無創(chuàng)診斷咽喉反流性疾病的試紙條及其制備和使用方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及臨床診斷技術(shù)領(lǐng)域，更具體地說，本發(fā)明涉及一種無創(chuàng)診斷咽喉反流性疾病的試紙條及其制備和使用方法。
【背景技術(shù)】
[0002]咽喉反流性疾病是指胃內(nèi)容物反流至食管上括約肌以上部位，引起一系列癥狀和體征的總稱，臨床表現(xiàn)為聲音嘶啞或發(fā)音障礙、咽喉腫痛、咽喉部異物感、持續(xù)清嗓、慢性長(zhǎng)期咳嗽、呼吸困難、喉痙攣等癥狀，以及聲帶后連合區(qū)域粘膜增生、肥厚，聲帶彌漫性充血水月中，嚴(yán)重時(shí)出現(xiàn)肉芽腫、喉室消失、聲門下狹窄等喉部體征。
[0003]咽喉反流性疾病是耳鼻咽喉頭頸外科一些疾病的源頭病因，與慢性喉炎、聲帶息肉、喉接觸性肉芽腫等喉部疾患關(guān)系密切。目前，咽喉反流性疾病的診斷一般依據(jù)癥狀和喉鏡檢查的反流癥狀指數(shù)量表以及反流體征評(píng)分量表、24小時(shí)喉咽部pH監(jiān)測(cè)和胃蛋白酶試劑盒進(jìn)行診斷。量表診斷缺乏特異性，準(zhǔn)確度差；24小時(shí)喉咽部pH監(jiān)測(cè)屬于有創(chuàng)檢查，不易被患者接受；目前應(yīng)用的胃蛋白酶試劑盒檢測(cè)唾液中胃蛋白酶診斷咽喉反流，雖然是無創(chuàng)檢查，但其是傳統(tǒng)的酶聯(lián)免疫技術(shù)，靈敏度較差，且每天患者咽喉反流次數(shù)有限，唾液中的胃蛋白酶含量相對(duì)較低，只有在咽喉反流后一段時(shí)間內(nèi)的唾液中才能監(jiān)測(cè)到，漏診率高。
[0004]此外，傳統(tǒng)的酶檢測(cè)試劑條一般為單個(gè)檢測(cè)單元，而對(duì)于咽喉反流性疾病的檢測(cè)因胃反流的不定性，需要長(zhǎng)時(shí)間進(jìn)行間隔檢測(cè)，利用一般的試劑條檢測(cè)時(shí)消耗量較大。另夕卜，一般的試劑條的檢測(cè)模塊利用膠體固定在底板上，且檢測(cè)模塊分割時(shí)易造成厚度不均，均會(huì)不同程度地對(duì)檢測(cè)結(jié)果造成影響，從而降低檢測(cè)的靈敏度和準(zhǔn)確度。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的一個(gè)目的是解決至少上述問題和/或缺陷，并提供至少后面將說明的優(yōu)點(diǎn)。
[0006]本發(fā)明的另一個(gè)目的是，提供一種用于無創(chuàng)診斷咽喉反流性疾病的胃蛋白酶檢測(cè)試紙條，能夠?qū)ρ屎矸戳餍约膊∵M(jìn)行無創(chuàng)診斷，并提高檢測(cè)的方便性及準(zhǔn)確性。
[0007]本發(fā)明的又一個(gè)目的是，提供一種不使用膠體對(duì)檢測(cè)模塊進(jìn)行固定的方法，并使檢測(cè)模塊厚度均勻，提高檢測(cè)的準(zhǔn)確性和靈敏度。
[0008]本發(fā)明的另一個(gè)目的是，提供一種用于無創(chuàng)診斷咽喉反流性疾病的試紙條的制備方法。
[0009]本發(fā)明還有一個(gè)目的是，提供一種用于無創(chuàng)診斷咽喉反流性疾病的試紙條的使用方法，能夠?qū)ρ屎矸戳餍约膊∵M(jìn)行準(zhǔn)確的診斷。
[0010]為了實(shí)現(xiàn)根據(jù)本發(fā)明的這些目的和其它優(yōu)點(diǎn)，本發(fā)明提供了以下技術(shù)方案:
[0011]無創(chuàng)診斷咽喉反流性疾病的試紙條，包括:
[0012]底板，其上、下兩面分別設(shè)置有多個(gè)平行的第一隔板，使底板的上、下兩面分別形成多個(gè)相互獨(dú)立的平行凹槽；所述凹槽的側(cè)壁分布有多個(gè)呈10-30°傾斜向上設(shè)置的突刺，所述突刺的端部向下彎折，使突刺的端部形成與凹槽側(cè)壁平行的倒鉤；
[0013]檢測(cè)模塊，其由樣品墊、結(jié)合墊、檢測(cè)墊及吸水紙沿底板的長(zhǎng)度方向順次排列連接構(gòu)成；
[0014]其中，所述結(jié)合墊上噴涂有標(biāo)記了胃蛋白酶單克隆抗體I的納米金顆粒；
[0015]所述檢測(cè)墊上間隔設(shè)置有由胃蛋白酶單克隆抗體II構(gòu)成的檢測(cè)帶和由羊抗鼠IgG抗體構(gòu)成的質(zhì)控帶；
[0016]此外，所述檢測(cè)模塊的數(shù)量與所述凹槽的數(shù)量相對(duì)應(yīng)，且各個(gè)檢測(cè)模塊分別固定在不同的凹槽內(nèi)，形成多個(gè)相互獨(dú)立的檢測(cè)單元。
[0017]優(yōu)選的是，所述的無創(chuàng)診斷咽喉反流性疾病的試紙條中，所述凹槽內(nèi)與樣品墊和結(jié)合墊的連接處相對(duì)應(yīng)的部位設(shè)置有凸起，以使結(jié)合墊與樣品墊結(jié)合處呈坡面；
[0018]所述凹槽的深度以凹槽上緣高出檢測(cè)模塊的最高處l_3mm為準(zhǔn)。
[0019]優(yōu)選的是，所述的無創(chuàng)診斷咽喉反流性疾病的試紙條中，所述凹槽內(nèi)與吸水紙相鄰的端部設(shè)置有第二隔板，所述第二隔板與凹槽兩側(cè)壁相抵頂，將凹槽端部隔離出一空腔；且所述第二隔板上設(shè)置有多個(gè)通孔，使該空腔與凹槽內(nèi)的檢測(cè)模塊相互連通；
[0020]所述空腔內(nèi)放置有由無紡布包裹干燥劑形成的干燥包；
[0021]此外，所述第二隔板與所述空腔對(duì)應(yīng)的一側(cè)的通孔上設(shè)置有向下傾斜15-30°的倒刺，用以將干燥包固定在空腔內(nèi)。
[0022]優(yōu)選的是，所述的無創(chuàng)診斷咽喉反流性疾病的試紙條中，所述底板的上、下兩面所設(shè)置凹槽的數(shù)量為8-12個(gè)，所述檢測(cè)模塊的數(shù)量與凹槽的數(shù)量一致。
[0023]優(yōu)選的是，所述的無創(chuàng)診斷咽喉反流性疾病的試紙條中，還包括塑料外殼，所述塑料外殼套設(shè)在所述底板外部，將底板及檢測(cè)模塊封閉；
[0024]且所述第一隔板與所述塑料外殼內(nèi)部相抵頂，使各個(gè)凹槽相互隔離；
[0025]所述塑料外殼上與各個(gè)檢測(cè)模塊的樣品墊相對(duì)應(yīng)的位置分別設(shè)置有加樣孔，與各個(gè)檢測(cè)模塊的檢測(cè)墊相對(duì)應(yīng)的位置分別設(shè)置有觀察窗；所述加樣孔上覆蓋有防水隔膜。
[0026]無創(chuàng)診斷咽喉反流性疾病的胃蛋白酶檢測(cè)試紙條的制備方法，包括以下步驟:
[0027]步驟一、提純胃蛋白酶單克隆抗體I和胃蛋白酶單克隆抗體II ;
[0028]步驟二、制備結(jié)合墊，用共價(jià)偶聯(lián)的方式將步驟一中處理得到的胃蛋白酶單克隆抗體I標(biāo)記在納米金顆粒上，然后噴涂在玻璃纖維膜上，避光條件下35?38°C烘干，即制得結(jié)合墊；
[0029]步驟三、制備檢測(cè)墊，使用含有4-8%蔗糖的磷酸緩沖溶液分別將胃蛋白酶單克隆抗體I1、羊抗鼠IgG抗體稀釋至終濃度為0.8-1.2mg/ml，然后分別間隔噴涂在硝酸纖維素膜上，烘干，即得所述檢測(cè)墊；
[0030]步驟四、制備樣品墊，用磷酸緩沖溶液浸泡玻璃纖維素膜20-40min，35-38°C烘干，即得所述樣品墊；
[0031]步驟五、組裝，在濕度小于35%，溫度為20?25°C條件下進(jìn)行檢測(cè)模塊的組裝；另夕卜，所述檢測(cè)墊的設(shè)置方式為，檢測(cè)帶接近結(jié)合墊一端，質(zhì)控帶接近吸水紙一端；將組裝后的檢測(cè)模塊裁切為與凹槽相對(duì)應(yīng)的尺寸，將裁切后的檢測(cè)模塊放入各個(gè)凹槽中并固定，即得所述試紙條。
[0032]優(yōu)選的是，所述的無創(chuàng)診斷咽喉反流性疾病的胃蛋白酶檢測(cè)試紙條的制備方法中，步驟一中胃蛋白酶單克隆抗體I和胃蛋白酶單克隆抗體II的提純方法為:
[0033]采用離子交換層析和凝膠過濾技術(shù)分離純化人胃液中的胃蛋白酶；將純化的胃蛋白酶免疫BALB/c小鼠，通過雜交瘤融合技術(shù)制備針對(duì)人胃蛋白酶的單克隆抗體；通過蛋白酶親和層析技術(shù)和凝膠過濾技術(shù)純化單克隆抗體，利用酶聯(lián)免疫技術(shù)篩選具有高度特異性的診斷用單克隆抗體。
[0034]優(yōu)選的是，所述的無創(chuàng)診斷咽喉反流性疾病的胃蛋白酶檢測(cè)試紙條的制備方法中，步驟二中，直徑為10-20nm的納米金顆粒標(biāo)記有生物素；直徑為40_60nm的納米金顆粒標(biāo)記有鏈霉親和素，作為二級(jí)捕獲納米金。
[0035]無創(chuàng)診斷咽喉反流性疾病的胃蛋白酶檢測(cè)試紙條的使用方法，方法為:
[0036]打開一個(gè)加樣孔上的防水隔膜，取咽喉分泌物或唾液作為待檢測(cè)樣品液，將樣品液滴加到該加樣孔上，觀察質(zhì)控帶是否顯色:
[0037]質(zhì)控帶顯色則診斷為患有咽喉反流性疾??；
[0038]質(zhì)控帶不顯色則間隔2小時(shí)后重復(fù)上一步操作，直至在24小時(shí)內(nèi)出現(xiàn)顯色反應(yīng)則診斷為患有咽喉反流性疾病，未出現(xiàn)顯色反應(yīng)則診斷為未患有咽喉反流性疾病。
[0039]優(yōu)選的是，所述的用于無創(chuàng)診斷咽喉反流性疾病的胃蛋白酶檢測(cè)試紙條的使用方法中，也可按照下列步驟進(jìn)行:
[0040]步驟一、打開一個(gè)加樣孔上的防水隔膜，取咽喉分泌物或唾液作為待檢測(cè)樣品液，將樣