專利名稱：一種提取山楂總黃酮的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種提取山楂總黃酮的方法。
背景技術(shù)：
黃酮類化合物是山楂的主要活性成分，含量在2.8％左右。山楂總黃酮化合物是以苯基色原酮為基核的化合物，既含有極性較大的甙又含有極性較小的甙元，其中包括牡荊素、牡荊素-4-鼠李糖甙、牡荊素-4、7-雙葡萄糖甙、乙酰牡荊素-4-鼠李糖甙、牡荊甙、異牡荊甙、東方蓼素、異東方蓼素等多種化合物。
心腦血管藥物在藥品消費(fèi)市場(chǎng)中占有較大的份額，全球每年大約有八百億元的市場(chǎng)。在中國，降血脂藥每年大約有20億元的市場(chǎng)。流行病學(xué)調(diào)查表明，我國20歲以上成人患心腦血管病的比率為6％，且發(fā)病率與死亡率存在上升趨勢(shì)。我國中老年人約占全國人口的40％，查出血脂水平高的占13％。估計(jì)目前我國成人高血脂患者有8000多萬人，降血脂藥物原料的研發(fā)具有巨大的市場(chǎng)潛力。
國內(nèi)目前治療高血脂的成方藥中，有81％的處方中使用山楂，由于食用山楂時(shí)酸澀不宜入口，食用過多還易引發(fā)結(jié)石等副作用。有研究報(bào)導(dǎo)，山楂黃酮類物質(zhì)對(duì)252例冠心病、心絞痛病人總有效率為94.4％，對(duì)降低血脂總有效率為85％，對(duì)治療冠心病、心肌炎及心肌病引起的早搏總有效率為63.2％，此外對(duì)降低舒張壓，防治心率失常、心血管病和活血化瘀也起重要作用。因此，制備高純度山楂總黃酮對(duì)國寶中藥進(jìn)行西藥化臨床應(yīng)用具有重大意義。
臨床應(yīng)用表明，山楂葉總黃酮可以治療冠心病、心絞痛、心律失常等心腦血管疾病。北京植物研究所、中醫(yī)研究院等單位，以山楂葉總黃酮制成的山楂黃酮片，經(jīng)6家醫(yī)院對(duì)137例冠心病心絞痛病人治療觀察表明，對(duì)心絞痛總有效率達(dá)94.4％。癥狀改善總有效率為92.2％，心電圖改善有效率為46.4％。46例經(jīng)雙盲對(duì)照觀察，對(duì)心絞痛總有效率山楂總黃酮組為84.8％，安慰劑對(duì)照組僅37％，心電圖有效率分別為46.4％及3.3％，兩組比較差異非常顯著。上海、浙江和山西的3家醫(yī)院，以雙盲對(duì)照法對(duì)300例心腦血管病患者所作臨床療效觀察表明，益心酮(山楂葉總黃酮)總有效率84.8％，對(duì)冠心病心絞痛有效率85.7％，明顯改善冠心病患者24小時(shí)心電圖，顯著降低血清總膽固醇和甘油三酯含量，提高血清HDL含量，降低心血管病患者血小板和紅細(xì)胞電泳時(shí)間，改善血流量和微循環(huán)，顯著增加腦血流量，有效地抑制腦血管病患者過氧化脂質(zhì)的產(chǎn)生，且均未見毒副作用。同時(shí)，山楂總黃酮作為一種安全有效的功能因子，在保健食品開發(fā)中也有重要價(jià)值。
有關(guān)醫(yī)藥用高純度山楂總黃酮的制備工藝研究較少，提取含量較低。有效成分純化和分離的方法主要有溶劑萃取(包括兩相溶劑萃取和系統(tǒng)溶劑萃取)，醇沉，鹽析，結(jié)晶，透析和層析法。溶劑萃取法收率低且有機(jī)溶劑價(jià)格較高，工藝不合理。水浸提醇沉法，盡管可以達(dá)到提純目的，但在雜質(zhì)多糖、果膠，果酸、等沉淀的同時(shí)，仍有少部分山楂黃酮沉淀，使產(chǎn)品收率下降。中國專利公開號(hào)1062294，名稱為“由山楂葉提取山楂總黃酮的方法”的專利申請(qǐng)中，公開了一種提取含量在80％左右的方法，即存在著上述問題。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種提取高純度醫(yī)用山楂總黃酮的方法。
為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明采取以下技術(shù)方案一種提取山楂總黃酮的方法，以粉碎的山楂果或/和山楂葉為原料，包括以下步驟1)粗提物的制備；2)將粗提物用超濾、柱層析純化，得到產(chǎn)品。
為了使得到的產(chǎn)品純度更高，所述柱層析純化后的產(chǎn)物再經(jīng)過溶劑結(jié)晶后得到產(chǎn)品；所述溶劑結(jié)晶法的溶劑為乙酸乙酯。樣品在所述柱層析后經(jīng)瞬間干燥，再進(jìn)行所述溶劑結(jié)晶。溶劑結(jié)晶后得到的產(chǎn)物經(jīng)粉碎、過篩、包裝、滅菌后得到成品。
其中，所述粗提物通過有機(jī)溶劑提取、過濾、濃縮得到，具體包括以下步驟①原料的處理將山楂或干燥山楂葉粉碎，過120目篩備用。
②浸提采用有機(jī)溶劑循環(huán)使用萃取法進(jìn)行浸提，用以浸提的有機(jī)溶劑有甲醇，乙醇，丙酮，乙酸乙酯，乙酸乙酯/甲醇等，其中以乙醇為優(yōu)選，較優(yōu)選的乙醇濃度為40-90％，最優(yōu)選的乙醇濃度為50-70％。浸提的條件為溶劑和山楂的比例為2-8∶1(V∶W)，較適宜的比例為3-5∶1(V∶W)；提取溫度為30-60℃；提取時(shí)間為3-5小時(shí)。
③濃縮提取液中除山楂總黃酮外，還有酒精，水、多糖、纖維素、蛋白質(zhì)、色素、果酸、果膠、萜烯類等物質(zhì)，本發(fā)明采用減壓蒸餾法，在60-70℃下，將提取液進(jìn)行濃縮。
粗提物經(jīng)超濾—柱層析—溶劑結(jié)晶進(jìn)行純化濃縮后的粗提物用超濾法有效地濾除大分子多糖、蛋白質(zhì)等雜質(zhì)，優(yōu)選的是以中空纖維膜(截留分子量3000-8000)為介質(zhì)，超濾的壓力優(yōu)選為0.15KPa。然后用大孔吸附樹脂柱層析法進(jìn)行純化，優(yōu)選的是以大孔陰離子交換樹脂或聚酰胺樹脂為層析介質(zhì)，洗脫劑為梯度乙醇溶液。
3)山楂總黃酮含量測(cè)定本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于本發(fā)明采用乙醇逆流萃取提取工藝進(jìn)行浸提，提取率可高達(dá)93.6％。同時(shí)，該法將乙醇循環(huán)使用，能減少乙醇的用量，降低能耗。采用乙醇為溶劑，使提取后的殘?jiān)茉僮鞴自系扔?，具有良好的環(huán)保效果，操作簡便。采用以中空纖維膜為介質(zhì)的超濾法能有效地濾除大分子多糖、蛋白質(zhì)等雜質(zhì)，具有節(jié)約能源，分離雜質(zhì)確定等優(yōu)點(diǎn)。采用大孔陰離子交換樹脂或聚酰胺樹脂為介質(zhì)的吸附性大孔樹脂層析法進(jìn)行純化，以乙醇為洗脫劑進(jìn)行洗脫，操作簡便，設(shè)備要求低，離子交換樹脂再生簡單，可以多次重復(fù)利用。離子交換樹脂法純化后的山楂黃酮的含量可提高60％左右。采用乙酸乙酯溶劑結(jié)晶法進(jìn)一步純化，產(chǎn)品含量可提高到96％左右。采用瞬間噴霧干燥工藝，使黃酮在極短的時(shí)間內(nèi)干燥為成品，從而保證黃酮不因加工而改變特性。
用本發(fā)明的方法可以得到純度較高的產(chǎn)品，對(duì)工業(yè)化生產(chǎn)高純度的山楂黃酮具有重要的意義及良好的經(jīng)濟(jì)效果，為山楂總黃酮在藥物、養(yǎng)生保健品開發(fā)等方面應(yīng)用的擴(kuò)大奠定了基礎(chǔ)。


圖1為山楂黃酮生產(chǎn)工藝流程圖具體實(shí)施方式
實(shí)施例1、從山楂果中提取山楂總黃酮在1000升搪瓷罐中投入經(jīng)粉碎成米粒大小的山楂果200公斤，加入70％乙醇溶液800公斤，加熱回流4小時(shí)，浸提三次。合并浸提液，在60℃下減壓蒸餾濃縮提取液，并回收乙醇。濃縮液用中空纖維素膜(截留分子量3000)進(jìn)行超濾，超濾液進(jìn)行大孔樹脂柱層析分離，分離介質(zhì)為D241大孔陰離子交換樹脂，用蒸餾水及不同濃度的乙醇進(jìn)行分級(jí)洗脫，先以蒸餾水洗脫，去除水溶性蛋白質(zhì)和多糖，再以20％、30％、40％、50％、60％乙醇洗脫，去除醇溶性多糖和鞣質(zhì)等，最后以70％乙醇洗脫，得到山楂總黃酮。將含有黃酮物質(zhì)的洗脫液在60℃下減壓濃縮，并回收乙醇。再將濃縮液用乙酸乙酯溶劑結(jié)晶法提純，噴霧干燥，粉碎，過60-80目篩，得山楂黃酮產(chǎn)品4.5公斤，含量98％(采用紫外分光光度法在510nm下，用蘆丁作為基準(zhǔn)測(cè)定山楂總黃酮含量。詳細(xì)操作參見《中華人民共和國藥典》2000年版P563)，最后將產(chǎn)品經(jīng)原子能輔照滅菌后避光存放。
在上述過程中，當(dāng)黃酮的含量要求不是非常高時(shí)，也可以是將大孔樹脂淋洗液經(jīng)60-70℃減壓濃縮后，在高速離心干燥器中進(jìn)行瞬間干燥，干燥后的樣品用紫外分光光度法測(cè)定含量，當(dāng)黃酮含量大于90％時(shí)，將其粉碎，過60-80目篩，即為山楂黃酮產(chǎn)品。
實(shí)施例2、從山楂葉中提取山楂總黃酮方法與實(shí)施例1的方法相同，只是在1000升搪瓷罐中投入的是經(jīng)粉碎成米粒大小的山楂葉200公斤，得山楂黃酮產(chǎn)品5公斤，含量95％。
實(shí)施例3、乙醇溶劑循環(huán)使用萃取法從山楂果中提取山楂總黃酮如圖1所示，采用乙醇循環(huán)連續(xù)萃取提取工藝進(jìn)行浸提。在1000升搪瓷罐中投入粉碎成米粒大小的山楂果200公斤，加入上一批第三次浸提液800公斤，加熱回流4小時(shí)，過濾；第一次濾渣加入70％乙醇液800公斤加熱回流4小時(shí)，過濾；第二次濾渣中加入70％乙醇800公斤加熱回流4小時(shí)，過濾，濾液留做下一批的第一次浸提用，濾渣另做處理。合并前兩次濾液，在60℃下減壓蒸餾濃縮，并回收乙醇。經(jīng)上述濃縮后得到的濃縮液中除山楂黃酮外，還有部分的多糖、果膠，果酸、等其他物質(zhì)，用蘆丁作為基準(zhǔn)的紫外分光光度法在510納米測(cè)定山楂果總黃酮含量為19％左右。濃縮液用中空纖維素膜進(jìn)行超濾后，進(jìn)行大孔樹脂柱層析分離，分離介質(zhì)為80-100目聚酰胺樹脂，用蒸餾水及不同濃度的乙醇進(jìn)行分級(jí)洗脫。先以蒸餾水洗脫，再以20％、30％、40％、50％、60％、70％乙醇洗脫。將含有黃酮物質(zhì)的洗脫液在60℃下減壓濃縮，并回收乙醇。再將濃縮液用乙酸乙酯溶劑結(jié)晶法提純，噴霧干燥，粉碎，過60-80目篩，得山楂黃酮產(chǎn)品4.4公斤，含量96％，提取率為93.6％。最后將產(chǎn)品經(jīng)原子能輔照滅菌后避光存放。
權(quán)利要求
1.一種提取山楂總黃酮的方法，以粉碎的山楂果或/和山楂葉為原料，包括以下步驟1)粗提物的制備；2)將粗提物用超濾、柱層析純化，得到產(chǎn)品。
2.按照權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述柱層析純化后的產(chǎn)物再經(jīng)過溶劑結(jié)晶后得到產(chǎn)品；所述溶劑結(jié)晶法的溶劑為乙酸乙酯。
3.按照權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述粗提物通過有機(jī)溶劑提取、過濾、濃縮得到。
4.按照權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于所述有機(jī)溶劑提取采用溶劑逆流萃取法，其中提取溫度為30-60℃，提取時(shí)間為3-5小時(shí)。
5.按照權(quán)利要求3或4所述的方法，其特征在于所述有機(jī)溶劑和山楂的比例為2-8∶1(V∶W)，較適宜比例為3-5∶1(V∶W)。
6.按照權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于所述有機(jī)溶劑為乙醇，其中優(yōu)選的乙醇濃度為40-90％，最優(yōu)選為50-70％。
7.按照權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述超濾的介質(zhì)為中空纖維膜。
8.按照權(quán)利要求1或7所述的方法，其特征在于所述超濾的壓力為0.15KPa。
9.按照權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述柱層析中的層析介質(zhì)為大孔陰離子交換樹脂或聚酰胺樹脂，其洗脫劑為梯度乙醇溶液。
10.按照權(quán)利要求2中所述的方法，其特征在于樣品在所述柱層析后經(jīng)瞬間干燥，再進(jìn)行所述溶劑結(jié)晶；所述溶劑結(jié)晶后得到的產(chǎn)物經(jīng)粉碎、過篩、包裝、滅菌后得到成品。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種提取山楂總黃酮的方法，用該方法得到的山楂總黃酮純度高，可以滿足醫(yī)用要求。本發(fā)明的技術(shù)方案是，以粉碎的山楂果或/和山楂葉為原料，包括以下步驟1)粗提物的制備；2)將粗提物用超濾、柱層析純化，得到產(chǎn)品。為了使得到的產(chǎn)品純度更高，所述柱層析純化后的產(chǎn)物再經(jīng)過溶劑結(jié)晶后得到產(chǎn)品；所述溶劑結(jié)晶法的溶劑為乙酸乙酯。樣品在所述柱層析后經(jīng)瞬間干燥，再進(jìn)行所述溶劑結(jié)晶。溶劑結(jié)晶后得到的產(chǎn)物經(jīng)粉碎、過篩、包裝、滅菌后得到成品。本發(fā)明的方法使產(chǎn)品中總黃酮的含量高達(dá)96％，提取率達(dá)到93.6％。
文檔編號(hào)C07H1/08GK1530369SQ03119429
公開日2004年9月22日 申請(qǐng)日期2003年3月12日 優(yōu)先權(quán)日2003年3月12日
發(fā)明者王茂一, 郭建華 申請(qǐng)人:山東省臨沂精細(xì)化工研究所