)回避內源性脂蛋白的影響的方法,其特征在于,被測物為血中的抗體或抗原,在被測物為抗體時通過與抗原的免疫反應、被測物為抗原時通過與抗體的免疫反應來測定被測物的試劑中,向免疫反應的反應系中添加甘油磷脂。
[0023](2)⑴所述的回避內源性脂蛋白的影響的方法,其中,甘油磷脂為選自磷脂酸、磷脂酰膽堿、磷脂酰甘油、磷脂酰乙醇胺及磷脂酰絲氨酸中的一種以上。
[0024](3) (I)或(2)所述的回避內源性脂蛋白的影響的方法,其中,被測物為抗磷脂抗體。
[0025](4) (3)所述的回避內源性脂蛋白的影響的方法,其中,被測物抗磷脂抗體為因梅毒感染而在血中出現(xiàn)的抗梅毒磷脂抗體或因自身免疫疾病抗磷脂抗體綜合征而在血中出現(xiàn)的抗磷脂抗體。
[0026](5)血中的抗體或抗原測定試劑,其特征在于,被測物為血中的抗體或抗原,在被測物為抗體時通過與抗原的免疫反應、被測物為抗原時通過與抗體的免疫反應來測定被測物的試劑中,前述免疫反應的反應系中含有甘油磷脂。
[0027](6) (5)所述的測定試劑,其中,甘油磷脂為選自磷脂酸、磷脂酰膽堿、磷脂酰甘油、磷脂酰乙醇胺及磷脂酰絲氨酸中的一種以上。
[0028](7) (5)或(6)所述的測定試劑,其中,被測物為抗磷脂抗體。
[0029](8) (5)?(7)所述的測定試劑,其中,抗原或抗體負載在不溶性載體上。
[0030](9) (7)或⑶所述的測定試劑,其中,被測物抗磷脂抗體為因梅毒感染而在血中出現(xiàn)的抗梅毒磷脂抗體。
[0031](10) (7)或(8)所述的測定試劑,其中,被測物抗磷脂抗體為因自身免疫疾病抗磷脂抗體綜合征而在血中出現(xiàn)的抗磷脂抗體。
[0032](11) (5)或(6)所述的測定試劑,其中,被測物為前列腺特異抗原。
[0033](12) (5)、(6)或(11)所述的測定試劑,其中,抗體為抗前列腺特異抗原抗體,抗體負載在不溶性載體上。
[0034]專利文獻3公開了一種在計數(shù)免疫測定法中添加磷脂酰膽堿的方法,它是為了抑制在陰性檢體中時而遇見的非特異凝集而添加的。非特異凝集是指由于人血液中稀有的成分(例如針對試劑中所含成分的抗體等)而在本來的特異性免疫凝集反應之外,也就是在作為檢測目的的抗磷脂抗體與磷脂的免疫反應之外發(fā)生的凝集反應。專利文獻3中的磷脂酰膽堿以抑制這種反應為目的,可以稱作非特異凝集抑制劑。
[0035]另一方面,本發(fā)明中的甘油磷脂旨在消除因人血液檢體中普遍含有的脂蛋白而發(fā)生的正常免疫反應的凝集抑制這一現(xiàn)象,更準確地檢測作為檢測目的的抗體或抗原,可以稱作脂蛋白影響的回避劑。
[0036]本發(fā)明的甘油磷脂的效果與上述專利文獻3的磷脂酰膽堿存在根本上的不同。
[0037]本發(fā)明提供的試劑是一種以向免疫反應的反應系中添加甘油磷脂為特征的回避內源性脂蛋白的影響的試劑,在受到內源性脂蛋白的影響的抗磷脂抗體測定試劑中,通過回避內源性脂蛋白的影響,可以更準確地進行測定。
【附圖說明】
[0038]圖1是研宄I中的比較例I的結果,反應系中不含甘油磷脂。
[0039]圖2是研宄I中的實施例2的結果,是反應系中含有0.06重量%雞蛋黃來源的磷脂酰甘油時的結果。
[0040]圖3是研宄2中的實施例1的結果,是反應系中含有0.12重量%雞蛋黃來源的磷脂酰甘油時的結果。
[0041]圖4是研宄2中的實施例2的結果,是反應系中含有0.06重量%雞蛋黃來源的磷脂酰甘油時的結果。
[0042]圖5是研宄2中的實施例3的結果,是反應系中含有0.03重量%雞蛋黃來源的磷脂酰甘油時的結果。
[0043]圖6是研宄2中的實施例4的結果,是反應系中含有0.03重量%的為合成磷脂酰甘油的1,2 一二肉豆蔻酰一 sn —甘油一 3 —磷酰甘油鈉鹽時的結果。
[0044]圖7是研宄2中的實施例5的結果,是反應系中含有0.06重量%雞蛋黃來源的磷脂酰乙醇胺時的結果。
[0045]圖8是研宄2中的實施例6的結果,是反應系中含有0.03重量%的為合成磷脂酰膽堿的1,2 一二肉豆蔻酰一 sn —甘油一 3 —磷酰膽堿時的結果。
[0046]圖9是研宄2中的實施例7的結果,是反應系中含有0.03重量%的為合成磷脂酰膽堿的I 一棕櫚酰一 2 —硬脂酰一 sn —甘油一 3 —磷酰膽堿時的結果。
[0047]圖10是研宄2中的實施例8的結果,是反應系中含有雞蛋黃來源的磷脂酰甘油0.015重量%及雞蛋黃來源的磷脂酰乙醇胺0.015重量%時的結果。
[0048]圖11是研宄2中的比較例I的結果,是反應系中不含甘油磷脂時的結果。
[0049]圖12是研宄3中的實施例9的結果,是反應系中含有雞蛋黃來源的磷脂酰甘油0.015重量%時的結果。
[0050]圖13是研宄3中的比較例2的結果,是反應系中不含甘油磷脂時的結果。
【具體實施方式】
[0051]本發(fā)明是一種回避
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