阿糖腺苷在制備抑制腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移和擴(kuò)散的藥物中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及阿糖腺苷在制藥領(lǐng)域新的用途，具體涉及阿糖腺苷在制備抑制腫瘤細(xì) 胞轉(zhuǎn)移和擴(kuò)散的藥物中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 阿糖腺苷具有廣譜抗病毒活性。對皰瘆病毒及帶狀皰瘆病毒作用最強(qiáng)，對水痘帶 狀皰瘆病毒、牛痘病毒、乙肝病毒次之，對腺病毒、偽狂犬病毒和一些RNA腫瘤病毒有效。對 大多數(shù)RNA病毒無效。經(jīng)細(xì)胞酶磷酸化生成三磷酸阿糖腺苷，可與三磷酸脫氧腺苷競爭性 抑制病毒的DNA多聚酶，并結(jié)合進(jìn)病毒的DNA鏈，三磷酸阿糖腺苷也抑制核糖核苷酸還原 酶，從而抑制病毒DNA的合成。有抗單純皰瘆病毒HSVl和HSV2作用，在性病臨床上用以治 療單純皰瘆病毒性腦炎，也用于治療免疫抑制病人的帶狀皰瘆和水痘感染。但對巨細(xì)胞病 毒則無效。本品的單磷酸酯有抑制乙肝病毒復(fù)制的作用。
[0003] 該品靜滴后在人體內(nèi)迅速去氨成為阿拉伯糖次黃嘌呤，具有抑制病毒DNA合成功 能。臨床用于慢性乙型肝炎，帶狀皰瘆性腦炎及皰瘆性角膜炎等。
[0004] 現(xiàn)有公開文獻(xiàn)中尚未發(fā)現(xiàn)阿糖腺苷的其他藥理作用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 發(fā)明目的：本發(fā)明目的在于提供一種阿糖腺苷在制備抑制腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移和擴(kuò)散的 藥物中的應(yīng)用。
[0006] 技術(shù)方案：阿糖腺苷在制備抑制腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移和擴(kuò)散的藥物中的應(yīng)用。
[0007] 優(yōu)選地，所述腫瘤細(xì)胞為結(jié)腸癌細(xì)胞。
[0008] 優(yōu)選地，其中阿糖腺苷的濃度為0. 5?5uM.。
[0009] 發(fā)明人通過細(xì)胞層面的實(shí)驗(yàn)研宄發(fā)現(xiàn)，阿糖腺苷對腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移能力有一定的 抑制作用。目前針對現(xiàn)有的適應(yīng)癥給藥途徑為靜滴：l〇〇mg/kg，用葡萄糖液溶解后緩慢滴入 (至少12小時(shí)以上輸完），每日不宜超過20mg/kg，以10-28天為一療程。本發(fā)明需要在現(xiàn) 有的細(xì)胞層面實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上根據(jù)新的適應(yīng)癥療效以及后續(xù)相關(guān)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)確定新的臨床給藥 方法及劑量。
[0010] 本發(fā)明通過將腫瘤細(xì)胞采集培養(yǎng)后，再利用藥物刺激細(xì)胞，觀察細(xì)胞形態(tài)、并定量 分析細(xì)胞層的面積，即細(xì)胞能夠與其他細(xì)胞接觸的面積，從而判斷腫瘤細(xì)胞的擴(kuò)散能力。細(xì) 胞層面積越大越有利于與其他細(xì)胞形成連接。細(xì)胞迀移需要內(nèi)外因素的配合。外部的因素 指的是細(xì)胞外的信號分子。內(nèi)部因素則指細(xì)胞的信號傳導(dǎo)系統(tǒng)和執(zhí)行運(yùn)動的細(xì)胞骨架和分 子馬達(dá)，還有參與粘著斑形成的各種分子。細(xì)胞外信號結(jié)合胞膜受體完成其使命后，需要 細(xì)胞內(nèi)信號分子接力，將運(yùn)動信息進(jìn)一步傳給細(xì)胞迀移的執(zhí)行單位一一細(xì)胞骨架和分子馬 達(dá)。種類繁多的細(xì)胞內(nèi)信號分子會相互作用，影響后述這兩種分子的分布，結(jié)構(gòu)和活性，達(dá) 到精細(xì)調(diào)整細(xì)胞運(yùn)動的目的。由此可見，腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移，與細(xì)胞本身以及細(xì)胞之間的關(guān)系 緊密。
[0011] 癌細(xì)胞與其同源正常組織相比，細(xì)胞間的粘著性降低，故癌細(xì)胞在體內(nèi)容易分散 和轉(zhuǎn)移。在正常細(xì)胞外被中的纖粘連蛋白是一種細(xì)胞外粘著糖蛋白，它增強(qiáng)了細(xì)胞與細(xì)胞 外基質(zhì)間的粘著。癌細(xì)胞的纖粘連蛋白顯著減少或缺失，鈣粘蛋白合成發(fā)生障礙，從而破 壞了細(xì)胞與基質(zhì)之間和細(xì)胞與細(xì)胞之間的粘著，因此癌細(xì)胞具有易于侵潤組織和轉(zhuǎn)移的屬 性。癌細(xì)胞的面積的增大增強(qiáng)了各個(gè)細(xì)胞之間的接觸面積更利于相互之間的粘連和附著。
[0012] 雖然腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移是由多種因素共同形成導(dǎo)致的，但是以細(xì)胞層的面積，即細(xì) 胞能夠與其他細(xì)胞接觸的面積作為細(xì)胞轉(zhuǎn)移能力大小的依據(jù)，以此作為細(xì)胞間連接強(qiáng)度的 測定的方法，具有成本低廉、操作簡便、結(jié)果易判的優(yōu)點(diǎn)，其表現(xiàn)出來的細(xì)胞面積增大是最 容易直接觀察辨別的，主要就是通過加藥刺激后對細(xì)胞間連接分子Ε-cadherin蛋白質(zhì)進(jìn) 行免疫染色，繼而進(jìn)行定量測定。細(xì)胞層面積越大越有利于與其他細(xì)胞形成連接。
[0013] 本發(fā)明以為阿糖腺苷為實(shí)驗(yàn)對象，評估考量其在抑制腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移的能力評價(jià)。 具體以藥物刺激前后細(xì)胞面積的變化為主要依據(jù)。
[0014] 有益效果：1、本發(fā)明利用阿糖腺苷制備的藥物對腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移能力進(jìn)行抑制， 阿糖腺苷為低毒藥物，可在腫瘤擴(kuò)散過程中起到較大的阻斷作用，與此同時(shí)再采用其他相 關(guān)腫瘤藥物進(jìn)行治療，可以大量減少正常細(xì)胞的死亡量；而現(xiàn)有的腫瘤藥物多為細(xì)胞毒藥 物，在殺死腫瘤細(xì)胞的同時(shí)大量正常細(xì)胞也一起死亡；2、本發(fā)明所使用的阿糖腺苷為成藥 庫的現(xiàn)有藥物化合物，研發(fā)周期與新藥研發(fā)的周期相比可明顯減少。
【附圖說明】
[0015] 圖1為0. 5uM濃度阿糖腺苷處理后的結(jié)腸癌細(xì)胞圖；
[0016] 圖2為IuM濃度阿糖腺苷處理后的結(jié)腸癌細(xì)胞圖；
[0017] 圖3為5uM濃度阿糖腺苷處理后的結(jié)腸癌細(xì)胞圖；
[0018] 圖4為IOuM濃度阿糖腺苷處理后的結(jié)腸癌細(xì)胞圖；
[0019] 圖5為陽性對照組，由IOuM濃度nocodazole處理后的結(jié)腸癌細(xì)胞圖；
[0020] 圖6為陰性對照組。
【具體實(shí)施方式】
[0021] 下面通過附圖對本發(fā)明技術(shù)方案進(jìn)行詳細(xì)說明，但是本發(fā)明的保護(hù)范圍不局限于 所述實(shí)施例。
[0022] 實(shí)施例1 :阿糖腺苷在制備抑制結(jié)腸癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移和擴(kuò)散的藥物中的應(yīng)用。具體實(shí) 驗(yàn)方案如下：
[0023] 1、實(shí)驗(yàn)材料
[0024] 本發(fā)明實(shí)驗(yàn)階段采用的是結(jié)腸癌細(xì)胞（HT29)，陽性對照采用的藥物是 nocodazole (實(shí)驗(yàn)濃度為IOuM)。陰性對照組沒有經(jīng)過任何處理。
[0025] 其中實(shí)驗(yàn)采用阿糖腺苷化合物 CltlH13N5O4, CAS NO.為 102728-64-3, 24356-66-9， 5536-17-4 [anhydrous]，濃度分別為 10uM，5uM，luM，0· 5uM。
[0026] 2、實(shí)驗(yàn)方法
[0027] 對培養(yǎng)24小時(shí)的結(jié)腸癌細(xì)胞（細(xì)胞密度：105)進(jìn)行藥物刺激2小時(shí)處理：
[0028] (1)將培養(yǎng)皿中狀態(tài)較好的結(jié)腸癌細(xì)胞離心，加入適量培養(yǎng)液制成細(xì)胞懸浮液；
[0029] (2)取細(xì)胞懸液計(jì)數(shù)，按照IO5的密度加入24孔盤中，放入37°C的CO 2培養(yǎng)箱中培 養(yǎng)；
[0030] (3) 24小時(shí)后，換液，培養(yǎng)液中加入相應(yīng)量的阿糖腺苷化合物配置到實(shí)驗(yàn)所需濃 度，以及陽性對照藥物，然后繼續(xù)培養(yǎng)2小時(shí)；
[0031] (4)培養(yǎng)2小時(shí)后將細(xì)胞于2%的PFA溶液下37°C固定10分鐘，再進(jìn)行熒光染色。
[0032] 3、實(shí)驗(yàn)結(jié)果處理
[0033] 對熒光染色后的結(jié)腸癌細(xì)胞觀察，將觀察的圖片用Image J處理并計(jì)算其細(xì)胞面 積在加藥前后的數(shù)據(jù)，Ratio是實(shí)驗(yàn)組與陰性對照組的比值。結(jié)果見表1。 「00341 弄1阿糠腺苷對HT29細(xì)朐制激2 /1、時(shí)后的而和女/1、
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 阿糖腺苷在制備抑制腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移和擴(kuò)散的藥物中的應(yīng)用。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其中腫瘤細(xì)胞為結(jié)腸癌細(xì)胞。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其中阿糖腺苷的濃度為0. 5?5uM。
【專利摘要】本發(fā)明公開阿糖腺苷在制備抑制腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移和擴(kuò)散的藥物中的應(yīng)用。發(fā)明利用阿糖腺苷制備的藥物對腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移能力進(jìn)行抑制，阿糖腺苷為低毒藥物，可在腫瘤擴(kuò)散過程中起到較大的阻斷作用，與此同時(shí)再采用其他相關(guān)腫瘤藥物進(jìn)行治療，可以大量減少正常細(xì)胞的死亡量；而現(xiàn)有的腫瘤藥物多為細(xì)胞毒藥物，在殺死腫瘤細(xì)胞的同時(shí)大量正常細(xì)胞也一起死亡。
【IPC分類】A61P35-04, A61K31-7076
【公開號】CN104546888
【申請?zhí)枴緾N201510066525
【發(fā)明人】董梅
【申請人】南京格耀生物科技有限公司
【公開日】2015年4月29日
【申請日】2015年2月9日