P311蛋白在治療皮膚創(chuàng)面中的用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于生物醫(yī)學(xué)治療技術(shù)領(lǐng)域，具體設(shè)及P311蛋白在治療皮膚創(chuàng)面中的用 途。
【背景技術(shù)】
[0002] 創(chuàng)傷、燒傷、手術(shù)等引起的皮膚創(chuàng)面是最常見(jiàn)的臨床問(wèn)題之一。如何有效促進(jìn)創(chuàng)面 愈合、避免癒痕形成是治療皮膚創(chuàng)面的關(guān)鍵。但由于對(duì)創(chuàng)面愈合和癒痕形成的機(jī)制不甚清 楚，導(dǎo)致對(duì)創(chuàng)面和癒痕的治療效果十分有限。目前認(rèn)為，肌成纖維細(xì)胞在創(chuàng)面正常愈合和癒 痕形成中發(fā)揮關(guān)鍵作用；肌成纖維細(xì)胞產(chǎn)生的強(qiáng)大收縮力可W促進(jìn)創(chuàng)面的快速閉合，但是 如果肌成纖維細(xì)胞活性持續(xù)升高，則會(huì)導(dǎo)致癒痕形成。雖然創(chuàng)周的成纖維細(xì)胞是肌成纖維 細(xì)胞的來(lái)源之一，但近幾年的研究表明，基底層的表皮干細(xì)胞也可能通過(guò)向肌成纖維細(xì)胞 轉(zhuǎn)分化的方式參與到創(chuàng)面修復(fù)。此外，上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化也是癒痕形成和腫瘤惡化的主要機(jī)制 之一。因此，調(diào)控表皮干細(xì)胞向肌成纖維細(xì)胞的轉(zhuǎn)分化，可能是促進(jìn)創(chuàng)面愈合和防治癒痕形 成的一種新的治療策略。
[0003]目前臨床上用于治療皮膚創(chuàng)面的藥物，大致可分為抗感染和生長(zhǎng)因子兩類(lèi)。其發(fā) 揮促進(jìn)創(chuàng)面愈合的機(jī)制也不同；抗感染藥物和炎性細(xì)胞刺激因子等W調(diào)控炎癥反應(yīng)為主， 表皮生長(zhǎng)因子W調(diào)控表皮細(xì)胞為主，堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子W調(diào)控成纖維細(xì)胞為主。但 仍未有特異性調(diào)控肌成纖維細(xì)胞，尤其是表皮干細(xì)胞向肌成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)分化的藥物。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的是為皮膚創(chuàng)面愈合提供一種新的治療策略。
[0005] 本發(fā)明的技術(shù)方案是發(fā)現(xiàn)一種特異調(diào)控表皮干細(xì)胞向肌成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)分化的藥 物，其主要活性成分是P311蛋白。
[0006] 進(jìn)一步的，所述P311蛋白的氨基酸序列如SEQIDNo.1所示。
[0007] 進(jìn)一步的，所述編碼P311蛋白的核甘酸序列如SEQIDNo.2所示。
[0008] 本發(fā)明還提供了促進(jìn)皮膚創(chuàng)面愈合的藥物，其特征在于：主要活性成分是P311蛋 白。
[0009] 進(jìn)一步的，所述P311蛋白的氨基酸序列如SEQIDNo.1所示。
[0010] 進(jìn)一步的，所述編碼P311蛋白的核甘酸序列如SEQIDNo.2所示。
[0011] 本發(fā)明還提供了P311蛋白在制備特異調(diào)控表皮干細(xì)胞向肌成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)分化的 藥物中的用途。
[0012] 本發(fā)明還提供了P311蛋白在制備創(chuàng)面修復(fù)藥物中的用途。
[0013] SEQIDNo.1P311蛋白的氨基酸序列；
[0014] mvyypelfvwvsqepfpnkdmegrlpkgrlpvpkevnrkkndetnaasltplgsselrsp risylhff
[001引沈Q IDNo.2編碼P311蛋白的棱甘酸序列：
[0016]atggtttattacccagaactctttgtctgggtcagtcaagaaccatttccaaacaaggaca t咨咨a咨咨咨aa咨咨cttcctaa咨ggaagacttcct咨tcccaaaggaagtgaaccgcaagaagaacgatgagac aaacgctgcctccctgactccactgggcagcagtgaactccgctccccaagaatcagttacctccacttt ttttaa
[0017] 本發(fā)明的P311蛋白可通過(guò)常規(guī)的蛋白表達(dá)和純化技術(shù)獲得。用于傳送藥物的載 體可W是凝膠，也可W是生物敷料，也可W是經(jīng)過(guò)基因改造后的細(xì)胞載體，該些載體可通過(guò) 商業(yè)化途徑購(gòu)得，也可根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)的制作流程獲得。搭載所述P311蛋白的各種藥物載體，只 需按照常規(guī)使用，無(wú)需特殊操作，本領(lǐng)域的臨床醫(yī)生能夠結(jié)合本產(chǎn)品特點(diǎn)正確使用。
[0018] 首先，通過(guò)組織病理學(xué)技術(shù)對(duì)燒傷早期患者標(biāo)本檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)P311蛋白的分布與表 皮干細(xì)胞向肌成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)分化發(fā)生的部位一致，均在新生表皮中（圖1)。然后，通過(guò)腺病 毒轉(zhuǎn)染使體外培養(yǎng)的人和小鼠表皮干細(xì)胞高表達(dá)P311蛋白，證實(shí)P311可促進(jìn)表皮干細(xì)胞 向肌成纖維細(xì)胞的轉(zhuǎn)分化（圖2、3)。最后，在建立P311野生型和敲基因小鼠淺ir燒傷 動(dòng)物模型的基礎(chǔ)上，發(fā)現(xiàn)P311敲除后表皮干細(xì)胞向肌成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)分化下降，傷口愈合速 度也下降（圖4、5)。綜上，發(fā)明人發(fā)現(xiàn)并證實(shí)了P311蛋白可W促進(jìn)表皮干細(xì)胞向肌成纖維 細(xì)胞轉(zhuǎn)分化，進(jìn)而加速燒傷創(chuàng)面愈合，防治癒痕形成。
[0019] 本發(fā)明的有益效果；本發(fā)明通過(guò)對(duì)燒傷患者標(biāo)本檢測(cè)、細(xì)胞實(shí)驗(yàn)和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn) 并證實(shí)了P311蛋白可W促進(jìn)表皮干細(xì)胞向肌成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)分化，進(jìn)而加速燒傷創(chuàng)面愈合， 防治癒痕形成。本發(fā)明從調(diào)控創(chuàng)面愈合中的肌成纖維細(xì)胞入手，發(fā)現(xiàn)了新的特異調(diào)控蛋白 P311蛋白。本發(fā)明發(fā)現(xiàn)的P311蛋白將會(huì)為促進(jìn)創(chuàng)面愈合、預(yù)防癒痕形成提供一種新的治療 策略，將為燒傷患者、糖尿病足患者W及外科手術(shù)患者等具有皮膚創(chuàng)面的患者帶來(lái)福音，具 有廣闊的應(yīng)用和市場(chǎng)前景。
【附圖說(shuō)明】
[0020] 圖1、燒傷患者皮膚中表皮干細(xì)胞向肌成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)分化標(biāo)志物和P311的分布 特點(diǎn)。A為燒傷患者連續(xù)切片的肥（蘇木素伊紅）染色和免疫巧光染色。肌成纖維細(xì)胞 標(biāo)志a-平滑肌肌動(dòng)蛋白標(biāo)記為紅色，表皮干細(xì)胞標(biāo)志角質(zhì)蛋白19標(biāo)記為綠色，細(xì)胞核 DAPI(4'，6-二脈基-2-苯基嘲噪）標(biāo)記為藍(lán)色。B為間質(zhì)細(xì)胞標(biāo)記Vimentin在表皮和真 皮中的表達(dá)，Vimentin標(biāo)記為紅色，細(xì)胞核DAPI(4'，6-二脈基-2-苯基嘲噪）標(biāo)記為藍(lán)色。 C為P311蛋白在燒傷患者新生表皮（左）和正常皮膚（中）的表達(dá)，褐色為陽(yáng)性區(qū)域，藍(lán)色 為蘇木素復(fù)染后的細(xì)胞核。PBS代替一抗，作為陰性對(duì)照組（右圖）。
[0021] 圖2P311促進(jìn)體外培養(yǎng)的人表皮干細(xì)胞向肌成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)分化。P311腺病毒轉(zhuǎn) 染人表皮干細(xì)胞72小時(shí)。A、免疫巧光染色觀察a-平滑肌肌動(dòng)蛋白和表皮標(biāo)志物上皮細(xì) 胞巧粘蛋白的表達(dá)。B、a-平滑肌肌動(dòng)蛋白單陽(yáng)性和上皮細(xì)胞巧粘蛋白單陽(yáng)性細(xì)胞比例。 **，P<0.01，與空載體組相比。
[0022] 圖3P311促進(jìn)體外培養(yǎng)的小鼠表皮干細(xì)胞向肌成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)分化。P311腺病毒 轉(zhuǎn)染小鼠表皮干細(xì)胞72小時(shí)。免疫巧光染色觀察a-平滑肌肌動(dòng)蛋白、波形蛋白和上皮細(xì) 胞巧粘蛋白的表達(dá)。
[0023]圖4P311敲除小鼠燒傷傷口愈合減慢。A、P311野生型和敲基因小鼠淺II。燒傷 后，大體觀察傷口愈合規(guī)律。B、定量分析傷口面積的變化規(guī)律。C、形態(tài)定量分析表皮間距。 *，P<0.05,與野生型小鼠相比；**，P<0.01，與野生型小鼠相比。D、形態(tài)定量分析新生表皮 長(zhǎng)度。*，P<0. 05,與野生型小鼠相比；**，P<0. 01，與野生型小鼠相比。
[0024]圖5P311敲除小鼠傷口中表皮干細(xì)胞向肌成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)分化現(xiàn)象減少。A、肥（蘇 木素伊紅）染色觀察傷口細(xì)胞形態(tài)變化。B、免疫巧光染色觀察波形蛋白在表皮和真皮中的 表達(dá)，波形蛋白標(biāo)記為紅色，細(xì)胞核DAPI(4'，6-二脈基-2-苯基嘲噪）標(biāo)記為藍(lán)色。C、免 疫巧光染色觀察a-平滑肌肌動(dòng)蛋白在表皮和真皮中的表達(dá)，a-平滑肌肌動(dòng)蛋白標(biāo)