專利名稱：含有甲基維生素b的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及含有作為肌萎縮性側(cè)索硬化癥治療劑的甲基維生素B12的高濃度注射用凍干制劑及其制備方法。
背景技術(shù)：
肌萎縮性側(cè)索硬化癥是以腦干、脊髓、運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元的病變?yōu)橹黧w、引發(fā)進(jìn)行性延髓綜合癥(progressive bulbar syndrome)、上運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元障礙、下運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元障礙的疾病，也稱ALS(amyotrophic lateralsclerosis)，“由于脊髓和大腦的運(yùn)動(dòng)神經(jīng)細(xì)胞變性、消失，在臨床上導(dǎo)致全身性肌肉萎縮、痙攣，通常經(jīng)2～3年，由于呼吸肌的麻痹而死亡”，是所謂的疑難病的一種。
肌萎縮性側(cè)索硬化癥的原因還不明確，目前，仍未發(fā)現(xiàn)該病的根本治療方法，不僅不能抑制或延緩該病的進(jìn)展，而且尚未發(fā)現(xiàn)有效的治療方法。
近年來(lái)，Kaji觀察到如果大量給予能夠有效治療人末梢神經(jīng)障礙的甲基維生素B12(例如，每日1次肌肉注射15～50mg甲基維生素B12)，在肌萎縮性側(cè)索硬化癥患者中，觀測(cè)到主觀肌力劑量依賴性地增強(qiáng)以及作為客觀指標(biāo)的肌肉復(fù)合活動(dòng)電位的振幅明顯增加。從而發(fā)現(xiàn)能夠獲得利用以往治療劑未得到的顯著治療效果，作為以甲基維生素B12為有效成分的肌萎縮性側(cè)索硬化癥治療劑，提出了甲基維生素B12高濃度制劑用水針劑(例如，參見(jiàn)特開(kāi)平10-218775號(hào))。
另外，在人末梢神經(jīng)障礙的治療中甲基維生素B12的給藥量通常為0.5～1.5mg/日。
但是，由于所述水針劑需要溶解在乙醇、生理鹽水或緩沖液中，制成15～50ml/安瓿的甲基維生素B12溶液，所以指出該水針劑存在難以確保光穩(wěn)定性和貯藏穩(wěn)定性、以及難以保證無(wú)菌性的問(wèn)題。
另一方面，含有維生素制劑之一的甲基維生素B12作為藥效成分的注射用凍干制劑主要針對(duì)含有各種必需維生素的綜合維生素注射劑進(jìn)行了研究。在將上述綜合維生素制劑制成凍干制劑時(shí)，已經(jīng)知道在確保貯藏中的穩(wěn)定性和改善再次溶解后的溶解狀態(tài)方面還存在很多課題(例如，參見(jiàn)特開(kāi)昭62-38號(hào)、特開(kāi)昭63-3137號(hào)、特開(kāi)平1-132514號(hào))。

發(fā)明內(nèi)容
所以，本發(fā)明鑒于上述情況，以提供含有高含量甲基維生素B12凍干制劑作為第一目的，上述凍干制劑的經(jīng)時(shí)穩(wěn)定性優(yōu)異，能用于甲基維生素B12的高濃度療法。
另外，本發(fā)明以提供含有甲基維生素B12的凍干制劑的制備方法作為第二目的，上述甲基維生素B12穩(wěn)定地存在于凍干固體中。
本發(fā)明人為了達(dá)到上述目的，進(jìn)行了銳意研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)甲基維生素B12存在于非晶形凍干固體中時(shí)比存在于結(jié)晶形凍干固體中穩(wěn)定，從而完成了本發(fā)明。
即，在本發(fā)明的第一種方案中，上述第一目的通過(guò)下述凍干制劑得以實(shí)現(xiàn)，上述凍干制劑是含有甲基維生素B12或其藥理學(xué)上可接受的鹽、和賦形劑的凍干制劑，上述賦形劑中的至少一種或一種以上是非晶形狀態(tài)。
本發(fā)明中所述凍干制劑的優(yōu)選方案的特征為所述甲基維生素B12或其藥理學(xué)上可接受的鹽也是非晶形狀態(tài)。
本發(fā)明中所述凍干制劑的優(yōu)選方案的特征為非晶形狀態(tài)的上述賦形劑含有糖類。
本發(fā)明中所述凍干制劑的優(yōu)選方案的特征為所述賦形劑進(jìn)一步含有糖醇。
本發(fā)明中所述凍干制劑的優(yōu)選方案的特征為上述凍干制劑中進(jìn)一步含有pH調(diào)節(jié)劑。
本發(fā)明中所述凍干制劑的優(yōu)選方案的特征為上述凍干制劑中進(jìn)一步含有抗氧化劑。
本發(fā)明中所述凍干制劑的優(yōu)選方案的特征為所述賦形劑含有糖類和糖醇的情況下，相對(duì)糖類和糖醇類的總重量，含有至少20重量％非晶形狀態(tài)的上述賦形劑。
本發(fā)明中所述凍干制劑的優(yōu)選方案的特征為所述糖類是蔗糖或乳糖。
本發(fā)明中所述凍干制劑的優(yōu)選方案的特征為所述糖醇是甘露醇。
另外，在本發(fā)明的第二種方案中，上述第一目的是通過(guò)下述凍干制劑實(shí)現(xiàn)的，上述凍干制劑含有甲基維生素B12或其藥理學(xué)上可接受的鹽、和賦形劑、并利用下述制備方法制得，上述制備方法包括(a)使上述甲基維生素B12或其藥理學(xué)上可接受的鹽、和上述賦形劑溶解在溶劑中的工序、和(b)為使上述賦形劑中的至少一種或一種以上生成非晶形狀態(tài)而凍干上述溶液的工序。
本發(fā)明中所述凍干制劑的優(yōu)選方案的特征為在所述工序(b)中，為使上述甲基維生素B12或其藥理學(xué)上可接受的鹽也生成非晶形狀態(tài)而進(jìn)行凍干。
本發(fā)明中所述凍干制劑的優(yōu)選方案的特征為在所述工序(b)中，在不引起上述賦形劑結(jié)晶化的溫度或該溫度以下進(jìn)行預(yù)冷凍。凍干時(shí)的預(yù)冷凍特別優(yōu)選在上述賦形劑的低共熔點(diǎn)或低共熔點(diǎn)以下的溫度進(jìn)行。
本發(fā)明中所述凍干制劑的優(yōu)選方案的特征為非晶形狀態(tài)的上述賦形劑含有糖類。
本發(fā)明中所述凍干制劑的優(yōu)選方案的特征為所述賦形劑進(jìn)一步含有糖醇。
本發(fā)明中所述凍干制劑的優(yōu)選方案的特征為在所述工序(a)中進(jìn)一步溶解pH調(diào)節(jié)劑。
本發(fā)明中所述凍干制劑的優(yōu)選方案的特征為在所述工序(a)中進(jìn)一步溶解抗氧化劑。
本發(fā)明中所述凍干制劑的優(yōu)選方案的特征為在所述賦形劑含有糖類和糖醇類的情況下，相對(duì)糖類和糖醇類的總重量，含有至少20重量％非晶形狀態(tài)的上述賦形劑。
本發(fā)明中所述凍干制劑的優(yōu)選方案的特征為所述糖類是蔗糖或乳糖。
本發(fā)明中所述凍干制劑的優(yōu)選方案的特征為所述糖醇是甘露醇。
另外，在本發(fā)明的第三種方案中，上述第二目的通過(guò)下述制備方法而實(shí)現(xiàn)，上述制備方法是含有甲基維生素B12的凍干制劑的制備方法，該方法包括(1)使上述甲基維生素B12或其藥理學(xué)上可接受的鹽、和上述賦形劑溶解在溶劑中的工序、和(2)為使上述賦形劑中的至少一種或一種以上生成非晶形狀態(tài)而凍干上述溶液的工序。
本發(fā)明中所述制備方法的優(yōu)選方案的特征為在所述工序(2)中，為使上述甲基維生素B12或其藥理學(xué)上可接受的鹽也生成非晶形狀態(tài)而進(jìn)行凍干。
本發(fā)明中所述制備方法的優(yōu)選方案的特征為在所述工序(2)中，在不引起上述賦形劑結(jié)晶化的溫度或該溫度以下進(jìn)行預(yù)冷凍。凍干時(shí)的預(yù)冷凍特別優(yōu)選在上述賦形劑的低共熔點(diǎn)或低共熔點(diǎn)以下的溫度下進(jìn)行。
本發(fā)明中所述制備方法的優(yōu)選方案的特征為非晶形狀態(tài)的上述賦形劑含有糖類。
本發(fā)明中所述制備方法的優(yōu)選方案的特征為所述賦形劑進(jìn)一步含有糖醇。
本發(fā)明中所述制備方法的優(yōu)選方案的特征為所述凍干制劑進(jìn)一步含有pH調(diào)節(jié)劑。
本發(fā)明中所述制備方法的優(yōu)選方案的特征為所述凍干制劑進(jìn)一步含有抗氧化劑。
本發(fā)明中所述制備方法的優(yōu)選方案的特征為在所述賦形劑含有糖類和糖醇類的情況下，相對(duì)糖類和糖醇類的總重量，含有至少20重量％非晶形狀態(tài)的上述賦形劑。
本發(fā)明中所述制備方法的優(yōu)選方案的特征為所述糖類是蔗糖或乳糖。
本發(fā)明中所述制備方法的優(yōu)選方案的特征為所述糖醇是甘露醇。
如果利用本發(fā)明，則能提供經(jīng)時(shí)穩(wěn)定性優(yōu)異、含有甲基維生素B12的凍干制劑。而且，如果利用本發(fā)明的制備方法，則能提供甲基維生素B12能穩(wěn)定地存在于凍干固體中的含有甲基維生素B12的凍干制劑制備方法。


圖1表示在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式中，制備甲基維生素B12凍干制劑時(shí)使用的蔗糖/甘露醇的混合比例。
圖2表示在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式中，制備甲基維生素B12凍干制劑時(shí)使用的蔗糖/甘露醇的混合比例。
圖3表示在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式中，制備甲基維生素B12凍干制劑時(shí)使用的乳糖/甘露醇的混合比例。
圖4表示在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式中，制備甲基維生素B12凍干制劑時(shí)使用的乳糖/甘露醇的混合比例。
圖5表示與作為本發(fā)明凍干制劑的賦形劑的蔗糖/甘露醇的混合比例相對(duì)應(yīng)的甲基維生素B12的殘留率結(jié)果。需要說(shuō)明的是，圖5與后述的圖6～8相同，1M表示1個(gè)月的貯藏期。
圖6表示與作為本發(fā)明凍干制劑的賦形劑的蔗糖/甘露醇的混合比例相對(duì)應(yīng)的甲基維生素B12的殘留率結(jié)果。
圖7表示與作為本發(fā)明凍干制劑的賦形劑的乳糖/甘露醇的混合比例相對(duì)應(yīng)的甲基維生素B12的殘留率結(jié)果。
圖8表示與作為本發(fā)明凍干制劑的賦形劑的乳糖/甘露醇的混合比例相對(duì)應(yīng)的甲基維生素B12的殘留率結(jié)果。
圖9表示本發(fā)明的凍干制劑在實(shí)施例1至5和比較例1中，在40℃時(shí)的貯藏穩(wěn)定性結(jié)果。
圖10表示本發(fā)明的凍干制劑在實(shí)施例6至10和比較例2中，在40℃時(shí)的貯藏穩(wěn)定性結(jié)果。
圖11表示本發(fā)明的凍干制劑在實(shí)施例11至12和比較例3中，在40℃時(shí)的貯藏穩(wěn)定性結(jié)果。
圖12表示本發(fā)明的凍干制劑在實(shí)施例13至14和比較例4中，在40℃時(shí)的貯藏穩(wěn)定性結(jié)果。
圖13表示利用本發(fā)明制備的含有甲基維生素B12的凍干制劑的X射線衍射圖。在圖13中，(a)表示賦形劑只由蔗糖組成的情況下的X射線衍射圖(實(shí)施例1)、(b)表示賦形劑為蔗糖/甘露醇＝1/1的情況下的X射線衍射圖(實(shí)施例3)、(c)表示賦形劑為蔗糖/甘露醇＝2/3的情況下的X射線衍射圖(實(shí)施例4)、(d)表示賦形劑為蔗糖/甘露醇＝1/4的情況下的X射線衍射圖(實(shí)施例5)、(e)表示賦形劑只由甘露醇組成的情況下的X射線衍射圖(比較例1)。
圖14表示在使用甘露醇的凍干制劑中，用于研究?jī)龈晒ば蛑袩崽幚淼挠绊懙慕M成。
圖15表示在使用甘露醇的凍干制劑中，凍干工序中熱處理的有無(wú)對(duì)甲基維生素B12穩(wěn)定性的影響的結(jié)果。圖中3M表示3個(gè)月，圖中的數(shù)字表示甲基維生素B12和羥基維生素B12的面積％。
具體實(shí)施例方式
以下的實(shí)施方式是為了說(shuō)明本發(fā)明的示例，并不是將本發(fā)明只限定于該實(shí)施方式。本發(fā)明只要不脫離其要旨，可以以各種方式實(shí)施。
本發(fā)明提供能用于甲基維生素B12高濃度療法的甲基維生素B12高含量?jī)龈芍苿?。下面詳?xì)說(shuō)明本發(fā)明。
本發(fā)明中利用的甲基維生素B12是存在于血液、脊髓液中的輔酶維生素B12。與其他B12同系物比較，已知其向神經(jīng)組織的移行性優(yōu)異，并且被用于糖尿病性神經(jīng)障礙、多發(fā)性神經(jīng)炎等末梢神經(jīng)障礙、特別是麻木、疼痛、麻痹的預(yù)防、治療、改善和維生素B12缺乏引起的巨胚紅血球性貧血。
甲基維生素B12是維生素B12類似物，該物質(zhì)是用甲基取代與維生素B12(氰鈷胺)中的鈷鍵合的氰基而得到的化合物，其分子式為C63H91CoN13O14P，分子量為1344.4，為紅色粉末(參見(jiàn)下式(I))。
R＝CN氰鈷胺(II)R＝CH3甲基維生素B12(I)本發(fā)明中使用的甲基維生素B12，例如，可以利用特公昭45-38059號(hào)公報(bào)中所述的方法，經(jīng)氰鈷胺(上述式(II))的還原反應(yīng)和其后的甲基化反應(yīng)進(jìn)行制備。另外，也可以使用市售的藥品級(jí)甲基維生素B12原藥。例如，可以從Sigma公司和Eisai公司等處購(gòu)買。在本發(fā)明中，還可以使用甲基維生素B12藥理學(xué)上可接受的鹽。而且，上述甲基維生素B12可以是旋光體，也可以是消旋體。
作為上述藥理學(xué)上可接受的鹽，通?？梢耘e出與酸所成的鹽，例如，與鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等所成的無(wú)機(jī)鹽，另外，例如與三氟乙酸、酒石酸、檸檬酸、富馬酸、馬來(lái)酸、甲苯磺酸、甲磺酸等有機(jī)酸所成的鹽。
本發(fā)明的凍干制劑含有高含量的上述甲基維生素B12或其藥理學(xué)上可接受的鹽作為有效成分。此處，本發(fā)明中使用的用語(yǔ)“高含量”是指每瓶中通常含有5～200mg，優(yōu)選10～100mg，進(jìn)一步優(yōu)選25～50mg，用時(shí)使其溶解時(shí)的濃度在每瓶中通常為5～50mg/ml，優(yōu)選5～25mg/ml，進(jìn)一步優(yōu)選10～15mg/ml。
本發(fā)明的凍干制劑至少含有甲基維生素B12和賦形劑，其配合比例用重量比表示時(shí)，相對(duì)1份甲基維生素B12，賦形劑為0～50份，優(yōu)選2.5～25份，進(jìn)一步優(yōu)選5～10份。
本發(fā)明中使用的賦形劑可以從糖類、糖醇類和氨基酸類中選擇。只要含有至少一種或一種以上如下所述在凍干時(shí)生成非晶形狀態(tài)的糖類即可。作為凍干時(shí)生成非晶形狀態(tài)的糖類，并不限定于下面的物質(zhì)，例如，可以舉出作為單糖類的葡萄糖、果糖等，作為二糖的麥芽糖、乳糖、蔗糖、海藻糖等。作為凍干時(shí)生成非晶形狀態(tài)的糖醇類的具體例子，并不限定于下面的物質(zhì)，例如，可以舉出肌醇、山梨糖醇等。作為凍干時(shí)生成非晶形狀態(tài)的賦形劑，特別優(yōu)選乳糖和蔗糖。
本發(fā)明中使用的賦形劑由糖類和糖醇構(gòu)成的情況下，從采用后述制備方法制備的凍干制劑的貯藏穩(wěn)定性方面考慮，相對(duì)糖類和糖醇類的總重量，優(yōu)選含有至少20重量％非晶形狀態(tài)的上述賦形劑，較優(yōu)選含有40重量％，進(jìn)一步優(yōu)選含有50重量％。
另外，作為本發(fā)明凍干制劑中使用的氨基酸類，可以舉出甘氨酸、丙氨酸、精氨酸、天冬氨酸、組氨酸等。而且這些氨基酸可以單獨(dú)使用，也可以組合使用。
本發(fā)明的凍干制劑可以進(jìn)一步含有pH調(diào)節(jié)劑。pH調(diào)節(jié)劑可以使用醫(yī)藥制劑中通常使用的物質(zhì)。作為pH調(diào)節(jié)劑，可以舉出無(wú)機(jī)酸、無(wú)機(jī)堿、有機(jī)酸、有機(jī)堿、緩沖劑。具體可以舉出鹽酸、碳酸鈉、碳酸氫鈉、檸檬酸、檸檬酸鈉、檸檬酸二氫鈉、磷酸、磷酸二氫鈉、磷酸一氫鈉、氫氧化鈉、乳酸、乳酸鈉、醋酸、醋酸鈉、葡甲胺等。
此外，本發(fā)明的凍干制劑可以進(jìn)一步含有抗氧化劑。作為抗氧化劑，只要是醫(yī)藥制劑中通常使用的物質(zhì)即可，作為具體例，可以舉出亞硝酸鈉、抗壞血酸、檸檬酸、生育酚、生育酚醋酸酯、二丁基羥基甲苯、天然維生素E、亞硫酸氫鈉、α-硫甘油、鹽酸半胱氨酸、巰基乙酸鈉等。
為提高本發(fā)明的凍干制劑的溶解度，或?yàn)檎{(diào)整作為注射劑的滲透壓，還可以添加各種添加劑。這些添加劑只要是通常用作制劑添加劑的物質(zhì)的添加量即可，沒(méi)有特別限定，例如根據(jù)需要可以添加下列添加劑。
為提高本發(fā)明的凍干制劑的溶解度，或?yàn)樘岣呷芙馑俣?，可以舉出作為溶解助劑的聚乙二醇、丙三醇等，另外，還可以舉出作為表面活性劑的聚山梨醇酯、聚氧乙烯-聚氧丙烯二醇、聚乙烯固化蓖麻油、失水山梨糖醇倍半油酸酯等。作為本發(fā)明的凍干制劑的滲透壓調(diào)節(jié)劑，可以舉出葡萄糖、木糖醇、山梨糖醇等。
除此以外，根據(jù)需要還可以添加醫(yī)藥制劑中使用的防腐劑、穩(wěn)定劑等添加物。具體可以舉出安息香酸、抗壞血酸等，可以添加本領(lǐng)域技術(shù)人員能使用的添加物的量。
接下來(lái)，對(duì)本發(fā)明的凍干制劑的制備方法進(jìn)行闡述。本發(fā)明的凍干制劑優(yōu)選如下制備，例如，將使甲基維生素B12、賦形劑、以及pH調(diào)節(jié)劑溶解在水或適當(dāng)?shù)乃匀軇?例如，水和醇的混合物)中得到的溶液，根據(jù)需要，使用膜濾器進(jìn)行過(guò)濾滅菌。然后，將無(wú)菌溶液分裝到小瓶、盤(pán)等之中，通過(guò)通常的凍干處理使其變成固體狀態(tài)的物質(zhì)。如果采用過(guò)濾滅菌，則可以抑制來(lái)源于加熱滅菌的分解物的產(chǎn)生，能得到雜質(zhì)少的制劑。
如上所述地制備的本發(fā)明的凍干制劑能長(zhǎng)期抑制甲基維生素B12的分解、變質(zhì)等，故能穩(wěn)定保存。
制備上述溶液時(shí)，按照公知的方法，將甲基維生素B12、賦形劑、以及pH調(diào)節(jié)劑溶解在水或水性溶劑(例如，水和醇的混合物)中即可。溶解順序可以與成分的種類無(wú)關(guān)。水性溶液中的甲基維生素B12的濃度通常為0.5mg/ml～50mg/ml，優(yōu)選1mg/ml～10mg/ml，進(jìn)一步優(yōu)選2.5mg/ml～7.5mg/ml。賦形劑的濃度通常為0mg/ml～200mg/ml，優(yōu)選12.5mg/ml～100mg/ml，進(jìn)一步優(yōu)選25mg/ml～50mg/ml。
水性溶液的pH優(yōu)選4～8。較優(yōu)選pH為6～8，進(jìn)一步優(yōu)選pH為6.5～7.5。通過(guò)適當(dāng)添加上述pH調(diào)節(jié)劑能調(diào)整至所希望的pH。
優(yōu)選在低共熔點(diǎn)或低共熔點(diǎn)以下預(yù)冷凍所制備的水性溶液，然后在保持干燥室內(nèi)為真空的同時(shí)，將隔板溫度緩慢升至1次干燥溫度，在該溫度下進(jìn)行1次干燥。1次干燥結(jié)束后，再將隔板溫度升至2次干燥溫度，在該溫度下進(jìn)行2次干燥。1次干燥和2次干燥可以在同一溫度下進(jìn)行。
具體的凍干制劑制備方法是將含有所規(guī)定濃度的甲基維生素B12和賦形劑的溶液進(jìn)行滅菌后，按所規(guī)定量分裝到小瓶中。在大約-60℃～-20℃的條件下進(jìn)行預(yù)冷凍，然后在大約-20℃～10℃減壓下進(jìn)行1次干燥，在大約15℃～40℃減壓下進(jìn)行2次干燥。而且，通常將小瓶?jī)?nèi)部氣體置換成氮?dú)?、加塞，得到凍干制劑。預(yù)冷凍時(shí)，為了不引起作為賦形劑的甘露醇等發(fā)生結(jié)晶化，有必要維持在未達(dá)到低共熔點(diǎn)或低共熔點(diǎn)以上溫度的低溫。
低共熔點(diǎn)根據(jù)構(gòu)成賦形劑的成分的混合比例的不同而不同，通常，在含有糖類和糖醇的情況下，例如，在含有1)蔗糖和/或乳糖、和2)甘露醇的情況下，預(yù)冷凍的溫度條件通常優(yōu)選在-40℃或-40℃以下的溫度。另外，在只含有作為賦形劑的甘露醇的情況下，進(jìn)一步優(yōu)選的預(yù)冷凍溫度條件是-10℃或-10℃以下。
由此所得的本發(fā)明的凍干制劑，在至少賦形劑以非晶形狀態(tài)存在的情況下，能長(zhǎng)期穩(wěn)定地保存甲基維生素B12。
本發(fā)明的凍干制劑通過(guò)任意適當(dāng)溶液(再溶解液)的添加，都極易再次溶解，從而再次形成凍干前的溶液。作為所述的再溶解液，可以舉出用時(shí)注射用蒸餾水、生理鹽水、其他普通的輸液(例如，葡萄糖、氨基酸輸液等)。
再次溶解本發(fā)明的凍干制劑得到的溶液可以作為靜脈注射劑、皮下注射劑、肌肉注射劑、點(diǎn)滴注射劑等注射劑或滴眼劑進(jìn)行非經(jīng)口給藥。使用該注射用蒸餾水或輸液溶解的溶液十分穩(wěn)定。此種情況下，溶解液中的甲基維生素B12的濃度約為5mg/ml～50mg/ml，優(yōu)選5mg/ml～25mg/ml，進(jìn)一步優(yōu)選10mg/ml～15mg/ml。賦形劑的濃度通常為0mg/ml～100mg/ml，優(yōu)選12.5mg/ml～75mg/ml，進(jìn)一步優(yōu)選25mg/ml～50mg/ml。
對(duì)本發(fā)明的凍干制劑的特征進(jìn)行說(shuō)明。本發(fā)明中的穩(wěn)定性是指化學(xué)和物理穩(wěn)定性。由于加熱條件下貯藏時(shí)的經(jīng)時(shí)分解，主要成分甲基維生素B12的殘留量減少，能觀察到在作為制劑的凍干制劑的外觀明顯著色。使用能觀察到顯著著色分解的制劑，溶解時(shí)很可能出現(xiàn)混濁、沉淀，故不優(yōu)選，所以通常將殘留量作為穩(wěn)定性的指標(biāo)。
在本發(fā)明中，殘留率定義如下。將含有甲基維生素B12的凍干制劑密封在小瓶中，在從5℃～40℃的范圍內(nèi)選擇的溫度下保存。在一定溫度下保存一定時(shí)間后，利用高效液相色譜(以下稱為“HPLC”)，由與甲基維生素B12對(duì)應(yīng)的峰面積計(jì)算出作為主要成分的甲基維生素B12的濃度。根據(jù)利用HPLC得到的保存開(kāi)始時(shí)甲基維生素B12的峰面積和保存所規(guī)定時(shí)間后甲基維生素B12的峰面積，按照后述實(shí)施例中中定義的公式，估計(jì)殘留率。
本發(fā)明的凍干制劑在室溫下保存至少2年時(shí)的殘留率希望大于等于95％。另外，在40℃保存6個(gè)月時(shí)的殘留率也希望大于等于95％。
利用以下的實(shí)施例進(jìn)一步詳細(xì)地說(shuō)明本發(fā)明，但本發(fā)明的范圍并不限定于此。基于本發(fā)明的敘述，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以進(jìn)行各種變更、修飾，這些變更、修飾都包含在本發(fā)明中。
實(shí)施例制造例1作為本發(fā)明凍干制劑的制備方法的一個(gè)實(shí)施方式，將基于后述的混合比例、由蔗糖和甘露醇的混合物組成的賦形劑和甲基維生素B12一同制備原料液，利用下面的凍干法進(jìn)行制備。
將0.5％(w/v)甲基維生素B12(商品名MethycobalEisai公司制)和2.5％(w/v)賦形劑混合物混合，制備原料液，進(jìn)行無(wú)菌過(guò)濾后，以準(zhǔn)確的量無(wú)菌分裝到各小瓶中，供凍干用。凍干后，完全塞住，制得本發(fā)明的含有甲基維生素B12的凍干制劑。
具體是將按照?qǐng)D1中所示的蔗糖和甘露醇的混合比例的量放入100ml燒杯中，加入80ml注射用蒸餾水，利用磁力攪拌器攪拌使其溶解。確認(rèn)上述賦形劑充分溶解后，加入500mg甲基維生素B12，攪拌，確認(rèn)充分溶解后，用100ml容量瓶定容，添加蒸餾水使總?cè)芤毫繛?00ml。
然后，將上述溶液分裝到18ml的小瓶中，每瓶分裝5ml，以在-55℃預(yù)冷凍3小時(shí)、在-10℃進(jìn)行24小時(shí)(0.1mbar)1次干燥、在25℃進(jìn)行36小時(shí)(0.02mbar)2次干燥的條件進(jìn)行凍干，作為實(shí)施例1～5，制得本發(fā)明的凍干制劑。
另外，作為比較例1，利用相同的方法，制備僅含圖1所示的甘露醇作為賦形劑的凍干制劑。
制造例2將0.5％(w/v)甲基維生素B12(商品名MethycobalEisai公司制)和5.0％(w/v)賦形劑混合物混合，制備原料液，進(jìn)行無(wú)菌過(guò)濾后，按照準(zhǔn)確的量無(wú)菌分裝到各小瓶中，供凍干用。凍干后，完全塞住，制得本發(fā)明的含有甲基維生素B12的凍干制劑。
具體是將按照?qǐng)D2中所示的蔗糖和甘露醇的混合比例的量放入100ml燒杯中，加入80ml注射用蒸餾水，利用磁力攪拌器攪拌使其溶解。確認(rèn)上述賦形劑充分溶解后，加入500mg甲基維生素B12，攪拌，確認(rèn)充分溶解后，用100ml容量瓶定容，添加蒸餾水使總?cè)芤毫繛?00ml。
然后，將上述溶液分裝到18ml的小瓶中，每瓶分裝5ml，以在-55℃預(yù)冷凍3小時(shí)、在-10℃進(jìn)行24小時(shí)(0.1mbar)1次干燥、在25℃進(jìn)行36小時(shí)(0.02mbar)2次干燥的條件進(jìn)行凍干，作為實(shí)施例6～10，制得本發(fā)明的凍干制劑。
另外，作為比較例2，利用相同的方法，制備僅含有圖2所示的甘露醇作為賦形劑的凍干制劑。
制造例3接下來(lái)，作為賦形劑的乳糖和甘露醇的混合物基于圖3所示的混合比例，按照制造例1中所述的方法(使用乳糖和甘露醇代替蔗糖和甘露醇)和甲基維生素B12一同制備原料液，在與制造例1相同的條件下制備凍干制劑(實(shí)施例11和12)。
另外，作為比較例3，利用相同的方法，制備僅含有圖3所示的甘露醇作為賦形劑的凍干制劑。
制造例4作為賦形劑的乳糖和甘露醇的混合物基于圖4所示的混合比例，按照制造例1中所述的方法(使用乳糖和甘露醇代替蔗糖和甘露醇)和甲基維生素B12一同制備原料液，在與制造例1相同的條件下制備凍干制劑(實(shí)施例13和14)。
另外，作為比較例4，利用相同的方法，制備僅含有圖4所示的甘露醇作為賦形劑的凍干制劑。
制造例5稱量12.5g蔗糖，放于100ml燒杯中，用80ml預(yù)先準(zhǔn)備的pH7.0的1mM磷酸緩沖液使其溶解。確認(rèn)上述蔗糖充分溶解后，向上述緩沖液中進(jìn)一步添加0.5g甲基維生素B12，確認(rèn)溶解后，用100ml容量瓶定容，用蒸餾水調(diào)至100ml。將所制備的溶液分裝到15ml小瓶中，每瓶分裝5ml，利用與制造例1相同的條件進(jìn)行凍干，制得含有甲基維生素B12的凍干制劑(實(shí)施例15)。
制造例6稱量25g乳糖，放于1000ml燒杯中，用800ml注射用水使其溶解。向其中加入0.69g磷酸二氫鈉1水合物，充分?jǐn)嚢?。確認(rèn)上述乳糖和磷酸二氫鈉充分溶解后，添加5g甲基維生素B12，并用注射用水將稱量容器中殘留的甲基維生素B12洗入燒杯中。確認(rèn)其溶解后，適當(dāng)添加預(yù)先準(zhǔn)備的0.1M氫氧化鈉水溶液，調(diào)整pH至7.0。用1000ml容量瓶定容，用蒸餾水調(diào)至1000ml。將所制備的溶液分裝到15ml小瓶中，每瓶分裝5ml，利用與制造例1相同的條件進(jìn)行凍干，制得含有甲基維生素B12的凍干制劑(實(shí)施例16)。
制造例7稱量12.5g乳糖，放于100ml燒杯中，加入1g作為氧化劑的檸檬酸1水合物和80ml注射用水，攪拌。確認(rèn)上述乳糖和檸檬酸充分溶解后，進(jìn)一步添加0.5g甲基維生素B12。確認(rèn)溶解后，用預(yù)先準(zhǔn)備的0.1M氫氧化鈉水溶液調(diào)整pH至7.0，用100ml容量瓶定容，用蒸餾水調(diào)至100ml。將所制備的溶液分裝到15ml小瓶中，每瓶分裝5ml，利用與制造例1相同的條件進(jìn)行凍干，制得含有甲基維生素B12的凍干制劑(實(shí)施例17)。
制造例8稱量12.5g蔗糖和乳糖，分別放于100ml燒杯中，用80ml預(yù)先準(zhǔn)備的pH7.0的1mM磷酸緩沖液使其溶解。確認(rèn)溶解后，向每個(gè)溶液中添加0.5g甲基維生素B12，進(jìn)一步攪拌使其溶解，確認(rèn)溶解后，用100ml容量瓶定容，用蒸餾水調(diào)至100ml。將所制備的溶液分裝到15ml小瓶中，每瓶分裝5ml，利用在-55℃預(yù)冷凍3小時(shí)、在-10℃進(jìn)行24小時(shí)(0.1mbar)1次干燥、在25℃進(jìn)行36小時(shí)(0.002mbar)2次干燥的制備條件進(jìn)行凍干，制得含有甲基維生素B12的凍干制劑(分別為實(shí)施例18和實(shí)施例19)。
基于甲基維生素B12的殘留量，如下所述進(jìn)行貯藏穩(wěn)定性的評(píng)價(jià)。
即，將基于上述制造例、無(wú)菌制備的含有甲基維生素B12的凍干制劑分別在5℃、25℃、40℃的恒溫槽中保存1個(gè)月。用HPLC測(cè)定時(shí)的流動(dòng)相溶解保存的凍干制劑，用25ml容量瓶進(jìn)行配制。使用該檢體，利用下面的試驗(yàn)方法測(cè)定甲基維生素B12的含量(殘留率)，從而評(píng)價(jià)甲基維生素B12的貯藏穩(wěn)定性。
HPLC分析是利用下面的條件測(cè)定甲基維生素B12的含量。
HPLC條件柱子hydrosphere C18，S-5μm，250×4.6mm I.D.
流動(dòng)相乙腈/0.02mol/L磷酸緩沖液(pH3.5)/1-己磺酸鈉(2/8/3.8，v/v/w)HPLC分析條件1)柱溫40℃、2)樣品溫度8℃、3)流速1mL/min4)檢測(cè)器紫外吸光光度計(jì)(測(cè)定波長(zhǎng)266nm)甲基維生素B12的殘留率是根據(jù)與該甲基維生素B12對(duì)應(yīng)的峰面積計(jì)算出來(lái)的。利用HPLC測(cè)定的保存開(kāi)始前甲基維生素B12的峰面積與保存后甲基維生素B12的峰面積的相對(duì)面積比，如下所述求出上述殘留率。
殘留率(％)＝{(保存后甲基維生素B12的峰面積)/(保存后的總峰面積)}/{(保存前甲基維生素B12的峰面積)/(保存前的總峰面積)}×100這里所謂的總峰面積是指HPLC測(cè)定時(shí)所有峰的面積總和。利用所述測(cè)定方法得到的制造例1～4的殘留率結(jié)果分別如圖5～圖8所示。
另外，將各實(shí)施例和各比較例在40℃的恒溫槽中保存1個(gè)月和/或3個(gè)月時(shí)的甲基維生素B12的殘留率(％)結(jié)果如圖9～圖12所示。
將制造例1中得到的各含有甲基維生素B12的凍干制劑進(jìn)行粉末X射線衍射，利用下面的條件觀察保存前的制劑和在5℃、25℃、40℃的恒溫槽中保存1個(gè)月的制劑的結(jié)晶狀態(tài)。
粉末X射線衍射的測(cè)定條件如下所示。
X射線Cu K-alphal/30kV/40mA測(cè)角儀RINT2000垂直測(cè)角儀過(guò)濾器Kβ過(guò)濾器發(fā)散狹縫1/2deg散射狹縫1/2deg受光狹縫0.15mm掃描速度連續(xù)掃描速度2°/min掃描寬度0.02°掃描軸2θ/θ掃描范圍5～40°偏置0°固定角0°圖13表示制造例1的保存前制劑的代表性X射線衍射圖結(jié)果。圖13中(a)、(b)、(c)、(d)和(e)表示制造例1的實(shí)施例1、實(shí)施例3～5以及比較例1的X射線衍射圖，在各保存條件下的保存前后未確認(rèn)X射線衍射圖發(fā)生變化。
由圖5和圖6的結(jié)果可知，不管甲基維生素B12中賦形劑混合物的添加量如何，只要賦形劑混合物蔗糖/甘露醇中存在的蔗糖的混合比例大于等于20％，含有甲基維生素B12的凍干制劑中甲基維生素B12的殘留率就非常高，而且，甲基維生素B12的貯藏穩(wěn)定性優(yōu)異。
另一方面，從圖13所示的X射線衍射結(jié)果發(fā)現(xiàn)在甲基維生素B12和蔗糖組成的實(shí)施例1(a)中，粉末X射線衍射峰幾乎不存在，根據(jù)凍干制劑中甲基維生素B12的含量，可知蔗糖以非晶形狀態(tài)存在。而且，隨著賦形劑混合物中甘露醇比例的增加，出現(xiàn)來(lái)源于甘露醇的衍射峰。
所以，由殘留率和X射線衍射圖的結(jié)果證實(shí)了在賦形劑中蔗糖大于等于20％的情況下，換言之，在賦形劑中的至少一種是非晶形狀態(tài)的情況下，含有甲基維生素B12的凍干制劑的貯藏穩(wěn)定性非常好。
另外，將實(shí)施例15～19的樣品在60℃保存1個(gè)月，評(píng)價(jià)貯藏穩(wěn)定性，任一樣品都極其穩(wěn)定，未見(jiàn)甲基維生素B12殘留率的降低。
圖7和圖8表示相對(duì)作為賦形劑的乳糖/甘露醇的混合比例的甲基維生素B12的殘留率結(jié)果。由圖7和圖8所示的結(jié)果可知，不管甲基維生素B12中賦形劑混合物的添加量如何，只要賦形劑混合物乳糖/甘露醇中，以非晶形狀態(tài)存在的乳糖的混合比例大于等于50％，甲基維生素B12的殘留率就非常高。
由圖9和圖10所示的40℃保存3個(gè)月的甲基維生素B12的殘留率結(jié)果可知，在甲基維生素B12內(nèi)賦形劑混合物蔗糖/甘露醇中存在的蔗糖的混合比例大于等于20％的情況下，含有甲基維生素B12的凍干制劑中的甲基維生素B12的殘留率非常高。
由圖11所示的40℃保存1個(gè)月的甲基維生素B12的殘留率結(jié)果和圖12所示的40℃保存3個(gè)月的甲基維生素B12的殘留率結(jié)果可知，在甲基維生素B12內(nèi)賦形劑混合物乳糖/甘露醇中存在的乳糖的混合比例大于等于50％的情況下，含有甲基維生素B12的凍干制劑中的甲基維生素B12的殘留率非常高，而且，貯藏穩(wěn)定性優(yōu)異。
由此可知，在本發(fā)明的含有甲基維生素B12的凍干制劑中，在賦形劑中的至少1種是非晶形狀態(tài)的情況下，甲基維生素B12的穩(wěn)定性提高。而且，進(jìn)一步含有pH調(diào)節(jié)劑和抗氧化劑的含有甲基維生素B12的凍干制劑的穩(wěn)定性也提高。
但是，在以甘露醇作為賦形劑進(jìn)行添加的制劑中，已知通過(guò)在凍干工序的預(yù)冷凍時(shí)進(jìn)行熱處理(簡(jiǎn)稱為“熱處理”)促進(jìn)甘露醇的結(jié)晶化。例如，參見(jiàn)Izutsu，K.，Yoshioka，S.，and Terao，T.，Pharma.Res.10，1232-1237；Pikal，M，J.，Dellerman，K.M.Roy，M.L.，Riggin，R.M.，Pharma Res.8(1991)427-436；Izutsu，K.，Ocheda，S.，Aoyagi，N.，Kojima，S.，Int.J.Pharm.273(2004)85-93；Wu，S.，Leung，D.，Tretyakov，L.，Hu，J.，Guzzetta，A.，Wang，J.，Int.J.Pharm.200(200)1-16；Yoshinari，T.，F(xiàn)orbes，R.，York，R.，Kawashima，Y.，Int.J.Pharm.258(2003)109-120。
主要以評(píng)價(jià)蛋白質(zhì)制劑的凍干條件對(duì)質(zhì)量的影響為目的進(jìn)行討論。根據(jù)Izutsu等的報(bào)告，在DSC測(cè)定中，由于由甘露醇結(jié)晶產(chǎn)生的放熱峰在-23℃附近，所以預(yù)凍干工序中通過(guò)熱處理使溫度高于該溫度，能促進(jìn)甘露醇的結(jié)晶化。
如下所述，討論了利用退火(annealing)處理促進(jìn)甘露醇的結(jié)晶化的有無(wú)對(duì)本發(fā)明的含有甲基維生素B12的凍干制劑的穩(wěn)定性的影響。
圖14表示在使用甘露醇的凍干制劑中，用于研究熱處理所帶來(lái)的影響的組成。作為凍干條件，在有退火處理工序和無(wú)熱處理工序中，采用以下條件。
有退火處理工序(1)在-55℃進(jìn)行2.5小時(shí)預(yù)冷凍，(2)經(jīng)3小時(shí)升溫，(3)在-10℃進(jìn)行3小時(shí)退火處理，(4)經(jīng)3小時(shí)降溫，(5)在-55℃進(jìn)行2.5小時(shí)一次干燥(-10℃、24小時(shí)(0.1mbar))。
無(wú)退火處理工序(A)在-55℃進(jìn)行2.5小時(shí)預(yù)冷凍，然后，(B)進(jìn)行一次干燥(-10℃、24小時(shí)(0.1mbar))。
貯藏穩(wěn)定性的評(píng)價(jià)基于甲基維生素B12的含量變化進(jìn)行的貯藏穩(wěn)定性的評(píng)價(jià)與上述實(shí)施例中的評(píng)價(jià)相同，是在各溫度的恒溫槽中保存3個(gè)月后，使用HPLC進(jìn)行測(cè)定。
圖15表示在使用甘露醇的凍干制劑中，凍干工序中熱處理的有無(wú)對(duì)甲基維生素B12穩(wěn)定性的影響結(jié)果。另外，圖15中甲基維生素B12(B12-CH3)和羥基維生素B12(B12-OH)的各數(shù)值是根據(jù)HPLC測(cè)定結(jié)果，按照(B12-CH3或B12-OH的峰面積)/(全部峰面積的總和)×100計(jì)算出來(lái)的值。
根據(jù)圖15所示的結(jié)果可以判斷與不進(jìn)行退火處理工序的制劑相比，如果實(shí)施促進(jìn)甘露醇結(jié)晶化的退火處理工序進(jìn)行凍干，則甲基維生素B12的穩(wěn)定性降低，同時(shí)，甲基維生素B12的分解產(chǎn)物羥基維生素B12的生成量增加。這證實(shí)了與非晶形氛圍相比，甲基維生素B12在結(jié)晶氛圍中是不穩(wěn)定的事實(shí)。
產(chǎn)業(yè)上的可利用性如果利用本發(fā)明的含有甲基維生素B12的凍干制劑，則能通過(guò)控制賦形劑的結(jié)晶化狀態(tài)來(lái)改善甲基維生素B12的貯藏穩(wěn)定性，而且，能提供適合于在溶液中溶解制備注射液的用時(shí)溶解型凍干制劑。
權(quán)利要求
1.一種凍干制劑，其中含有甲基維生素B12或其藥理學(xué)上可接受的鹽、和賦形劑，所述賦形劑中的至少一種或一種以上是非晶形狀態(tài)。
2.如權(quán)利要求1所述的凍干制劑，其中所述甲基維生素B12或其藥理學(xué)上可接受的鹽也是非晶形狀態(tài)。
3.如權(quán)利要求1或2所述的凍干制劑，其中所述非晶形狀態(tài)的賦形劑含有糖類。
4.如權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)所述的凍干制劑，其中所述賦形劑還含有糖醇。
5.如權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)所述的凍干制劑，其中所述凍干制劑還含有pH調(diào)節(jié)劑。
6.如權(quán)利要求1至5中任一項(xiàng)所述的凍干制劑，其中所述凍干制劑還含有抗氧化劑。
7.如權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)所述的凍干制劑，其中所述賦形劑含有糖類和糖醇類的情況下，相對(duì)糖類和糖醇類的總重量，含有至少20重量％非晶形狀態(tài)的所述賦形劑。
8.一種凍干制劑，其含有甲基維生素B12或其藥理學(xué)上可接受的鹽、和賦形劑，并利用包括下述工序的制備方法制得，所述工序?yàn)?a)使上述甲基維生素B12或其藥理學(xué)上可接受的鹽、和上述賦形劑溶解在溶劑中的工序；和(b)將所述溶液進(jìn)行凍干，以使所述賦形劑中的至少一種或一種以上生成非晶形狀態(tài)的工序。
9.如權(quán)利要求8所述的凍干制劑，其中在所述工序(b)中進(jìn)行凍干以使所述甲基維生素B12或其藥理學(xué)上可接受的鹽生成非晶形狀態(tài)。
10.如權(quán)利要求8或9所述的凍干制劑，其中在所述工序(b)中在不引起所述賦形劑結(jié)晶化的溫度或該溫度以下進(jìn)行預(yù)冷凍。
11.如權(quán)利要求8至10中任一項(xiàng)所述的凍干制劑，其中所述非晶形狀態(tài)的賦形劑含有糖類。
12.如權(quán)利要求8至11中任一項(xiàng)所述的凍干制劑，其中所述賦形劑還含有糖醇。
13.如權(quán)利要求8至12中任一項(xiàng)所述的凍干制劑，其中在所述工序(a)中還溶解pH調(diào)節(jié)劑。
14.如權(quán)利要求8至13中任一項(xiàng)所述的凍干制劑，其中在所述工序(a)中還溶解抗氧化劑。
15.如權(quán)利要求8至12中任一項(xiàng)所述的凍干制劑，其中，所述賦形劑含有糖類和糖醇的情況下，相對(duì)糖類和糖醇類的總重量，含有至少20重量％非晶形狀態(tài)的所述賦形劑。
16.一種含有甲基維生素B12的凍干制劑的制備方法，其包括下述工序(1)使上述甲基維生素B12或其藥理學(xué)上可接受的鹽和上述賦形劑溶解在溶劑中的工序；和(2)將上述溶液進(jìn)行凍干，以使所述賦形劑中的至少一種或一種以上生成非晶形狀態(tài)的工序。
17.如權(quán)利要求16所述的制備方法，其中，在所述工序(2)中進(jìn)行凍干以使所述甲基維生素B12或其藥理學(xué)上可接受的鹽生成非晶形狀態(tài)。
18.如權(quán)利要求16或17所述的制備方法，其中，在所述工序(2)中在不引起所述賦形劑結(jié)晶化的溫度或該溫度以下進(jìn)行預(yù)冷凍。
19.如權(quán)利要求16至18中任一項(xiàng)所述的制備方法，其中所述非晶形狀態(tài)的賦形劑含有糖類。
20.如權(quán)利要求16至19中任一項(xiàng)所述的制備方法，其中所述賦形劑還含有糖醇。
21.如權(quán)利要求16至20中任一項(xiàng)所述的制備方法，其中，所述凍干制劑還含有pH調(diào)節(jié)劑。
22.如權(quán)利要求16至21中任一項(xiàng)所述的制備方法，其中，所述凍干制劑還含有抗氧化劑。
23.如權(quán)利要求16至22中任一項(xiàng)所述的制備方法，其中，所述賦形劑含有糖類和糖醇類的情況下，相對(duì)糖類和糖醇類的總重量，含有至少20重量％非晶形狀態(tài)的所述賦形劑。
全文摘要
本發(fā)明提供一種含有高含量甲基維生素B
文檔編號(hào)A61K47/02GK1784237SQ200480012108
公開(kāi)日2006年6月7日 申請(qǐng)日期2004年5月6日 優(yōu)先權(quán)日2003年5月7日
發(fā)明者加藤晃良, 野村晃子 申請(qǐng)人:衛(wèi)材株式會(huì)社