本申請(qǐng)涉及一種新型的ccr2拮抗劑及其用途。

背景技術(shù)：

如cn103328479a中所述，趨化因子受體ccr2見(jiàn)于單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、b細(xì)胞、活化的t細(xì)胞、樹(shù)突細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞的表面上。它是多種趨化因子配體(包括mcp-1、mcp-2、mcp-3和mcp-4)的受體。其中，mcp-1(單核細(xì)胞趨化蛋白-1，也稱為ccl2)似乎僅與ccr2相互作用，而不與迄今為止鑒定的任何其他趨化因子受體相互作用。mcp-1由心肌細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、軟骨細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞、系膜細(xì)胞、肺泡細(xì)胞、t淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等表達(dá)。在被其mcp-1活化后，ccr2受體信號(hào)級(jí)聯(lián)放大涉及磷脂酶、蛋白激酶和脂質(zhì)激酶的活化。

ccr2介導(dǎo)的單核細(xì)胞募集是導(dǎo)致發(fā)生動(dòng)脈粥樣硬化的最早期步驟之一。在動(dòng)脈粥樣硬化的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ椭?，?dòng)脈斑塊形成依賴于ccr2和mcp-1的完整性。

慢性炎性疾病的動(dòng)物模型研究已證明，通過(guò)拮抗劑抑制mcp-1與ccr2之間的結(jié)合抑制了炎性應(yīng)答。已表明抑制發(fā)生關(guān)節(jié)炎、哮喘和葡萄膜炎的mcp-1拮抗劑抑制單核細(xì)胞遷移。mcp-1和ccr2二者敲除小鼠已證明，單核細(xì)胞向炎性病變中的浸潤(rùn)顯著降低。單核細(xì)胞的ccr2介導(dǎo)性遷移被認(rèn)為是人多發(fā)性硬化(ms)的致病原因，因?yàn)樵趍s患者的腦脊液中觀察到了ccr2和mcp-1表達(dá)。在人ms的小鼠模型中，ccr2或mcp-1缺陷預(yù)防eae的發(fā)生。在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和克羅恩病中用tnf-α拮抗劑治療期間觀察到的改善還與mcp-1表達(dá)和浸潤(rùn)性巨噬細(xì)胞數(shù)目的降低相關(guān)。另外，最近有人提出了ccr2影響肥胖和相關(guān)脂肪組織炎癥和全身胰島素抗性的發(fā)生，并且在一旦確立肥胖及其代謝結(jié)果后在維持脂肪組織巨噬細(xì)胞和胰島素抗性中發(fā)揮作用。此外，ccr2信號(hào)傳導(dǎo)可在神經(jīng)性疼痛中發(fā)揮致病作用。還表明缺乏ccr2使小鼠疼痛模型中的炎性和神經(jīng)性疼痛降低，表明神經(jīng)組織中巨噬細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞的募集和活化在疼痛狀態(tài)中發(fā)揮重要作用。

已將mcp-1與ccr2之間的相互作用與炎性疾病的病理學(xué)聯(lián)系起來(lái)，所述疾病例如銀屑病、葡萄膜炎、動(dòng)脈粥樣硬化、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、多發(fā)性硬化、克羅恩病、炎性腸病、腎炎、器官同種異體移植排斥、纖維化肺、腎功能不全、腎纖維化、糖尿病和糖尿病并發(fā)癥、糖尿病性腎病、糖尿病性視網(wǎng)膜病、糖尿病性視網(wǎng)膜炎、糖尿病性微血管病、肥胖、神經(jīng)性疼痛(包括與糖尿病相關(guān)的神經(jīng)性疼痛)、結(jié)核病、結(jié)節(jié)病、侵襲性葡萄球菌感染、白內(nèi)障手術(shù)后炎癥、變應(yīng)性鼻炎、變應(yīng)性結(jié)膜炎、慢性蕁麻疹、慢性阻塞性肺病(copd)、變應(yīng)性哮喘、hiv相關(guān)癡呆癥、牙周病、牙周炎、牙齦炎、齒齦病、舒張性心肌病、心肌梗死、心肌炎、慢性心力衰竭、血管狹窄、再狹窄、再灌注障礙、腎小球腎炎、實(shí)體瘤和癌癥、慢性淋巴細(xì)胞性白血病、慢性髓細(xì)胞性白血病、多發(fā)性骨髓瘤、惡性骨髓瘤、霍奇金病、以及膀胱癌、乳腺癌、子宮頸癌、結(jié)腸癌、直腸癌、肺癌、前列腺癌和胃癌(參見(jiàn)，例如rollins，mol.med.today，2：198-204(1996)；dawson等，expertopin.ther.targets，7(1)：35-48，(2003))，connor等，gut，153：1287-1294；ali-osmanjr等，j.surg.res.，144：350-351(2008)；cid等，rheumatology，45(11)：1356-1363(2006)；wada等，inflammationandregeneration，23(5)：567-572(2004)。

ccr2和mcp-1與多種癌癥的生長(zhǎng)、確立和轉(zhuǎn)移擴(kuò)散密切相關(guān)(yoshie等，2001)。一般而言，認(rèn)為ccr2介導(dǎo)的巨噬細(xì)胞和免疫抑制性骨髓細(xì)胞對(duì)腫瘤和轉(zhuǎn)移細(xì)胞的吸引是所涉及的主要機(jī)制，但是多種骨髓祖細(xì)胞的活動(dòng)化也可發(fā)揮作用。特別有趣的是，在許多腫瘤類型中，mcp-1水平與侵襲、巨噬細(xì)胞含量和血管發(fā)生相關(guān)聯(lián)。血漿ccl2水平在癌癥患者中傾向于升高并且與乳腺癌(dwyer等，2007)、卵巢癌(hefler等，1999)和肺癌(cai等，2009)患者的腫瘤階段相關(guān)。

ccr2受體和mcp-1/ccl2的多態(tài)性與人的癌癥發(fā)生率顯著相關(guān)，包括膀胱癌和子宮頸癌(zafiropoulos等，2004；coelho等，2005；narter等，2010)。其中與mcp-1和ccr2相關(guān)的癌癥包括黑素瘤(graves等，1992；koga等2008；zheng等，1999，)、卵巢癌(negus等，1995)、乳腺癌(saji等，2001；soria等，2008；soria和benbaruch2008；mestdagt等2004；chavey等，2007；valkovic等，1998；ueno等，2000；valkovic等，2005；salcedo等，2000)、食管癌(ohta等，2002；koide等，2004)、胃癌(ohta等，2003；kuroda等，2005；futagami等，2008)、腎細(xì)胞癌(lukesova等，2008)、肺癌(cai等，2009；wong等，2008；niiya等，2003)、結(jié)腸癌(bailey等，2007)、甲狀腺癌(tanaka等，2009)、白血病(mazur等，2007)、多發(fā)性骨髓瘤(arendt等，2002；johrer等，2004；vandebroeke等，2003；pellegrino等，2005)和前列腺癌(lu等，2007a)。

mcp-1促進(jìn)前破骨細(xì)胞融合，導(dǎo)致形成破骨細(xì)胞(lu等，2007b)，并且還參與促進(jìn)cd11b+細(xì)胞分化為破骨細(xì)胞(mizutani等，2009)。數(shù)種癌主要轉(zhuǎn)移至骨，包括肺癌、乳腺癌、腎癌、甲狀腺癌和多發(fā)性骨髓瘤(參見(jiàn)craig和loberg，2006)。多于90％的晚期前列腺癌患者表現(xiàn)出骨轉(zhuǎn)移的跡象(shah等，2004)。

mcp-1在骨定向轉(zhuǎn)移的發(fā)生中發(fā)揮核心作用。lu和kang(2009)表明，使用提高mcp-1表達(dá)的人乳腺腫瘤系促進(jìn)了肺轉(zhuǎn)移和骨轉(zhuǎn)移以及繼發(fā)性腫瘤的后續(xù)生長(zhǎng)。

肝是結(jié)直腸癌轉(zhuǎn)移的主要部位。然而，肝切除術(shù)很少有療效，有60～70％的病例發(fā)生復(fù)發(fā)。mcp-1可在肝轉(zhuǎn)移中高度表達(dá)，并且高的水平與不良預(yù)后相關(guān)，mcp-1表達(dá)隨癌癥分期而明顯升高(bailey等，2007；yoshimode等，2009)。

與肝腫瘤相關(guān)的成纖維細(xì)胞和正常成纖維細(xì)胞在tnfα的影響下均表達(dá)mcp-1(muller等，2007，2010)，表明與腫瘤相關(guān)的成纖維細(xì)胞來(lái)自炎性條件下的正常肝基質(zhì)。

因此，大量證據(jù)證明，mcp-1和ccr2參與癌癥的生長(zhǎng)和發(fā)展，特別是癌癥相關(guān)細(xì)胞(如巨噬細(xì)胞)的募集。因此，ccr2拮抗劑應(yīng)可用于治療癌癥，尤其是用于限制癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移擴(kuò)散，并且降低巨噬細(xì)胞和骨髓細(xì)胞向原發(fā)性腫瘤的募集，從而降低腫瘤生長(zhǎng)和血管形成。特別是，ccr2拮抗劑應(yīng)可用于抑制轉(zhuǎn)移性腫瘤細(xì)胞從原發(fā)性腫瘤部位的擴(kuò)散。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明第一方面提供下式i所示的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽在制備藥物中的用途，尤其是在制備用于治療或預(yù)防ccr2介導(dǎo)的疾病的藥物中的用途：

式中，

r¹、r²、r³和r⁴各自獨(dú)立為oh或-oc(o)r⁵，其中，r⁵選自c1-c4烷基；

a、b、c和d各自獨(dú)立為0、1、2或3的整數(shù)。

在一個(gè)或多個(gè)實(shí)施方案中，r¹、r²、r³和r⁴各自獨(dú)立為oh。

在一個(gè)或多個(gè)實(shí)施例中，a為2，b、c和d為1。

在一個(gè)或多個(gè)實(shí)施方案中，b、c和d為1，r²、r³和r⁴各自獨(dú)立地位于對(duì)位或間位上。

在一個(gè)或多個(gè)實(shí)施方案中，式i化合物具有下式ii所示的結(jié)構(gòu)：

式中，a、b、c、d、r¹、r²、r³和r⁴各自如前文所述。

在一個(gè)或多個(gè)實(shí)施方案中，式ii化合物中，a為2，b、c和d為1，兩個(gè)r¹分別位于5和7位，r²、r³和r⁴各自獨(dú)立地位于對(duì)位上。

在一個(gè)或多個(gè)實(shí)施方案中，式i化合物為下式化合物：

在一個(gè)或多個(gè)實(shí)施方案中，所述ccr2介導(dǎo)的疾病包括但不限于疼痛、炎性疾病、癌癥、癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移擴(kuò)散等。

在一個(gè)或多個(gè)實(shí)施方案中，所述ccr2介導(dǎo)的疾病包括但不限于銀屑病、葡萄膜炎、動(dòng)脈粥樣硬化、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、多發(fā)性硬化、克羅恩病、炎性腸病、腎炎、器官同種異體移植排斥、纖維化肺、腎功能不全、腎纖維化、糖尿病和糖尿病并發(fā)癥、糖尿病性腎病、糖尿病性視網(wǎng)膜病、糖尿病性視網(wǎng)膜炎、糖尿病性微血管病、肥胖、神經(jīng)性疼痛(包括與糖尿病相關(guān)的神經(jīng)性疼痛)、結(jié)核病、結(jié)節(jié)病、侵襲性葡萄球菌感染、白內(nèi)障手術(shù)后炎癥、變應(yīng)性鼻炎、變應(yīng)性結(jié)膜炎、慢性蕁麻疹、慢性阻塞性肺病、變應(yīng)性哮喘、hiv相關(guān)癡呆癥、牙周病(牙周炎、牙齦炎、齒齦病)、舒張性心肌病、心肌梗死、心肌炎、慢性心力衰竭、血管狹窄、再狹窄、再灌注障礙、腎小球腎炎、實(shí)體瘤和癌癥、慢性淋巴細(xì)胞性白血病、慢性髓細(xì)胞性白血病、多發(fā)性骨髓瘤、惡性骨髓瘤和霍奇金病。

在一個(gè)或多個(gè)實(shí)施方案中，所述ccr2介導(dǎo)的疾病包括但不限于膀胱癌、子宮頸癌、黑素瘤、卵巢癌、乳腺癌、食管癌、胃癌、腎細(xì)胞癌、肺癌、結(jié)腸癌、直腸癌、甲狀腺癌、白血病、多發(fā)性骨髓瘤、肝癌和前列腺癌。

在一個(gè)或多個(gè)實(shí)施方案中，所述ccr2介導(dǎo)的疾病包括轉(zhuǎn)移性腫瘤細(xì)胞從原發(fā)性腫瘤部位的擴(kuò)散，例如，肺癌、乳腺癌、腎癌、甲狀腺癌和多發(fā)性骨髓瘤的癌細(xì)胞向骨的轉(zhuǎn)移，乳腺癌細(xì)胞向肺的轉(zhuǎn)移，結(jié)腸癌、直腸癌細(xì)胞向肝的轉(zhuǎn)移。

在一個(gè)或多個(gè)實(shí)施方案中，所述藥物還包括一種或多種已知的抗癌藥物。

在一個(gè)或多個(gè)實(shí)施方案中，所述已知的抗癌藥物選自：白消安、馬法蘭、苯丁酸氮芥、環(huán)磷酰胺、異環(huán)磷酰胺、替莫唑胺、苯達(dá)莫司汀、順鉑、絲裂霉素c、博萊霉素、卡鉑、喜樹(shù)堿、伊立替康、托泊替康、阿霉素、表阿霉素、阿克拉霉素、米托蒽醌、甲基羥基玫瑰樹(shù)堿、5-氮雜胞苷、吉西他濱、5-氟尿嘧啶、5-氟-2'-去氧尿苷、氟達(dá)拉濱、奈拉濱、長(zhǎng)春新堿、長(zhǎng)春瑞濱、紫杉醇、伊沙匹隆、卡巴他賽、多西他賽、帕尼單抗、阿瓦斯丁、赫賽汀、美羅華、伊馬替尼、吉非替尼、埃羅替尼、拉帕替尼、甲苯磺酸索拉非尼、舒尼替尼、尼羅替尼、達(dá)沙替尼、帕唑帕尼、依維莫司、他莫昔芬、來(lái)曲唑、氟維司群和米托胍腙。

在一個(gè)或多個(gè)實(shí)施方案中，所述已知的抗癌藥物為甲苯磺酸索拉非尼。

本發(fā)明還提供式i所示的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽在制備用于在需要的對(duì)象中調(diào)節(jié)腫瘤微環(huán)境、降低巨噬細(xì)胞和骨髓細(xì)胞向原發(fā)性腫瘤的募集、抑制腫瘤生長(zhǎng)、抑制血管形成、和/或增加cd8t細(xì)胞的藥物或試劑中的用途。

在一個(gè)或多個(gè)實(shí)施方案中，所述用途包括制備用于下述任意一種或多種目的藥物或試劑的用途：

抑制ccr2介導(dǎo)的細(xì)胞遷移，包括但不限于抑制thp-1的遷移能力，或抑制巨噬細(xì)胞的招募；

抑制ccl2-ccr2引起的鈣流；

解除巨噬細(xì)胞對(duì)cd8t細(xì)胞的抑制作用；和

使巨噬細(xì)胞從免疫抑制型(m2)向免疫促進(jìn)型(m1)偏移。

本發(fā)明還提供式i所示的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽在制備用于抑制ccr2或ccl2-ccr2通路的藥物或試劑中的用途。

附圖說(shuō)明

圖1：不同濃度747藥物對(duì)于ccl2-ccr2介導(dǎo)的thp-1遷移能力的影響。

圖2：10μm747與其他ccr2拮抗劑對(duì)thp1-gcamp6鈣流影響。

圖3：不同濃度747對(duì)293ft-gcamp6-ccr2鈣流影響。

圖4：不同濃度747對(duì)人與鼠的i125mcp1-ccr2的抑制能力。

圖5：不同濃度747對(duì)人與鼠的i125mip1a-ccr5的抑制能力。

圖6：747對(duì)tg腹膜炎誘導(dǎo)的腹腔巨噬細(xì)胞數(shù)量影響。

圖7：747對(duì)于多種肝癌細(xì)胞系體外增殖影響(48小時(shí))。

圖8：747與sorafenib對(duì)于hepa1-6小鼠肝原位腫瘤治療活體成像追蹤。

圖9：747與sorafenib治療后hepa1-6肝原位腫瘤生長(zhǎng)結(jié)果。

圖10：747與sorafenib治療hepa1-6肝原位腫瘤小鼠體重變化追蹤。

圖11：747對(duì)hepa1-6肝原位腫瘤微環(huán)境中cd8t細(xì)胞與cd4t細(xì)胞比例影響。

圖12：747、巨噬細(xì)胞敲除、cd8t細(xì)胞敲除對(duì)hepa1-6小鼠肝癌皮下腫瘤治療結(jié)果。

圖13：747、巨噬細(xì)胞敲除、cd8t細(xì)胞敲除對(duì)hepa1-6小鼠肝癌皮下腫瘤生長(zhǎng)變化。

圖14：747對(duì)hepa1-6小鼠肝癌皮下腫瘤微環(huán)境cd4t細(xì)胞與cd8t細(xì)胞比例影響。

圖15：747對(duì)hepa1-6小鼠肝癌皮下腫瘤微環(huán)境巨噬細(xì)胞比例影響。

圖16：747、sorafenib各組對(duì)lpc小鼠皮下肝癌治療結(jié)果。

圖17：747、sorafenib各組對(duì)lpc小鼠肝癌皮下腫瘤生長(zhǎng)變化追蹤。

圖18：747、sorafenib治療lpc小鼠肝癌皮下腫瘤后腫瘤重量。

圖19：747對(duì)lpc小鼠肝癌皮下腫瘤微環(huán)境cd8t細(xì)胞與cd4t細(xì)胞比例影響。

圖20：747、sorafenib對(duì)lpc小鼠肝癌皮下腫瘤微環(huán)境巨噬細(xì)胞的細(xì)胞比例。

圖21：lpc小鼠皮下腫瘤微環(huán)境的巨噬細(xì)胞中ccr2陽(yáng)性細(xì)胞的各組比例。

圖22：lpc小鼠皮下腫瘤微環(huán)境的巨噬細(xì)胞中m2-免疫抑制性巨噬細(xì)胞的各組比例。

圖23：化合物747的hplc-uv檢測(cè)(a)和ms(+/-)(b)。該化合物該化合物在負(fù)模式下離子化好；正模式下離子化差。

具體實(shí)施方案

本文提供一類新的ccr2拮抗劑，其結(jié)構(gòu)如前文所述的式i所示。優(yōu)選的，式i化合物具有式ii所示的結(jié)構(gòu)。

在優(yōu)選的式i和ii化合物中，r¹、r²、r³和r⁴各自獨(dú)立為oh；和/或，a為2，b、c和d為1；和/或，r²、r³和r⁴各自獨(dú)立地位于對(duì)位或間位上。

在某些優(yōu)選的式i和ii化合物中，b、c和d為1，r²、r³和r⁴各自獨(dú)立為oh，且位于對(duì)位上；a為2。

在其它實(shí)施方案中，式i和ii化合物中，a為2，b、c和d為1，兩個(gè)r¹分別位于5和7位，r²、r³和r⁴各自獨(dú)立地位于對(duì)位上。

更優(yōu)選的，式i化合物為本文所述的編號(hào)為747的化合物(山奈酚3-(2,4-二-e-p-香豆?；罄钐擒?：

一些化合物可能作為立體異構(gòu)體，包括旋光異構(gòu)體存在。本申請(qǐng)包括所有立體異構(gòu)體和這樣的立體異構(gòu)體的外消旋混合物，以及可以根據(jù)本領(lǐng)域技術(shù)人員眾所周知的方法分離出來(lái)的單獨(dú)的對(duì)映體。

本文中，化合物747可從長(zhǎng)苞冷杉中提取獲得。例如，在一個(gè)具體的提取方法中，將長(zhǎng)苞冷杉干燥的地上部分粉碎成粗粉，用乙醇回流提取數(shù)次后，合并提取液，減壓濃縮成稠浸膏。浸膏加水稀釋后分別以氯仿、乙酸乙酯和正丁醇依次萃取，收集各萃取部分，分別濃縮成浸膏。其中乙酸乙酯萃取部分的浸膏，以甲醇溶解過(guò)濾后進(jìn)行硅膠柱色譜分離，可獲得化合物747。

色譜分離時(shí)，可使用氯仿-甲醇(例如2:1的氯仿:甲醇)洗脫，用薄層色譜檢查洗脫流分，得流分1到10，其中流分1經(jīng)進(jìn)一步硅膠色譜純化，得到黃色無(wú)定形粉末，該粉末即為化合物747。

獲得化合物747后，可將其制備成相應(yīng)的衍生物，例如，可采用本領(lǐng)域周知的方法將其制備成其藥學(xué)上可接受的鹽或酯。

本文中，藥學(xué)上可接受的鹽的例子包括但不限于無(wú)機(jī)和有機(jī)酸鹽，例如鹽酸鹽、氫溴酸鹽、磷酸鹽、硫酸鹽、檸檬酸鹽、乳酸鹽、酒石酸鹽、馬來(lái)酸鹽、富馬酸鹽、扁桃酸鹽和草酸鹽；以及與堿例如鈉羥基、三(羥基甲基)胺基甲烷(tris，胺丁三醇)和n-甲基葡糖胺形成的無(wú)機(jī)和有機(jī)堿鹽。

本文中，藥學(xué)上可接受的酯包括依據(jù)本領(lǐng)域已知方法通過(guò)使式i化合物上的羥基與c1-4羧酸、c3-6二酸或其酸酐例如琥珀酸酐和富馬酸酐縮合而獲得的酯。

作為ccr2拮抗劑，本發(fā)明式i化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽可用于治療或預(yù)防ccr2介導(dǎo)的各種疾病，包括但不限于疼痛、炎性疾病、癌癥和癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移擴(kuò)散等。

舉例而言，ccr2介導(dǎo)的疾病包括但不限于銀屑病、葡萄膜炎、動(dòng)脈粥樣硬化、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、多發(fā)性硬化、克羅恩病、炎性腸病、腎炎、器官同種異體移植排斥、纖維化肺、腎功能不全、腎纖維化、糖尿病和糖尿病并發(fā)癥、糖尿病性腎病、糖尿病性視網(wǎng)膜病、糖尿病性視網(wǎng)膜炎、糖尿病性微血管病、肥胖、神經(jīng)性疼痛(包括與糖尿病相關(guān)的神經(jīng)性疼痛)、結(jié)核病、結(jié)節(jié)病、侵襲性葡萄球菌感染、白內(nèi)障手術(shù)后炎癥、變應(yīng)性鼻炎、變應(yīng)性結(jié)膜炎、慢性蕁麻疹、慢性阻塞性肺病、變應(yīng)性哮喘、hiv相關(guān)癡呆癥、牙周病(牙周炎、牙齦炎、齒齦病)、舒張性心肌病、心肌梗死、心肌炎、慢性心力衰竭、血管狹窄、再狹窄、再灌注障礙、腎小球腎炎、實(shí)體瘤和癌癥、慢性淋巴細(xì)胞性白血病、慢性髓細(xì)胞性白血病、多發(fā)性骨髓瘤、惡性骨髓瘤、癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移擴(kuò)散和霍奇金病。

就癌癥的治療和預(yù)防而言，本申請(qǐng)式i化合物通過(guò)ccr2這一免疫靶點(diǎn)調(diào)節(jié)了腫瘤微環(huán)境，減少了腫瘤巨噬細(xì)胞的浸潤(rùn)，增加了cd8t細(xì)胞，從而達(dá)到治療腫瘤的效果。因此，本申請(qǐng)包括式i化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽用于下述任意一種或多種目的的用途或方法(包括制備用于下述一種或多種目的的藥物組合物/試劑的用途)：

調(diào)節(jié)腫瘤微環(huán)境；

減少腫瘤巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)；和

增加cd8t細(xì)胞。

更具體而言，本申請(qǐng)包括式i化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽用于下述任意一種或多種目的的用途或方法(包括制備用于下述一種或多種目的的藥物組合物/試劑的用途)：

抑制ccr2介導(dǎo)的細(xì)胞遷移，包括但不限于抑制thp-1的遷移能力，或抑制巨噬細(xì)胞的招募；

抑制ccl2-ccr2引起的鈣流；

解除巨噬細(xì)胞對(duì)cd8t細(xì)胞的抑制作用；和

使巨噬細(xì)胞從免疫抑制型(m2)向免疫促進(jìn)型(m1)偏移。

本文中，ccr2介導(dǎo)的癌癥包括但不限于膀胱癌、子宮頸癌、黑素瘤、卵巢癌、乳腺癌、食管癌、胃癌、腎細(xì)胞癌、肺癌、結(jié)腸癌、直腸癌、甲狀腺癌、白血病、多發(fā)性骨髓瘤、肝癌和前列腺癌。

本文中，癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移擴(kuò)散包括但不限于轉(zhuǎn)移性腫瘤細(xì)胞從原發(fā)性腫瘤部位的擴(kuò)散，例如，肺癌、乳腺癌、腎癌、甲狀腺癌和多發(fā)性骨髓瘤向骨的轉(zhuǎn)移，乳腺癌細(xì)胞向肺的轉(zhuǎn)移，結(jié)腸癌、直腸癌細(xì)胞向肝的轉(zhuǎn)移。

本申請(qǐng)式i化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽也可用于降低巨噬細(xì)胞和骨髓細(xì)胞向原發(fā)性腫瘤的募集、抑制腫瘤生長(zhǎng)和/或抑制血管形成，因此，本申請(qǐng)也包括式i化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽在制備用于降低巨噬細(xì)胞和骨髓細(xì)胞向原發(fā)性腫瘤的募集、抑制腫瘤生長(zhǎng)和/或抑制血管形成的藥物組合物或試劑中的用途。

本申請(qǐng)?zhí)貏e包括化合物747及其藥學(xué)上可接受的鹽在制備治療或預(yù)防ccr2介導(dǎo)的癌癥以及癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移擴(kuò)散的藥物中的用途，尤其是在制備治療或預(yù)防肝癌(如ccr2介導(dǎo)的肝癌)的藥物中的用途。

本申請(qǐng)還包括用于治療或預(yù)防上述疾病的本申請(qǐng)式i化合物，尤其是式ii化合物和化合物747。

因此，本申請(qǐng)也包括上述疾病的治療或預(yù)防方法，所述方法包括給予需要的對(duì)象治療或預(yù)防有效量的本申請(qǐng)式i化合物。尤其是，本申請(qǐng)包括肝癌(如ccr2介導(dǎo)的肝癌)的治療或預(yù)防方法，上述方法包括給予需要的對(duì)象治療或預(yù)防有效量的化合物747。

本文中，治療或預(yù)防有效量可由本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)本領(lǐng)域常規(guī)的方法容易地確定。例如，一般情況下，式i化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽對(duì)哺乳動(dòng)物每天口服給藥，藥量可按照約0.0025到50毫克/公斤體重。單位口服劑量可以包括約0.01到50毫克式i化合物。單位劑量可給予一次或多次，每天為一片或多片，每片含有約0.1到50毫克。

對(duì)于上述用途或方法而言，本申請(qǐng)式i化合物可以藥物組合物或試劑的方式給予或施用。

藥物組合物中通常含有本領(lǐng)域常規(guī)施用的藥學(xué)上可接受的載體。藥學(xué)上可接受的載體包括藥學(xué)上可接受的賦形劑和稀釋劑。載體可為惰性的或者其本身可具有藥物益處。載體的類別包括但不限于粘合劑、緩沖劑、著色劑、稀釋劑、崩解劑、乳化劑、調(diào)味劑、流平劑、潤(rùn)滑劑、防腐劑、穩(wěn)定劑、表面活性劑、制片劑、延遲釋放劑和濕潤(rùn)劑等。稀釋劑可以是惰性稀釋劑，例如碳酸鈣、磷酸鈣或乳糖。崩解劑可以是玉米淀粉或海藻酸。粘合劑可以是淀粉或明膠。潤(rùn)滑劑可以是硬脂酸鎂、滑石、硬脂酸和十二烷基硫酸鈉。延遲釋放劑可以是例如羧甲基纖維素、鄰苯二甲酸乙酸纖維素或聚乙酸乙烯酯。調(diào)味劑可以是甜味劑，甜味劑，例如糖精、環(huán)己烷氨基磺酸鹽、甘油或糖；和味道增強(qiáng)劑，例如香蘭素或橙提取物。防腐劑可以是對(duì)羥基苯甲酸酯。乳化劑可以是木質(zhì)素、亞硫酸廢液、甲基纖維素、淀粉和聚乙烯基吡咯烷酮等。

例示性藥學(xué)上可接受的載體包括糖、淀粉、纖維素、粉狀黃蓍膠、麥芽、明膠、滑石粉和植物油。

可將本發(fā)明的藥物組合物制成各種適合給藥的劑型，包括但不限于片劑、膠囊、溶液、糖漿、乳液等。

因此，可以本領(lǐng)域周知的各種給藥方式給予本發(fā)明的藥物組合物，包括但不限于腸外、皮下、靜脈、肌肉、腹腔內(nèi)、透皮、口腔、鞘內(nèi)、顱內(nèi)、鼻腔或外用途徑給藥。作為替代或并行地，可以通過(guò)口服給藥。藥的劑量將根據(jù)病人的年齡、健康與體重、并行治療的種類、治療的頻率、以及所需治療效益來(lái)決定。

本申請(qǐng)的劑型可用已知的方式制備。例如，由傳統(tǒng)的混合、制粒、制錠、溶解、或冷凍干燥過(guò)程制造。制造口服制劑時(shí)，可結(jié)合固體輔料和活性化合物，選擇性研磨混合物。如果需要或必要時(shí)加入適量助劑后，加工顆?；旌衔铮@得片劑或錠劑芯。

本申請(qǐng)的試劑可含有前文所述的藥學(xué)上可接受的載體。當(dāng)然，也可含有本領(lǐng)域體外實(shí)驗(yàn)常規(guī)的各種載體，例如水或能溶解本申請(qǐng)式i化合物的各種無(wú)機(jī)或有機(jī)溶劑。因此，應(yīng)理解的是，本申請(qǐng)前文所述的各種用途和方法包括體內(nèi)和體外用途和方法。

本申請(qǐng)的式i化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽可與其它已知的抗癌藥物一起施用。這類已知的抗癌藥物包括但不限于：白消安、馬法蘭、苯丁酸氮芥、環(huán)磷酰胺、異環(huán)磷酰胺、替莫唑胺、苯達(dá)莫司汀、順鉑、絲裂霉素c、博萊霉素、卡鉑、喜樹(shù)堿、伊立替康、托泊替康、阿霉素、表阿霉素、阿克拉霉素、米托蒽醌、甲基羥基玫瑰樹(shù)堿、5-氮雜胞苷、吉西他濱、5-氟尿嘧啶、5-氟-2'-去氧尿苷、氟達(dá)拉濱、奈拉濱、長(zhǎng)春新堿、長(zhǎng)春瑞濱、紫杉醇、伊沙匹隆、卡巴他賽、多西他賽、帕尼單抗、阿瓦斯丁、赫賽汀、美羅華、伊馬替尼、吉非替尼、埃羅替尼、拉帕替尼、甲苯磺酸索拉非尼、舒尼替尼、尼羅替尼、達(dá)沙替尼、帕唑帕尼、依維莫司、他莫昔芬、來(lái)曲唑、氟維司群和米托胍腙等。尤其優(yōu)選的是，本申請(qǐng)式i化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽可與甲苯磺酸索拉非尼一起施用。

當(dāng)使用已知的抗癌藥物時(shí)，這類已知的抗癌藥物可以其常規(guī)的用量給予，或者以較低的劑量給予。

因此，在某些實(shí)施方案中，本申請(qǐng)還包括本申請(qǐng)式i化合物與已知抗癌藥物(尤其是治療肝癌的藥物)在制備治療或預(yù)防癌癥(尤其是肝癌)的藥物中的應(yīng)用。

在其它實(shí)施方案中，本申請(qǐng)?zhí)峁┮环N藥物組合物，該藥物組合物含有本申請(qǐng)式i化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽與一種或多種已知的抗癌藥物。所述藥物組合物中本申請(qǐng)式i化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽與已知的抗癌藥物分別提供，或以兩者的混合物的形式提供。藥物組合物中，所述已知的抗癌藥物的劑量可為該抗癌藥物常規(guī)使用時(shí)的劑量，或者可以較低的劑量使用或含于本申請(qǐng)的藥物組合物中。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述抗癌藥物是治療肝癌的藥物，例如甲苯磺酸索拉非尼。在某些實(shí)施方案中，該藥物組合物中，甲苯磺酸索拉非尼的單位劑量要低于其常規(guī)的用于治療肝癌時(shí)的單位劑量。

本申請(qǐng)的藥物組合物可以給予任何哺乳動(dòng)物對(duì)象，優(yōu)選的，所述哺乳動(dòng)物是人。

下列實(shí)施例是舉例說(shuō)明，而不是限制本發(fā)明的方法和制劑。其他對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員來(lái)說(shuō)是顯而易見(jiàn)的，和在臨床治療中通常會(huì)遇到的對(duì)各種條件和參數(shù)的適當(dāng)修改和改進(jìn)，都在本發(fā)明的精神和范圍內(nèi)。

實(shí)施例1：化合物747的制備

將長(zhǎng)苞冷杉干燥的地上部分22kg粉碎成粗粉，用200l的80％乙醇回流提取3次，每次3小時(shí)，合并提取液，減壓濃縮成25l稠浸膏。浸膏加10l水稀釋后分別以氯仿、乙酸乙酯和正丁醇依次萃取，收集各萃取部分，分別濃縮成浸膏。其中乙酸乙酯萃取部分的浸膏300g，以甲醇溶解過(guò)濾后進(jìn)行硅膠柱色譜，以氯仿-甲醇2:1洗脫，用薄層色譜檢查洗脫流分，具有相同單一斑點(diǎn)的流分合并，濃縮，得流分1-10，其中第1流分經(jīng)進(jìn)一步硅膠色譜純化，得到黃色無(wú)定形粉末，結(jié)構(gòu)鑒定為stenopalustrosided，即山奈酚3-(2,4-二-e-p-香豆?；罄钐擒?，共58mg。該化合物結(jié)構(gòu)如下所示，本文命名為化合物747：

化合物747的分子量為724，黃色粉末，極易溶于甲醇、乙醇，易溶于乙酸乙酯、dmso，不溶于水。化合物747的hplc-uv檢測(cè)和ms(+/-)分別如圖23的a和b所示。

核磁數(shù)據(jù)：

無(wú)定形粉末；¹hnmr(cd3od,600mhz)δ7.76(2h,d,j＝9.0hz,h-2′,6′)，7.66(1h,d,j＝15.6hz,h-7′″)，7.57(1h,d,j＝15.6hz,h-7″″)，7.48(2h,d,j＝8.4hz,h-2′″,6′″)，7.43(2h,d,j＝9.0hz,h-2″″,6″″)，7.02(2h,d,j＝8.4hz,h-3′,5′)，6.81(2h,d,j＝8.4hz,h-3′″,5′″)，6.78(2h,d,j＝8.0hz,h-3′″,5′″)，6.38(1h,d,j＝15.6hz,h-8′″)，6.32(1h,d,j＝1.8hz,h-8)，6.29(1h,d,j＝15.6hz,h-8″″)，6.17(1h,d,j＝1.8hz,h-6)，5.74(1h,d,j＝1.8hz,h-1″)，5.61(1h,m,h-2″)，5.01(1h,t,j＝9.6hz,h-4″)，4.22(1h,dd,j＝9.6,3.6hz,h-3″)，3.33(1h,m,h-5″)，0.88(3h,d,j＝6.0hz,h3-6″)；

¹³cnmr(cdcl3,150mhz)，見(jiàn)表1；

esims(positive)m/z747[m+na]⁺；esims(negative)m/z723[m-h]^-,759[m+cl]^-。

表1：化合物747的¹³cnmr光譜數(shù)據(jù)

實(shí)施例2：化合物747的活性測(cè)試

1.實(shí)驗(yàn)步驟

1.1細(xì)胞遷移

人單核細(xì)胞系thp-1(ccr2高表達(dá))，96孔transwell(corning3788)，hccl2(peprotech)，thp-1細(xì)胞與藥物共孵育30分鐘后，取1x10⁵thp-1細(xì)胞/孔，下層培養(yǎng)基加入hccl250ng/ml誘導(dǎo)其遷移，6小時(shí)后lμminescentcellviabilityassay(promega)測(cè)定下層培養(yǎng)基穿過(guò)的細(xì)胞數(shù)量。

1.2鈣流實(shí)驗(yàn)

thp-1細(xì)胞穩(wěn)轉(zhuǎn)鈣流指示蛋白gcamp6獲得穩(wěn)轉(zhuǎn)株thp-1gcamp6，thp-1細(xì)胞與藥物共孵育30分鐘后，取1x10⁶thp-1細(xì)胞/孔并加入mg²⁺:2mm，ca²⁺:2mm，hccl2100ng/ml(peprotech)記錄數(shù)據(jù)(488nm，520nm)。

293ft細(xì)胞穩(wěn)轉(zhuǎn)鈣流指示蛋白gcamp6獲得穩(wěn)轉(zhuǎn)株293ft-gcamp6，lipo2000瞬轉(zhuǎn)pcdna^tm3.1/v5-hisa-hccr2，48h后，與藥物共孵育37度，3h，取1x10⁶細(xì)胞/孔，加入mg²⁺:2mm，ca²⁺:2mm，hccl2100ng/ml(peprotech)，記錄數(shù)據(jù)(488nm，520nm)。

1.3同位素實(shí)驗(yàn)

pcdna^tm3.1/v5-hisa-hccr2；hccr5；mccr2；mccr5(h：hμman，m：mouse)；lipo2000瞬轉(zhuǎn)96孔板chok1.1，3500細(xì)胞/孔，同位素配體[¹²⁵i]mcp-1(nex332,pe)，[¹²⁵i]m-ip-1a(nex298,pe)與藥物和細(xì)胞共孵育3小時(shí)后，加閃爍液，上機(jī)記錄數(shù)據(jù)。

1.4腹膜炎實(shí)驗(yàn)

4％巰基乙酸鹽(sigma)，6-8周雄性小鼠腹腔注射1ml，藥物組每天給予相應(yīng)劑量的腹腔注射，對(duì)照組每天打等量的注射液。3天后取腹水細(xì)胞，記數(shù)，流式分析。

1.5小鼠肝癌腫瘤治療實(shí)驗(yàn)與肝癌微環(huán)境細(xì)胞

小鼠與人肝癌細(xì)胞系hepa1-6、lpc，7404，7702，hepg2等實(shí)驗(yàn)細(xì)胞系均來(lái)自上海生科院細(xì)胞庫(kù)或atcc，c57/bl6，balb/c裸鼠(上海斯萊克公司)飼養(yǎng)與spf級(jí)動(dòng)物房?jī)?nèi)。皮下腫瘤模型接種4周c57/bl6雄性小鼠腹股溝150μl1.5x10⁶細(xì)胞/只，腫瘤生長(zhǎng)至100mm³左右大小進(jìn)行分組給藥治療，并追蹤腫瘤大小與小鼠體重。巨噬細(xì)胞清除劑氯膦酸二鈉脂質(zhì)體(formμmax)清除小鼠體內(nèi)巨噬細(xì)胞，每三天腹腔1次，每次150μl/只。cd8中和性抗體(ebioscience)清除小鼠體內(nèi)cd8t細(xì)胞，每三天1次，每次150μl/只。

原位腫瘤模型將hepa1-6穩(wěn)定標(biāo)記熒光素酶后，在c57/bl6小鼠肝臟原位注射100μl1x106細(xì)胞，xenogen活體成像系統(tǒng)(perkin-elmer)使用前小鼠注射d-luciferin(alameda,ca,usa)用于荷瘤小鼠活體成像，分組給藥治療并追蹤腫瘤進(jìn)展。所有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)用藥均由0.5％羥甲基纖維素與0.2％tween-20配置。新鮮的小鼠腫瘤組織分離消化成單細(xì)胞(miltenyibiotec),紅細(xì)胞裂解液去除血紅細(xì)胞，重懸于facs溶液并抗鼠cd16/32去除非特異性結(jié)合，流式抗體對(duì)細(xì)胞進(jìn)行染色(4度避光，45分鐘)，bdariaii上機(jī)檢測(cè)并記錄。實(shí)驗(yàn)所使用的流式抗體以及溶液購(gòu)自ebioscience，biolegend，r&d公司。

2.實(shí)驗(yàn)結(jié)果

在體外實(shí)驗(yàn)中，圖1顯示本發(fā)明中747藥物能夠抑制ccl2-ccr2介導(dǎo)的thp-1遷移能力，并呈現(xiàn)一定的劑量依賴。

圖2顯示，與現(xiàn)有的ccr2拮抗劑rdc和rs相比，747藥物在同濃度10μm能夠明顯抑制ccl2-ccr2引起的鈣流。

圖3顯示，747在濃度低至100nm依舊展現(xiàn)很好的抑制鈣流能力。

由于ccr2與ccr5序列有接近70％相似性，因此是現(xiàn)在開(kāi)發(fā)ccr2專一性拮抗劑的一個(gè)難點(diǎn)。但圖4和圖5顯示，在同位素的結(jié)合抑制實(shí)驗(yàn)中，本發(fā)明中的747藥物對(duì)于ccl2-人ccr2，ccl2-鼠ccr2的半數(shù)抑制濃度分別為167.2nm與177.8nm，而對(duì)于人ccr5的半數(shù)抑制濃度為16547nm，對(duì)鼠ccr5并沒(méi)有展現(xiàn)出抑制能力，這說(shuō)明747藥物能夠直接抑制ccr2這一受體并發(fā)揮功能，抑制ccr2介導(dǎo)的細(xì)胞遷移以及鈣流，而對(duì)于ccr5的抑制能力則很差，展現(xiàn)了很好的選擇性以及敏感性。

體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中，圖6顯示在ccr2介導(dǎo)腹膜炎的巨噬細(xì)胞招募的模型中，747也展現(xiàn)了良好的抑制巨噬細(xì)胞招募的能力，并呈現(xiàn)一定的劑量依賴。

以上的實(shí)驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明在體內(nèi)外747藥物都對(duì)ccr2有良好的拮抗作用，并能抑制ccr2相關(guān)功能，具有很好的選擇性以及敏感性的一類新的ccr2拮抗劑。

ccl2-ccr2這一信號(hào)通路在肝臟炎癥-肝癌的過(guò)程被激活并與肝癌的預(yù)后也有一定關(guān)系。圖7顯示747對(duì)于肝癌細(xì)胞系在體外并無(wú)明顯的細(xì)胞毒殺傷作用，而在圖8和圖9的c57/bl6小鼠的hepa1-6原位肝癌模型中展現(xiàn)出了很好的抑制腫瘤能力，圖11中顯示腫瘤微環(huán)境中殺傷性cd8t細(xì)胞明顯增多，cd4t細(xì)胞沒(méi)有明顯變化。因?yàn)閏cr2主要表達(dá)在巨噬細(xì)胞里，少量表達(dá)于其他細(xì)胞，巨噬細(xì)胞在腫瘤微環(huán)境中通常發(fā)揮免疫抑制功能來(lái)促進(jìn)腫瘤，我們認(rèn)為這一現(xiàn)象表明，747藥物發(fā)揮抑制腫瘤的能力不是直接殺傷腫瘤，而是通過(guò)抑制ccr2這一靶點(diǎn)來(lái)解除微環(huán)境中腫瘤巨噬細(xì)胞的免疫抑制能力，調(diào)動(dòng)激活cd8t細(xì)胞來(lái)完成。圖10中相對(duì)于sorafenib組小鼠體重沒(méi)有降低，表示747藥物該劑量下并沒(méi)有明顯毒性。

為了研究747藥物是否通過(guò)解除巨噬細(xì)胞對(duì)cd8t細(xì)胞的抑制來(lái)發(fā)揮抗肝癌的功能，分別使用了巨噬細(xì)胞清除劑和cd8中和性抗體來(lái)進(jìn)行研究，在圖12中，747治療組與巨噬細(xì)胞清除組展現(xiàn)了相似的腫瘤抑制能力，并且在巨噬細(xì)胞清除組747沒(méi)有明顯治療效果，并且這一治療效果依賴cd8t細(xì)胞，cd8t細(xì)胞清除后，治療效果隨即消失。圖13為各治療組對(duì)hepa1-6小鼠肝癌皮下腫瘤生長(zhǎng)變化測(cè)量追蹤，圖14和圖15顯示747治療后hepa1-6小鼠肝癌皮下腫瘤微環(huán)境中cd8t細(xì)胞顯著增多，巨噬細(xì)胞tam顯著減少。

為了證實(shí)747對(duì)于肝癌的抑制能力并非hepa1-6細(xì)胞系依賴，采用了另一株小鼠肝癌細(xì)胞系lpc，構(gòu)建皮下腫瘤治療模型，并與現(xiàn)有肝癌臨床一線用藥sorafenib(甲苯磺酸索拉非尼，商品名：多吉美)聯(lián)合使用，采用腫瘤靶向加免疫治療雙管齊下，圖17為747，低劑量sorafenib，與747聯(lián)合sorafenib分別治療lpc小鼠皮下肝癌的結(jié)果，圖17和圖18分別為各組治療過(guò)程腫瘤生長(zhǎng)過(guò)程的追蹤以及腫瘤最終重量。lpc皮下肝癌治療結(jié)果顯示低劑量的sorafenib抑制lpc皮下肝癌能力有限，與對(duì)照組無(wú)明顯差異，747具有一定的治療效果，兩種藥物聯(lián)合使用后，能夠顯著抑制腫瘤生長(zhǎng)，并且與對(duì)照組與747、sorafenib單獨(dú)治療組都有明顯差異。圖19和圖20與顯示747治療lpc小鼠皮下腫瘤后，腫瘤微環(huán)境中cd8t細(xì)胞顯著增多，cd4t細(xì)胞無(wú)明顯變化，巨噬細(xì)胞tam顯著減少，這一結(jié)果與hepa1-6皮下腫瘤結(jié)果相似。在圖21中，747治療以后ccr2陽(yáng)性的細(xì)胞出現(xiàn)了顯著的減少，與小鼠腹膜炎模型互相印證，說(shuō)明了747在體內(nèi)具有良好的ccr2拮抗活性，此外本發(fā)明發(fā)現(xiàn)747治療以后微環(huán)境中的巨噬細(xì)胞數(shù)量明顯減少后激活cd8t細(xì)胞殺傷腫瘤的同時(shí)，巨噬細(xì)胞的表型也有一定變化，圖22顯示從m2-免疫抑制型向m1-免疫促進(jìn)型偏移，協(xié)助抑制殺傷腫瘤。

本發(fā)明開(kāi)發(fā)了一種天然產(chǎn)物來(lái)源的新型的ccr2拮抗劑(實(shí)驗(yàn)代號(hào)747)，通過(guò)各種模型認(rèn)證其對(duì)于ccr2的體內(nèi)體外的拮抗活性以及敏感性和選擇性，本發(fā)明通過(guò)ccr2這一免疫靶點(diǎn)調(diào)節(jié)了腫瘤微環(huán)境，減少腫瘤巨噬細(xì)胞的浸潤(rùn)，增加了cd8t細(xì)胞達(dá)到治療腫瘤的效果，使用本發(fā)明可以產(chǎn)生新的骨架結(jié)構(gòu)的ccr2拮抗劑，可用于肝癌的免疫治療。本化合物來(lái)源于天然產(chǎn)物本身毒性很低，聯(lián)合現(xiàn)有肝癌一線臨床用藥sorafenib，利用小鼠肝癌模型進(jìn)行聯(lián)合治療，利用低劑量sorafenib聯(lián)合本化合物輔助免疫治療展現(xiàn)了很好的治療效果，對(duì)于現(xiàn)在臨床的耐藥以及高劑量抗腫瘤藥帶來(lái)毒副作用提供了新的臨床應(yīng)用前景，為臨床治療提供新的思路。