一種測(cè)定交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠體外酶解率的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，尤指一種交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠體外酶 解率的檢測(cè)方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 式（1)中高純度透明質(zhì)酸鈉交聯(lián)衍生物為無(wú)色透明膠狀液體，其分子長(zhǎng)鏈在溶液 中相互交聯(lián)形成卷曲盤(pán)繞的三維親水矩陣網(wǎng)絡(luò)構(gòu)型，允許營(yíng)養(yǎng)，氧氣，激素等自由通行，從 而維護(hù)組織正常的生理功能。交聯(lián)的透明質(zhì)酸最終大都被機(jī)體降解并吸收利用，但是它降 解的速度要遠(yuǎn)比未交聯(lián)的透明質(zhì)酸緩慢得多。
[0004] 交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉的降解周期與交聯(lián)程度有關(guān)，交聯(lián)程度越高，抵抗酶降解能力就 越強(qiáng)，故降解周期越長(zhǎng)。
[0005] 如何用體外的試驗(yàn)方法來(lái)間接估計(jì)和比較交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉產(chǎn)品在體內(nèi)的留存時(shí) 間是開(kāi)發(fā)交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉產(chǎn)品的研究重點(diǎn)。
[0006] 目前，國(guó)際上還沒(méi)有一種成熟的方法來(lái)檢測(cè)交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉的體外酶解特性。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明所解決的技術(shù)問(wèn)題在于為了克服上述所提到的困難，提供一種操作簡(jiǎn)單的 交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠體外酶解率的檢測(cè)方法。
[0008] 本發(fā)明所解決的技術(shù)問(wèn)題可以通過(guò)以下技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)：
[0009] -種交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠體外酶解率的檢測(cè)方法，包括以下步驟：
[0010] 1)稱(chēng)取適量交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠，置于西林瓶中；
[0011] 2)稱(chēng)取適量透明質(zhì)酸酶，置于容量瓶?jī)?nèi)，配成濃度為2~1 ου/ml的透明質(zhì)酸酶溶 液；
[0012] 3)向步驟1)的西林瓶?jī)?nèi)加入模擬組織液2~5ml和步驟2)制備的透明質(zhì)酸酶溶液1 ~3ml;
[0013] 4)西林瓶密封后，震蕩混勻，放入37°C恒溫水浴中；
[0014] 5)若干小時(shí)后，將西林瓶取出，放入沸水浴中滅活lOmin;
[0015] 6)冷卻后，濾去剩余的凝膠顆粒得濾液；
[0016] 7)對(duì)步驟6)放入濾液進(jìn)行糖醛酸含量檢測(cè)，計(jì)算交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠體外酶解 率。
[0017] 本發(fā)明的交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠體外酶解率的檢測(cè)方法操作簡(jiǎn)單，成本低。
【具體實(shí)施方式】
[0018] 通過(guò)下面給出的本發(fā)明的具體實(shí)施例可以進(jìn)一步清楚地了解本發(fā)明，但它們不是 對(duì)本發(fā)明的限定。
[0019] 實(shí)施例1
[0020] 取0.50g交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠，用模擬組織液稀釋至4mg/ml，加入lmL5U/mL透明質(zhì) 酸酶溶液，震蕩混勻，置37 °C恒溫水浴，在lh、6h、16h、24h取出，沸水浴進(jìn)行酶滅活，0.45μπι 膜過(guò)濾，咔唑法測(cè)葡萄糖醛酸含量，計(jì)算體外酶解率。結(jié)果見(jiàn)表1。
[0021]表1
[0023] 實(shí)施例2
[0024] 取0.50g交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠，用模擬組織液稀釋至4mg/ml，加入lmLIOU/mL透明 質(zhì)酸酶溶液，震蕩混勻，置37°C恒溫水浴，在lh、6h取出，沸水浴進(jìn)行酶滅活，0.45μπι膜過(guò)濾， 咔唑法測(cè)葡萄糖醛酸含量，計(jì)算體外酶解率，結(jié)果見(jiàn)表2。
[0025]表 2
[0027] 實(shí)施例3
[0028] 取0.20g交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠，用模擬組織液稀釋至4mg/ml，加入lmL2U/mL透明質(zhì) 酸酶溶液，震蕩混勻，置37°C恒溫水浴，在lh、6h、24h取出，沸水浴進(jìn)行酶滅活，0.45μπι膜過(guò) 濾，咔唑法測(cè)葡萄糖醛酸含量，計(jì)算體外酶解率。結(jié)果見(jiàn)表3。
[0029]表3
[0031 ] 實(shí)施例4
[0032] 取0.20g交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠，用模擬組織液稀釋至4mg/ml，加入lmLIOU/mL透明 質(zhì)酸酶溶液，震蕩混勻，置37 °C恒溫水浴，在lh、4h、6h、8h取出，沸水浴進(jìn)行酶滅活，0.45μπι 膜過(guò)濾，咔唑法測(cè)葡萄糖醛酸含量，計(jì)算體外酶解率。結(jié)果見(jiàn)表4。
[0033]表 4
[0035] 實(shí)施例5:
[0036] 取0.20g交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠，用模擬組織液稀釋至4mg/ml，加入lmL8U/mL透明質(zhì) 酸酶溶液，震蕩混勻，置37°C恒溫水浴，在lh、6h、24h取出，沸水浴進(jìn)行酶滅活，0.45μπι膜過(guò) 濾，咔唑法測(cè)葡萄糖醛酸含量，計(jì)算體外酶解率。結(jié)果見(jiàn)表5。
[0037]表 5
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠體外酶解率的檢測(cè)方法，其特征在于，包括以下步驟： 1) 稱(chēng)取適量交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠，置于西林瓶中； 2) 稱(chēng)取適量透明質(zhì)酸酶，置于容量瓶?jī)?nèi)，配成濃度為2~10U/ml的透明質(zhì)酸酶溶液； 3) 向步驟1)的西林瓶?jī)?nèi)加入模擬組織液2~5ml和步驟2)制備的透明質(zhì)酸酶溶液1~ 3ml; 4) 西林瓶密封后，震蕩混勻，放入37 °C恒溫水浴中； 5) 若干小時(shí)后，將西林瓶取出，放入沸水浴中滅活lOmin; 6) 冷卻后，濾去剩余的凝膠顆粒得濾液； 7) 對(duì)步驟6)放入濾液進(jìn)行糖醛酸含量檢測(cè)，計(jì)算交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠體外酶解率。
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)的一種交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠體外酶解率的檢測(cè)方法，其特征在于，包括以下步驟：1)稱(chēng)取適量交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠，置于西林瓶中；2)稱(chēng)取適量透明質(zhì)酸酶，置于容量瓶?jī)?nèi)，配成濃度為2～10U/ml的透明質(zhì)酸酶溶液；3)向步驟1)的西林瓶?jī)?nèi)加入模擬組織液2～5ml和步驟2)制備的透明質(zhì)酸酶溶液1～3ml；4)西林瓶密封后，震蕩混勻，放入37℃恒溫水浴中；5)若干小時(shí)后，將西林瓶取出，放入沸水浴中滅活10min；6)冷卻后，濾去剩余的凝膠顆粒得濾液；7)對(duì)步驟6)放入濾液進(jìn)行糖醛酸含量檢測(cè)，計(jì)算交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠體外酶解率。本發(fā)明的交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠體外酶解率的檢測(cè)方法操作簡(jiǎn)單，成本低。
【IPC分類(lèi)】G01N21/31
【公開(kāi)號(hào)】CN105572062
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510990564
【發(fā)明人】羅麗, 葉琳, 孔小杭
【申請(qǐng)人】杭州嘉偉生物制品有限公司
【公開(kāi)日】2016年5月11日
【申請(qǐng)日】2015年12月24日