一種丹參丹酚酸b的制備方法及其在視網(wǎng)膜疾病中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及中藥產(chǎn)品的制備方法和用途，特別涉及丹參提取物丹參丹酚酸B的制 備及其在治療和預(yù)防視網(wǎng)膜疾病中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 視網(wǎng)膜疾病是一類容易引起視力障礙甚至失明的周圍神經(jīng)疾病，主要包括視網(wǎng)膜 血管阻塞病，新生血管年齡相關(guān)性黃斑變性，增生性糖尿病視網(wǎng)膜病和青光眼等。大量的研 究表明，該類疾病的發(fā)病機制主要與視網(wǎng)膜缺血再灌注損傷導(dǎo)致的氧化應(yīng)激，炎癥與免疫 反應(yīng)，神經(jīng)元細(xì)胞凋亡壞死及膠質(zhì)細(xì)胞活化等因素相關(guān)；此外，高眼壓狀態(tài)下導(dǎo)致的視網(wǎng)膜 神經(jīng)節(jié)細(xì)胞凋亡也是該類疾病發(fā)病的重要機制。
[0003] 目前，臨床上用于治療視網(wǎng)膜疾病的藥物主要有維生素類如VB1，改善微循環(huán)類如 羥苯磺酸鈣，抗膽堿酯酶類新斯的明，β-受體阻滯劑類如貝特舒，α 2-受體激動劑類阿普 可樂定，以及前列腺素類蘇為坦等。然而，這些針對單一靶點的強效藥物在治療這類由多種 疾病網(wǎng)絡(luò)機制共同調(diào)控的復(fù)雜性視網(wǎng)膜疾病過程中，并沒有取得令人滿意的臨床效果。不 過值得關(guān)注的是，近年來，中藥在復(fù)雜性疾病的治療過程中取得了較好的治療效果，顯現(xiàn)出 了巨大應(yīng)用價值。有籍于此，越來越多的藥物研究工作者意識到，從傳統(tǒng)名優(yōu)中藥中二次開 發(fā)具有與多種致病機制相關(guān)的藥物將是未來治療視網(wǎng)膜疾病發(fā)展的方向。
[0004] 丹參注射液，是經(jīng)典傳統(tǒng)活血化瘀中藥丹參的水溶性藥用部位，臨床上除被用于 治療冠心病，腦血栓，神經(jīng)衰弱和心絞痛等疾病之外，在視網(wǎng)膜疾病的治療過程中也顯示出 了良好的治療效果。藥理學(xué)研究表明，在鼠視網(wǎng)膜缺血-再灌注動物實驗?zāi)Ｐ椭?，丹參?射液不但能在形態(tài)學(xué)上減輕細(xì)胞結(jié)構(gòu)的損傷，而且在功能上也有助于視網(wǎng)膜電圖b波的恢 復(fù)，減少視網(wǎng)膜自由基的含量，顯示出較強的視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞的保護效應(yīng)(李岱，易明望，管 志華.復(fù)方丹參對缺血再灌注損傷鼠視網(wǎng)膜的保護作用.現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志，2004， 13(4): 444-446)。然而，進(jìn)一步藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究發(fā)現(xiàn)，丹參注射液的主要成分之一丹參 素鈉在兔視網(wǎng)膜缺血-再灌注中的神經(jīng)保護作用并不顯著，僅在治療晚期顯示出較弱的抑 制VEGF生成作用（丁建光，姜德詠，吳榮瀚，李文生.丹參素鈉對兔視網(wǎng)膜缺血-再灌注 VEGF表達(dá)的影響.眼科新進(jìn)展，2006,26(5):357-360)。明顯的，丹參素鈉不能有效闡明丹 參注射液防治視網(wǎng)膜疾病的作用。
[0005] 值得注意的是，丹參丹酚酸B，約占藥材總量的4%，不僅是丹參最主要的水溶性成 分，而且是丹參發(fā)揮抗炎、抗氧化、抗肝臟損傷、抗心肌缺血、抗腦缺血、抗血栓、抗血小板聚 集及抗動脈粥樣硬化等作用的最重要的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)。此外，它也是丹參注射液的有效成 分之一。鑒于上述丹酚酸B廣泛的藥理作用及在丹參制劑中的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)要求，可以設(shè)想，丹 酚酸B可能是丹參注射液產(chǎn)生防治視網(wǎng)膜疾病作用的根本藥效物質(zhì)基礎(chǔ)。此外，雖然丹參 丹酚酸B的含量較高(約占藥材總量的4%)，但到目前為止，已報道的具有工業(yè)化價值的技 術(shù)方法制備的高含量丹參丹酚酸B的技術(shù)方法或多或少存在丹參丹酚酸B得率和含量不能 兼顧，工藝操作繁雜，以及產(chǎn)業(yè)化成本較高等問題。例如，中國專利CN 101759672 A公開了 一種丹參水溶性提取物、其制劑及用途，需經(jīng)聚酰胺和大孔樹脂連續(xù)分離才能得到的含量 為90%以上丹參丹酚酸B ;再如，中國專利CN 101638401 A公開了丹參水溶性提取物、其制 劑及用途，通過微生物發(fā)酵去除迷迭香酸，再經(jīng)反相樹脂分離，得到純度>99%丹參丹酚酸 B。明顯的，上述方法或多或少存在延長生產(chǎn)周期、生產(chǎn)控制較難以及生產(chǎn)成本較高的缺點， 難以有效滿足丹參丹酚酸B作為新型制劑（90%)的產(chǎn)業(yè)化開發(fā)應(yīng)用。因此，開發(fā)簡單、有效 且成本低的具有工業(yè)化價值的制備高含量丹參丹酚酸B的技術(shù)方法具有重要研究價值。
[0006] 基于上述分析，本發(fā)明人通過大量的勞動，發(fā)現(xiàn)了一種高含量丹參丹酚酸B的制 備方法，并在此基礎(chǔ)上開展藥理學(xué)研究，發(fā)現(xiàn)丹酚酸B可以通過升高H0-1 (血紅素氧化 酶-1)和降低cleaved cas印ase-3的過表達(dá)對視網(wǎng)膜-缺血再灌注損傷發(fā)揮神經(jīng)保護作 用；同時，還可以通過提高自由基清除劑S0D (超氧化物歧化酶）活性，降低脂質(zhì)過氧化物 MDA (丙二醛)的含量及抑制視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的凋亡發(fā)揮對慢性高眼壓視網(wǎng)膜發(fā)揮視神經(jīng) 保護作用。因此，丹參丹酚酸B對視網(wǎng)膜疾病有治療和預(yù)防的作用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明提供了一種丹參丹酚酸B的制備方法和其新用途，可在防治視網(wǎng)膜疾病中 應(yīng)用。如，視網(wǎng)膜血管阻塞病，新生血管年齡相關(guān)性黃斑變性，增生性糖尿病視網(wǎng)膜病和青 光眼等。
[0008] 本發(fā)明提供一種丹參丹酚酸B的制備方法其在視網(wǎng)膜疾病中的應(yīng)用，其特征在 于，所述制備方法包括如下步驟： (1) 去脂丹參生藥制備：取粉碎丹參生藥，用體積量為3~6倍原料重量的單一或混合 有機溶媒提取2~4次，每次1~3小時，分離提取液，得去脂丹參生藥； (2) 去脂丹參生藥提?。簩⑷ブ⑸幵儆皿w積量為3~7倍原料重量的醇水溶液 提取2~3次，每次1~12小時，合并提取液，減壓濃縮至無醇味； (3) 丹參丹酚酸B分離：將上述提取濃縮液，用大孔樹脂、聚酰胺樹脂等反相填料分離， 經(jīng)0~80% (V/V)(；~C 2溶液梯度洗脫，收集含丹參酚酸B部分； (4) 丹參丹酚酸B干燥：將含丹參丹酚酸B的洗脫液減壓濃縮，干燥，得到丹參丹酚酸B 提取物。
[0009] 優(yōu)選的，制備方法步驟（1)中有機提取溶液選自乙醚、乙酸丙酯、乙酸乙酯、乙酸 甲酯、丙酮、甲基叔丁基醚、甲醇、乙醇、異丙醇、正丁醇、叔丁醇和水中的一種或幾種混合有 機溶液。
[0010] 優(yōu)選的，制備方法步驟（1)中提取所用的時間為1~6小時，共提取3次。
[0011] 優(yōu)選的，制備方法步驟（2)中的提取方法選自冷浸、滲漉、回流提取及超聲提取中 的一種或幾種。
[0012] 優(yōu)選的，制備方法步驟（2)中的去脂丹參生藥回流及超聲提取丹參酚酸B所用的 時間為1~4小時，提取2次。
[0013] 優(yōu)選的，制備方法步驟（2)中的去脂丹參生藥回流及超聲提取丹參酚酸B所用的 醇水溶液為濃度60~80%的(；~C 2醇水溶液。
[0014] 優(yōu)選的，制備方法步驟（2)中的去脂丹參生藥冷浸及滲漉提取所用的時間為12小 時，提取2次。
[0015] 優(yōu)選的，制備方法步驟（2)中的去脂丹參生藥冷浸及滲漉提取丹參酚酸B所用的 醇水溶液為濃度〇~5%的(；~C 2醇水溶液。
[0016] 優(yōu)選的，制備方法步驟（3)中的大孔樹脂包含但不限于下列樹脂中的一種或幾 種。如：HP-20、H103、HPD-80、HPD-100、HPD-100B、HPD-200A、HPD-300、HPD-450、HPD-722、 HPD-826、HP-20、ADS-8、ADS-21、D101、AB-8 等。
[0017] 優(yōu)選的，制備方法步驟（3)中所用的0~80% (V/V)的(；~(：2醇水梯度洗脫方 法為：〇~20% (V/V) Ci~C 2醇水洗脫4~8個填料容積量的柱體積去掉紫草酸等雜質(zhì)， 20~50% (V/V)(；~C 2醇水洗脫6~8個填料容積量的柱體積，得到丹參丹酚酸B。
[0018] 優(yōu)選的，制備方法中干燥所用的方法選自減壓干燥、冷凍干燥、真空干燥、及噴霧 干燥中的一種或幾種。
[0019] 優(yōu)選的，制備方法得到的丹參丹酚酸B的含量大于等于90%，更優(yōu)的大于等于95%。
[0020] 優(yōu)選的，制備方法所得丹參丹酚酸B可制備成藥物制劑組合物并用于預(yù)防和治療 人類視網(wǎng)膜疾病。
[0021] 優(yōu)選的，丹參丹酚酸B可以通過升高H0-1 (血紅素氧化酶-1)，cleaved cas印ase-3的表達(dá)對視網(wǎng)膜-缺血再灌注損傷發(fā)揮神經(jīng)保護作用。
[0022] 優(yōu)選的，丹參丹酚酸B可以通過提高自由基清除劑S0D (超氧化物歧化酶）活性， 降低脂質(zhì)過氧化物MDA (丙二醛）的含量及抑制視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的凋亡發(fā)揮對慢性高眼 壓視網(wǎng)膜發(fā)揮視神經(jīng)保護作用。
[0023] 本發(fā)明所述丹酚酸B，可根據(jù)現(xiàn)有技術(shù)制備，符合藥用標(biāo)準(zhǔn)即可。優(yōu)選丹酚酸B純 度> 70%，更優(yōu)選純度> 90%，最優(yōu)選純度> 98%。
[0024] 本發(fā)明技術(shù)特點在于： 第一，本發(fā)明首次報道丹參生藥材首先通過有機及其混合溶劑