專利名稱：山楂葉總黃酮針劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種以山楂葉總黃酮為主要成分，對冠心病、心絞痛以及腦中風(fēng)具有顯著療效的針劑及其制備方法。
背景技術(shù)：
山楂葉中含有豐富的黃酮類化合物，主要成分有牡荊素鼠李糖甙、牡荊素葡萄糖甙、金絲桃甙等，具有廣泛的藥理活性，主要為舒張血管，增加冠脈流量，抗心肌缺氧、抗腦缺血以及保護腦組織解除局部淤血狀態(tài)。臨床上主要用于氣結(jié)血淤、胸悶憋氣、冠心病、心絞痛、冠狀動脈供血不足等癥。
目前上市的以山楂葉總黃酮為功效成分治療冠心病、心絞痛的藥物制劑有益心酮片、心安膠囊、復(fù)心片等，口服制劑療效發(fā)揮比較慢，而冠心病、心絞痛屬于臨床急癥，發(fā)病快，需要急救藥物，針劑是最好的劑型。由于山楂葉總黃酮制成水針劑在工藝上有一定的難度，所以一直沒有相關(guān)的產(chǎn)品問世。我們經(jīng)過研究解決了一系列的難題，最終研制成功。藥效實驗證明山楂葉總黃酮針劑具有活血化瘀，理氣舒絡(luò)，宣通心脈的功能，能增加冠脈流量、擴張冠脈血管，對治療冠心病、心絞痛有顯著的療效。實驗結(jié)果表明針劑中PH范圍在6.0-7.5為最佳PH值范圍，與PH7.5以上相比較，不但制劑顏色較淺，活性成分更穩(wěn)定。
經(jīng)過檢索，本發(fā)明的提取工藝與申請?zhí)枮?3120841X一種由山楂葉提取物為主要功效成分制成的制劑工藝有相似之處，本發(fā)明的工藝對該工藝進行了改進，直接采用了一定規(guī)格的聚酰胺層析分離，摸索出了最佳的工藝條件，省去了大孔樹脂，提高了收率，生產(chǎn)成本大大降低。藥效實驗證明，制備的總黃酮藥效確切，符合注射劑的質(zhì)量要求。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明涉及一種具有對冠心病、心絞痛有顯著療效的山楂葉總黃酮針劑及其制備方法。其特征在于用于制備針劑的山楂葉總黃酮含量為80-99.9％，其中牡荊素鼠李糖甙含量為10-50％，牡荊素葡萄糖甙含量為3-30％。其中針劑包括水針劑、輸液劑、粉針劑及凍干粉針劑。
制備山楂葉總黃酮水針劑，將山楂葉總黃酮，溶于適量注射用水中，加入計量的注射用水溶性輔料，加0.1-0.5％的活性炭除去熱源，調(diào)節(jié)PH至6.0-7.5，經(jīng)微孔濾膜超濾后，補充注射用水至規(guī)定量，灌裝于安瓿瓶中或輸液瓶中，熔封/軋蓋，經(jīng)檢驗合格后，包裝即得。每安瓿山楂葉總黃酮含量為3.0-50.0mg/ml；規(guī)格為2ml、5ml。輸液劑中山楂葉總黃酮含量為0.5-10.0mg/ml，規(guī)格為50ml、100ml、150ml和200ml。
制備山楂葉總黃酮粉針劑，將山楂葉總黃酮溶于適量注射用水中，加入計量的藥用輔料，加0.1-0.5％的活性炭除去熱源，調(diào)節(jié)PH為6.0-7.5，經(jīng)微孔濾膜超濾后，真空或噴霧干燥，無菌分裝于西林瓶中，每瓶含山楂葉總黃酮10-200mg，軋蓋，經(jīng)檢驗合格后，包裝即得。
制備山楂葉總黃酮凍干粉針劑，將山楂葉總黃酮溶于適量注射用水中，加入計量的藥用輔料，加0.1-0.5％的活性炭除去熱源，調(diào)節(jié)PH為6.0-7.5，經(jīng)微孔濾膜超濾后，分裝于安瓿中，每安瓿含山楂葉總黃酮10-200mg，經(jīng)冷凍干燥后熔封，檢驗合格后，包裝即得。
用于制備山楂葉總黃酮的水針劑和粉針劑，其中的藥用輔料是指抗氧化劑，包括亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、焦亞硫酸鈉、硫代硫酸鈉、維生素C中的一種或兩種。
用于制備山楂葉總黃酮的凍干粉針劑，其中的藥用輔料是指凍干粉支持劑，包括以下輔料中的一種或兩種乳糖、甘露醇、肌醇、葡聚糖、甘氨酸。
本發(fā)明的山楂葉總黃酮提取物的制備方法如下取山楂葉，加10-16倍量的稀乙醇溫浸提取三次，每次1-5小時，濾過，合并濾液，減壓濃縮，濃縮至無醇味，加水適量，冷藏24-48小時，吸取上清液，下層濾過，濾液與上清液合并，用水飽和的正丁醇等倍量萃取三次，合并回收正丁醇至干，用適量水溶解后上聚酰胺樹脂柱，用蒸餾水洗脫至有鹽酸-鎂粉反應(yīng)時開始接收，并同時改用稀乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，至鹽酸-鎂粉反應(yīng)陰性，回收乙醇至干，即得本發(fā)明的山楂葉總黃酮。
本發(fā)明中總黃酮含量的測定方法1、對照品溶液的制備精密稱取在120℃減壓干燥至恒重的牡荊素鼠李糖甙對照品200mg，置100ml量瓶中，加甲醇70ml，至水浴上微熱使溶解，放冷，加甲醇至刻度，搖勻。精密吸取10ml，置100ml量瓶中，加水至刻度，搖勻，即得(每1ml中含牡荊素鼠李糖甙0.2mg)。
2、標準曲線的制備精密量取對照品溶液0ml、1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml、5.0ml與6.0ml，分別置25ml量瓶中，各加水至6ml，加5％亞硝酸鈉溶液1ml，使混勻，放置6分鐘，加10％硝酸鋁溶液1ml，搖勻，放置6分鐘，加氫氧化鈉溶液10ml，再加水至刻度，搖勻，放置15分鐘，照分光光度法在280nm的波長處測定吸收度，以吸收度為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標準曲線。
3、測定法山楂葉總黃酮粉末約1g，于60℃干燥6小時，精密稱定，置索氏提取器中，加乙醚120ml，加熱回流至提取液無色，放冷，棄去乙醚液。再加甲醇90ml，加熱回流至提取液無色，移置100ml量瓶中，用甲醇少量洗滌容器，洗液并入量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻。精密量取10ml，置100ml量瓶中，加水至刻度，搖勻。精密量取3ml，置25ml量瓶中，照標準曲線制備項下的方法，自“加水至6ml”起依法測定吸收度，從標準曲線上讀出供試品溶液中牡荊素鼠李糖甙的重量(μg)，計算，即得。
實施例1制備山楂葉總黃酮水針劑和輸液劑。
將用本發(fā)明的制備方法制得的山楂葉總黃酮2kg，溶于100L注射用水中，配成20mg/ml，調(diào)節(jié)PH至7.0。經(jīng)微孔濾膜超濾后，補充注射用水至規(guī)定量，灌裝于安瓿瓶中或輸液瓶中，熔封/軋蓋，經(jīng)檢驗合格后，包裝即得。
按說明書中提供的方法測定，結(jié)果得針劑每安瓿中山楂葉總黃酮的濃度為9.7-10.2mg/ml；規(guī)格為2ml、5ml。輸液劑中山楂葉總黃酮的濃度為1.0-1.2mg/ml，規(guī)格為50ml、100ml、150ml和200ml。
實施例2制備山楂葉總黃酮粉針劑。
將用本發(fā)明的制備方法制得的山楂葉總黃酮2kg溶于適量100L注射用水中，加入計量的藥用輔料，調(diào)節(jié)PH為7.0，經(jīng)微孔濾膜超濾后，真空或噴霧干燥得山楂葉總黃酮無菌粉，無菌分裝于西林瓶中，制成每瓶含山楂葉總黃酮無菌粉50mg、100mg兩個規(guī)格，軋蓋，經(jīng)檢驗合格后，包裝即得。
實施例3制備山楂葉總黃酮凍干粉針劑。
將用本發(fā)明的制備方法制得的山楂葉總黃酮2kg，溶于100L注射用水中，配成20mg/ml的溶液，調(diào)節(jié)PH至7.0。經(jīng)微孔濾膜超濾后，分裝于5ml、10ml安瓿中，經(jīng)冷凍干燥后熔封，檢驗合格后，包裝即得。分別得每安瓿含山楂葉總黃酮50mg、100mg。
實施例4本發(fā)明的山楂葉總黃酮的制備方法如下取山楂葉1kg，加40％稀乙醇50℃溫浸提取三次，每次3小時，濾過，合并濾液，減壓濃縮，濃縮至無醇味，加水至2kg，冷藏48小時，吸取上清液，下層濾過，濾液與上清液合并，用水飽和的正丁醇等倍量萃取三次，合并回收正丁醇至干，用2000ml水溶解后上聚酰胺樹脂柱，先用蒸餾水洗脫，至有鹽酸-鎂粉反應(yīng)時開始接收，并同時改用40％稀乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，至鹽酸-鎂粉反應(yīng)陰性，回收乙醇至干，即得本發(fā)明的提取物210g，檢測結(jié)果表明山楂葉總黃酮含量為85％，總黃酮中的主要成分牡荊素鼠李糖甙的含量為25％，牡荊素葡萄糖甙的含量為10％。
本發(fā)明山楂葉總黃酮針劑的有關(guān)藥效學(xué)實驗由于本發(fā)明中所述的針劑都是由同種質(zhì)量標準的山楂葉總黃酮制成，因此可以用山楂葉總黃酮原料進行藥效實驗。
實驗一、山楂葉總黃酮對犬冠脈血流量的影響實驗材料1.實驗動物健康成年犬36只，雌雄兼用，體重17.50±1.77kg。
2.實驗藥物山楂葉總黃酮50mg/支，0.9％氯化鈉注射液。
實驗共分4組(1)空白對照組，生理鹽水1ml/kg；(2)山楂葉總黃酮5mg/kg劑量組；(3)山楂葉總黃酮10mg/kg劑量組；(4)山楂葉總黃酮20mg/kg劑量組。各給藥組60min前n＝12，90min后n＝6。
實驗藥物用生理鹽水配制成同體積(50ml)，電腦微量注射泵以5ml/min的速度經(jīng)股靜脈給入試藥。
實驗方法實驗動物用戊巴比妥鈉(30mg/kg)靜脈麻醉，氣管插管，連接電動人工呼吸機。施左側(cè)第四肋間開胸術(shù)，暴露心臟，剪開心包，做心包床，分離冠狀動脈左旋支及主動脈根部，放置電磁流量計探頭，測量冠脈血流量。手術(shù)完畢，待所觀察指標穩(wěn)定后，記錄藥前值，給入所試藥物。并于藥后即刻、藥后10、30、60、90min進行記錄并測定各給藥組對犬冠脈血流量(ml/100g·min-1)的影響。將各項觀測指標及推導(dǎo)參數(shù)進行統(tǒng)計學(xué)處理，以不同觀察時間的實測值進行給藥前后自身比較，其變化百分率進行組間比較，以t檢驗判斷其顯著性。
表1各給藥組對犬冠脈血流量(ml/100g·min-1)的影響(X±SD)

實驗結(jié)果顯示，山楂葉總黃酮可明顯增加冠脈流量，擴張冠脈血管，降低冠脈阻力，改善心肌的供血供氧，并能降低總外周阻力，對心血管系統(tǒng)起到調(diào)整和改善作用。
實驗二、山楂葉總黃酮對缺血再灌注所致心肌梗塞的影響實驗材料1.實驗動物Wistar種大鼠32只，雄性，體重250～270g。
2.實驗藥物山楂葉總黃酮50mg/支，0.9％氯化鈉注射液。
實驗方法動物隨機分為4組模型組(生理鹽水)，山楂葉總黃酮20、10、5mg/kg組。藥物以生理鹽水稀釋至所需濃度，給藥體積均為3ml/kg，給藥途徑為靜脈。
動物以戊巴比妥鈉腹腔麻醉(45mg/kg)，仰位固定，心電圖機以標準II導(dǎo)聯(lián)監(jiān)測動物心電圖；切開氣管，插入氣管插管，接呼吸機進行人工呼吸(32次/分，呼吸比值1∶3)；開胸，斷3-5肋，打開心包膜，暴露心臟，于冠狀動脈左前降支根部穿線(0號縫合線)，備結(jié)扎用；分離左股靜脈，備給藥用；穿線后穩(wěn)定10min，將一塑料凹管與血管并列，結(jié)扎(無ST段及T波改變者淘汰)，給入受試藥物；40min后，沿凹槽剪斷結(jié)扎線，使前降肢實現(xiàn)再灌注；縫合胸壁，恢復(fù)自主呼吸。
再灌注損傷2小時后，腹主動脈取血，心臟結(jié)扎線以下橫切5片，N-BT染色，采板和不銹鋼絲篩網(wǎng)固定，即得(如圖)。
擋板 為一平整光滑的透明塑料塊，相對密度1.18～1.20，直徑20.7±0.15mm，厚9.5±0.15mm；擋板共有5個孔，孔徑2mm，中央1個孔，其余4個孔距中心6mm，各孔間距相等；擋板側(cè)邊有4個等距離的V形槽，V形槽上端寬9.5mm，深2.55mm，底部開口處的寬與深度均為1.6mm。
檢查法 將吊籃通過上端的不銹鋼軸懸掛于金屬支架上，浸入1000ml燒杯中，并調(diào)節(jié)吊籃位置使其下降時篩網(wǎng)距燒杯底部25mm，燒杯內(nèi)盛有溫度為37±1℃的水，調(diào)節(jié)水位高度使吊籃上升時篩網(wǎng)在水面下25mm處。取供試品6粒，按上述方法檢查，應(yīng)在30分鐘內(nèi)全部崩解，包衣滴丸應(yīng)在1小時內(nèi)全部崩解。
三.崩解時限實驗數(shù)據(jù)用上述方法制備的三種丸劑，按上述方法進行崩解時限的實驗結(jié)果如下

實驗表明，用相同的提取藥材中有效成分的方法將六味藥材中的揮發(fā)油、脂溶性成分及水溶性成分全部提出，按上述的方法制成滴心丸、滴丸以及濃縮丸，按《中華人民共和國藥典》規(guī)定的方法及上述描述的方法，分別進行崩解時限的檢測，滴心丸在20分鐘即可全部崩解，而滴丸在60分鐘內(nèi)即可崩解，而濃縮丸要在120分鐘才可崩解。說明滴心丸崩解快，易吸收，起效快，作用強。


附圖1是本發(fā)明滴心丸的橫截面示意圖。其中1-藥核、2-包裹層、3-包衣層。
具體實施例本發(fā)明的實施例1制備復(fù)合維生素滴心丸統(tǒng)計學(xué)處理方法 全部實驗數(shù)據(jù)的統(tǒng)計學(xué)處理均采用t檢驗法進行顯著性檢驗，結(jié)果以均數(shù)減標準差(x±S)表示。
實驗結(jié)果山楂葉總黃酮對全腦缺血小鼠的生存時間明顯延長、SOD升高、MDA含量明顯降低，證明用本發(fā)明工藝制備的山楂葉總黃酮具有延長腦中風(fēng)患者的生存時間并具有保護腦組織的作用。
表3山楂葉總黃酮對全腦缺血小鼠的生存時間、SOD、MDA含量的影響(x±S，n＝10)組別 生存時間 SOD MDA空白組 335.46±61.6395.96±32.50假手術(shù)組 338.21±25.0287.02±19.06模型組112.30±32.74235.89 111.39△114.56±37.72△銀杏葉組 120.21±42.30△315.57±52.8993.68±25.92大劑量組 150.65±38.37△356.95±93.06△61.21 ±22.62△中劑量組 130.65±30.97△337.06±57.23△70.91±16.30△小劑量組 119.21±25.80296.39±110.28 96.32±40.35與空白組比較△P＜0.05本發(fā)明針劑的最佳PH值范圍篩選實驗結(jié)果用加速穩(wěn)定性實驗方法考察比較兩者的穩(wěn)定性，條件溫度40℃，相對濕度75％，時間三個月，每隔一個月抽樣檢測一次，最佳PH值范圍為6.0-7.5，注射液顏色太深，不利于橙明度的檢查。結(jié)果見下表

備注本發(fā)明中牡荊素鼠李糖甙與牡荊素葡萄糖甙的化學(xué)名稱牡荊素鼠李糖甙為5，7，4`-三羥基黃酮-8-C-β-D-葡萄糖基(1→2)-β-D-鼠李糖甙牡荊素葡萄糖甙為5，7，4`-三羥基黃酮-8-C-β-D-葡萄糖基(1→4)-β-D-葡萄糖甙
權(quán)利要求
1.一種對冠心病、心絞痛具有顯著療效的山楂葉總黃酮針劑及其制備方法，其特征在于用于制備針劑的山楂葉總黃酮含量為80-99.9％，總黃酮中的主要成分牡荊素鼠李糖甙的含量為10-50％，牡荊素葡萄糖甙的含量為3-30％。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的針劑，包括水針劑、粉針劑、輸液劑。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的針劑，是由山楂葉總黃酮作為活性成分和藥用輔料組成。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的水針劑，是由山楂葉總黃酮和注射用水及藥用輔料組成，其特征在于將山楂葉總黃酮，溶于適量注射用水中，加入計量的注射用水溶性輔料，加0.1-0.5％的活性炭除去熱原，調(diào)節(jié)PH至6.0-7.5，經(jīng)微孔濾膜超濾后，補充注射用水至規(guī)定量，灌裝于安瓿瓶中或輸液瓶中，熔封/軋蓋，經(jīng)檢驗合格后，包裝即得；針劑中山楂葉總黃酮的含量為3.0-50.0mg/ml；規(guī)格為2ml、5ml；輸液劑含山楂葉總黃酮0.5-10.0mg/ml，規(guī)格為50ml、100ml、150ml和200ml。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的粉針劑，是由山楂葉總黃酮與注射用水溶性藥用輔料組成，其特征在于將山楂葉總黃酮溶于適量注射用水中，加入計量的藥用輔料，加0.1-0.5％的活性炭除去熱原，調(diào)節(jié)PH為6.0-7.5，經(jīng)微孔濾膜超濾后，真空或噴霧干燥，無菌分裝于西林瓶中，每瓶含山楂葉總黃酮10-200mg，軋蓋，經(jīng)檢驗合格后，包裝即得。
6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的粉針劑，是由山楂葉總黃酮和注射用水溶性藥用輔料組成，其特征在于將山楂葉總黃酮溶于適量注射用水中，加入計量的藥用輔料，調(diào)節(jié)PH為6.0-7.5，經(jīng)微孔濾膜超濾后，分裝于安瓿中，每安瓿中山楂葉總黃酮含量為10-200mg，經(jīng)冷凍干燥后熔封，檢驗合格后，包裝即得。
7.據(jù)權(quán)利要求4或5所述的山楂葉總黃酮針劑，其中的藥用輔料是指抗氧化劑，包括亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、焦亞硫酸鈉、硫代硫酸鈉、維生素C中的一種或兩種。
8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的山楂葉總黃酮針劑，其中的藥用輔料是指凍干粉支持劑，包括以下輔料中的一種或兩種乳糖、甘露醇、肌醇、葡聚糖、甘氨酸。
全文摘要
本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種以山楂葉總黃酮為主要成分，對冠心病、心絞痛以及腦中風(fēng)有顯著療效的針劑及其制備方法。用本發(fā)明的提取方法制備的山楂葉總黃酮含量為80－99.9％，其中牡荊素鼠李糖甙的含量為10－50％，牡荊素葡萄糖甙的含量為3－30％。
文檔編號A61K9/14GK1634110SQ20041008671
公開日2005年7月6日 申請日期2004年10月29日 優(yōu)先權(quán)日2004年4月1日
發(fā)明者梁玉英 申請人:梁玉英