一種茶葉或茶葉制品中抗氧化能力的分析方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及茶葉中抗氧化能力分析，旨在提供一種茶葉或茶葉制品中抗氧化能力的分析方法。該種茶葉或茶葉制品中抗氧化能力的分析方法包括步驟：配制次氯酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液、配制載流溶液、配制茶多酚標(biāo)準(zhǔn)品溶液、配制魯米諾發(fā)光試劑溶液、配制待測(cè)試樣溶液，然后利用順序注射化學(xué)發(fā)光分析系統(tǒng)裝置進(jìn)行分析測(cè)定，可得試樣折算成標(biāo)準(zhǔn)還原性物質(zhì)抗氧化性能力的定量指標(biāo)，實(shí)現(xiàn)對(duì)茶葉或茶葉制品總抗氧化能力的分析測(cè)定。本發(fā)明是基于茶葉試樣提取物與氧化劑次氯酸鈉的反應(yīng)，來(lái)測(cè)定樣品的總抗氧化能力，且將順序注射分析與化學(xué)發(fā)光檢測(cè)技術(shù)聯(lián)用，兼具兩者的優(yōu)勢(shì)。
【專利說(shuō)明】
一種茶葉或茶葉制品中抗氧化能力的分析方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明是關(guān)于茶葉中抗氧化能力分析領(lǐng)域，特別涉及一種茶葉或茶葉制品中抗氧化能力的分析方法。
【背景技術(shù)】
[0002]抗氧化作用被認(rèn)為是茶葉保健作用中最重要的部分。目前國(guó)內(nèi)外有關(guān)茶的抗氧化作用及機(jī)理研究報(bào)道較多，但大量用于茶葉中抗氧化能力的分析研究報(bào)道，是基于茶葉及其制品中有效成分，如茶多酚、黃酮類、沒(méi)食子酸、兒茶素及茶黃素等成分的分子結(jié)構(gòu)所具有的物理化學(xué)性質(zhì)，分別進(jìn)行紫外-可見(jiàn)分光光度法檢測(cè)。如茶多酚采用Folin-C1calteu(福林酸)法(Mokbel，Μ.S.,and Hashinaga,F.Evaluat1n of the ant1xidant activityof extracts from buntan(Citrus grandis 0sbeck)fruit tissues[J].Food Chem.,2006,94:529-534)測(cè)定，其原理是試樣在70°C水浴上用70%甲醇提取，用Folin-C1calteu試劑氧化茶多酚中一 OH基團(tuán)并顯藍(lán)色，在最大吸收波長(zhǎng)λ為765nm下測(cè)定，沒(méi)食子酸作參比校正，標(biāo)定茶多酚含量。黃酮類采用三氯化鋁比色法(鐘蘿，主編.茶葉品質(zhì)理化分析[M].上海:上?？萍汲霭嫔?，1989.)測(cè)定，其原理為試樣用AlCl3絡(luò)合顯色后，在最大吸收波長(zhǎng)λ為510nm下測(cè)定，以蘆丁為標(biāo)準(zhǔn)品，標(biāo)定黃酮含量。沒(méi)食子酸、兒茶素及茶黃素采用高效液相色譜法(Liang，Y.R.,Lu,J.L.,and Zhang,L.Y.Comparative study cream in infus1ns ofblack tea and green tea[Came Ilia sinemsis(L.)0.Kuntze][J].1nt.J.FoodSc1.Technol.，2002，34:624-.)測(cè)定，其原理為試樣用低于60°(:溫水溶解，在C18柱色譜柱上，采用梯度洗脫分離，并在波長(zhǎng)278nm檢測(cè)，分別用茶黃素、兒茶素等標(biāo)準(zhǔn)物外標(biāo)法定量。
[0003]上述對(duì)茶葉中不同抗氧化有效成分的分析，需分別采用相應(yīng)顯色劑或相應(yīng)色譜分離技術(shù)，不僅操作繁瑣，而且對(duì)茶葉的總抗氧化性能的測(cè)定也不直接;尤其是各種分析方法對(duì)某些有效成分可能重復(fù)測(cè)定，而對(duì)另一些有效成分則測(cè)定不全面，因此對(duì)總抗氧化性能的測(cè)定不直接且可能存在誤差。
[0004]流動(dòng)注射分析(Flow Inject1n Analysis，F(xiàn)IA)，是由丹麥技術(shù)大學(xué)的J.Ruzicka和E.H.Hansen于1975年提出的迅速發(fā)展起來(lái)的溶液自動(dòng)在線處理及測(cè)定的現(xiàn)代分析技術(shù)，即在非熱力學(xué)平衡條件下，在液流中重現(xiàn)性地處理試樣或試劑區(qū)帶的定量流動(dòng)分析技術(shù)。近年來(lái)，該分析方法與其它分析技術(shù)相結(jié)合，極大地推動(dòng)了儀器分析的發(fā)展，成為帶有微量、高速和自動(dòng)化等優(yōu)勢(shì)的新型分析方法。
[0005]流動(dòng)注射分析發(fā)展迅速，被廣泛應(yīng)用于很多分析領(lǐng)域。順序注射分析(SequentialInject1n Analysis，SIA)是在此基礎(chǔ)上，由Ruzicka和Marshall于1990年進(jìn)一步發(fā)展的流動(dòng)分析法。除具有FIA的優(yōu)勢(shì)外，SIA還有一些獨(dú)特的優(yōu)點(diǎn)。系統(tǒng)硬件簡(jiǎn)單可靠，操作完全由微機(jī)控制，樣品和試劑的混合程度、反應(yīng)時(shí)間可通過(guò)軟件控制，分析過(guò)程易于自動(dòng)化、智能化;可用同一裝置完成不同組分的檢測(cè)而無(wú)需改變流路設(shè)置，樣品和試劑的消耗更少，更適于受樣品來(lái)源有限、試劑昂貴等因素制約的試樣的分析。
[0006]隨著順序注射分析中試樣試劑用量的減少，對(duì)檢測(cè)方法的靈敏度的要求也相應(yīng)提高?；瘜W(xué)發(fā)光法具有靈敏度高、線性范圍寬、檢測(cè)裝置簡(jiǎn)單、可持續(xù)在線檢測(cè)等優(yōu)點(diǎn)，魯米諾具有良好的水溶性和突出的發(fā)光性能，是應(yīng)用最廣泛的化學(xué)發(fā)光試劑。次氯酸及次氯酸鹽具有強(qiáng)氧化性，可快速氧化溶液中的還原性物質(zhì)，氧化魯米諾后會(huì)發(fā)生化學(xué)發(fā)光反應(yīng)，且該發(fā)光反應(yīng)速度快，量子效率高。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]本發(fā)明的主要目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)中的不足，提供一種簡(jiǎn)單、方便、靈敏度高，基于流動(dòng)分析的茶葉中還原性物質(zhì)總抗氧化能力檢測(cè)分析方法。為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明的解決方案是:
[0008]提供一種茶葉或茶葉制品中抗氧化能力的分析方法，利用順序注射化學(xué)發(fā)光分析系統(tǒng)裝置進(jìn)行分析測(cè)定，所述茶葉或茶葉制品中抗氧化能力的分析方法具體包括下述步驟:
[0009](I)配制次氯酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液:
[0010]量取次氯酸鈉溶液(有效氯含量5%)，加重蒸餾水稀釋并滴加0.5mol/L的硫酸，調(diào)節(jié)至pH為6.2后，定容；再采用紫外分光光度法標(biāo)定濃度(檢測(cè)λ = 235nm的吸光度，以ε =100mol/L.cm為消光系數(shù)進(jìn)行標(biāo)定)，得到次氯酸鈉儲(chǔ)備液；
[0011 ] 進(jìn)一步稀釋采用重蒸餾水，臨用時(shí)稀釋至1.0 X 10—4mol/L?I.0 X 10—5mol/L的次氯酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液；
[0012](2)配制載流溶液:
[0013]稱取碳酸鈉，溶于水制成0.lOmol/L的Na2CO3溶液;再向該Na2CO3緩沖溶液中滴加
0.10mol/L的HCl溶液，調(diào)節(jié)pH至10.50，得到Na2CO3-NaHCO3緩沖溶液；
[0014](3)配制茶多酚標(biāo)準(zhǔn)品溶液:
[0015]稱取茶多酚標(biāo)準(zhǔn)品，溶于I OOmL水中定容，得到濃度范圍為1.0 X I O—7?1.0 X I O—6mol/L的茶多酚標(biāo)準(zhǔn)品溶液；
[0016]再用pH為3.0的甲酸-甲酸鈉緩沖液(取1.36mL的濃硫酸和4.23mL甲酸加重蒸餾水至250mL，用0.5mol/L稀硫酸調(diào)至pH為3.0，即制得甲酸-甲酸鈉緩沖液)稀釋茶多酚標(biāo)準(zhǔn)品溶液，分別稀釋成所需的不同濃度的茶多酚標(biāo)準(zhǔn)品溶液；
[0017](4)配制魯米諾發(fā)光試劑溶液:
[0018]稱取魯米諾溶解于0.lmol/L的NaOH溶液中，再用步驟(2)配制的Na2CO3-NaHCO3緩沖溶液(根據(jù)試樣需要，PH控制在8.0?12.0范圍)定容后，制得濃度范圍在1.0 X 10—Vol/L?1.0 X 10—3mol/L的魯米諾發(fā)光試劑溶液；
[0019](5)配制待測(cè)試樣溶液:
[0020]稱取0.0OOlg待測(cè)茶葉或茶葉制品搗碎，加重蒸餾水混合、過(guò)濾后，制得待測(cè)試樣溶液，并將待測(cè)試樣溶液定容至I OOmL;
[0021](6)先用重蒸餾水清洗順序注射化學(xué)發(fā)光分析系統(tǒng)裝置，包括順序注射栗、儲(chǔ)液管、六位選擇閥，并使整個(gè)順序注射化學(xué)發(fā)光分析系統(tǒng)裝置的管路內(nèi)部充滿重蒸餾水且無(wú)空氣；
[0022](7)開(kāi)啟恒流注射栗，用步驟(4)配制中的魯米諾發(fā)光試劑溶液以20mL/h?40mL/h的固定流速推入反應(yīng)盤(pán)管；
[0023](8)待光電倍增管的記錄基線平穩(wěn)后，六位選擇閥依次先轉(zhuǎn)至P3號(hào)閥位，順序注射栗將步驟(2)配制的載流溶液抽入儲(chǔ)液管;六位選擇閥再轉(zhuǎn)至P4號(hào)閥位，順序注射栗將步驟
(I)配制的次氯酸標(biāo)準(zhǔn)溶液抽入儲(chǔ)液管;六位選擇閥再轉(zhuǎn)至P5號(hào)閥位，順序注射栗將步驟
(5)配制的待測(cè)試樣溶液抽入儲(chǔ)液管;六位選擇閥最后轉(zhuǎn)至Pl號(hào)閥位，順序注射栗將上述在儲(chǔ)液管內(nèi)逐漸混合的溶液注入反應(yīng)盤(pán)管；
[0024](9)步驟(8)注入反應(yīng)盤(pán)管的溶液，與步驟(7)由恒流注射栗推入魯米諾發(fā)光試劑溶液混合發(fā)光，發(fā)光信號(hào)用光電倍增管記錄，經(jīng)數(shù)據(jù)處理后輸出；
[0025](10)重復(fù)步驟(8)至步驟(9)，分別測(cè)定步驟(3)配制的不同濃度的茶多酚標(biāo)準(zhǔn)品溶液的發(fā)光信號(hào);根據(jù)所得檢測(cè)信號(hào)的相應(yīng)峰高，繪制工作曲線；
[0026](11)將六位選擇閥P4號(hào)閥位對(duì)應(yīng)的次氯酸標(biāo)準(zhǔn)溶液，換成待測(cè)試樣溶液(步驟(5)配制)，重復(fù)上述步驟(8)至步驟(9)，檢測(cè)待測(cè)試樣溶液(步驟(5)配制)，得到檢測(cè)信號(hào)的相應(yīng)峰高，對(duì)照工作曲線，可得試樣折算成標(biāo)準(zhǔn)還原性物質(zhì)抗氧化性能力的定量指標(biāo)，實(shí)現(xiàn)對(duì)茶葉或茶葉制品總抗氧化能力的分析測(cè)定。
[0027]在本發(fā)明中，繪制步驟(10)中工作曲線的茶多酚標(biāo)準(zhǔn)品溶液，為步驟(3)配制的濃度為1.0X 10—7?1.0X 10—6mol/L的茶多酚標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
[0028]在本發(fā)明中，所述步驟(6)?步驟(11)的具體操作(整個(gè)流程由軟件控制自動(dòng)進(jìn)行)為:
[0029]a:將順序注射栗的三通閥轉(zhuǎn)至A-B口相連，S口封閉；
[0030]b:將重蒸餾水用注射器手工注入儲(chǔ)液管、六位選擇閥、反應(yīng)盤(pán)管等組成的發(fā)光分析管路系統(tǒng)；
[0031]c:將順序注射栗的三通閥轉(zhuǎn)至S-B口相連，A口封閉；
[0032]d:開(kāi)啟恒流注射栗，使魯米諾溶液以20mL/h?40mL/h的固定流速推入反應(yīng)盤(pán)管；
[0033]e:將六位選擇閥順時(shí)針轉(zhuǎn)至P3號(hào)閥位；
[0034]f:在15秒之中，順序注射栗吸液300yL;
[0035]g:六位選擇閥順時(shí)針旋轉(zhuǎn)至P4號(hào)閥位；
[0036]h:在5秒之中順序注射栗吸液I OyL;
[0037]1:等待 3秒；
[0038]j:六位選擇閥順時(shí)針旋轉(zhuǎn)至P5號(hào)閥位；
[0039]k:等待 3秒；
[0040]1:在10秒之中，順序注射栗吸液80yL;
[0041]m:等待 3秒；
[0042]η:六位選擇閥順時(shí)針旋轉(zhuǎn)至Pl號(hào)閥位；
[0043]ο:等待 3秒；
[0044]ρ:在10秒之中，順序注射栗注射390yL。
[0045]提供一種用于所述茶葉或茶葉制品中抗氧化能力的分析方法的順序注射化學(xué)發(fā)光分析系統(tǒng)裝置，包括順序注射進(jìn)樣系統(tǒng)、恒流注射栗、儲(chǔ)液管、反應(yīng)盤(pán)管、光電倍增管、數(shù)據(jù)采集系統(tǒng)；
[0046]所述順序注射進(jìn)樣系統(tǒng)包括順序注射栗、六位選擇閥和計(jì)算機(jī)，計(jì)算機(jī)通過(guò)串口連接順序注射栗和六位選擇閥，實(shí)現(xiàn)對(duì)順序注射栗和六位選擇閥進(jìn)行控制；
[0047]所述數(shù)據(jù)采集系統(tǒng)，采用數(shù)據(jù)采集卡與數(shù)據(jù)采集計(jì)算機(jī)連接，記錄光電倍增管產(chǎn)生的信號(hào)；
[0048]所述恒流注射栗和反應(yīng)盤(pán)管通過(guò)管路連接，順序注射栗和六位選擇閥之間采用儲(chǔ)液管連接;所述六位選擇閥的Pl號(hào)閥位通過(guò)管路連接到反應(yīng)盤(pán)管，P3號(hào)閥位、P4號(hào)閥位通過(guò)管路分別連接到載流溶液儲(chǔ)液池、次氯酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液儲(chǔ)液池，P5號(hào)閥位通過(guò)管路連接到茶多酚標(biāo)準(zhǔn)溶液儲(chǔ)液池或待測(cè)試樣溶液儲(chǔ)液池;所述光電倍增管置于反應(yīng)盤(pán)管下方，用于檢測(cè)發(fā)光信號(hào)。
[0049]在本發(fā)明中，所述反應(yīng)盤(pán)管的內(nèi)徑和外徑分別為0.5?0.9mm和1.0?1.7mm。
[0050]在本發(fā)明中，所述順序注射栗采用10yL?100yL的順序注射栗。
[0051]在本發(fā)明中，所述儲(chǔ)液管采用長(zhǎng)度為Icm?20cm的聚四氟乙烯管。
[0052]在本發(fā)明中，所述光電倍增管與盤(pán)管式反應(yīng)檢測(cè)池的反應(yīng)盤(pán)管都設(shè)置在不透明的暗盒中。
[0053]在本發(fā)明中，所述順序注射化學(xué)發(fā)光分析系統(tǒng)裝置中的連接管路都采用聚四氟乙烯(PTFE)管。
[0054]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果是:
[0055]本發(fā)明是基于茶葉試樣提取物與氧化劑次氯酸鈉的反應(yīng)，來(lái)測(cè)定樣品的總抗氧化能力，且將順序注射分析與化學(xué)發(fā)光檢測(cè)技術(shù)聯(lián)用，兼具兩者的優(yōu)勢(shì)。
[0056]本發(fā)明所用氧化劑，在體內(nèi)可由嗜中性粒細(xì)胞中的髓過(guò)氧化物酶催化H2O2和Cl—(髓過(guò)氧化物酶/H202/C1—體系)產(chǎn)生，亦屬內(nèi)源性氧化性物，因此本法對(duì)抗氧化能力的測(cè)定具有很強(qiáng)的針對(duì)性。
【附圖說(shuō)明】
[0057]圖1為本發(fā)明中順序注射化學(xué)發(fā)光分析系統(tǒng)裝置的示意圖。
[0058]圖2為茶多酚試樣濃度與檢測(cè)信號(hào)的相關(guān)性記錄圖。
[0059]圖3為茶多酚試樣流速與信號(hào)相關(guān)性記錄圖。
[0060]圖4為次氯酸溶液溶度與信號(hào)相關(guān)性記錄圖。
[0061 ]圖中的附圖標(biāo)記為:I注射器;2恒流注射栗;3順序注射栗;4六位選擇閥；5計(jì)算機(jī)；6反應(yīng)盤(pán)管;7廢液池。
【具體實(shí)施方式】
[0062]下面結(jié)合附圖與【具體實(shí)施方式】對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)描述:
[0063]—種茶葉或茶葉制品中抗氧化能力的分析方法，采用微型盤(pán)管檢測(cè)池，用碳酸鈉-碳酸氫鈉緩沖液(pH= 10.50)作為載流，用光電倍增管和數(shù)據(jù)采集儀記錄次氯酸和魯米諾混合反應(yīng)后的化學(xué)發(fā)光信號(hào)，進(jìn)行定量分析；以茶多酚溶液作為標(biāo)液，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)茶葉或茶葉制品總抗氧化能力的分析測(cè)定。
[0064]一、儀器裝置及方法:
[0065]實(shí)驗(yàn)所用的順序注射化學(xué)發(fā)光分析系統(tǒng)裝置如圖1所示，主要部件包括程控進(jìn)樣系統(tǒng)、儲(chǔ)液管、盤(pán)管式反應(yīng)檢測(cè)池、光電倍增管處理系統(tǒng)等。程控進(jìn)樣系統(tǒng)包括一個(gè)微量恒流注射栗2，一個(gè)500yL順序注射栗3和六位選擇閥4組成，采用計(jì)算機(jī)控制注射栗注射速度和六位選擇閥4閥位。
[0066]連接注射栗和檢測(cè)盤(pán)管的管路均采用聚四氟乙烯(PTFE)管，發(fā)光試劑魯米諾溶液由微量恒流注射栗2推送進(jìn)入反應(yīng)檢測(cè)盤(pán)管。順序注射栗3和六位選擇閥4之間采用長(zhǎng)度為1cm的聚四氟乙烯管，作為儲(chǔ)液管。六位選擇閥4的P3、P4、P5端口上的聚四氟乙烯管分別連接載流(碳酸鈉-碳酸氫鈉緩沖液，PH為10.50)、次氯酸和不同濃度樣品的儲(chǔ)液池，順序注射栗3依次抽取進(jìn)入儲(chǔ)液管后，最后通過(guò)六位選擇閥4的I端口推入反應(yīng)盤(pán)管6與魯米諾溶液混合發(fā)光，光電倍增管置于反應(yīng)盤(pán)管6下方檢測(cè)發(fā)光信號(hào)(其中反應(yīng)盤(pán)管6與光電倍增管置于不透明的暗盒中)。待每次分析結(jié)束，可切換順序注射栗3上的三通閥，用重蒸水清洗流路。
[0067]二、實(shí)驗(yàn)試劑和材料:
[0068]無(wú)水碳酸鈉，碳酸氫鈉，氫氧化鈉，無(wú)水磷酸氫二鈉，無(wú)水磷酸二氫鉀，次氯酸鈉，甲酸，稀硫酸，魯米諾。
[0069]三、實(shí)驗(yàn)流程:
[0070]實(shí)驗(yàn)前將順序注射栗3、儲(chǔ)液管以及六位選擇閥4體系用去重蒸餾水清洗，并使這個(gè)體系充滿水防止空氣進(jìn)入。將魯米諾溶液經(jīng)恒流注射栗2以30mL/h的流速推入反應(yīng)盤(pán)管6，待基線平穩(wěn)后，六位選擇閥4依次轉(zhuǎn)至P3號(hào)閥位抽取載流、轉(zhuǎn)至P4號(hào)閥位抽取次氯酸、轉(zhuǎn)至P5號(hào)閥位抽取待測(cè)試樣溶液，最后轉(zhuǎn)至Pl號(hào)閥位將儲(chǔ)液管的溶液注入反應(yīng)盤(pán)管6，整個(gè)流程由軟件控制自動(dòng)進(jìn)行。發(fā)光信號(hào)用光電倍增管記錄，經(jīng)數(shù)據(jù)處理后輸出。重復(fù)上述流程分別檢測(cè)不同濃度的試樣液。具體操作流程如下:
[0071]分析系統(tǒng)操作程序
[0072]a:將順序注射栗3的三通閥轉(zhuǎn)至A-B口相連，S口封閉；
[0073]b:將重蒸餾水用注射器I手工注入儲(chǔ)液管、六位選擇閥4、反應(yīng)盤(pán)管6等組成的發(fā)光分析管路系統(tǒng)；
[0074]c:將順序注射栗3的三通閥轉(zhuǎn)至S-B口相連，A口封閉；
[0075]d:開(kāi)啟恒流注射栗2，使魯米諾溶液以20mL/h?40mL/h的固定流速推入反應(yīng)盤(pán)管6；
[0076]e:將六位選擇閥4順時(shí)針轉(zhuǎn)至P3號(hào)閥位；
[0077]f:在15秒之中，順序注射栗3吸液300yL;
[0078]g:六位選擇閥4順時(shí)針旋轉(zhuǎn)至P4號(hào)閥位；
[0079]h:在5秒之中順序注射栗3吸液I OyL;
[0080]1:等待 3秒；
[0081 ] j:六位選擇閥4順時(shí)針旋轉(zhuǎn)至P5號(hào)閥位；
[0082]k:等待 3秒；
[0083]1:在10秒之中，順序注射栗3吸液80yL;
[0084]m:等待 3秒；
[0085]η:六位選擇閥4順時(shí)針旋轉(zhuǎn)至Pl號(hào)閥位；
[0086]ο:等待 3秒；
[0087]p:在10秒之中，順序注射栗3注射390yL;
[0088]四、標(biāo)準(zhǔn)還原性物質(zhì)的工作曲線
[0089]分別取不同濃度的茶多酚標(biāo)準(zhǔn)溶液。按上述流程分析，得檢測(cè)信號(hào)，根據(jù)得到相應(yīng)峰高，繪制工作曲線。
[0090]五、試樣抗氧化性能力測(cè)定[0091 ]未知濃度的試樣溶液(如茶葉或茶葉制品浸出液或提取液)按上述流程進(jìn)行檢測(cè)， 得到信號(hào)，對(duì)照工作曲線可得試樣折算成標(biāo)準(zhǔn)還原性物質(zhì)抗氧化性能力的定量指標(biāo)。[〇〇92]下面的實(shí)施例可以使本專業(yè)的專業(yè)技術(shù)人員更全面地理解本發(fā)明，但不以任何方式限制本發(fā)明。[〇〇93] 實(shí)施例1[〇〇94] 采用圖1中所示裝置:反應(yīng)盤(pán)管6內(nèi)徑X外徑(根據(jù)需要可選0.5 X1.0mm、0.8 X 1.4mm、0.5 X 1.5mm、0.7 X 1.7mm、0.9 X 1.7mm等)與光電倍增管置于暗盒內(nèi)，暗盒開(kāi)一個(gè)個(gè)小孔將反應(yīng)盤(pán)管6引出。反應(yīng)盤(pán)管6中部的下方正對(duì)光電倍增管光窗，見(jiàn)圖1。光電倍增管工作電壓-40V，光信號(hào)通過(guò)光電倍增管記錄。
[0095]3個(gè)貯液管(3?5)分別裝載流緩沖液、次氯酸溶液、茶多酚溶液，本實(shí)施例使用的次氯酸濃度為3.2 X l(T5m〇l/L，分別配置茶多酚濃度為1.2 X l(T7m〇l/L、1.7 X l(T7m〇l/L、 2.2 X 1 (T7m〇 1 /L、2.7 X 1 (T7m〇 1 /L、3.2 X 1 (T7m〇 1 /L，連續(xù)循環(huán)進(jìn)樣，微量恒流注射栗2以固定流速(30mL/h)持續(xù)進(jìn)樣。實(shí)例進(jìn)樣順序、流量和流通時(shí)間見(jiàn)上述分析系統(tǒng)操作程序。實(shí)驗(yàn)前用去離子水將整個(gè)通道循環(huán)運(yùn)行至光電倍增管數(shù)值穩(wěn)定。
[0096]分別進(jìn)行分析記錄相應(yīng)的光信號(hào)，以不同濃度茶多酚濃度橫坐標(biāo)，以信號(hào)強(qiáng)度為縱坐標(biāo)，得圖2。[〇〇97]實(shí)施例2魯米諾流速影響[〇〇98]3個(gè)貯液管(3?5)分別裝pH= 10.50緩沖液、次氯酸溶液、pH= 10.50緩沖液，本實(shí)施例使用的次氯酸濃度為3.2 X l(T5m〇l/L，連續(xù)循環(huán)進(jìn)樣，微量恒流注射栗2流速:10mL/h、 20mL/h、30mL/h、40mL/h、50mL/h持續(xù)進(jìn)樣。進(jìn)樣順序、流量和流通時(shí)間同上述分析系統(tǒng)操作程序。
[0099]如圖3所示，結(jié)果表明魯米諾流速為30ml/h時(shí)，信號(hào)強(qiáng)度最高。表明此為理想的化學(xué)發(fā)光分析條件。
[0100]實(shí)施例3次氯酸濃度對(duì)信號(hào)的影響[0101 ]3個(gè)貯液管(3?5)分別裝pH = 10.50緩沖液、次氯酸溶液、pH = 10.50緩沖液，本實(shí)施例使用的次氯酸濃度為1.〇 X 10-4mol/L、5.6 X 10-5mol/L、3.2 X 10-5mol/L、1.8 X 10-5mol/ L、1.0 X l(T5mo 1/L，連續(xù)循環(huán)進(jìn)樣，微量恒流注射栗2流速固定30ml/h持續(xù)進(jìn)樣。進(jìn)樣順序、 流量和流通時(shí)間同上述分析系統(tǒng)操作程序。[〇1〇2] 如圖4所示，結(jié)果表明次氯酸濃度為1.0\10、〇1/1、5.6\10^11〇1/1時(shí)，信號(hào)強(qiáng)度已超分析裝置的檢測(cè)上限；次氯酸濃度為1.8 X l(T5m〇l/L、l.0 X l(T5m〇l/L時(shí)，信號(hào)強(qiáng)度偏弱，會(huì)導(dǎo)致茶多酚試樣分析的檢測(cè)范圍縮小;次氯酸濃度為3.2 X l(T5m〇l/L，信號(hào)強(qiáng)度最合適。表明此為理想化學(xué)發(fā)光分析條件。
[0103]最后，需要注意的是，以上列舉的僅是本發(fā)明的具體實(shí)施例。顯然，本發(fā)明不限于以上實(shí)施例，還可以有很多變形。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員能從本發(fā)明公開(kāi)的內(nèi)容中直接導(dǎo)出或聯(lián)想到的所有變形，均應(yīng)認(rèn)為是本發(fā)明的保護(hù)范圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種茶葉或茶葉制品中抗氧化能力的分析方法，利用順序注射化學(xué)發(fā)光分析系統(tǒng)裝置進(jìn)行分析測(cè)定，其特征在于，所述茶葉或茶葉制品中抗氧化能力的分析方法具體包括下述步驟: (1)配制次氯酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液: 量取次氯酸鈉溶液，加重蒸餾水稀釋并滴加0.5mol/L的硫酸，調(diào)節(jié)至pH為6.2后，定容；再采用紫外分光光度法標(biāo)定濃度，得到次氯酸鈉儲(chǔ)備液； 進(jìn)一步稀釋采用重蒸餾水，臨用時(shí)稀釋至1.0 X 10—4mol/L?1.0 X 10—5mol/L的次氯酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液； (2)配制載流溶液: 稱取碳酸鈉，溶于水制成0.1O m ο I / L的N a 2 C O 3溶液；再向該N a 2 C O 3緩沖溶液中滴加0.10mol/L的HCl溶液，調(diào)節(jié)pH至10.50，得到Na2CO3-NaHCO3緩沖溶液； (3)配制茶多酚標(biāo)準(zhǔn)品溶液: 稱取茶多酚標(biāo)準(zhǔn)品，溶于I OOmL水中定容，得到濃度范圍為1.0 X I O—7?1.0 X I O—6mo I /L的茶多酚標(biāo)準(zhǔn)品溶液； 再用pH為3.0的甲酸-甲酸鈉緩沖液稀釋茶多酚標(biāo)準(zhǔn)品溶液，分別稀釋成所需的不同濃度的茶多酚標(biāo)準(zhǔn)品溶液； (4)配制魯米諾發(fā)光試劑溶液: 稱取魯米諾溶解于0.lmol/L的NaOH溶液中，再用步驟(2)配制的Na2CO3-NaHCO3緩沖溶液定容后，制得濃度范圍在1.0 X 10—Vol/L?1.0 X 10—3mol/L的魯米諾發(fā)光試劑溶液； (5)配制待測(cè)試樣溶液: 稱取0.0OOlg待測(cè)茶葉或茶葉制品搗碎，加重蒸餾水混合、過(guò)濾后，制得待測(cè)試樣溶液，并將待測(cè)試樣溶液定容至I OOmL; (6)先用重蒸餾水清洗順序注射化學(xué)發(fā)光分析系統(tǒng)裝置，包括順序注射栗、儲(chǔ)液管、六位選擇閥，并使整個(gè)順序注射化學(xué)發(fā)光分析系統(tǒng)裝置的管路內(nèi)部充滿重蒸餾水且無(wú)空氣； (7)開(kāi)啟恒流注射栗，用步驟(4)配制中的魯米諾發(fā)光試劑溶液以20mL/h?40mL/h的固定流速推入反應(yīng)盤(pán)管； (8)待光電倍增管的記錄基線平穩(wěn)后，六位選擇閥依次先轉(zhuǎn)至P3號(hào)閥位，順序注射栗將步驟(2)配制的載流溶液抽入儲(chǔ)液管;六位選擇閥再轉(zhuǎn)至P4號(hào)閥位，順序注射栗將步驟(I)配制的次氯酸標(biāo)準(zhǔn)溶液抽入儲(chǔ)液管;六位選擇閥再轉(zhuǎn)至P5號(hào)閥位，順序注射栗將步驟(5)配制的待測(cè)試樣溶液抽入儲(chǔ)液管;六位選擇閥最后轉(zhuǎn)至Pl號(hào)閥位，順序注射栗將上述在儲(chǔ)液管內(nèi)逐漸混合的溶液注入反應(yīng)盤(pán)管； (9)步驟(8)注入反應(yīng)盤(pán)管的溶液，與步驟(7)由恒流注射栗推入魯米諾發(fā)光試劑溶液混合發(fā)光，發(fā)光信號(hào)用光電倍增管記錄，經(jīng)數(shù)據(jù)處理后輸出； (10)重復(fù)步驟(8)至步驟(9)，分別測(cè)定步驟(3)配制的不同濃度的茶多酚標(biāo)準(zhǔn)品溶液的發(fā)光信號(hào);根據(jù)所得檢測(cè)信號(hào)的相應(yīng)峰高，繪制工作曲線； (11)將六位選擇閥P4號(hào)閥位對(duì)應(yīng)的次氯酸標(biāo)準(zhǔn)溶液，換成待測(cè)試樣溶液，重復(fù)上述步驟(8)至步驟(9)，檢測(cè)待測(cè)試樣溶液，得到檢測(cè)信號(hào)的相應(yīng)峰高，對(duì)照工作曲線，可得試樣折算成標(biāo)準(zhǔn)還原性物質(zhì)抗氧化性能力的定量指標(biāo)，實(shí)現(xiàn)對(duì)茶葉或茶葉制品總抗氧化能力的分析測(cè)定。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種茶葉或茶葉制品中抗氧化能力的分析方法，其特征在于，繪制步驟(10)中工作曲線的茶多酚標(biāo)準(zhǔn)品溶液，為步驟(3)配制的濃度為1.0X 10—7?1.0XI O—6H1 I /L的茶多酚標(biāo)準(zhǔn)品溶液。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種茶葉或茶葉制品中抗氧化能力的分析方法，其特征在于，所述步驟(6)?步驟(11)的具體操作為: a:將順序注射栗的三通閥轉(zhuǎn)至A-B 口相連，S 口封閉； b:將重蒸餾水用注射器手工注入儲(chǔ)液管、六位選擇閥、反應(yīng)盤(pán)管等組成的發(fā)光分析管路系統(tǒng)； c:將順序注射栗的三通閥轉(zhuǎn)至S-B 口相連，A 口封閉； d:開(kāi)啟恒流注射栗，使魯米諾溶液以20mL/h?40mL/h的固定流速推入反應(yīng)盤(pán)管； e:將六位選擇閥順時(shí)針轉(zhuǎn)至P3號(hào)閥位； f:在15秒之中，順序注射栗吸液300yL; g:六位選擇閥順時(shí)針旋轉(zhuǎn)至P4號(hào)閥位； h:在5秒之中順序注射栗吸液1yL ； 1:等待3秒； j:六位選擇閥順時(shí)針旋轉(zhuǎn)至P5號(hào)閥位； k:等待3秒； 1:在10秒之中，順序注射栗吸液80yL; m:等待3秒； η:六位選擇閥順時(shí)針旋轉(zhuǎn)至Pl號(hào)閥位； ο:等待3秒； P:在10秒之中，順序注射栗注射390yL。4.一種用于權(quán)利要求1所述茶葉或茶葉制品中抗氧化能力的分析方法的順序注射化學(xué)發(fā)光分析系統(tǒng)裝置，其特征在于，包括順序注射進(jìn)樣系統(tǒng)、恒流注射栗、儲(chǔ)液管、反應(yīng)盤(pán)管、光電倍增管、數(shù)據(jù)采集系統(tǒng)； 所述順序注射進(jìn)樣系統(tǒng)包括順序注射栗、六位選擇閥和計(jì)算機(jī)，計(jì)算機(jī)通過(guò)串口連接順序注射栗和六位選擇閥，實(shí)現(xiàn)對(duì)順序注射栗和六位選擇閥進(jìn)行控制； 所述數(shù)據(jù)采集系統(tǒng)，采用數(shù)據(jù)采集卡與數(shù)據(jù)采集計(jì)算機(jī)連接，記錄光電倍增管產(chǎn)生的信號(hào)； 所述恒流注射栗和反應(yīng)盤(pán)管通過(guò)管路連接，順序注射栗和六位選擇閥之間采用儲(chǔ)液管連接;所述六位選擇閥的Pl號(hào)閥位通過(guò)管路連接到反應(yīng)盤(pán)管，P3號(hào)閥位、P4號(hào)閥位通過(guò)管路分別連接到載流溶液儲(chǔ)液池、次氯酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液儲(chǔ)液池，P5號(hào)閥位通過(guò)管路連接到茶多酚標(biāo)準(zhǔn)溶液儲(chǔ)液池或待測(cè)試樣溶液儲(chǔ)液池;所述光電倍增管置于反應(yīng)盤(pán)管下方，用于檢測(cè)發(fā)光信號(hào)。5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的順序注射化學(xué)發(fā)光分析系統(tǒng)裝置，其特征在于，所述反應(yīng)盤(pán)管的內(nèi)徑和外徑分別為0.5?0.9mm和1.0?1.7mm。6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的順序注射化學(xué)發(fā)光分析系統(tǒng)裝置，其特征在于，所述順序注射栗采用10yL?100yL的順序注射栗。7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的順序注射化學(xué)發(fā)光分析系統(tǒng)裝置，其特征在于，所述儲(chǔ)液管采用長(zhǎng)度為Icm?20cm的聚四氟乙稀管。8.根據(jù)權(quán)利要求4所述的順序注射化學(xué)發(fā)光分析系統(tǒng)裝置，其特征在于，所述光電倍增管與盤(pán)管式反應(yīng)檢測(cè)池的反應(yīng)盤(pán)管都設(shè)置在不透明的暗盒中。9.根據(jù)權(quán)利要求4所述的順序注射化學(xué)發(fā)光分析系統(tǒng)裝置，其特征在于，所述順序注射化學(xué)發(fā)光分析系統(tǒng)裝置中的連接管路都采用聚四氟乙烯管。
【文檔編號(hào)】G01N1/38GK106018386SQ201610255115
【公開(kāi)日】2016年10月12日
【申請(qǐng)日】2016年4月20日
【發(fā)明人】沈宏, 麻威威
【申請(qǐng)人】杭州大茗堂生物科技有限公司