本發(fā)明屬于基因的功能與應用領域，特別涉及一種干擾素調(diào)節(jié)因子1(interferon regulatory factor-1，IRF1)作為藥物靶標在篩選預防、緩解和/或治療脂肪肝和/或Ⅱ型糖尿病的藥物中應用。

背景技術：

近年來，隨著人們生活水平的提高，各種不良生活方式的影響，脂肪肝及糖尿病患者患者愈來愈多，并且年齡逐步趨向于年輕化。

糖尿病是由遺傳因素、免疫功能紊亂、微生物感染和精神因素等多種因素引發(fā)的機體胰島功能減退、胰島素抵抗，最終導致糖、蛋白質(zhì)、脂肪、水和電解質(zhì)等一系列代謝紊亂綜合征。Ⅱ型糖尿病患者有大血管和微血管并發(fā)癥，包括動脈粥樣硬化癥、冠心病、末梢血管病、高血壓、腎病、神經(jīng)病和視網(wǎng)膜的風險顯著增加。糖尿病是繼癌癥、心血管疾病之后的第三大健康疾病。據(jù)統(tǒng)計，全球糖尿病患者已超過3億人，其中Ⅱ型糖尿病(type 2diabetes mellitus,T2DM)占90％以上，到2030年，患病人數(shù)將超過4億。值得注意的是，當前兒童、青少年以及青年人群中T2DM前期發(fā)病率劇增，這也意味著在未來的糖尿病的發(fā)病人群將擴大，防治難度將會大大增加。當前市場上已有許多藥物靶點被發(fā)現(xiàn)并被應用于糖尿病治療領域，但由于靶點機制問題，很多傳統(tǒng)的抗T2DM藥物存在低血糖、心血管事件、體重增加等副作用，這限制了它們的使用。

非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)是指除外酒精和其他明確的損傷肝因素造成的以肝細胞內(nèi)脂肪過度沉積為主要特征的臨床病例綜合征，與胰島素抵抗和遺傳易感性密切相關的獲得性代謝應激性肝損傷。包括單純性脂肪肝，非酒精性脂肪肝炎，以及終末肝臟疾病如肝硬化和肝細胞癌。此外，脂肪肝還可損害消化系統(tǒng)功能，降低人體免疫力、減弱解毒功能，影響激素代謝。隨著B超檢查的廣泛普及，脂肪肝發(fā)現(xiàn)率明顯提高，重癥脂肪肝B超檢出率在95％以上。和高血壓、糖尿病一樣，脂肪肝也成為當代人常見的慢性病之一，成為僅次于病毒性肝炎的第二大肝病，它可以進展為肝纖維化、肝硬化，甚至肝癌，發(fā)展為肝硬化和肝癌的比例分別為5％～10％和1％～2％，嚴重威脅著人們的身體健康^【1】。

近年來，T2DM合并NAFLD的患病率正逐年增加。研究結果顯示，在糖尿病人群中，NAFLD患病率可高達80％^[2]。在有些患者中肝臟脂肪沉積可能是影響其T2DM發(fā)展的主要因素^[3]。另一方面，如果T2DM控制不佳或充分發(fā)展，不僅促進脂肪肝生成，而且使肝損傷加重，甚至形成非酒精性脂肪性肝炎、肝纖維變性、肝硬化及肝細胞癌。T2DM合并NAFLD將大大增加由于肝硬化、肝細胞癌和心血管并發(fā)癥導致的死亡風險^[4]。目前，雖然控制高脂血癥在T2DM伴NASH患者中的治療作用仍有待探究，但是NAFLD的治療主要包括針對糖尿病和心血管風險因子的積極控制。研究表明，在合并T2DM和NASH的患者中，只有噻唑烷二酮類藥物吡格列酮顯示出肝臟組織學的明顯改善。因此未來我們應該制定特異的篩選標準以及治療方案以期應用于臨床T2DM和NAFLD患者，尤其是T2DM和NAFLD合并的患者。

干擾素調(diào)節(jié)因子是一類轉(zhuǎn)錄因子，主要調(diào)節(jié)I型干擾素、干擾素刺激基因、其他細胞因子和趨化因子的表達。IRF家族已發(fā)現(xiàn)9個成員，N端為保守的DNA結合結構域，由115個氨基酸組成，形成螺旋-轉(zhuǎn)角-螺旋的結構，在DNA識別區(qū)包含五個高度保守的色氨酸。IRF1是IRF家族中最早被發(fā)現(xiàn)的成員，在許多細胞中都有組成型表達。人的IRF-1定位在5號染色體長臂3區(qū)1帶，包含有9個內(nèi)含子，10個外顯子，由329個氨基酸組成，其編碼36.5ku的蛋白質(zhì)，其蛋白質(zhì)特別不穩(wěn)定，半衰期僅有30分鐘。在多個物種中IRF1基因都已被研究^[5]。深入研究表明，在病毒感染的細胞中，IRF1能夠與IFN-β基因啟動子的特殊序列結合，從而激活IFN-β的表達。IRF1還選擇性的調(diào)節(jié)不同基因在不同細胞中發(fā)揮其免疫應答效應。在許多惡性血液系統(tǒng)疾病，如急性白血病、骨髓增生異常綜合癥和多種癌癥，均伴有IRF1基因的異常表達。

鑒于IRF1的重要生理功能，現(xiàn)階段涌現(xiàn)大量關于IRF1的研究。研究發(fā)現(xiàn)，IRF1的表達能誘導小鼠乳腺癌細胞凋亡和抑制腫瘤生長，IRF1的缺失可以明顯增加腫瘤易感性^[6]。其次，還有研究表明IRF1在調(diào)控呼吸道合胞病毒感染后調(diào)控氣道神經(jīng)源性炎癥中具有重要作用^[7]。此外，IRF1基因是影響白血病發(fā)病的一個重要的抑癌基因，在白血病可能存在缺失或部分失活的異常改變，對白血病的診治有參考價值^[8]?；贗RF1如此豐富的生物活性，我們擬進一步探討IRF1基因在脂肪肝和糖尿病中的治療效應。

參考文獻：

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[4]Cusi K.Treatment of patients with type 2diabetes and non-alcoholic fatty liver disease:Current approaches and future directions.Diabetologia.2016；59:1112-1120

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技術實現(xiàn)要素：

為解決上述現(xiàn)有技術的缺陷和不足，本發(fā)明的目的在于提供一種IRF1基因的表達與脂肪肝、Ⅱ型糖尿病之間的相互關系，提供一種IRF1基因作為藥物靶標在篩選預防、緩解和/或治療脂肪肝、Ⅱ型糖尿病的藥物中的應用，進而提供一種IRF1的抑制劑在制備預防、緩解和/或治療脂肪肝、Ⅱ型糖尿病的藥物中的應用。

本發(fā)明的目的通過以下技術方案實現(xiàn)：

本發(fā)明以野生型C57小鼠與IRF1基因過表達小鼠為實驗對象，通過高脂飲食誘導的肥胖小鼠模型(diet induced obesity，DIO)研究IRF1基因的功能，結果發(fā)現(xiàn)與野生型小鼠對比，IRF1基因過表達小鼠表現(xiàn)出肥胖加重，其體重明顯高于同種飼料飼養(yǎng)的WT小鼠，并且IRF1基因過表達小鼠的空腹血糖水平高于對照組WT小鼠，IRF1基因過表達小鼠的肝功能明顯差于WT小鼠。進一步通過腹腔注射葡萄糖耐量實驗發(fā)現(xiàn)IRF1基因過表達小鼠對葡萄糖的耐受能力明顯減弱。從小鼠肝臟重量及肝臟/體重比以及脂質(zhì)成分病理染色結果等均說明HFD組(High fat diet，高脂飲食)的IRF1-TG小鼠脂肪肝病變明顯加重，脂質(zhì)蓄積顯著增多。這表明IRF1基因過表達會加劇脂肪肝、Ⅱ型糖尿病的發(fā)生，IRF1基因能夠促進脂肪肝、Ⅱ型糖尿病的發(fā)生。

因此，IRF1基因可作為藥物靶點，構建IRF1基因過表達的體外細胞模型或動物模型，用于篩選預防、緩解和/或治療脂肪肝和/或Ⅱ型糖尿病的藥物；IRF1基因也可作為基因治療中的靶基因，設計并制備預防、緩解和/或治療脂肪肝和/或Ⅱ型糖尿病的藥物和/或生物學試劑，通過基因工程技術達到預防、緩解和/或治療脂肪肝和/或Ⅱ型糖尿病的目的。例如以IRF1為靶基因，設計可干擾IRF1表達的雙鏈siRNA，通過化學方法合成以后，注射入人體通過RNA干擾的方法使IRF1基因沉默來治療脂肪肝和/或Ⅱ型糖尿??；還可以設計并構建IRF1的突變體，注射后進入細胞，競爭IRF1原形的作用底物，從而抑制IRF1的功能，起到治療目的；此外，還可以以IRF1為靶點設計小分子化合物抑制劑，利用IRF1基因過表達的體外細胞模型或動物模型，通過篩選，發(fā)現(xiàn)其中能夠特異性抑制IRF1的分子，從而為脂肪肝和/或Ⅱ型糖尿病的治療提供新的治療性分子。

針對IRF1的上述功能，提供IRF1作為藥物靶標在篩選保護肝臟及糖代謝的藥物中的應用。

針對IRF1的上述功能，提供IRF1作為藥物靶標在篩選預防、緩解和/或治療脂肪肝和/或Ⅱ型糖尿病的藥物中的應用。

針對IRF1的上述功能，提供IRF1的抑制劑在制備預防、緩解和/或治療脂肪肝和/或Ⅱ型糖尿病的藥物中的應用。

一種預防、緩解和/或治療脂肪肝和/或Ⅱ型糖尿病的藥物，包含IRF1的抑制劑。

所述的IRF1的抑制劑優(yōu)選為IRF1基因的siRNA、IRF1基因的RNA干擾載體，IRF1的抗體及其他能夠抑制IRF1表達的抑制劑。

本發(fā)明相對于現(xiàn)有技術具有如下的優(yōu)點及效果：

(1)本發(fā)明發(fā)現(xiàn)IRF1的新功能，即IRF1具有惡化脂肪肝和Ⅱ型糖尿病的作用。

(2)基于IRF1在惡化脂肪肝和Ⅱ型糖尿病疾病中的功能，其為研制預防、緩解和/或治療脂肪肝和/或Ⅱ型糖尿病的藥物提供靶標。

(3)IRF1的抑制劑可用于制備預防、緩解和/或治療脂肪肝和/或Ⅱ型糖尿病的藥物。

附圖說明

圖1是肝臟特異性IRF1轉(zhuǎn)基因小鼠的構建策略圖。

圖2是WT和IRF1-TG小鼠的體重、空腹血糖結果圖；

A為小鼠體重結果圖(*：p＜0.05)，B為空腹血糖水平統(tǒng)計圖(*：p＜0.05vs WT HFD組，#：p＜0.05vs WT NC組)。

圖3是WT和IRF1-TG小鼠通過腹腔注射葡萄糖耐量結果圖；

A為通過腹腔注射葡萄糖后不同時間點小鼠血糖水平統(tǒng)計圖(*：p＜0.05vs WT HFD組，#：p＜0.05vs WT NC組)，B為各組小鼠糖耐量曲線下面積(area under the curve，AUC)比較圖(*：p＜0.05)。

圖4是IRF1-TG和WT小鼠的肝臟重量結果圖；

A為肝臟重量統(tǒng)計柱狀圖，B為肝臟重量與小鼠本身體重比值統(tǒng)計柱狀圖(*：p＜0.05)。

圖5是WT和IRF1-TG小鼠的HE和油紅O染色圖。

具體實施方式

通過以下詳細說明結合附圖可以進一步理解本發(fā)明的特點和優(yōu)點。所提供的實施例僅是對本發(fā)明方法的說明，而不以任何方式限制本發(fā)明揭示的其余內(nèi)容。

通過以下詳細說明結合附圖可以進一步理解本發(fā)明的特點和優(yōu)點。所提供的實施例僅是對本發(fā)明方法的說明，而不以任何方式限制本發(fā)明揭示的其余內(nèi)容。

實驗用動物及飼養(yǎng)：

實驗動物種屬，性別，周齡及來源：C57BL/6(WT)小鼠和肝臟特異性IRF1轉(zhuǎn)基因小鼠(IRF1-TG)，雄性，8周齡。C57BL/6小鼠購自北京華阜康生物科技有限公司；IRF1-TG小鼠的構建過程如下列敘述：

肝臟特異性IRF1轉(zhuǎn)基因小鼠的構建(構建策略見圖1)：

轉(zhuǎn)基因載體構建信息：用上游引物，

5’-AGCTTTGTTTAAACGCCACCATGCCAATCACTCGAATGCGG-3’；

下游引物：

5’-CTAGCTAGCCTATGGTGCACAAGGAATGGCC-3’，

擴增小鼠IRF1基因(NCBI，Gene ID：11496，CCDS24686.1)cDNA，把擴增得到的產(chǎn)物和pCAG-CAT-LacZ載體(北京協(xié)和醫(yī)學院基礎學院楊青林老師實驗室提供，制備過程參見參考文獻：Kim T,Zhelyabovska O,Liu J,et al.Generation of an Inducible,Cardiomyocyte-Specific Transgenic Mouse Model with PPAR b/d Overexpression[J].Peroxisome Proliferator-Activated Receptors(PPARs),57.)用限制性內(nèi)切酶PmeI(NEB，R0560L)和NheI(NEB，R0131L)酶切后連接，得到轉(zhuǎn)基因載體pCAG-CAT-IRF1-polyA，IRF1的表達由CAG啟動子驅(qū)動得到。將構建的pCAG-CAT-IRF1-polyA載體通過顯微注射構造成受精胚胎(C57BL/6J背景)，得到IRF1-floxed轉(zhuǎn)基因小鼠。肝臟特異性IRF1轉(zhuǎn)基因小鼠由IRF1-floxed轉(zhuǎn)基因小鼠和肝細胞特異性表達的Cre轉(zhuǎn)基因小鼠Albumin-Cre(購自The Jackson Laboratory，貨號003574)小鼠雜交繁殖得到。

實驗動物飼料配方：高脂飼料(HFD)(購自北京華阜康生物科技有限公司，貨號D12942)：熱量百分比：蛋白質(zhì):20％；碳水化合物:20％；脂肪:60％，總的熱量質(zhì)量比:5.24kcal/g。低脂飼料(NC)(購自北京華阜康生物科技有限公司，貨號D12450B)：熱量百分比：蛋白質(zhì):20％；碳水化合物:70％；脂肪:10％，總的熱量質(zhì)量比:3.85kcal/g。

動物飼養(yǎng)及環(huán)境條件：所有的實驗小鼠均飼養(yǎng)在武漢大學SPF級動物房(許可證號：SYXK(鄂)：2009-0053)。每12小時交替照明，溫度24±2℃，濕度40％-70％，小鼠自由飲水進食。

【實施例1】小鼠脂肪肝、Ⅱ型糖尿病模型(diet induced obesity，DIO)獲得

(1)實驗動物分組：選用8周齡，雄性，WT小鼠和IRF1-TG小鼠，分別給與兩種特殊飼料：D12942高脂飼料(High fat diet，HFD)和D12450B低脂飼料(Normal chow，NC)飼養(yǎng)，即WT NC組，TG NC組，WT HFD組，TG HFD組共4個組別。

(2)模型通過高脂飼料誘導操作流程：

采用WT和TG小鼠，建立DIO模型，進行表型相關分析，明確IRF1基因?qū)χ靖?、Ⅱ型糖尿病發(fā)揮的作用。選用8周齡，雄性，WT小鼠和IRF1-TG小鼠，分別給與兩種特殊飼料D12942高脂飼料(Highfat diet，HFD)和D12450B低脂飼料(Normal chow，NC)飼養(yǎng)，即WT NC組，TG NC組，WT HFD組，TG HFD組共4個組別。小鼠空腹血糖每隔8周檢測1次。實驗第23周，進行腹腔注射葡萄糖實驗(IPGTT)，以評價小鼠機體對葡萄糖耐受能力。第24周檢測小鼠空腹體重并進行終末取材，取出小鼠肝臟，然后一部分置于甲醛溶液中固定或O.C.T冰凍切片包埋劑(Tissue Freezing Medium)包埋作為病理分析用。

【實施例2】小鼠體重、血糖水平測定

(1)小鼠空腹體重，食量檢測

1)體重檢測

①禁食：上午8:00將待實驗小鼠禁食(不禁水)，下午2:00開始實驗操作。

②稱重：在第24周稱重，將一塑料小桶放在動態(tài)電子天平上，抓起小鼠，放入稱量小桶中，測量體重記錄數(shù)據(jù)。飼料量檢測：待稱體重操作完成后，給小鼠加飼料，并在動態(tài)電子天平上記錄小鼠的飼料量。

(2)空腹血糖水平檢測實驗

分別在第0周、8周、16周、24周測定小鼠空腹血糖。

將所有待實驗的小鼠從上午8:00至下午2:00間禁食(不禁水)，即禁食6小時后開始實驗操作。

①血糖儀準備：檢查血糖儀(美國強生公司，ONETOUCH)電池，按右側(cè)開關，將試紙正確放入左側(cè)插槽，屏幕顯示與血糖試紙條相應代碼的數(shù)字，隨后顯示滴血圖案，提示血糖儀進入待測狀態(tài)。

②固定小鼠：右手抓鼠尾，左手持一塊毛巾，將毛巾對折，用拇指和食指捏住毛巾對折處，將鼠頭部和身體包入手掌內(nèi)的毛巾，拇指和食指在將鼠尾根部固定。

③剪尾：眼科剪迅速在距鼠尾末端0.1-0.2cm處剪下鼠尾，待血滴自行流出。

④血糖檢測：將血糖儀試紙邊緣輕觸血滴，血液浸入試紙，血糖儀倒計時5秒顯示讀數(shù)。

Ⅱ型糖尿病損傷嚴重程度的評估指標主要包括體重、血糖等水平，體重、血糖變化結果如圖2所示，WT小鼠在給與HFD飼料飼養(yǎng)后，體重明顯高于其NC飼料組，給與IRF1-TG小鼠24周的HFD飼料和NC飼料飼養(yǎng)后，HFD組的IRF1-TG小鼠體重明顯高于HFD組的WT小鼠體重(見圖2A)；經(jīng)空腹血糖檢測發(fā)現(xiàn)在HFD組的小鼠從第8周、16周、24周的空腹血糖水平明顯較相應NC對照組升高，HFD組的IRF1-TG小鼠空腹血糖水平也明顯高于WT組小鼠空腹血糖水平(見圖2B)。表明IRF1基因過表達后顯著加劇了小鼠在HFD飼養(yǎng)狀態(tài)下的糖代謝紊亂，IRF1基因能顯著降低小鼠的糖代謝能力，表明IRF1基因在高脂誘導引起的Ⅱ型糖尿病中起到重要的促進作用。

【實施例3】葡萄糖耐量實驗(intraperitoneal glucose tolerance test，IPGTT)

實驗第23周，進行腹腔注射葡萄糖實驗(IPGTT)，以評價小鼠機體對糖耐受能力。

(1)在測血糖之前，先測量小鼠的空腹體重，根據(jù)10μL/g計算葡萄糖的注射體積。

(2)先檢測葡糖糖注射前即0分鐘時空腹血糖，在檢測完畢后迅速經(jīng)腹腔注射葡萄糖液。

(3)腹腔注射操作方法：①固定小鼠；抓起小鼠，左手的小指和無名指抓小鼠的尾巴，另三手指抓住小鼠的頸部，使小鼠的頭部向下，將小鼠腹部充分暴露。②進針定位及注射：從腹部一側(cè)進針右手持注射器，將尖端與小鼠腹部成45°的夾角，進針，回抽，注射時針頭在腹部皮下穿行一小段距離，穿過腹中線后在腹部另一側(cè)進入腹腔，注射完藥物后，緩緩拔出針頭，并輕微旋轉(zhuǎn)針頭，防止漏液。

(4)分別于腹腔注射后15分、30分、60分、120分鐘時間點剪尾測小鼠血糖值，并記錄血糖數(shù)值和檢測時間。

進一步通過腹腔注射葡萄糖耐量實驗(intraperitoneal glucose tolerancetests，IPGTT)來評估各組小鼠對葡萄糖的處理能力，在實驗第23周，通過注射1.0g/kg體重的葡萄糖后，HFD組的WT小鼠和IRF1-TG小鼠血糖水平在15分鐘時間點劇增達到峰值，隨著時間推移至注射后60分鐘，兩組小鼠血糖水平稍微下降，但仍處于高于空腹血糖水平(0分鐘時血糖)，在2小時時恢復至空腹血糖水平，且IRF1-TG小鼠血糖水平從0分鐘至2小時一直處于高于WT小鼠的血糖水平(圖3A)。比較各組小鼠血糖曲線下面積(area under the curve，AUC)，發(fā)現(xiàn)WT小鼠HFD組的AUC顯著高于NC組，IRF1-TG HFD組的AUC顯著大于WT HFD組的AUC(圖3B)，表明IRF1打破了糖代謝穩(wěn)態(tài)。

【實施例4】肝臟大體外觀及肝臟組織脂質(zhì)成分測定

(1)終末肝臟組織取材

1)小鼠稱重后，迅速脫頸處死。仰臥固定小鼠，用蒸餾水將小鼠胸部，腹部毛發(fā)潤濕。

2)用一鑷子鉗夾小鼠腹部正中皮膚，沿腹部正中向頭部剪開皮膚至劍突下，向尾端剪開皮膚，逐層暴露皮下筋膜，肌肉等，打開腹腔，充分暴露各臟器。

3)迅速找到并取下小鼠的肝臟，將取下的肝臟標本置于滅菌紗布上，拭干肝臟表面上殘留血液，將肝臟置于無菌培養(yǎng)皿中，迅速拍照，稱重。

4)石蠟標本：切取部分肝臟置于10％中性福爾馬林中固定。冰凍標本：切取部分肝臟，置于有OCT的錫紙模具中包埋，放在干冰上冰凍固定。

(2)肝臟組織處理及病理染色相關實驗

1)肝臟脫水，透明，浸蠟

切取10％中性福爾馬林中固定好的部分肝葉組織于標記的包埋框內(nèi)，在小流量流水沖洗30分鐘以上。按照以下流程在機器上設置以下程序，①脫水：75％酒精(45分鐘)→75％酒精(45分鐘)→85％酒精(45分鐘)→85％酒精(45分鐘)→95％酒精(45分鐘)→95％酒精(45分鐘)→無水酒精(1小時)→無水酒精(1小時)；②透明：二甲苯(1小時)→二甲苯(1小時)；③浸臘(65℃)：石蠟(1小時)→石蠟(1小時)。待組織沖洗完畢后，將包含組織的包埋框裝進機器籃筐內(nèi)，啟動上述程序。上述程序完成后，取出組織包埋框送病理室包埋組織，同時清洗機器備用。

2)肝臟組織切片

使用切片機切片(切片厚度5μm)。

3)肝臟組織蘇木精-伊紅(HE)染色

將肝臟組織石蠟切片放入65℃烘箱(30分鐘)→二甲苯中(5分鐘×3次)→100％酒精(1分鐘)→90％酒精(1分鐘)→70％酒精(1分鐘)→蒸餾水洗→蘇木素(5分鐘)→自來水洗去切片上的浮色→1％鹽酸酒精(1至3秒)→自來水洗數(shù)下→Scott促藍液(碳酸氫鈉0.35g，硫酸鎂2g，蒸餾水100mL)(1分鐘)→自來水洗數(shù)下→伊紅(1分鐘)→蒸餾水洗去切片上的浮色→70％酒精一下→90％酒精一下→100％酒精(30秒×3次)→二甲苯(2分鐘×3次)→在二甲苯未干時封片，拍照。

4)肝臟組織油紅O染色

①將冰凍肝臟組織切片在通風櫥中風干30分鐘，4％多聚甲醛固定10分鐘。置于雙蒸水中稍洗10分鐘，以除去組織表明的多聚甲醛。

②以60％異丙醇處理1分鐘。

③用油紅O(公司sigma，貨號O0625，濃度0.5克/100mL 100％異丙醇)染色30分鐘。

④之后以60％異丙醇漂洗1分鐘×3次，直至背景干凈。

⑤用Mayer’s蘇木素染液(5滴)淡染細胞核。

⑥水漂洗，稀碳酸鋰水溶液中促藍，充分水洗，水洗至細胞核藍化。

⑦用甘油明膠封片，拍照。

在HFD組的IRF1-TG小鼠肝臟重量較WT小鼠高，同時肝臟重量與小鼠本身體重比值較HFD組的WT小鼠高(如圖4)。進一步通過組織切片，進行HE和油紅O染色，顯微鏡下觀察各組小鼠肝臟組織在高脂飲食飼養(yǎng)條件下發(fā)生了顯著的病理改變。通過肝臟HE染色，可以觀察到在HFD飼養(yǎng)條件下，WT組小鼠的肝細胞發(fā)生脂肪沉積減輕，IRF1-TG小鼠肝臟組織脂肪變性、空泡化且融合連成片狀，肝臟細胞形態(tài)已幾乎完全破壞(如圖5上)。通過肝臟油紅O染色來檢測肝組織中脂質(zhì)，可以發(fā)現(xiàn)在HFD組的WT小鼠的肝門靜脈周圍呈紅色，提示有脂質(zhì)沉積，而在HFD組的IRF1-TG小鼠脂質(zhì)沉積明顯加重(如圖5下)。這些結果說明IRF1-TG小鼠的脂肪肝明顯加重。

上述結果顯示IRF1-TG小鼠在HFD的誘導下發(fā)生的Ⅱ型糖尿病和脂肪肝病變顯著加重。這些結果表明IRF1基因?qū)夯蛐吞悄虿『椭靖尉哂酗@著的作用。本發(fā)明結果說明IRF1基因在脂肪肝、Ⅱ型糖尿病疾病模型中有著重要的惡化作用。

上述實施例為本發(fā)明較佳的實施方式，但本發(fā)明的實施方式并不受上述實施例的限制，其他的任何未背離本發(fā)明的精神實質(zhì)與原理下所作的改變、修飾、替代、組合、簡化，均應為等效的置換方式，都包含在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。

SEQUENCE LISTING

<110> 武漢大學

<120> 干擾素調(diào)節(jié)因子1及其抑制劑在治療脂肪肝和Ⅱ型糖尿病中的功能和應用

<160> 2

<170> PatentIn version 3.3

<210> 1

<211> 41

<212> DNA

<213> 擴增IRF1上游引物

<400> 1

agctttgttt aaacgccacc atgccaatca ctcgaatgcg g 41

<210> 2

<211> 31

<212> DNA

<213> 擴增IRF1下游引物

<400> 2

ctagctagcc tatggtgcac aaggaatggc c 31