專利名稱：一種完整肽聚糖磁性脂質(zhì)體的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種磁性脂質(zhì)體的制備方法。
背景技術(shù)：
近年來，由于微生態(tài)學(xué)的崛起和醫(yī)學(xué)的快速發(fā)展，雙歧桿菌的很多重要作用被越 來越多的學(xué)者重視和研究起來。其中最引人注意的是雙歧桿菌的抗腫瘤作用，普遍認(rèn)為其 抗腫瘤機(jī)理是它可以激活吞噬細(xì)胞，提高體細(xì)胞免疫功能，抑制腫瘤細(xì)胞的產(chǎn)生或分化。研 究顯示，雙歧桿菌細(xì)胞壁制備完整肽聚糖可以導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞的破壞，此后越來越多的研究 顯示，肽聚糖發(fā)揮著多種的生物學(xué)活性，是雙歧桿菌眾多益生作用(免疫調(diào)節(jié)、抗感染、抗 腫瘤活性)的效應(yīng)物質(zhì)。完整肽聚糖易被消化酶分解進(jìn)而活性降低甚至消失，因此采用脂質(zhì)體進(jìn)行保護(hù)， 但是以這種形式給藥存在藥物劑量大及對正常組織有損害的問題；文章“雙歧桿菌肽聚糖 的提取及其白蛋白磁性微球的制備”中所得白蛋白微球在掃描電鏡下觀察到微球的直徑在 6 μ m左右，微球經(jīng)過激光粒徑分布測量儀測得的平均粒徑為5. 32 μ m，可見磁性微球粒徑 大，導(dǎo)致靜脈注射易堵塞血管，口服不易吸收的問題
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的是為了解決現(xiàn)有磁性微球制備技術(shù)制備出的磁性微球粒徑大，靜脈注 射易堵塞血管，口服不易吸收的問題，而提供一種完整肽聚糖磁性脂質(zhì)體的制備方法。完整肽聚糖磁性脂質(zhì)體的制備方法按以下步驟實(shí)現(xiàn)一、取0. 22 0. 26g的蛋黃 磷脂酰膽堿和0. 05 0. 07g的膽固醇并用18 22ml的氯仿溶解，得混合液；二、將混合 液倒入圓底燒瓶，然后置于50 60°C的水浴中，在真空度為-0. 08 0. IMPa的條件下旋 轉(zhuǎn)蒸發(fā)至圓底燒瓶內(nèi)形成脂質(zhì)薄膜，再加入0. 18 0. 22ml的磁性納米顆粒懸液、0. 004 0. 006g的完整肽聚糖和48 52ml的磷酸鹽緩沖液，在60°C的條件下水化3h，即完成完整 肽聚糖磁性脂質(zhì)體的制備；其中磁性納米顆粒懸液的濃度為26 28mg/ml。本發(fā)明中應(yīng)用磁性脂質(zhì)體作為完整肽聚糖的載體，可以使抗腫瘤藥物肽聚糖具有 控釋性和靶向性的重要功能，這些功能使藥物可以更好的發(fā)揮治療作用可防止藥物在胃酸 條件下分解，減少藥物與胃蛋白酶等消化酶的接觸，從而提高藥物在胃腸中的穩(wěn)定性，磁性 的載體粒徑小又具有粘附性，使被包封的藥物可以完好的輸送至不同的組織和細(xì)胞，有利 于局部用藥時增加其滯留性，有利于增加藥物與腸壁的接觸面積，延長接觸時間，提高藥物 的生物利用率，達(dá)到部位特異性和靶向給藥的目的；同時由于對磁場有較好的響應(yīng)，磁性脂 質(zhì)體可以應(yīng)用于藥物靶向治療，利用體外磁場效應(yīng)引導(dǎo)脂質(zhì)體選擇性的到達(dá)并定位于腫瘤 靶區(qū)，可以降低用藥劑量和對正常組織的損害。本發(fā)明中采用薄膜法制備完整肽聚糖磁性脂質(zhì)體，把完整肽聚糖和磁性納米顆粒 包埋在脂質(zhì)體中，形成了完整肽聚糖磁性脂質(zhì)體體系，降低了對外界環(huán)境對完整肽聚糖的 影響，使完整肽聚糖更加穩(wěn)定，這是肽聚糖發(fā)揮其生物學(xué)效應(yīng)的基礎(chǔ)，同時使整個體系具有良好的磁響應(yīng)性；完整肽聚糖磁性脂質(zhì)體的包埋率為64. 6 65. 5%。本發(fā)明中所得完整肽聚糖磁性脂質(zhì)體的磁性微球粒徑為180 200nm，在獲得靶 向性的同時更加有利于人體吸收；同時靜脈注射不易堵塞血管，口服易吸收，且實(shí)現(xiàn)了在有 效保護(hù)肽聚糖結(jié)構(gòu)完整的同時使其具有磁靶向性這一技術(shù)難題，并且制備工藝簡單，具有 廣泛的應(yīng)用前景。


圖1為具體實(shí)施方式
十六中所得完整肽聚糖磁性脂質(zhì)體的透射電鏡圖。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明技術(shù)方案不局限于以下所列舉具體實(shí)施方式
，還包括各具體實(shí)施方式
間的 任意組合。
具體實(shí)施方式
一本實(shí)施方式完整肽聚糖磁性脂質(zhì)體的制備方法按以下步驟實(shí) 現(xiàn)一、取0. 22 0. 26g的蛋黃磷脂酰膽堿和0. 05 0. 07g的膽固醇并用18 22ml的 氯仿溶解，得混合液；二、將混合液倒入圓底燒瓶，然后置于50 60°C的 水浴中，在真空度 為-0. 08 0. IMPa的條件下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至圓底燒瓶內(nèi)形成脂質(zhì)薄膜，再加入0. 18 0. 22ml 的磁性納米顆粒懸液、0. 004 0. 006g的完整肽聚糖和48 52ml的磷酸鹽緩沖液，在60°C 的條件下水化3h，即完成完整肽聚糖磁性脂質(zhì)體的制備；其中磁性納米顆粒懸液的濃度為 26 28mg/ml。
具體實(shí)施方式
二 本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一不同的是步驟一中取0. 22g的蛋 黃磷脂酰膽堿和0. 07g的膽固醇并用18ml的氯仿溶解，得混合液。其它步驟及參數(shù)與具體 實(shí)施方式一相同。
具體實(shí)施方式
三本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一不同的是步驟一中取0. 26g的蛋 黃磷脂酰膽堿和0. 05g的膽固醇并用22ml的氯仿溶解，得混合液。其它步驟及參數(shù)與具體 實(shí)施方式一相同。
具體實(shí)施方式
四本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一不同的是步驟一中取0.23 0. 25g的蛋黃磷脂酰膽堿和0. 04 0. 06g的膽固醇并用19 21ml的氯仿溶解，得混合液。 其它步驟及參數(shù)與具體實(shí)施方式
一相同。
具體實(shí)施方式
五本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一不同的是步驟一中取0. 24g的蛋 黃磷脂酰膽堿和0. 06g的膽固醇并用20ml的氯仿溶解，得混合液。其它步驟及參數(shù)與具體 實(shí)施方式一相同。
具體實(shí)施方式
六本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一至五之一不同的是步驟二中置于 50°C的水浴中，在真空度為-0. IMPa的條件下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)。其它步驟及參數(shù)與具體實(shí)施方式
一至五之一相同。
具體實(shí)施方式
七本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一至五之一不同的是步驟二中置于 60°C的水浴中，在真空度為-0. OSMPa的條件下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)。其它步驟及參數(shù)與具體實(shí)施方式
一至五之一相同。
具體實(shí)施方式
八本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一至五之一不同的是步驟二中置于 55°C的水浴中，在真空度為-0. 09MPa的條件下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)。其它步驟及參數(shù)與具體實(shí)施方式
一至五之一相同。
具體實(shí)施方式
九本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一至七之一不同的是步驟二中再加 入0. 18ml的磁性納米顆粒懸液、0. 006g的完整肽聚糖和52ml的磷酸鹽緩沖液。其它步驟 及參數(shù)與具體實(shí)施方式
一至七之一相同。
具體實(shí)施方式
十本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一至七之一不同的是步驟二中再加 入0. 22ml的磁性納米顆粒懸液、0. 004g的完整肽聚糖和48ml的磷酸鹽緩沖液。其它步驟 及參數(shù)與具體實(shí)施方式
一至七之一相同。
具體實(shí)施方式
十一本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一至七之一不同的是步驟二中再 加入0. 2ml的磁性納米顆粒懸液、0. 005g的完整肽聚糖和50ml的磷酸鹽緩沖液。其它步驟 及參數(shù)與具體實(shí)施方式
一至七之一相同。
具體實(shí)施方式
十二 本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一至十一之一不同的是步驟二中 磷酸鹽緩沖液為每IOOOml由8g氯化鈉，0. 2g氯化鉀，1. 44g磷酸氫二鈉、0. 24g磷酸二氫鉀 和余量的蒸餾水組成，PH值為7. 2。其它步驟及參數(shù)與具體實(shí)施方式
一至十一之一相同。
具體實(shí)施方式
十三本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一至十二之一不同的是步驟二中 完整肽聚糖提取于兩歧雙歧桿菌，購買自東北農(nóng)業(yè)大學(xué)乳品教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室菌種庫，菌 種編號為2. 9502。其它步驟及參數(shù)與具體實(shí)施方式
一至十二之一相同。
具體實(shí)施方式
十四本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一至十三之一不同的是步驟二中 磁性納米顆粒懸液的主要成分是Fe3O4，對磁場有良好的響應(yīng)性，F(xiàn)e3O4的粒徑為20nm。其它 步驟及參數(shù)與具體實(shí)施方式
一至十三之一相同。
具體實(shí)施方式
十五本實(shí)施方式完整肽聚糖磁性脂質(zhì)體的制備方法按以下步驟實(shí) 現(xiàn)一、取0. 23g的蛋黃磷脂酰膽堿和0. 06g的膽固醇并用20ml的氯仿溶解，得混合液；二、 將混合液倒入圓底燒瓶，然后置于50°C的水浴中，在真空度為-0. IMPa的條件下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā) 至圓底燒瓶內(nèi)形成脂質(zhì)薄膜，再加入0. 19ml的磁性納米顆粒懸液、0. 006g的完整肽聚糖和 48ml的磷酸鹽緩沖液，在60°C的條件下水化3h，即完成完整肽聚糖磁性脂質(zhì)體的制備；其 中磁性納米顆粒懸液的濃度為28mg/ml。本實(shí)施方式所得完整肽聚糖磁性脂質(zhì)體的包埋率為64.6%，磁性微球粒徑為 200nmo具體實(shí)施方式
十六本實(shí)施方式完整肽聚糖磁性脂質(zhì)體的制備方法按以下步驟實(shí) 現(xiàn)一、取0. 24g的蛋黃磷脂酰膽堿和0. 06g的膽固醇并用20ml的氯仿溶解，得混合液；二、 將混合液倒入圓底燒瓶，然后置于55°C的水浴中，在真空度為-0. 09MPa的條件下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā) 至圓底燒瓶內(nèi)形成脂質(zhì)薄膜，再加入0. 2ml的磁性納米顆粒懸液、0. 005g的完整肽聚糖和 50ml的磷酸鹽緩沖液，在60°C的條件下水化3h，即完成完整肽聚糖磁性脂質(zhì)體的制備；其 中磁性納米顆粒懸液的濃度為27mg/ml。本實(shí)施方式所得完整肽聚糖磁性脂質(zhì)體的包埋率為65. 5% ；由圖1中可見，磁性微 球粒徑為180nm。
權(quán)利要求
一種完整肽聚糖磁性脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于完整肽聚糖磁性脂質(zhì)體的制備方法按以下步驟實(shí)現(xiàn)一、取0.22～0.26g的蛋黃磷脂酰膽堿和0.05～0.07g的膽固醇并用18～22ml的氯仿溶解，得混合液；二、將混合液倒入圓底燒瓶，然后置于50～60℃的水浴中，在真空度為-0.08～0.1MPa的條件下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至圓底燒瓶內(nèi)形成脂質(zhì)薄膜，再加入0.18～0.22ml的磁性納米顆粒懸液、0.004～0.006g的完整肽聚糖和48～52ml的磷酸鹽緩沖液，在60℃的條件下水化3h，即完成完整肽聚糖磁性脂質(zhì)體的制備；其中磁性納米顆粒懸液的濃度為26～28mg/ml。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種完整肽聚糖磁性脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于步驟一 中取0. 23 0. 25g的蛋黃磷脂酰膽堿和0. 04 0. 06g的膽固醇并用19 21ml的氯仿溶 解，得混合液。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種完整肽聚糖磁性脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于步驟一 中取0. 24g的蛋黃磷脂酰膽堿和0. 06g的膽固醇并用20ml的氯仿溶解，得混合液。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種完整肽聚糖磁性脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于步驟二 中置于55°C的水浴中，在真空度為-0. 09MPa的條件下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種完整肽聚糖磁性脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于步驟二 中再加入0. 2ml的磁性納米顆粒懸液、0. 005g的完整肽聚糖和50ml的磷酸鹽緩沖液。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種完整肽聚糖磁性脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于步驟二 中磷酸鹽緩沖液為每IOOOml由8g氯化鈉，0. 2g氯化鉀，1. 44g磷酸氫二鈉、0. 24g磷酸二氫 鉀和余量的蒸餾水組成，PH值為7. 2。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種完整肽聚糖磁性脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于步驟二 中完整肽聚糖提取于兩歧雙歧桿菌，購買自東北農(nóng)業(yè)大學(xué)乳品教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室菌種庫， 菌種編號為2. 9502。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種完整肽聚糖磁性脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于步驟二 中磁性納米顆粒懸液的主要成分是Fe3O4，對磁場有良好的響應(yīng)性，F(xiàn)e3O4的粒徑為20nm。
全文摘要
一種完整肽聚糖磁性脂質(zhì)體的制備方法，它涉及一種磁性脂質(zhì)體的制備方法。它解決了現(xiàn)有磁性微球制備技術(shù)制備出的磁性微球粒徑大，靜脈注射易堵塞血管，口服不易吸收的問題。方法1.取蛋黃磷脂酰膽堿和膽固醇并用氯仿溶解，得混合液；2.混合液置于水浴中旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至形成脂質(zhì)薄膜，再加入磁性納米顆粒懸液、完整肽聚糖和磷酸鹽緩沖液，水化后即完成完整肽聚糖磁性脂質(zhì)體的制備。本發(fā)明中完整肽聚糖磁性脂質(zhì)體的包埋率為64.6～65.5%，磁性微球粒徑為180～200nm，在獲得靶向性的同時更加有利于人體吸收；同時靜脈注射不易堵塞血管，口服易吸收，在有效保護(hù)肽聚糖結(jié)構(gòu)完整的同時使其具有磁靶向性這一技術(shù)難題，且制備工藝簡單。
文檔編號A61K47/02GK101843585SQ20101020589
公開日2010年9月29日 申請日期2010年6月22日 優(yōu)先權(quán)日2010年6月22日
發(fā)明者劉寧, 孫盟璐, 江虹銳 申請人:東北農(nóng)業(yè)大學(xué)