專利名稱：人尿激肽原酶在制備治療急性腎衰藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及藥物化學(xué)領(lǐng)域。具體而言，本發(fā)明涉及人尿激肽原酶的新醫(yī)藥用途，即 人尿激肽原酶在制備治療急性腎衰藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
人尿激肽原酶(Human Urinary Kallidinogenase)，是從健康男性人尿中提取精 制的糖蛋白，分子量約54000道爾頓，具有激活人血漿激肽原轉(zhuǎn)化為激肽，擴(kuò)張血管增加血 流量，改善血液循環(huán)的作用，并且還有增加紅細(xì)胞的變形性和抑制血小板聚集，延長(zhǎng)再鈣化 時(shí)間改善血液粘稠的作用。本申請(qǐng)人的在先專利申請(qǐng)“02116783. 4人尿激肽原酶在制備治 療和預(yù)防腦梗塞藥物中的應(yīng)用”公開(kāi)了它的一種醫(yī)藥用途。本發(fā)明人經(jīng)過(guò)認(rèn)真研究和動(dòng)物 試驗(yàn)證明，人尿激肽原酶對(duì)急性腎衰疾病也有明顯的治療作用。急性腎功能衰竭(Acute Renal Failure, ARF)是由多種原因引起的臨床綜合征， 可見(jiàn)于臨床各科病人，發(fā)病率高且往往帶來(lái)嚴(yán)重后果，其特點(diǎn)為短期內(nèi)(數(shù)小時(shí)至數(shù)天)腎 功能急劇下降，臨床表現(xiàn)為急性少尿(尿量< 400mLPd)或無(wú)尿(尿量< IOOmLPd)，體內(nèi)氮 質(zhì)代謝產(chǎn)物排出產(chǎn)生障礙，迅速出現(xiàn)氮質(zhì)血癥，水及電解質(zhì)、酸堿平衡紊亂，并引起全身各 系統(tǒng)相應(yīng)功能失調(diào)。引起急性腎衰的主要因素是腎血流量的急劇減少，以及由于腎組織缺 血引起的氧化應(yīng)激和細(xì)胞損傷，最終導(dǎo)致腎臟組織結(jié)構(gòu)的破壞和功能的惡化。目前臨床上 尚無(wú)公認(rèn)的治療急性腎衰有效的藥物，僅能通過(guò)糾正水電解質(zhì)平衡，糾正酸中毒等對(duì)癥治 療措施改善癥狀，后期還需要通過(guò)血液透析維持機(jī)體機(jī)能。在改善腎臟血流灌注障礙和減 輕腎組織損傷方面有明顯療效的臨床藥物少見(jiàn)。人尿激肽原酶是在腎小球遠(yuǎn)曲小管和血管極的上皮細(xì)胞產(chǎn)生的一種內(nèi)源性血管 活性物質(zhì)，對(duì)維持腎臟及其它器官正常血流發(fā)揮重要作用，此外，人尿激肽原酶還具有一定 的腎臟保護(hù)作用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供人尿激肽原酶用于治療急性腎衰的用途，即用于制備治療急 性腎衰藥物的用途。本發(fā)明的另一目的是提供一種用于治療急性腎衰的含有人尿激肽原酶 的藥物組合物。本發(fā)明的人尿激肽原酶對(duì)急性腎衰疾病有明顯的治療作用，一般以藥物組合物的 形式使用，這種組合物含有治療有效量的作為活性成分的人尿激肽原酶和可藥用輔料，其 每計(jì)量單位中含有15 25 μ g的人尿激肽原酶和10 50mg的可藥用輔料，主要?jiǎng)┬桶?凍干粉針劑和注射液劑，通常以靜脈注射途徑給藥。經(jīng)靜脈注射給藥的人尿激肽原酶組合物，一般是固體的滅菌組合物形式，即凍干 粉針劑型，這些組合物含有的可藥用輔料是甘露醇、右旋糖苷、水解明膠、檸檬酸鈉、甘氨酸 等中的一種或多種。在使用時(shí)溶解于滅菌注射用水或其它注射用滅菌介質(zhì)中。經(jīng)靜脈注射給藥的人尿激肽原酶組合物也可以是水溶液形式，即注射液劑，這些組合物含有的可藥用輔料是甘露醇、氯化鈉、葡萄糖等中的一種或多種。人尿激肽原酶組合物治療急性腎衰的劑量根據(jù)病情的嚴(yán)重程度、治療時(shí)間而定， 一般靜脈注射給藥每次0. 1-0. 2PNA單位，每天給藥1-2次。通過(guò)我們的研究發(fā)現(xiàn)，人尿激肽原酶能夠改善急性腎衰時(shí)的無(wú)尿或少尿癥狀，保 護(hù)腎臟的功能。人尿激肽原酶通過(guò)激活體內(nèi)的激肽原酶-激肽系統(tǒng)，釋放血管活性物質(zhì)如 N0、EDHF和前列環(huán)素等，舒張腎血管，增加腎血流量，改善腎血流動(dòng)力學(xué)，抑制腎小球?yàn)V過(guò)功 能的衰退。同時(shí)，人尿激肽原酶能減輕急性腎衰后氧化應(yīng)激反應(yīng)，保護(hù)腎組織，對(duì)急性腎衰 疾病起到良好的治療作用。
具體實(shí)施例方式以下通過(guò)具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說(shuō)明。實(shí)施例1制備人尿激肽原酶干粉針取過(guò)濾滅菌的人尿激肽原酶150PNA單位，加7. 5克甘露醇、2克右旋糖酐40、5克 檸檬酸鈉溶解，調(diào)節(jié)PH至中性，加注射用水至500毫升，無(wú)菌過(guò)濾，分裝1000個(gè)安瓿瓶中， 無(wú)菌條件下冷凍干燥，即得。實(shí)施例2制備人尿激肽原酶注射液取過(guò)濾滅菌的人尿激肽原酶水溶150PNA單位，調(diào)節(jié)PH至中性，加注射用水至500 毫升，加氯化鈉調(diào)節(jié)等滲，無(wú)菌過(guò)濾，分裝1000個(gè)安瓿瓶中，即得。實(shí)施例3人尿激肽原酶對(duì)急性腎衰大鼠的治療作用實(shí)驗(yàn)方法采用肌肉注射甘油致急性腎功能衰竭大鼠動(dòng)物模型。選用180 220g健康雄性 SD大鼠60只，隨機(jī)分為5組假手術(shù)組(肌肉注射生理鹽水)；模型組(肌肉注射甘油)； 人尿激肽原酶I組(3. 85X I(T3PNAu)；人尿激肽原酶II組(8. 75X I(T3PNAU)；人尿激肽原 酶III組(17. 5 X 10_3PNAu)，各組大鼠在甘油造模后立即尾靜脈注射生理鹽水或人尿激肽 原酶，12和24小時(shí)后再給藥一次。觀察指標(biāo)60只大鼠末次給予人尿激肽原酶或生理鹽水后放入代謝籠收集24小時(shí)尿，留尿 后6小時(shí)用4%水合氯醛腹腔注射麻醉，采用激光多普勒血流儀測(cè)定造模后及治療后雙側(cè) 腎臟血流量，取平均值作為單只動(dòng)物腎血流量；取血制備血清，測(cè)定血BUN和Cre ；取腎臟， 制備10%腎皮質(zhì)勻漿，測(cè)定腎皮質(zhì)勻漿MDA、GSH和NO(均按試劑盒說(shuō)明書(shū)操作)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果1.人尿激肽原酶可增加急性腎衰大鼠腎血流量
4
*p < 0. 05vs急性腎衰模型組2.人尿激肽原酶對(duì)急性腎衰大鼠腎功能具保護(hù)作用模型組大鼠較假手術(shù)組大鼠24小時(shí)尿量顯著減少，分別為4. 57士0. 74ml和 11. 82士2. 36ml ；中、高劑量人尿激肽原酶組大鼠24小時(shí)尿量顯著高于模型組(ρ < 0. 05)， 三個(gè)藥物治療組的尿量具有劑量依賴性，分別為I組5. 38士0. 87ml, II組7. 62士 1. 32ml, III組9. 38士 1. 50ml。說(shuō)明人尿激肽原酶能改善急性腎衰大鼠的少尿癥狀。急性腎衰大鼠靜脈注射生理鹽水24小時(shí)后，血清BUN為25. 63士 1. 62mmol/L,Cre 為168. 26士 13. 01umol/L,明顯高于假手術(shù)組，說(shuō)明模型組動(dòng)物腎功能損害嚴(yán)重。中、高劑量 人尿激肽原酶能劑量依賴性地改善急性腎衰大鼠的腎功能(P < 0. 05)。見(jiàn)表1。表1各試驗(yàn)組大鼠腎功能指標(biāo)比較 *p < 0. 05vs急性腎衰模型組3.人尿激肽原酶能抑制大鼠急性腎衰后氧化應(yīng)激反應(yīng)急性腎衰大鼠腎皮質(zhì)勻漿中MDA含量為11. 83士0. 26nmol/mgprot,明顯高于假手 術(shù)組，說(shuō)明模型組動(dòng)物腎皮質(zhì)氧化應(yīng)激嚴(yán)重。中、高劑量人尿激肽原酶能劑量依賴性地減輕 氧化應(yīng)激(P < 0. 05)。急性腎衰大鼠腎皮質(zhì)勻漿中GSH含量為265. 15士25. 32mg/gprot, 明顯低于假手術(shù)組，說(shuō)明模型組動(dòng)物腎皮質(zhì)內(nèi)源性抗氧化因子減少。中、高劑量人尿激肽原 酶能劑量依賴性地增強(qiáng)抗氧化應(yīng)激作用(P <0.05)。急性腎衰大鼠腎皮質(zhì)勻漿中NO含量 為9. 07士0. 75umol/gprot,明顯低于假手術(shù)組，中、高劑量人尿激肽原酶能劑量依賴性地增 加腎皮質(zhì)NO的含量(ρ < 0. 05)。見(jiàn)表2。表2各試驗(yàn)組大鼠氧自由基損傷和炎癥反應(yīng)指標(biāo)比較
1.88*
人尿激肽原酶 III 組 5.93 ±0.20* 423.23 ±27.32* 23.73 ±2.34**p < 0. 05vs急性腎衰模型組討論甘油引起急性腎功能衰竭涉及如下病理機(jī)制腎小管阻塞，腎血管收縮和氧化應(yīng) 激，該模型能較好的模擬動(dòng)物急性腎衰狀態(tài)，被國(guó)內(nèi)外廣泛采用，是研究腎衰藥物治療較好 的動(dòng)物模型。本實(shí)驗(yàn)動(dòng)物造模后24小時(shí)尿量顯著減少，符合臨床少尿或無(wú)尿的表現(xiàn)，反映 腎功能的兩個(gè)指標(biāo)血BUN和Cre也顯著升高，提示腎功能損害嚴(yán)重。人尿激肽原酶能劑量 依賴性地增加腎血流量和排尿量，改善腎功能指標(biāo)，說(shuō)明人尿激肽原酶對(duì)急性腎衰大鼠具 有治療作用。氧化應(yīng)激是急性腎衰的重要病理過(guò)程之一。MDA是氧自由基與生物膜多聚不飽和 脂肪酸發(fā)生脂質(zhì)過(guò)氧化的產(chǎn)物，其產(chǎn)量與氧自由基的量相平行，因此測(cè)定MDA可反映氧自 由基的水平，間接反映細(xì)胞損傷的程度。還原型谷胱甘肽(GSH)是重要的防護(hù)自由基損傷 的巰基化合物，是研究藥物抗氧化損傷的一種常用的重要指標(biāo)。一氧化氮(NO)在多種病理 生理過(guò)程中如血管擴(kuò)張、神經(jīng)傳遞、鐵代謝和免疫防御中起重要作用。大量的證據(jù)表明不僅 腎血管內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生一氧化氮，系膜細(xì)胞、致密斑和腎小管細(xì)胞也能產(chǎn)生一氧化氮。NO不僅 在調(diào)節(jié)腎血流動(dòng)力學(xué)方面起重要作用，還可減輕氧化損傷，保護(hù)腎組織。人尿激肽原酶在血 液中能促進(jìn)激肽的生成，作用于激肽受體，促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞釋放NO。在本實(shí)驗(yàn)中，高劑量人尿 激肽原酶組腎皮質(zhì)NO含量甚至高于假手術(shù)組，證明人尿激肽原酶確實(shí)能促進(jìn)NO的釋放，人 尿激肽原酶治療急性腎衰的部分機(jī)制與促進(jìn)內(nèi)皮源性NO釋放有關(guān)。
權(quán)利要求
人尿激肽原酶在制備治療急性腎衰藥物中的應(yīng)用。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其中所述藥物的給藥量是每天給藥1-3次，每次給藥 0. 01 0. 2PNA單位/支(瓶)。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的用途，其中所述藥物是凍干粉針劑。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的用途，其中所述藥物是注射液。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的用途，其中所述的藥物還含有選自甘露醇、右旋糖苷、水解明 膠、檸檬酸鈉或甘氨酸的添加劑。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的用途，其中所述的藥物還含有選自甘露醇、氯化鈉或葡萄糖 的添加劑。
全文摘要
本發(fā)明涉及人尿激肽原酶的新醫(yī)藥用途，即人尿激肽原酶在制備治療急性腎衰藥物中的應(yīng)用。
文檔編號(hào)A61K38/48GK101879308SQ201010200138
公開(kāi)日2010年11月10日 申請(qǐng)日期2010年6月13日 優(yōu)先權(quán)日2010年6月13日
發(fā)明者傅和亮, 吳蓉蓉, 孫莉, 孫鐵, 李睿, 鄒春芽 申請(qǐng)人:廣東天普生化醫(yī)藥股份有限公司