一種高效液相色譜同時測定龍腦、樟腦、異龍腦含量的方法
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明本發(fā)明涉及龍腦，尤其涉及高效液相色譜測定艾片及冰片等樣品中龍腦、 樟腦、異龍腦含量方法。
【背景技術】
[0002] 眾所周知，龍腦有d、1、dl三種旋光異構體?！吨袊幍洹?010年版一部收載有天 然冰片（右旋龍腦）、冰片（合成龍腦）與艾片（左旋龍腦），其中的艾片為菊科植物艾納 香的新鮮葉經(jīng)提取加工制成的結晶，其主要活性成分為左旋龍腦；冰片為龍腦香科植物龍 腦香的樹脂和揮發(fā)油加工品提取獲得的半透明似梅花瓣塊狀、片狀的結晶體，是近乎于純 粹的右旋龍腦，亦也用化學方法合成；天然冰片為天然樟科植物樟的新鮮枝、葉經(jīng)提取加工 制成，為白色結晶性粉末或片狀結晶，主要成分為右旋龍腦?！吨袊幍洹酚涊d艾片、冰片、天 然冰片："辛、苦，微寒。歸心、脾、肺經(jīng)。其功效主治：開竅醒神，清熱止痛。用于熱病神昏、 痙厥，中風痰厥，氣郁暴厥，中惡昏迷，目赤，口瘡，咽喉腫痛，耳流膿瘡"。艾片、冰片臨床應 用極為廣泛，尤其在心腦血管疾病的預防和治療中，是開竅醒神的常用中藥。
[0003] 天然冰片、冰片與艾片中的標志性活性成分為龍腦，其含量通常被作為上述三種 藥材主要質量控制指標，目前龍腦含量測定的主要方法包括氣相色譜法、衍生化高效液相 色譜法、薄層色譜法、紅外光譜法、紫外-可見分光光度法等。由于其具有揮發(fā)性，且沒有較 強的紫外吸收，其含量測定方法大多采用GC法或GC-MS法。目前，《中國藥典》2010版收 錄天然冰片、冰片與艾片中龍腦、樟腦、異龍腦含量測定方法為氣相色譜法（GC)，用于其質 量控制。但GC分析成本比較高，對樣品穩(wěn)定性要求高，而目前報道的液相測定的柱前衍生 化又增加了樣品的前處理時間，而示差檢測器是根據(jù)物質的折射率進行檢測的，是一種通 用型的檢測器，可以檢測紫外吸收不能響應的組分，適用范圍廣泛，并且其對樣品的要求較 低、分析成本低，可用于工業(yè)化生產(chǎn)的檢測。中國專利數(shù)據(jù)庫中也無涉及高效液相測定龍 腦、樟腦、異龍腦的含量的專利，因此建立高效液相色譜示差法準確測定龍腦、樟腦、異龍腦 含量的方法具有非常重要的意義。

【發(fā)明內容】

[0004] 本發(fā)明旨在提供簡便、分離效果好、精密度和準確性高的一種高效液相色譜測定 龍腦、樟腦、異龍腦含量的方法，為達到上述目的，本方法采用了如下技術方案：
[0005] (1)確定色譜條件
[0006] 色譜柱：C18柱；
[0007] 檢測器：示差檢測器；
[0008] 柱溫：3(TC~40Γ;
[0009] 流動相：甲醇-0. 4 %磷酸溶液或乙腈-磷酸水溶液
[0010] 流速：0· 6~lmL·minS
[0011] 進樣量：10 ~20μL。
[0012] ⑵對照品洛液的制備
[0013] 稱取龍腦、樟腦、異龍腦的對照品適量，精密稱定，加甲醇制成lmgiL1，作為對照 品溶液；
[0014] (3)供試品溶液的制備
[0015] 精密稱取適量供試品l〇mg，加甲醇溶解制備lmg·mL\即得供試品溶液；
[0016] (4)測定
[0017] 將對照品溶液與供試品溶液分別進行高效液相色譜檢測，其中供試品溶液中待檢 測峰之間的分離度大于1. 5,分別得到對照品溶液色譜峰與供試品溶液色譜峰，根據(jù)對照品 與供試品的出峰時間來進行供試品組分的定性，通過外標法進行計算來得到待檢測組分的 含量；
[0018] (5)計算公式
[0019] 按照以下外標法計算公式計算龍腦、樟腦、異龍腦含量：
[0020] Cx= CRXAxXffR/ARXffxX100%
[0021] 式中：CX為供試品的含量，
[0022] CR為對照品的含量，
[0023]Ax為供試品的峰面積，
[0024]AR為對照品的峰面積，
[0025] WR為對照品的稱樣量，單位：mg，
[0026]Wx為供試品的稱樣量，單位:mg。
[0027] 上述方法的流動相中為甲醇或乙腈；磷酸的分數(shù)為0. 4%。
[0028] 本發(fā)明采用高效液相色譜法同時檢測龍腦、樟腦、異龍腦含量，不同于已有的氣相 色譜方法，與現(xiàn)有技術相比，具有檢測速度快、檢測數(shù)據(jù)準確、重現(xiàn)性好、靈敏度高、專屬性 強、操作方法簡便、檢測試劑和儀器應用廣泛等特點，經(jīng)過精密度試驗、重復性試驗、線性關 系考察和加樣回收試驗等試驗對方法進行驗證，結果表明該方法準確可靠，方便快捷，成本 低廉；檢測范圍大；靈敏度、精確性高；將廣泛應用于化學分析領域中。
【附圖說明】
[0029] 圖1為龍腦、樟腦、異龍腦混標高效液相色譜圖；圖2艾粉供試品高效液相色譜圖； 圖3龍腦、樟腦、異龍腦混標高效液相色譜圖；圖4艾片高效液相色譜圖；圖5對照品高效液 相色譜圖；圖6冰片（合成龍腦）高效液相色譜圖。
【具體實施方式】
[0030] 以下實施案例將有助于本發(fā)明的了解，但這些實施案例僅為了對本發(fā)明加以說 明，本發(fā)明并不限于這些內容。
[0031] 實施例1
[0032] 艾粉中龍腦、樟腦、異龍腦含量檢測
[0033] (1)色譜條件：色譜柱：依利特C18柱；檢測器：示差檢測器；柱溫：40°C ;流動相： 甲醇：磷酸水溶液為65 :35,流速：lmL·min、
[0034] (2)標準品溶液的制備：對照品溶液的制備：稱取龍腦、樟腦、異龍腦的對照品適 量，精密稱定，加甲醇制成lmg·mL\作為對照品溶液；
[0035] (3)供試品溶液的制備：精密稱取適量供試品10mg，加甲醇溶解制備lmg·!Λ\即 得供試品溶液；
[0036] (4)記錄色譜圖并測定：將對照品溶液與供試品溶液分別進行高效液相色譜檢 測，其中供試品溶液中待檢測峰之間的分離度大于1. 5,分別得到對照品溶液色譜峰與供試 品溶液色譜峰，根據(jù)對照品與供試品的出峰時間來進行供試品組分的定性，通過外標法進 行計算來得到待檢測組分的含量。根據(jù)計算公式
卜算出的含 量見表1，對照品高效液相色譜圖見附圖1，供試品高效液相色譜圖見附圖2。
[0037] 表1艾粉中龍腦、樟腦、異龍腦含量測定結果
[0038]
[0040] 通過上述實例表明本發(fā)明穩(wěn)定性好，精密度高，適用于龍腦、樟腦、異龍腦的高效 液相色譜法的含量測定。
[0041] 本發(fā)明方法學的建立
[0042] 1. 1專屬性
[0043] 該方法專屬性強。
[0044] 1. 2線性范圍
[0045] 精密量取混合對照品溶液1、2、3、4、5、81^分別置于1〇11^量瓶中，用甲醇定容至刻 度，搖勻，配制成對照品溶液。在HPLC上進樣分析并記錄色譜圖。分別以樟腦、龍腦、異龍 腦的濃度為橫坐標，以峰面積為縱坐標，進行回歸分析。樟腦、龍腦、異龍腦的回歸方程分別 為：
[0046]Y= 77727Χ+2635. 7(R2=0. 9990)；
[0047]Y= 79415X+2756.0(R2= 0.9991)；
[0048]Y= 79284X+4796. 6(R2= 0·9993)。
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